MAIA CONTROLSControl columns containing Paraoxon and Carbaryl

to be used for MAIA Pesticide MultiTest

ENGLISH

PRINCIPLE OF THE METHOD

The method of Acetylcholinesterase – Microplate Acetylcholinesterase Inhibition Assay (MAIA) – for the detection of

organophosphate, organochloride and carbamate pesticides residues in hydro-acetonitrilic extracts of solid/liquid food

matrices is based on testing in microtitre plates of Acetylcholinesterase (AChE) activity inhibition by pesticide molecules,

that belong to 3 important families. It is a semiquantitative analytic method called screening method, or first level method.

The AChE is preincubated with the desiccated extract to accentuate the pesticide's inhibition effect on AChE, if present in

the food matrix in examination. Afterwards, the enzyme-extract system is integrated with an appropriate reaction

substratum, the acetylthiocholine, and with a chromogenic detector for thiocoline that has developed. The reaction is

stopped by a denaturant of the enzymatic protein. Proceed to direct visual evaluation by comparing the color in Sample

wells with the Color Card included in the kit or with the color of the Control Columns (ref. 79703). The method makes a

biological test in which the analyte pesticide is selectively intercepted because of its specific “noxious” action on a critical

physiological event of the animal organism, the AChE activity in nervous and neuromuscular junctions.

KIT CONTENTS

• 1 microtiter plate (96 wells), including 6 columns of Paraoxon and 6 columns of Carbaryl pesticides.

The Control columns contain wells reserved to desiccated Biological Milk, double sample,with Paraoxon and Carbaryl

according to the following table:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A B B B B B B B B B B B B

B B B B B B B B B B B B B

C L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0

D L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0

E LP10 LP10 LP10 LP10 LP10 LP10 LC100 LC100 LC100 LC100 LC100 LC100

F LP10 LP10 LP10 LP10 LP10 LP10 LC100 LC100 LC100 LC100 LC100 LC100

G LP50 LP50 LP50 LP50 LP50 LP50 LC500 LC500 LC500 LC500 LC500 LC500

H LP50 LP50 LP50 LP50 LP50 LP50 LC500 LC500 LC500 LC500 LC500 LC500

Legend:

B: contain desiccated biological milk. These wells work as Blank, STARTER is not added to these wells. Their absorbance values are representative of

milk matrix. No color development.

L0: contain desiccated biological milk. In these wells the reaction is complete: maximum color development.

LP10: contain desiccated milk at 10 µg/kg Paraoxon concentration.

LC100: contain desiccated milk at 100 µg/kg Carbaryl concentration.

In these wells the reaction is partially inhibited. Intermediate color development.

LP50: contain desiccated milk at 50 µg/kg Paraoxon concentration.

LC500: contain desiccated milk at 500 µg/kg Carbaryl concentration.

In these wells the reaction is almost totally inhibited. Very low color development.

TEST PROCEDURERefer to the paragraph “Test Procedure” described in the pack insert of the MAIA Pesticide MultiTest (ref. 79700)

INTERPRETATION OF RESULTS

Direct visual evaluation of pesticide titers in the examined Extracts by comparing with the Control Columns (ref. 79703):

Compare the color in Sample wells with those in Control wells: a pesticide concentration estimate in the extract is obtained

by the yellow colour intensity developed in the sample well, compared to the colour in control wells. The yellow colour

intensity is inversely proportional to the pesticide quantity.

1

In the photo: Control Columns containing Paraoxon

MAIA Pesticide MultiTest was tested with milk containing the following pesticides:

Pesticide Detection limit

Paraoxon < 10 !g/kg

Carbaryl < 100 !g/kg

DDT < 100 !g/kg

The detection limits of analyte in matrix are below Italian and European MRLs.

QUALITY CONTROL FOR THE USER

Every batch of MAIA Pesticide MultiTest is submitted to quality control. The user can test a positive control by using the Control

Columns (ref. 79703) which contain Paraoxon (organophosphate) and Carbaryl (carbamate).

PRECAUTIONS

Reagent may contain some non-reactive and preservative components.

It is suggested to handle carefully it, avoiding contact with skin and swallow.

Perform the test according to the general Good Laboratory Practice guidelines (GLP).

STORAGE

Store at 2-8 °C in the original packaging. Keep away from sources of heat and avoid excessive changes in temperature.

In such conditions, the product will remain valid until the expiry date indicated on the label.

Do not use beyond that date. Eliminate without using if there are signs of deterioration.

WASTE DISPOSAL

Product is intended for professional laboratories.

Waste products must be handled as per relevant security cards and local regulations.

REFERENCES• Anastassiades, M., S. J. Lehotay, D. Stajnbaher and F. J. Schenck. (2003). Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/

partitioning and dispersive solid-phase extraction for the determination of pesticide residues in produce. Journal of AOAC International 86(2), 412-31

• Ellman, G.L., K.D. Courtney, V. Andres, and R.M. Featherstone. (1961). A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity. Biochem. Pharmacol. 7, 88-95.

• Galgani, F:, and G. Bocquenne, (1989). A method for routine detection of organophosphates and carbamates in sea water. Environm. Tech. Lett. 10, 311-322.

• Mishra, N.N., J.A. Pedersen, and K.R. Rogers. (2001). Highly sensitive assay for anticholinesterase compounds using 96 well plate format. pp. 289-305. In Lipnick, R.L., R.P. Mason, M.L. Phillips, C.U. Pittnam, Jr. (eds.) Chemicals in the Environment: Fate, Impacts and Remediation, ACS Symposium Series No. 806; Oxford University Press: New York.

• Wilson, B.W, J.N. Seiber, M.E. Stelljes, J.D. Henderson, T.E. Archer, G.A. Pollock, and J.B..Knaak. (1989). Bioassays for detection of aldicarb in watermelon. Bull. Environ. Contam. Toxicol. 42, 159-166.

MAIA Pesticide MultiTest ® trademark and the relevant process are covered by Italian (no. 0001332238) and European (Request no. 03425778.2) patents.

PRESENTATION

Product REF Kit contents

MAIA Controls 797031 microplate with 12 control columns

(6 Paraoxon + 6 Carbaryl)

TABLE OF SYMBOLS

LOT Batch code Do not reuse Manufacturer Contents of the packageTemperature limitation

REF Catalogue number Fragile, handle with care

Use by Caution, consult accompanying documents

rev 2

23/01/2009

LIOFILCHEM srlVia Scozia Zona Ind.le, 64026 Roseto D.A. (TE), Italy

Tel. +39 0858930745 Fax +39 0858930330

Website: www.liofilchem.net E-Mail: liofilchem@liofilchem.net

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MAIA ControlsColonne di controllo contenenti Paraoxon e Carbaryl

da utilizzare nel MAIA Pesticide MultiTest

ITALIANO

PRINCIPIO DEL METODO

Il metodo dell'Acetilcolinesterasi – Microplate Acetylcholinesterase Inhibition Assay (MAIA) – per la ricerca di residui di pesticidiorganofosforati, organoclorurati e carbammati in estratti idro-acetonitrilici di matrici alimentari solide/liquide si basa sulla misura inpiastre da microtitolazione dell'inibizione dell'attività dell'Acetilcolinesterasi (AChE) da parte di molecole di insetticidi, appartenenti a 3importanti famiglie. È un metodo analitico quantitativo cosiddetto di screening, di primo livello. L'AChE viene preincubata conl'estratto mandato a secco allo scopo di accentuare sensibilmente l'effetto inibitorio sull'AChE da parte del pesticida, eventualmentepresente nella matrice alimentare in esame. Successivamente il sistema enzima-estratto viene integrato con un substrato di reazioneopportuno, l'acetiltiocolina, e con un rilevatore cromogenico della tiocolina che si libera. Si blocca la reazione con un denaturante dellaproteina enzimatica. Si procede a valutazione visiva diretta attraverso la comparazione dei colori con la Color Card contenuta nel kit, ocon le colonne di controllo (cod.79703), per ottenere dati qualitativi. Il metodo realizza un test biologico in cui l'analita pesticida vieneselettivamente intercettato in base alla sua specifica azione “nociva” su un evento fisiologico critico dell'organismo animale, l'attivitàacetilcolinesterasica di servizio in giunzioni neuromuscolari e nervose.

CONTENUTO DELLA CONFEZIONEIl MAIA Controls contiene una micropiastra con 12 colonne di controllo per il MAIA Pesticide MultiTest.

Le colonne di controllo sono disposte nel seguente modo:

– colonne da 1 a 6: controllo contenente Paraoxon

– colonne da 7 a 12: controllo contenente Carbaryl

Le colonne di Controllo contenengono pozzetti riservati ad essiccati di Latte Biologico, in duplice campione, addizionato con Paraoxone Carbaryl, L0, LP10, LP50, e L0, LC100, LC500, secondo la seguente tabella:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A B B B B B B B B B B B B

B B B B B B B B B B B B B

C L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0

D L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0 L0

E LP10 LP10 LP10 LP10 LP10 LP10 LC100 LC100 LC100 LC100 LC100 LC100

F LP10 LP10 LP10 LP10 LP10 LP10 LC100 LC100 LC100 LC100 LC100 LC100

G LP50 LP50 LP50 LP50 LP50 LP50 LC500 LC500 LC500 LC500 LC500 LC500

H LP50 LP50 LP50 LP50 LP50 LP50 LC500 LC500 LC500 LC500 LC500 LC500

LEGENDA:

B: contengono latte biologico essiccato. Questi pozzetti sono destinati a fornire il Bianco, lo STARTER non viene aggiunto a questi pozzetti. I loro valoridi assorbanza sono rappresentativi della matrice latte. Nessuno sviluppo di colore.

L0: latte biologico essiccato. In questi pozzetti la reazione è completa: massimo sviluppo di colore.

LP10: latte essiccato alla concentrazione di 10 !g/kg di Paraoxon.LC100: latte essiccato alla concentrazione di 100 !g/kg di Carbaryl. In questi pozzetti la reazione è parzialmente inibita. Sviluppo intermedio di colore.

LP50: latte essiccato alla concentrazione di 50 !g/kg di Paraoxon. LC500: latte essiccato alla concentrazione di 500 !g/kg di Carbaryl. In questi pozzetti la reazione è quasi totalmente inibita. Sviluppo molto basso di colore.

PROCEDURA DEL TESTFare riferimento al paragrafo “Procedura del Test” descritta nella metodica inclusa nel MAIA Pesticide MultiTest (cod. 79700)

INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI

Valutazione diretta visiva dei titoli di pesticida presenti negli Estratti in analisi tramite confronto con colonne di controllo(cod. 79703):Comparare i colori presenti nei pozzetti dei Campioni con quelli dei Controlli: una stima della concentrazione di pesticidanell’estratto verrà dall’intensità del colore giallo sviluppato nel pozzetto del campione, paragonato al colore dei pozzetti deicontrolli. L’intensità di colore giallo è inversamente proporzionale alla presenza di pesticida.

1

Nella foto sono visibili colonne di Controllo contenenti Paraoxon:

MAIA Pesticide MultiTest ® è stato testato per la matrice latte con i seguenti pesticidi:

Pesticida Limite di rilevabilità

Paraoxon < 10 µg/kg

Carbaryl < 100 µg/kg

DDT < 100 µg/kg

I Limiti di dosaggio di analita in matrice sono entro gli MRL di Legge italiani ed europei.

PRECAUZIONIIl reagente può contenere componenti non reattivi e conservanti di varia natura.A scopo cautelativo è comunque opportuno evitare il contatto con la pelle e l’ingestione.Utilizzare le normali precauzioni previste per il comportamento in laboratorio.

CONSERVAZIONE Conservare a 2-8 °C nella sua confezione originale. Non conservare vicino a fonti di calore ed evitare eccessive variazioni di temperatura. In questecondizioni il prodotto è valido fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Non utilizzare oltre questa data. Eliminare se vi sono segni dideterioramento.

CONSIDERAZIONI SULLO SMALTIMENTO Il prodotto è destinato all’utilizzo all’interno di laboratori di analisi professionali.Per un corretto smaltimento dei rifiuti fare riferimento alla normativa vigente e alle schede informative in materia di sicurezza.

BIBLIOGRAFIA

! Anastassiades, M., S. J. Lehotay, D. Stajnbaher and F. J. Schenck. (2003). Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile

extraction/partitioning and dispersive solid-phase extraction for the determination of pesticide residues in produce. Journal of AOAC International86(2), 412-31

! Ellman, G.L., K.D. Courtney, V. Andres, and R.M. Featherstone. (1961). A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity.Biochem. Pharmacol. 7, 88-95.

! Galgani, F:, and G. Bocquenne, (1989). A method for routine detection of organophosphates and carbamates in sea water. Environm. Tech. Lett.

10, 311-322.

! Mishra, N.N., J.A. Pedersen, and K.R. Rogers. (2001). Highly sensitive assay for anticholinesterase compounds using 96 well plate format. pp. 289-305. In Lipnick, R.L., R.P. Mason, M.L. Phillips, C.U. Pittnam, Jr. (eds.) Chemicals in the Environment: Fate, Impacts and Remediation, ACSSymposium Series No. 806; Oxford University Press: New York.

! Wilson, B.W, J.N. Seiber, M.E. Stelljes, J.D. Henderson, T.E. Archer, G.A. Pollock, and J.B..Knaak. (1989). Bioassays for detection of aldicarb in

watermelon. Bull. Environ. Contam. Toxicol. 42, 159-166.

Il marchio MAIA Pesticide MultiTest ® ed il relativo processo sono coperti da brevetti italiano (n. 0001332238) ed europeo (Requestn. 03425778.2).

PRESENTAZIONE

Prodotto REF Contenuto del kit

MAIA Controls 797031 MAIA micropiastra con 12 colonne di controllo

(6 Paraoxon + 6 Carbaryl)

TABELLA DEI SIMBOLI

LOT Codice del lotto Non riutilizzare Fabbricante Contenuto sufficienteper <n> saggi

Limiti ditemperatura

REF Numero di catalogo Fragile, maneggiarecon cura

Utilizzare entro Attenzione, vedere leistruzioni per l’uso

rev 1

26/01/2009

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