manual de prácticas de farmacognosia

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UNIVERSIDAD LA SALLE A.C.ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS

LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA.MANUAL DE PRÁCTICAS.

QFB 791Autor: Dra. Clarisa Villegas Gómez.

Responsable: Dr. Juan Rodrigo Salazar

GENERALIDADES:

a) Número Total de Prácticas: 7

b) Duración de cada práctica:

No. de Práctica No. de Sesiones1.- Preparación y separación de extractos 3 h (1 sesión)2.- Identificación de metabolitos secundarios 3 h (1 sesión)3.- Caracterización de poliacetilenos a partir de zanahorias. 6 h (2 sesiones)4.- Aislamiento de hesperidina a partir de cáscaras de naranja (Citrus sinensis). 6 h (2 sesiones)5.- Aislamiento de linalool a partir de cilantro (Coriandum sativum) 3 h (1 sesión)6.- Caracterización de capsantina a partir de chile (Capsicum sp.) 6 h (2 sesiones)7.- Aislamiento de piperina a partir de pimienta negra (Piper nigrum). 3 h (1 sesión)8.- Proyecto final 4 sesiones

c) Al término de cada práctica se entregará un reporte, el cual deberá realizarse de la siguiente manera:

- Portada.- Nombre del laboratorio.- Nombre y número de la práctica.- Fecha en que se realizó la práctica.- Nombre de los alumnos que integran el equipo.

- Introducción.- Objetivos (redactados de manera personal). - Desarrollo de la parte experimental.

- Resultados detallados.- Detallar pesos y rendimientos de las materias primas.- Datos cromatográficos.- Equipo a utilizar.

- Conclusiones.- Cuestionario.

d) El reporte será entregado a la siguiente sesión de que se realizó la práctica.

e) Evaluación:

Promedio de los reportes: 50%Proyecto final 50%

TOTAL 100%

La calificación obtenida en el laboratorio se convertirá al 20% a evaluar con la teoría.

f) Normas de seguridad.Es indispensable en todas las prácticas el uso de bata y googles. (Al alumno que no

cumpla estos dos requisitos, se le impedirá el ingreso al laboratorio).

BIBLIOGRAFIA:

1.- Trease y Evans. Tratado de Farmacognosia, México; Nueva Editorial Interamericana, 1991

2.- Tyler, V.E., L. R. Brady y J. E. Robbers. Farmacognosia. Buenos Aires: Ed. El Ateneo, 1985

3.- Harborne, J.B., Phytochemical Methods, a guide to modern techniques of plant analysis. Third Edition, Chapman and Hall, 1998.4.- Domínguez, X.A., Métodos de investigación fitoquímica. Primera edición, Editorial Limusa, 1973.

UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C.Facultad de Ciencias Químicas

Materia: Farmacognosia Clave: FA010508PRÁCTICA NO. 1 Carrera: QFB

PREPARACIÓN Y SEPARACIÓN DE EXTRACTOS. En vigor: 2012Escrita por: Dra. Clarisa Villegas Gómez.

Revisada y Aprobada por: QFB. Ana Belén Ogando Justo.

Substituye a: Versión 2009Próxima revisión: 2013

OBJETIVO: Que el alumno conozca y aplique metodologías generales en la extracción de los diferentes metabolitos de origen vegetal para su futura caracterización.

MATERIAL Y REACTIVOS:40g de planta seca Acetato de etilo10 Matraces Erlenmeyer de 25 ml Hexano4 Matraces Erlenmeyer de 100 ml Diclorometano1 Vaso de precipitado Agua destilada4 Tubos de ensaye Etanol1 Embudo tallo corto Piedras de ebullición Placas para cromatografía Cristales de yodo.Lámpara U.V Equipo para reflujo de 100 mLNido 1 Probeta de 10 mlParrilla de calentamiento 1 Tijeras

INTRODUCCIÓN:Algunos aspectos importantes cuando se va a trabajar con plantas se mencionan a continuación.

Colecta: Las plantas deben recolectarse con cuidado, el ejemplar, al que se le asigna un número progresivo debe ser lo mas completo que se pueda, con hojas, tallos, flores y si es posible con semillas. Durante la colecta, las plantas se pueden poner en una bolsa de polietileno y así retardar su marchitamiento. Las plantas se deben prensar tan pronto como sea posible.Secado : Puede hacerse de dos maneras.Secado al sol : Debe cambiarse el papel periódico a las 24 h; Es muy importante, ya que en ese período las plantas pierden la mayor parte del agua. Después, cambiar papeles cuatro o cinco veces más, en las plantas con mucho agua y dos o tres veces más en planas con poco agua.Secado artificial : (que puede ser eléctrico o de otra fuente). En este caso se necesita adicionalmente cartón corrugado para facilitar el secado.Estudios preliminares para estos casos se pueden utilizar muestras de 1 a 1000 g y orientarse a localizar cualitativa o cuantitativamente varios principios activos (por ejemplo, flavonoides, sapogeninas, alcaloides, etc.) Los métodos pueden ser:

a) Histológicos, que consiste en la observación del comportamiento de cortes de tejidos vegetales frente a ciertos reactivos.

b) Químicos que consiste en el tratamiento de extractos con agentes cromógenos.c) Fisicoquímicos, que consiste en el uso de cromatografía o espectroscopia (IR y UV de manera

frecuente)

d) Biológicos, consiste en observar el efecto de extractos sobre cultivos de microorganismos, en animales pequeños (ratas, ratones), embriones, órganos aislados, tejidos y cultivos celulares.

Determinación cualitativa de principios activos. Las técnicas utilizadas son muy variadas y diferentes, se procura que satisfagan criterios sobre sensibilidad, costos, reproducibilidad, etc. Para asegurar la reproducibilidad de la prueba es importante indicar si el material está fresco o seco; que cantidad de éste se extrajo; el peso del extracto obtenido y el volumen de la solución del que se tomaron las alícuotas para las pruebas y la composición exacta de los reactivos empleados.

PARTE EXPERIMENTAL:

Análisis fitoquímico preliminar (Método de Wally y colaboradores).La cantidad de material con la que se trabajará está entre los 30 y 40g.

1.- Se colocan 5 g en un matraz Erlenmeyer y se adicionan 15 ml de disolvente y 3 piedras de ebullición (hacer esta prueba con cuatro matraces, empleando como disolvente hexano, acetato de etilo, diclorometano, agua), y se calienta hasta ebullición, durante 10 minutos, si el disolvente se evapora adicionar un poco más de tal forma que el volumen no sea menor a 10 ml.

2.- Se deja enfriar, filtrar con un embudo de tallo corto y papel filtro; al residuo se le toman placas cromatográficas, empleando placas de gel de sílice y haciendo eluciones en hexano-acetato de etilo 80:20 (matraz con hexano), hexano, acetato de etilo 60:20 (matraz con acetato de etilo y con diclorometano), hexano-acetato de etilo 20:80 (matraz con agua).

3.- Para todos los casos se usa luz UV y vapores de yodo como agentes reveladores. No olvide dibujar las cromatoplacas en su bitácora de manera detallada. ¿En que extracto observa la mayor cantidad de componentes?

4.-Posteriormente someta los extractos a evaporación casi completa de disolventes (aproximadamente 2 ó 3 ml) y coloque los matraces en un baño de hielo acuoso y observe si se forman precipitados sólidos.

5.- Por otro lado 20 g de material seco y finamente molido se colocan en un matraz bola de 250 ml, se adicionan 100ml de etanol y se calienta hasta alcanzar el reflujo y se mantiene bajo esas condiciones durante 1 hora. Se deja enfriar y se filtra el extracto en un embudo de tallo corto, el disolvente se elimina hasta un 50% del volumen inicial.

6.- A este extracto también se le toma una placa cromatográfica, la cual se eluye en hexano-acetato de etilo 20:80, empleando también luz UV y vapor de yodo como reveladores. Esta solución se guarda para los experimentos a realizar en la Práctica 2.

CUESTIONARIO:

1.- ¿Qué entiende por metabolito primario y metabolito secundario?2.- ¿Qué importancia tiene la polaridad del disolvente en una extracción de plantas?3.- Mencione los principales grupos de metabolitos secundarios y para cada caso dibuje la fórmula química de algún compuesto, mencionando que propiedad fisiológica importante presenta.4.- ¿Qué clase de compuestos espera observar al revelar una cromatoplaca empleando luz UV de yodo?

Tratamiento de residuos.

Los sólidos deberán ser secados de cualquier residuo de disolventes antes de desecharse en la basura.Los disolventes deberán ser depositados en los contenedores respectivos.Los ácidos y bases se deberán neutralizar para poder ser depositados en los contenedores correspondientes.Si existen residuos de metales pesados, estos deberán confinarse en los recipientes correspondientes.


Materia: Farmacognosia Clave: FA010508PRÁCTICA NO. 2

IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUINDARIOS.Carrera: QFB En vigor: 2012

Escrita por: Dra. Clarisa Villegas Gómez.



OBJETIVO: utilizar pruebas simples y generales en la identificación de metabolitos a partir de un extracto alcohólico simple.

MATERIAL Y REACTIVOS:HCl MetanolMg metálico EtanolHgCl2 Ácido acéticoKl Ácido sulfúricoFeCl3 Anhídrido acéticoI2 VainillinaRevelador de Sulfato cérico Éter etílicoNaOH Tubos de ensayoNaCl Parrilla de calentamiento y agitaciónAcetato de etilo Placas de cromatografíaCloroformo 5 vasos de precipitados 25 y 50 mL.Hexano 5 Matraces Erlenmeyer 5, 10, 25 y 100 mLAlcohol isoamílico 1 Probeta de 10 mL4 zanahorias grandes

PARTE EXPERIMENTAL:

Para la siguiente práctica. Cuatro zanahorias de tamaño grande se cortan en pedazos muy pequeños, los cuales se colocan en un matraz Erlenmeyer de 500 mL se adicionan 50 mL de éter etílico y se deja reposar hasta la siguiente sesión, cuidando condiciones a baja temperatura y bien tapado.

Se utiliza el extracto etanólico preparado en la Práctica 1.Los 100 ml se dividen en dos porciones (50 ml).Se trabajaran solo los primeros 50 ml.

a) Presencia de flavonoles: 1.- Se toman 2 ml del extracto etanólico y se mezclan con 2 ml de una solución de HCl al 1%, posteriormente se adiciona una viruta de Mg metálico, agitando suavemente la formación de coloración roja indica la presencia de flavonoles, posteriormente adicione 1 ml de alcohol isoamílico (observe si se forma un compuesto colorido).

2.- Realizar una cromatografía en placa fina del extracto etanólico empleando un sistema hexano/acetato de etilo 80:20 como eluyente y cristales de yodo como revelador. ¿Qué colores observa en la placa? ¿Qué significa si presenta un color amarillo al revelar?

b) Presencia de glicosidos.1.- De manera convencional se emplean sales de Pb, por tal razón y debido a la alta toxicidad que presenta solo se realizará por medio de la coloración en cromatografía en placa fina. Se aplica una muestra del extracto etanólico en una placa cromatográfica y se eluye en un sistema diclorometano-metanol-agua (87:12:1), una vez que se eluyó la placa se revela con una solución preparada de sulfato cérico en ácido sulfúrico, (anote sus observaciones).

2.- A 12 ml del extracto etanólico se le agrega agua caliente (10 ml) y se agita durante 15min. Si se genera espuma y esta perdura por más de 15 minutos, se considera como prueba positiva de saponinas.

c) Presencia de alcaloides: 1.- A 15 ml del extracto etanólico se le evapora el disolvente hasta sequedad y se disuelve en una solución de HCl 2N, adicionándole una cantidad similar de solución saturada de NaCl, se deja reposar durante 10 minutos, finalizado éste tiempo se filtra y al filtrado se realizan pruebas con los reactivos de Dragendorff ó Mayer. Para preparar el reactivo de Mayer se disuelve 1.36 g de HgCl2 en 60ml de agua y 5 g de Kl en 10 ml de agua, se juntan las soluciones y se aforan a 100 ml. En caso de no contar con los reactivos arriba descritos, se puede utilizar el reactivo de Wagner, este se prepara disolviendo 1.27 g de yodo y 2 g de yoduro de potasio en 20 ml de agua; la solución se afora a 100 ml con agua destilada, la mayoría de las soluciones aciduladas de alcaloides forman precipitados floculentos color marrón.

La parte restante de la solución se utiliza para cromatografía en capa fina ocupando como revelador una solución del reactivo de Wagner, y como sistema de elución cloroformo-metanol 9:1

Ultimo paso: Una porción de 60 ml, se evapora hasta tener un volumen aproximado de 6 ml., El restante se divide en tres partes para las siguientes pruebas.

d) Presencia de taninos: El residuo se disuelve en 5 ml de agua destilada y se adicionan 5 ml de solución de FeCl3 acuoso, deje reposar por 5 min y anote sus observaciones.

e) Presencia de fenoles: El residuo se disuelve en 8 ml de una solución de HCl al 1% se agita durante 5 minutos y se extrae con éter etílico (2 X 8 ml), una vez separada la fase etérea se toma una placa cromatográfica utilizando ácido acético-diclorometano (1:9). Se revela con una solución de vainillina-ácido sulfúrico, el cual se prepara disolviendo 3 g de vainillina en 100 ml de etanol absoluto, se adicionan 0.5 ml de ácido sulfúrico y se agita por 10 minutos.

f) Presencia de terpenos: Para este caso primero se prepara un reactivo mezclando anhídrido acético-ácido sulfúrico-cloroformo (10:1:25), se adiciona 10 ml de esta solución al residuo y se agita durante 3 a 5 minutos, la aparición de colores rojizos o azules se consideran prueba positiva.

CUESTIONARIO:1.- ¿Mediante que reacciones químicas podrían diferenciar los grupos funcionales presentes en los metabolitos secundarios de la práctica 2?2.- ¿Si se quisiera confirmar la estructura de algún compuesto en especial, que técnica analítica utilizaría y porqué?3.- ¿Qué sugiere para descartar o confirmar la presencia de algún metabolito buscando mediante la generalización realizada en la práctica?4.- ¿Cuándo usted se prepara un té, que grupos de compuestos considera que se extraen en mayor proporción y porqué?





CARACTERIZACIÓN DE POLIACETILENOS A PARTIR DE ZANAHORIAS.Carrera: QFB En vigor: 2012




OBJETIVO: Realizar la caracterización de falcarinol, un compuesto poliacetilénico a partir de zanahorias como fuente natural.

MATERIAL Y REACTIVOS:1 Matraz Erlenmeyer de 500 ml Papel filtroEquipo de destilación Piedras de ebullición1 Embudo de tallo corto MgSO4

1 Matraz bola de 100 ml Hexano

1 Probeta de 10 ml BencenoPlacas cromatográficas CloroformoLámpara UV Revelador de Sulfato Cérico.Cáscaras de naraja Eter etílico

I2

INTRODUCCIÓN:Las zanahorias poseen cuatro tipos de acetilenos, el mayor de ellos es el falcarinol, este compuesto es débilmente tóxico pues posee una propiedad neurotóxica, sin embargo, en las zanahorias su concentración es extremadamente pequeña que no presenta algún peligro en la dieta diaria. Este compuesto se aisla fácilmente de las zanahorias y la presencia de falcarinol puede observarse por medio de espectroscopia UV.

PARTE EXPERIMENTAL:

Para la siguiente práctica. 100 g de cáscara de naranja cortada en pedazos muy pequeños se colocan en un matraz Erlenmeyer de 1000 ml y se adicionan 350 ml de una solución de hidróxido de calcio al 10%, agitando manualmente por un periodo de hora y media, dejándolo en reposo hasta la siguiente sesión.

Cuatro zanahorias de tamaño grande se cortan en pedazos muy pequeños, los cuales se colocan en un matraz Erlenmeyer de 500 mL se adicionan 50 mL de éter etílico y se deja reposar hasta la siguiente sesión, cuidando condiciones a baja temperatura y bien tapado. (ya se realizó)

Al término de este tiempo, el éter se decanta, el residuo etéreo se seca sobre MgSO4 y se destila suavemente el éter en un baño María (cuidar que la temperatura no exceda de los 35°C). El residuo se disuelve en un pequeño volumen de hexano y se toman placas cromatográficas que se eluyen en un sistema benceno-cloroformo (10:1), utilizando un revelador de sulfato cérico en ácido sulfúrico, una vez rociadas las placas, se calientan por unos minutos. La presencia de falcarinol se toma como positiva cuando en la placa se observa una intensa mancha color café. Realice también pruebas ocupando vapores de yodo y luz UV como reveladores.

Utilice la siguiente sesión para realizar la caracterización en UV de la sustancia aislada.

CUESTIONARIO:1.- Estudios recientes sobre productos naturales, han demostrado que los compuestos alquínicos poseen actividad farmacológica muy interesante, uno de los ejemplos más contundentes son los enedinos, de un ejemplo de este tipo de compuestos y para tal caso cite su interés farmacológico.2.- ¿Cuál es el origen biogenético de los compuestos acetilénicos?3.- ¿Qué prueba de caracterización de grupos funcionales sugiere para este caso?4.- ¿Usted cree posible la presencia de falcarinol en otro tipo de tubérculos?





AISLAMIENTO DE HESPERIDINA A PARTIR DE CASCARAS DE NARANJA (Citrus sinensis)

Carrera: QFB En vigor: 2012




OBJETIVO: Aislamiento e identificación de flavonoides, en especial de hesperidina a partir de las cáscaras de la naranja.

MATERIAL Y REACTIVOS:Ácido acético 2 Matraz Erlenmeyer de 500 mlHidróxido de calcio 1 Embudo BuchnerCelita 4 Tubos de ensayeCloruro férrico HexanoÁcido clorhídrico MetanolFormamida Agua destiladaMagnesio Papel filtro 1 Matraz kitazato de 500 ml Cáscaras de naranja

PARTE EXPERIMENTAL:

100 g de cáscara de naranja cortada en pedazos muy pequeños se colocan en un matraz Erlenmeyer de 1000 ml y se adicionan 350 ml de una solución de hidróxido de calcio al 10%, agitando manualmente por un periodo de hora y media, dejándolo en reposo hasta la siguiente sesión.

Finalizado el tiempo, la mezcla se filtra a través de un embudo Büchner con una capa delgada de celita y papel filtro. El filtrado de color amarillo-naranja se acidula cuidadosamente a pH de 4 a 6 con ácido clorhídrico concentrado; la hesperidina precipita como un sólido amorfo.

El precipitado se separa mediante filtración en un Büchner y se lava con muy poca cantidad de agua destilada helada.

Nota: Si la precipitación de hesperidina al momento de adicionar el ácido clorhídrico es muy lenta, es conveniente concentrar la solución a presión reducida.

Al residuo se le realizan las siguientes pruebas:

a) Prueba con cloruro férrico:La adición de una solución de cloruro férrico a una muestra de hesperidina produce un color rojo.

b) Prueba con ácido clorhídrico-magnesio:La adición de ácido clorhídrico a una solución etanólica de hesperidina que contiene magnesio produce un color violeta.

Utilice la segunda sesión para realizar la caracterización de la sustancia aislada.

CUESTIONARIO:1.- ¿Cuál es la biogénesis de los flavonoides?2.- ¿Cuáles son las propiedades físico químicas más importantes de las flavonas e isoflavonas?3.- Cite al menos una estrategia de síntesis de flavonas.4.- ¿Qué fuente natural es rica en flavonas y cuales son sus atribuciones farmacológicas?





AISLAMIENTO DE LINALOOL A PARTIR DE CILANTRO (Coriandum sativum)





OBJETIVO: Aislamiento de aceites escenciales, de manera particular monoterpenos acíclicos (linalol) a partir de cilantro (Coriandum sativum).

MATERIAL Y REACTIVOS:3 Matraz Erlenmeyer de 500 mlMaterial de vidrio para destilación por arrastre de vapor.Lámpara de luz UVAgua destiladaCristales de yodoVainillinaBencenoCloroformoHexanoPlacas cromatográficasCilantro fresco

INTRODUCCIÓN:

Los compuestos denominados aceites esenciales generalmente se utilizan como saborizantes y aromatizantes, algunos presentan actividad fisiológica, por ejemplo los derivados de Anethum graveolens (eneldo), todos ellos tienen la característica de ser principalmente monoterpenos, especialmente aldehídos o cetonas (cuminaldehído y carvona) en la gran mayoría de los casos. Las diferencias entre los aromas que de ellos se obtienen están ligadas a las diferencias estructurales.

La cromatografía en capa fina es un buen método para determinar la cantidad de monoterpenos aislados a partir de una fuente en especial, esta metodología puede servir para muestras desconocidas y compararlas con patrones preestablecidos y así conocer si algún compuesto en especial se repite en más de una especie, esto es muy útil en farmacognosia.

PARTE EXPERIMENTAL:En un matraz Erlenmeyer de 250 ml se colocan 50 g de cilantro fresco y se someten a una extracción por arrastre de vapor, hasta obtener alrededor de 200ml.

La caracterización del linalol se realiza mediante cromatografía en placa fina, utilizando como eluyente benceno (100%), benceno-cloroformo (1:1) y hexano-cloroformo (3:2). Observe las cromatoplacas en la luz UV (el linalol, genera una fuerte absorción obscura). NOTA: realizar dos placas de cada eluyente (dos lotes de tres placas)

Las primeras tres cromatoplacas se revelan con vainillina y se calientan.Las otras tres placas se revelan con Yodo.En ambos casos realice sus notas pertinentes.

Finalmente, ¿es agradable el aroma del linalol?, ¿Le recuerda algún aroma en especial?

CUESTIONARIO:1.-¿Qué importancia tienen los aceites esenciales para el ser humano?2.- Cite algún ejemplo de aceite esencial que posea actividad farmacológica y cuál es ésta.3.- ¿Cuál es el origen biosintético de los terpernos?4.- ¿Cuántas vías biosintéticas existen para los terpenos?5.- ¿Cuál de éstas dos vías pertenece al linalol?6.- Se sabe que la gran mayoría de los terpernos son de muy baja polaridad, ¿Entonces por qué se utiliza arrastre de vapor de agua como técnica de aislamiento?.





CARACTERIZACIÓN DE CAPSANTINA A PARTIR DE CHILE (Capsicum sp.)





OBJETIVO: Caracterización de capsantina, compuesto carotenoide a partir de de chile.

MATERIAL Y REACTIVOS:Equipo para reflujo de 250 o de 500 mL. KOH1 Embudo de separación de 500 ml Hexano1 Embudo Büchner de tallo corto CloroformoNido Acido sulfúrico1 Matraz Erlenmeyer de 250 ml Agua destilada1 Matraz Kitazato de 100 ml Na2SO4

1 Embudo de tallo corto Papel filtroParrilla de calentamiento Cristales de yodoLámpara de luz UV Chiles

INTRODUCCIÓN:Los carotenoides son pigmentos inestables, se oxidan fácilmente, de manera particular cuando se exponen al aire en la cromatografía de capa fina, también sufren isomería cis-trans al realizar el aislamiento. Mucha de la identificación de carotenoides se basa en la cromatografía por placa fina, comparándola con muestras estándar para aquellos casos en donde sea posible. Otra forma es a través de la información que proporciona la espectroscopia de UV, ya que para este caso aparecen absorciones características de 400 a 500 nm.

PARTE EXPERIMENTAL:

1.- 50 g de chiles finamente cortados se colocan a reflujo durante 1.5 h en 100 ml de hexano, finalizado este tiempo se deja enfríar y se filtra,

2.- Al filtrado se le adicionan 20 ml de cloroformo y 15 ml de una solución de KOH al 30%, se agita durante 1 h,

3.- Finalizado éste tiempo se separan las fases orgánica e inorgánica, a la fase orgánica se le realizan dos lavados con agua destilada (30 ml c/u), y al final se seca sobre Na2SO4, este residuo se concentra hasta obtener un volumen aproximado de 10 ml del extracto.

4.- Se adicionan 20 ml de hexano y se deja en reposo en un lugar obscuro hasta la siguiente sesión, tiempo durante el cual los cristales de capsantina aparecerán; éstos se separan por filtración.5.- Se adicionan de 3 a 5 ml de una solución de cloroformo-ácido sulfúrico, y se observará la formación de un color azul. (Mientras más color azul se observé, más concentración de capsantina)

Realice cromatografía en placa fina utilizando como eluyente hexano:acetato de etilo (90:10) y como revelador vapores de yodo y luz UV

Utilice la segunda sesión para la caracterización del producto aislado.

CUESTIONARIO:1.- ¿Cuál es el origen biogenético de los carotenoides?2.- ¿Qué importancia tienen en el ser humano?3.- La capseicina, es un metabolito presente en los chiles; ¿Cuál es la fórmula de dicho compuesto y que propiedades farmacológicas presenta?4.- ¿Qué otras fuentes naturales son ricas en carotenoides?





AISLAMIENTO DE PIPERINA A PARTIR DE PIMIENTA NEGRA (Piper nigrum)





OBJETIVO: Aislamiento e identificación de piperina, alcaloide común en especies del género Piper.

MATERIAL Y REACTIVOS:Soxhlet Hidróxido de potasioParrilla de calentamiento I2

1 Embudo Hirsch de tallo corto Etanol1 Matraz kitazato de 50 ml Acido Sulfúrico1 Matraz Erlenmeyer de 50 ml Placas cromatográficasLámpara U.V Papel filtroPiedras de ebullición Pimienta negra en bola (prohibido traer pimienta molida)Nido al tamaño del equipo Soxhlet

PARTE EXPERIMENTAL:10 g de pimienta negra finamente molida se someten a extracción con 50 ml de etanol al 95% en un aparato soxhlet por 1.5 horas. La solución se filtra y concentra. Se adiciona al filtrado una solución alcohólica de hidróxido de potasio (10 ml al 10%), se decanta la solución debido a la formación de un residuo insoluble.

Se induce la cristalización de la solución alcohólica hasta la formación de agujas amarillentas (si esto no es posible, concentre en el rotavapor la disolución hasta unos 5 mL, e induzca la cristalización), estas se filtran en un embudo Hirsch, se dejan secar y se obtiene el rendimiento del alcaloide.

Pruebas de identificación:a) El extracto se aplica en una placa cromatográfica y se eluye en un sistema benceno-acetato de

etilo 2:1. Si la placa se somete a la luz UV se observará una fluorescencia color azul debida a la piperina.

b) Si se rocía un ácido sulfúrico y se calienta a por unos min, la piperina adquirirá una coloración amarilla-café.

c) Realizar otra placa en el mismo eluyente y someterla en cristales de Yodo, anotar las posibles diferencias entre estos dos reveladores.

SOY MUY ENOJONA Y AGRESIVA, RECONOZCO QUE NECESITO AYUDA. ARELI TAL VEZ SEA LA RESPONSABLE, SIENTO COSAS MUY EROTICAS POR ELLA. OJALA LA TUVIERA DESNUDA EN MI CAMA … LA DESEO CON LOCURA Y PASION DESENFRENADA… SERA MI PEQUEÑO SECRETO.pf de 125 a 126°C.

CUESTIONARIO:1.- ¿Cuáles son las propiedades físico químicas más importantes de los alcaloides?2.- ¿Se podría englobar una sola vía biogenética para los alcaloides?3.- ¿Bajo que condiciones se recomienda el aislamiento de alcaloides?4.- ¿Cuál es el agente revelador por excelencia para determinar la presencia de alcaloides en una muestra?





PROYECTO DE INVESTIGACION Carrera: QFB En vigor: 2012

Escrita por: Juan Rodrigo Salazar



OBJETIVO: el estudiante planteará un proyecto de investigación.

MATERIAL Y REACTIVOS: El alumno deberá entregar al docente una lista con el material solicitado para poder trabajar.

PARTE EXPERIMENTAL: el alumno diseñará su propio procedimiento y lo entregará al docente para su evaluación. Las metas del proyecto son: aislar un metabolito secundario y caracterizarlo mediante UV, IR, y otras técnicas si fuera necesario. Los alumnos deberán hacer incapie en utilizar metodologías limpias e indicar los procedimientos para el tratamiento y disposición final de los residuos de cada práctica.

manual de prácticas de farmacognosia

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