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Nestlé Purina Pet Care Company • Parasitología: Diagnósticos en perros y gatos

Clinical Handbook Series

Nestlé Purina PetCare CompanyCheckerboard Square

St. Louis, Missouri

Parasitología: Diagnósticos en perros y gatosDwight D. Bowman, MS, PhD

Elizabeth A. Fogarty, BA


Publicado por The Gloyd Group. Inc.Wilmington, Delaware

©2003 por Nestlé Purina PetCare CompanyTodos los derechos reservados.

Impreso en ArgentinaNestlé Purina PetCare Company: Checkerboard Square. St. Louis, Missouri, 63188

Primera impresión 2003

Este libro está protegido por las leyes de propiedad intelectual.

ISBN 0-9678005-9-5

Parasitología: Diagnósticos en perros y gatos

Dwight D. Bowman, MS, PhDElizabeth A. Fogarty, BA


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Nestlé Purina Pet Care Company • Parasitología: Diagnósticos en perros y gatos 5

Contenido

Introducción 7

Parte I

Capítulo 1: Análisis de materia fecal 11Frotis fecal directo 11Flotación con sulfato de zinc 12Métodos de flotación estacionaria 15Flotación centrífuga de azúcar 17Análisis de sedimentación 19Aparato de Baermann 21Pruebas de antígenos fecales 22Métodos de cultivo de materia fecal 22

Capítulo 2: Muestras de orina 25

Capítulo 3: Muestras de sangre 27Preparación húmeda para Microfilarias y Tripanosomas 27Técnica de Knott 27Técnicas de membrana 29Equipos para pruebas de antígenos 29Frotis de sangre teñida 29

Capítulo 4: Muestras de tejido 31Raspaje de piel 31Frotis de piel y aspirados de médula ósea 31

Parte II

Capítulo 5: Parásitos detectados en las heces — Estudio de casos 35

Capítulo 6: Parásitos detectados en la orina — Estudio de un caso 53

Capítulo 7: Parásitos detectados en la sangre — Estudio de casos 55

Capítulo 8: Parásitos detectados en muestras de tejido— Estudio de casos 63

Parte IIIGlosario 75Lecturas sugeridas 79Índice de figuras 81


Introducción

Los veterinarios en su consultorio hacenexámenes de rutina de muestras de ma-teria fecal, orina, sangre y tejidos paradetectar parásitos y diagnosticar parasi-tosis en perros y gatos. Sin embargo, nohay un solo método que sea apropiadopara todos los tipos de parásitos. Porejemplo, si bien un frotis fecal directopuede ser el mejor método para detec-tar los trofozoitos de ciertos flagelados,con frecuencia este método no tiene lasensibilidad suficiente para detectar elextraño huevo de helminto que puedeestar presente. Una muestra de sedimen-to de orina teñido probablemente nosea la mejor forma de detectar los hue-vos de distintos helmintos que puedenestar presentes en el tracto urinario por-que existen altas posibilidades de quelos huevos no se adhieran al portaobje-tos durante el teñido. De manera simi-lar, el teñido de portaobjetos con mate-rial de lavado traqueal puede no ser lamejor forma de determinar si hay larvasde Metastrongylidae o huevos de Parago-nimus en la muestra, mientras que elexamen directo del sedimento es másprobable que de resultados positivos.Cuando se conservan las muestras, ladensidad flotante de los huevos con fre-cuencia cambia y, por lo tanto, la mismaprueba que funciona bien en heces fres-cas puede resultar inapropiada en mate-ria fecal conservada.

Un diagnóstico parasitológico es de granayuda porque por lo general significaque se puede implementar un tratamien-to efectivo. Existen productos comercia-les para el tratamiento de la mayoría delas parasitosis y la parasitología es, en-tonces, uno de los campos en el cual lascuras son por lo general directas y sim-ples. Hay excepciones, como por ejem-plo las infecciones por Cytauxzoon,

Cryptosporidium o larvas de Mesoces-toides, pero, la mayoría de las veces, lasparasitosis pueden desaparecer con rela-tiva facilidad. El diagnóstico correctopermite administrar a tiempo un pro-ducto que curará a la mascota de su in-fección.Existen dos tipos de exámenes parasito-lógicos: aquellos que se realizan comoparte de un examen físico de rutina yaquellos que se realizan porque se sos-pecha de un agente o tipo de agente es-pecífico. Cuando se realiza un análisis demateria fecal como parte de un estudiofísico de rutina, se elige una técnica quede resultados uniformes y confiables pa-ra la mayoría de los parásitos más comu-nes. Se utilizan técnicas especialescuando existe la necesidad de buscaruna causa subyacente de una enferme-dad inesperada o para verificar una sos-pecha clínica en base a un examen clíni-co u otros métodos diagnósticos comolas radiografías. Los métodos especiali-zados, como por ejemplo los cultivos desangre y cultivos de piel o las biopsiasde médula ósea para detectar infeccio-nes causadas por flagelados, a veces losutilizan los laboratorios especiales. Estaspruebas no se tratarán en detalle en estemanual porque se asume que la mayoríade dichas muestras serán entregadasdespués de consultar con el laboratorioque realiza la prueba.

El manual "Parasitología: Diagnósticosen perros y gatos" está dividido en trespartes. La Parte I presenta informaciónbásica sobre los diversos métodos dispo-nibles para los veterinarios clínicos y la-boratorios para el examen de muestrasde materia fecal, orina, sangre y tejidopara la detección de parásitos. Se descri-ben los procedimientos paso por paso,incluso los equipos y reactivos necesa-

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rios, para cada una de las técnicas quegeneralmente se utilizan en veterinaria.Se incluye además, una explicación ge-neral de los métodos más especializadosque usualmente usan los laboratorios dediagnóstico centralizados, como se men-cionó anteriormente. En la Parte II, sepresentan casos de estudio que demues-tran el uso de las técnicas descriptas enla Parte I en casos clínicos reales. Cadaestudio de un caso describe las marcas,la historia clínica, el examen físico, laevaluación inicial y el supuesto diagnós-tico y pasa a tratar el plan de diagnósti-co y el resultado. En la Parte III se pro-porciona material de referencia, inclusoun glosario de términos utilizados en pa-rasitología, lecturas sugeridas para mayorinformación e índices de figuras y te-mas.

Este manual ha sido diseñado para pre-sentar los diversos métodos que se usany pueden usarse en el laboratorio clíni-co. No pretende ser una exhaustivacompilación de todas la técnicas posi-bles. Las técnicas presentadas se descri-ben con detalles suficientes para permi-tir realizarlas en la mayoría de los labora-torios. La utilidad de muchas de las téc-nicas se ilustra con una serie de histo-rias clínicas que presentan situacionesen las cuales las diferentes metodologíaspodrían ayudar en un diagnóstico. Algu-nas de las técnicas presentadas no seránnecesariamente el método preferido portodos los laboratorios o todos los profe-sores de parasitología. Gran parte de lascontroversias entre los parasitólogos so-bre las diferente técnicas en realidad pa-recen remitirse a una diferencia en lapreferencia personal y los parásitos derutina que un parasitólogo o un técnicode laboratorio podría buscar en unacierta área geográfica. Este manual no

es una guía ilustrada de todos los parási-tos que pueden aparecer en las heces, lasangre, la orina o los tejidos de los gatosy perros. Para estos detalles, se remite allector a otras fuentes (ver Lecturas Suge-ridas en la Parte III).

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Parte I

DESCRIPCIÓN GENERAL

El análisis de la materia fecal en veterinaria sepuede realizar con distintos objetivos. Si el análisis demateria fecal es parte del control de rutina de la mas-cota, las pruebas adecuadas para lograr este objetivoson:

• Frotis fecal directo• Flotación con sulfato de zinc • Métodos de flotación estacionaria• Flotación centrífuga de azúcarOtros métodos, incluso los análisis de sedimenta-

ción y el aparato de Baermann se pueden utilizarcuando el análisis de materia fecal se realiza para diag-nosticar una presunta parasitosis de cierto tipo.

Los diferentes análisis funcionan mejor según cadasituación, independientemente de qué tan bien pudie-ra funcionar la prueba para el diagnóstico de una in-fección.Algunos laboratorios prefieren los métodosestacionarios para los análisis de rutina. Un veterina-rio, amigo de los autores, realiza un análisis estaciona-rio de materia fecal al comenzar el exámen clínico dela mascota ya sea con una muestra suministrada porel dueño o tomada durante el exámen. La prepara-ción lleva sólo unos segundos y cuando el análisis es-tá terminado, en aproximadamente 10 o 15 minutos,el veterinario está listo para examinar la muestra conel microscopio delante del dueño. Este veterinariosiente que este método compromete al dueño con eltratamiento recomendado para la mascota. Conocebien su parasitología y reconoce que es posible quepierda algunos parásitos como parte de su diagnósti-co: sin embargo, siente que se detectarán parásitos derutina como helmintos y coccidios que podrían estarpresentes y no se preocupa por otros parásitos menoscomunes que podrían pasarse por alto en un perro ogato sano. Otros veterinarios no planean tener los re-sultados del análisis terminado en el momento de lavisita de la mascota; en cambio, llaman al cliente des-pués para info rmarle los resultados de la pru e b a . En es-tos casos, se pueden usar otros métodos analíticos o elp e rsonal técnico puede usar va rios análisis dife re n t e s .

Muestras frescas versus muestras fijadasEn medicina veterinaria, las muestras de materia

fecal frescas, más que las muestras fijadas, por lo gene-ral se procesan para exámenes de rutina. En cambio,en medicina de seres humanos, el peligro de infec-ción del personal de laboratorio con los agentes pre-sentes en las muestras ha llevado a fijar la mayoría delas muestras antes de presentarlas. Los agentes infec-ciosos, como por ejemplo la hepatitis A y otros pató-genos como la ameba humana, Entamoeba histolytica,por lo general no están presentes en las muestras pro-venientes de caninos y felinos; por esta razón, en lamedicina veterinaria, aún se procesan las muestras sin

el fijador inicial. Una ventaja del exámen de prepara-ciones frescas es que los organismos viviente con fre-cuencia se pueden visualizar por su movimiento. Ladesventaja es que sin fijador, algunos protozoos sepueden descomponer si no se examina la muestra rá-pidamente apenas se la recibe. Los huevos y quistesen las muestras de materia fecal fijadas con formol notienen las mismas características de flotabilidad quecuando no están fijadas con formol. Así, el uso de mé-todos de sedimentación es mucho más común en loslaboratorios de medicina de seres humanos que enlos laboratorios veterinarios.

Los métodos de sedimentación, como se los des-cribe en los textos de parasitología en seres humanosy luego en este capítulo, son métodos útiles pero tien-den a requerir más tiempo para el exámen de lamuestra. Por lo tanto, para diagnósticos de rutina confrecuencia se prefieren los métodos de flotación utili-zando heces frescas.

Pruebas especializadasEn la actualidad existen métodos que detectan los

antígenos de diferentes parásitos en las heces. Los dosparásitos que se detectan más comúnmente con estemétodo son Giardia y Cryptosporidium. Estas prue-bas han sido desarrolladas para infecciones en sereshumanos y todavía no están comercializadas en formadirecta para muestras de materia fecal de caninos y fe-linos. Sin embargo, varios laboratorios de diagnósticode animales usan estas pruebas de rutina que parecenproporcionar resultados adecuados según la verifica-ción interna de los laboratorios que surge de la com-paración con métodos de diagnóstico más estándares.Estas pruebas son relativamente costosas y con fre-cuencia requieren la adquisición de material suficien-te para analizar muchas muestras. Por estas razones,con frecuencia se realizan en laboratorios de diagnós-tico centralizados. De manera similar, los métodos derotulación de patógenos con anticuerpos fluorescen-tes también los usan por lo general los laboratorioscentralizados que tienen microscopios de fluorescen-cia. Al final de este capítulo se explican en detalle laspruebas de antígenos fecales.

FROTIS FECAL DIRECTOEl método más rápido para la detección de parasi-

tosis es el frotis fecal salino directo. El término frotisen realidad no es un nombre muy correcto ya que nose hacen frotis de las heces. En cambio, una pequeñacantidad de heces, aproximadamente la que se puedetomar con el extremo de un aplicador de madera, ape-nas se humedece en una gota de solución salina enun portaobjetos (Figura 1.1). En el caso de heces deperro y gato, hay altas probabilidades de que hayagrandes trozos de granos del alimento seco que hayansido ingeridos por la mascota; estos trozos pueden re-


Capítulo 1: Análisis de materia fecal

tirarse con el extremo del aplicador. Las heces de pe-rros y gatos con frecuencia absorben la humedad dela gota que se colocó en el portaobjetos, por lo tantopuede ser necesario agregar un poco más de soluciónsalina. Colocar la gota al aplicador y dejar que se des-lice sobre el portaobjetos con las heces es una de lasmejores formas de hacerlo.

Por lo general, no hay motivo para hacer estas pre-paraciones con agua. El objetivo del frotis directo esvisualizar trofozoitos vivos y estas etapas habitualmen-te se lisarán si la preparación se hace con agua en lu-gar de solución salina. Por supuesto que si el agua esel único medio disponible, puede permitirle al clínicodar un vistazo rápido y detectar altas concentracionesde huevos o quistes que pueden detectarse en mues-tras con agua.

Una vez que se ha desparramado el material en elportaobjetos hasta formar una preparación homogé-nea y que se han retirado los trozos grandes, se puedecolocar un cubreobjetos sobre la preparación (Figura1.2). Primero, se debe escanear el portaobjetos conun objetivo de 10X o 20X (con práctica, todos los pa-rásitos de los perros y gatos se pueden visualizar conun objetivo de 10X). Luego, se pueden examinar losobjetos de interés más de cerca con un alto objetivoseco (40X). El uso de una lente de inmersión en acei-te sobre preparaciones húmedas por lo general no re-sulta satisfactorio porque la preparación es demasiadoespesa o porque el material que se encuentra debajodel portaobjetos se mueve por la presión de la lentesobre la superficie del cubreobjetos. La observacióncon inmersión en aceite es una posibilidad, pero sólosi se sella primero el portaobjetos con esmalte parauñas o parafina derretida. En parasitología humana, laspreparaciones con frecuencia se tiñen con yodo, locual hace que los núcleos de los trofozoitos sean másfáciles de visualizar ya que los gránulos de glucógenose tiñen en algunos de los quistes y trofozoitos. Enmedicina veterinaria, la mayoría de las especies deamebas y otros parásitos protozoos importantes enmedicina para seres humanos, por lo general no seobservan, por lo tanto el uso de yodo no es necesarioy tampoco resulta útil.

FLOTACIÓN CON SULFATO DE ZINCUno de los mejores medios para observar los quis-

tes de Giardia y diversos huevos de parásitos es conla flotación con sulfato de zinc. Esta técnica tiene laventaja de ser rápida y relativamente fácil de realizar.Como actualmente se consigue solución de sulfato dezinc ya preparada, la tarea se hace menos onerosaporque no hay que trabajar en la preparación de estereactivo. Una alternativa poco costosa es usar sulfatode magnesio (sales de Epsom) en lugar de sulfato dezinc. Las únicas desventajas con las sales de Epsomson que la solución es un poco más viscosa y quetiende a cristalizarse un poco más rápido durante laobservación (Figura 1.3).

Nestlé Purina Pet Care Company • Parasitología: Diagnósticos en perros y gatos12

Figura 1.1. Los materiales necesarios para realizar un frotis di-recto son: cubreobjetos de 22 x 22 mm (o de 18 x 18 mm), unportaobjetos para microscopio, un aplicador, heces y soluciónsalina. Siempre es mejor hacer la preparación con solución sa-lina en lugar de agua, de modo que los trofozoitos vivos perma-necerán viables y móviles.

Figura 1.2. Al preparar el frotis directo, es importante colocaruna pequeña cantidad de solución salina en el portaobjetos yluego agregar una pequeña cantidad de heces, más o menosdel tamaño del extremo del aplicador, aproximadamente 2mm2. Luego se mezclan las heces con la solución salina y selas desparrama hasta formar una mezcla relativamente clara(A). Si hay sólidos presentes, en especial común cuando seadministra a los animales alimento seco, se pueden apart a rcon cuidado los sólidos a un costado de la gota con el bord edel cubreobjetos antes de bajar el cubreobjetos sobre la pre-paración (B).

Cuando se la hace en forma correcta, la centrifuga-ción de sulfato de zinc puede hacerse rápido. Median-te el uso de una centrífuga en la que se puedan colo-car seis tubos a la vez (Figura 1.4), es fácil que unapersona procese y examine alrededor de 60 muestraspor hora con este método. El secreto del análisis rápi-do es no usar un cubreobjetos durante la fase de ob-servación del exámen. Una vez que uno se ha toma-do el trabajo de concentrar los quistes y huevos en un

pequeño círculo de 5 mm, ¿para qué desparramarlosdebajo de un cubreobjetos de 22 X 22 mm? La realiza-ción de la prueba sin cubreobjetos hace que sea nece-sario examinar las muestras rápidamente, antes deque se sequen y antes de que los cristales formados amedida que el sulfato de zinc sale de la solución ha-gan que la observación de las muestras resulte imposi-ble (Figura 1.5). por lo tanto, sólo se puede prepararla cantidad de muestras que una persona puede leer


Figura 1.5. Cuando se traslada el loop al portaobjetos delmicroscopio, se lo puede examinar como la simple y pequeñaporción tomada con el loop o debajo de un cubreobjetos. Laobservación de una o dos porciones tomadas con el loop tienela ventaja de que la muestra no se desparrama debajo de unasuperficie más grande como ocurre con el cubreobjetos. Ladesventaja de examinar la porción tomada con el loop es quese puede secar si el examinador tarda demasiado durante laobservación.

Figura 1.4. Al tomar la muestra de la parte superior del tubo dela centrífuga, se lo debe empujar con cuidado hacia abajo enforma recta a través de la parte superior del líquido y luego sedebe tirar en forma recta hacia arriba. En ocasiones, elmaterial que se encuentra en la parte superior del tubo puedeser tan espeso que se parece más a un barro que a un menisco.En estos casos, parte del material se puede trasladar del lateraldel loop al portaobjetos.

Figura 1.3. Ya sea que se use sulfato de zinc o de magnesio, onitrato de sodio, siempre es mejor verificar la gravedadespecífica con un hidrómetro. El nitrato de sodio se puedeadquirir seco en una cantidad pre-medida para flotacionesestacionarias. El sulfato de zinc se puede adquirir líquido conuna gravedad específica de 1,18. El sulfato de magnesioprobablemente sea la solución para flotación menos costosa,pero algunas sales de Epsom (si bien están graduadas paraalimentos y aprobadas para usar como laxante) pueden estarlevemente descoloridas o pueden contener algunos sólidoscuando están presente en soluciones de gravedad específica1,2; la elección de otra marca con frecuencia resolverá estosproblemas. (A) Este hidrómetro tiene una escala de 1,000(gravedad específica del agua) a 1,220. (B) En esta imagen, elmenisco se encuentra en 1,200, entre los números 80 (1,180) y20 (1,220). Este hidrómetro sería inapropiado para verificar unasolución azucarada pesada.

en una sola sentada. Con seis muestras, se pueden co-locar tres porciones tomadas con el loop en cada por-taobjetos, de este modo sólo se necesitan dos por-taobjetos cada seis muestras. Si se necesita más tiem-po, se puede colocar en el portaobjetos un loop llenode agua o una gota de solución salina antes de agre-gar el loop del tubo. Si en último caso se necesita uncubreobjetos, se puede agregar una gota de agua almaterial que se encuentra sobre el portaobjetos y lue-go aplicar un cubreobjetos. El loop funcionará mejorsi se lo pasa por la llama antes de cada uso (Figura1.6). La llama asegura que no se arrastre nada entreuna muestra y la otra. Mientras se coloca el loop en lallama, puede observarse una acumulación de sulfatode zinc y materia fecal en él que formará una costra.Se puede limpiar el loop sumergiéndolo dos o tres ve-ces en agua, raspándolo con un aplicador o colocán-dolo más tiempo sobre la llama. Es importante que elloop sea de alambre resistente a las llamas y tambiénque sea lo suficientemente delgado para que funcionebien. Un loop típico de microbiología para placas deagar tiene un alambre muy grueso y el orificio delloop es demasiado pequeño.Los quistes de Giardia flotarán sobre la superficie delsulfato de zinc. Con frecuencia, cuando estánpresentes en los bordes del material que se encuentrasobre el portaobjetos, aparecerán de un color rosadodebido a la aberración esférica causada por lacurvatura de la gota sobre el portaobjetos. Lapresencia de huevos también será obvia sobre elportaobjetos.A medida que se seca el portaobjetos,los quistes colapsan. Un inconveniente del métodocon sulfato de zinc es que no detecta los huevos máspesados. Por lo tanto, es probable que usando estemétodo no se observen en la muestra los huevos detenias taeniid y Diphyllobothrium y Spirometra, lamayoría de los trematodos y algunos nematodos, porejemplo,Trichuris vulpis.


Figura 1.6. El loop utilizado para tomar una muestra de la partesuperior de un tubo es más fino que el loop típico que se utilizaen microbiología y tiene un diámetro un poco más grande. Esimportante que el loop sea de alambre resistente a la llama, delo contrario se derretirá. La colocación del loop sobre la llamaparece ayudarlo a tomar la muestra del menisco del tubo de lacentrífuga. En ocasiones, el loop acumulará una costra dematerial seco producto de los restos de heces y la colocaciónsobre la llama que se puede quebrar con cuidado y sacar delalambre con el extremo de un aplicador.

MATERIALES•Centrífuga común de mesada con rotor de

tambor horizontal oscilante y soportes para tubos de 13 X 100 mm

• Microscopio binocular compuesto,debe tener por lo menos objetivos de 10 X y 40 X y 10 piezas oculares

• Vasos de cartón no encerado o vasos similares de 88 a 120 cm3 (3 a 4 onzas)

• Fieltro de doble pliegue • Hidrómetro: rango de gravedad específica

1,000 a 1,300• Botellas plásticas para lavado • Tubos de centrifuga de fondo redondeado

y de vidri o , de 13 x 100 mm• Aplicadores de madera• Portaobjetos para microscopio: de vidrio

de 7,62 x 2,54 cm (3 x 1 pulgadas)• Mechero de Bunsen, lámpara de alcohol o

encendedor de cigarrillos• Loop de alambre de aproximadamente

calibre 28 y loop de 4 a 5-mm

• Mezclador Vortex• Agua de la canillaREACTIVOS• Solución de sulfato de zinc, gravedadespecífica 1,18 (aproximadamente 33 g decristales en 100 ml de agua).Verificar lagravedad específica con un hidrómetro yajustarla en caso de ser necesario. El sulfatode zinc se puede adquirir ya preparado conuna gravedad específica de 1,18.

PROCEDIMIENTO1. Desmenuzar aproximadamente 1 g de lamuestra de materia fecal en 5 ml de agua enun vaso de cartón. Esto se puede lograrmezclando en forma manual con dosaplicadores. Si se sostienen los aplicadorescon los dedos pulgar e índice, unos ligerosgolpecitos con el dedo anular y mayor sobrelos aplicadores produce una efectiva acciónde mezclado.

2. Filtrar la suspensión de materia fecal através de dos capas de gasa y pasarla a unsegundo vaso de cartón, lavando con unpequeño volumen de agua.3. Verter el filtrado en el tubo de ensayo.4. Centrifugar durante 1 minuto a 800g.5. Decantar el sobrenadante.6.Agregar aproximadamente 3 ml desolución de sulfato de zinc y volver asuspender con los aplicadores y elmezclador Vortex.7. Llenar el tubo hasta 1 cm del borde yvolver a centrifugar a aproximadamente800g durante 1 minuto.8. Sin sacar el tubo de la centrífuga y con unloop de alambre recién colocado en lallama, extraer 1 o 2 loops del centro de lapelícula de la superficie y colocar en unportaobjetos con el número de muestra.9. Examinar con un microscopio compuestocon magnificaciones de 100X y 400X.

FLOTACIÓN CON SULFATO DE ZINC

MÉTODOS DE FLOTACIÓN ESTACIONARIA

La flotación estacionaria es un medio por el cual losh u evos y quistes de los parásitos pueden apare c e rflotando en la superficie de un medio líquido. El pro-ceso es de simple realización y se lo puede arm a rcon materiales del lab o ra t o rio o con la adquisiciónde dive rsos kits comerc i a l e s , como por ejemplo Fe-c a lyzer® (EVSCO Pharmaceuticals) o Ova s s ay® (Syn-biotics Corpora t i o n ) .Todos estos métodos trab a j a ns o b re el mismo pri n c i p i o . Los huevos son más pesa-dos que el ag u a , p e ro la mayor parte de la materia fe-cal es más pesada que los huevo s . De este modo, s em e z clan las heces con una solución que tiene unadensidad flotante superior a los huevos pero infe ri o ra los otros materiales de las heces. Mediante pru e b ay error se ha demostrado que una gravedad específi-ca de 1,2 es aproximadamente la densidad corre c t ap a ra lograr una buena separación entre los huevos ylos restos en la mu e s t ra de materia fe c a l . Una solu-ción de material que pesa 1,2 veces el peso de un vo-lumen igual de agua tiene una gravedad específica de1 , 2 ; por lo tanto, 10 ml de agua pesan 10 gramos y 10ml de una solución con una gravedad específica de1,2 pesa 12 gra m o s .E n t re los re a c t i vos comunes que se usan en estas pre-p a raciones están la sal de mesa (NaCl), el sulfato

de zinc, el sulfato de magnesio y el nitrato de sodio.El primer medio utilizado de rutina para realizar estep rocedimiento fue la sal de mesa saturada (solucións a l i n a ) , que tiene una gravedad específica de aprox i-madamente 1,2. La separación por lo ge n e ral no estan buena como cuando se usa la centri f u g a c i ó n , p e-ro en ge n e ral es adecuada para obtener una mu e s t rabastante limpia. La solución de nitrato de sodio tienela desventaja que parece cri s t a l i z a rse levemente másrápido en el portaobjetos que las otras soluciones. L asolución de sulfato de magnesio tiene una viscosidadque es levemente superior a la de las otras tres solu-ciones y entonces es posible que los huevos floten ala superficie más lentamente en este material que enlas otras tres soluciones.L o s métodos en las dive rsas pruebas pre p a ra d a s(por ejemplo, Fe c a lyzer y Ova s s ay) trabajan sobre elmismo pri n c i p i o . D i fi e ren del método descripto encuanto a que el soporte de la mu e s t ra también fun-ciona como tamiz. En el método Fe c a ly z e r, el tuboen el cual se produce la flotación sirve también co-mo dispositivo de toma de mu e s t ras en el cual elfondo del accesorio de inserción pro p o rciona unmedio para medir la cantidad de heces que se intro-duce en el tubo.


MATERIALES

•Microscopio binocular compuesto: debe tener por lo menos objetivos de 10 X y 40X y 10 piezas oculares

•Vasos de cartón no encerado o vasos similares de 88 a 120 cm3 (3 a 4 onzas)

•Fieltro de doble pliegue •Hidrómetro: rango de gravedad específica

1,000 a 1,300•Botellas plásticas para lavado •Tubos de centrifuga de fondo redondeado

y de vidrio, de 16 x 100 mm• Soporte para tubos de ensayo• Aplicadores de madera• Portaobjetos para microscopio• Cubreobjetos de vidrio de 18 x 18 mm• Mezclador Vortex

REACTIVOS

• Solución de flotación: cloruro de sodiosaturado (solución salina), sulfato de zinc,

gravedad específica 1,18; sulfato demagnesio, gravedad específica 1,2 o nitratode sodio, gravedad específica 1,2.

PROCEDIMIENTO1. Desmenuzar aproximadamente 1 g de lamuestra de materia fecal en 5 ml de agua enun vaso de cartón. Esto se puede lograrmezclando en forma manual con dosaplicadores. Si se sostienen los aplicadorescon los dedos pulgar e índice, unos ligerosgolpecitos con el dedo anular y mayor sobrelos aplicadores produce una efectiva acciónde mezclado.2. Filtrar la suspensión de materia fecal através de dos capas de gasa y pasarla a unsegundo vaso de cartón, lavando con unpequeño volumen de solución de flotación.3. Verter el filtrado en el tubo de ensayo,colocar el tubo en el soporte.4. Llenar el tubo con solución de flotaciónhasta tener un leve menisco de líquidomoviéndose sobre la superficie.

5. Colocar un cubreobjetos en la partesuperior del tubo.6. Dejar reposar el tubo con el cubreobjetosdurante 10 o 15 minutos, luego retirar elcubreobjetos y colocar sobre el portaobjetosdel microscopio7. Examinar con un microscopio compuestocon magnificaciones de 100X y 400X.

FLOTACIÓN ESTACIONARIA

Método FecalyzerEl Fecalyzer es un dispositivo de flotación común-mente usado en muchas prácticas veterinarias (Figura1.7). El accesorio de inserción verde tiene una por-ción en el fondo que el cliente puede insertar en lasheces de la mascota para tomar una cantidad de he-ces previamente medida. Luego se puede colocar elaccesorio de inserción en el vial blanco con tapa apresión y se lo lleva a la clínica para examinar. La solu-ción de flotación, por lo general solución de nitratode sodio a una gravedad específica de 1,2, se agregaen la cámara blanca, se reinserta el accesorio de inser-ción verde y se mezcla por rotación con la soluciónde flotación. Luego se llena el accesorio de insercióncon la solución de modo tal que aparezca un meniscoen la parte superior y se coloca un cubreobjetos de22 x 22 mm en la superficie del menisco. Después deaproximadamente 5 o 10 minutos, se retira el cu-breobjetos y se coloca en un portaobjetos de vidriopara examinar la muestra. El accesorio de inserciónverde tiene una parte con tejido que evita que las par-tículas más grandes floten en la superficie e interfie-ran con el exámen microscópico de la muestra.

Método OvassayEl dispositivo Ovassay Plus Kit es muy similar al Fe-calyzer en cuanto a diseño y concepto (Figura 1.8).Aligual que en el método anterior, se agregan heces aun accesorio de inserción central y se mezcla con lasolución de flotación, por lo general sulfato de zinc.Se coloca el filtro en el dispositivo y se crea un menis-co positivo mediante el agregado de más solución deflotación. Se agrega un cubreobjetos para microsco-pio en la parte superior del dispositivo y luego se dejaque flote el material durante aproximadamente 10 mi-nutos. El accesorio de inserción central tiene una par-te con tejido que evita que las partículas más grandesfloten contra el cubreobjetos e interfieran con elexámen microscópico de la muestra.Al igual que con el Fecalyzer, la flotación estacionariatiene la distintiva ventaja de que no requiere una cen-trífuga para el procesamiento. La desventaja es que elmétodo no permite la recuperación máxima de hue-vos y quistes de parásitos de la muestra de materia fe-cal. Sin embargo, para diagnósticos de rutina, ambosanálisis son útiles y pueden ayudar en la mayoría delas situaciones clínicas.


Figura 1.7. El Fecalyzer es un dispositivo de flotaciónestacionaria que ha sido desarrollado para la toma y elprocesamiento de muestras de materia fecal. La parte internase puede usar para tomar una porción de las heces del tamañoapropiado mediante la inserción del extremo en las heces.Luego se puede colocar la muestra en el recipiente exterior y sela lleva a la clínica. En el momento de examinar la muestra, sepuede agregar medio de flotación y mezclar la muestra girandoel accesorio de inserción dentro del soporte. Luego se llena elaccesorio de inserción con solución de flotación de modo talque se forme un menisco positivo. Un tamiz colocado en elaccesorio de inserción evita que las grandes partículas flotenen la superficie. Luego se coloca un cubreobjetos de 22 x 22mm en la parte superior del tubo y se lo deja reposar de 5 a 10minutos. Por último, se retira el cubreobjetos y se coloca en unportaobjetos para microscopio para determinar qué parásitoshan flotado a la superficie.

Figura 1.8. El Ovassay es un dispositivo para recolección yp rocesamiento de materia fecal que se utiliza para re a l i z a runa flotación de materia fecal estacionaria. El dispositivoi n t e rno se puede usar para tomar una muestra del tamañoa p ropiado clavándolo en las heces. Luego, el accesorio dei n s e rción se puede colocar en el soporte y llevar a la clínica.En el momento de procesar la muestra, se puede agre g a rmedio de flotación al tubo y mezclar las heces girando elaccesorio de inserción dentro del soporte. A continuación, sellena el accesorio de inserción con medio de flotación demodo tal que se forme un menisco positivo. Se coloca unc u b reobjetos de 22 x 22 mm sobre el menisco y se lo dejareposar de 5 a 10 minutos. Por último, se retira elc u b reobjetos y se lo traslada a un portaobjetos param i c roscopio para identificar aquellos parásitos que hanflotado a la superf i c i e

FLOTACIÓN CENTRÍFUGA DE AZÚCAR

Los para s i t ó l o gos ve t e ri n a rios en su mayoría pre fi e-ren un método de flotación centrífuga a los métodose s t a c i o n a ri o s . Cada técnico pre fi e re dife rentes me-dios de fl o t a c i ó n , p e ro un método que se usa común-mente es el método de flotación centrífuga de azú-c a r. Este método tiene la ventaja de que hará queh u evos más pesados fl o t e n , lo cual no ocurre con losmétodos que emplean dive rsas soluciones salinas(por ejemplo, s u l fato de mag n e s i o , s u l fato de zinc,cl o ru ro de sodio o nitrato de sodio). La solución deazúcar puede funcionar con flotación estacionari a ,p e ro con frecuencia los huevos y quistes apare c e r á nd i s t o rsionados por la presión osmótica causada porel azúcar y la alta viscosidad de la solución re q u i e reque los huevos permanezcan en la solución dura n t eun tiempo mayor antes de que logren llegar a la su-p e r ficie del tubo estacionari o . Este inconveniente hasido superado por el uso de centri f u g a c i ó n . La solu-ción de azúcar tiene la desventaja de que puedea t raer moscas y cucara ch a s . Cuando se trabaja al airel i b re , las moscas se vuelven bastante fru s t rantes yaque se posan y alimentan sobre los bordes de los cu-b reobjetos en la mu e s t ra fi n a l . Las cucara chas conf recuencia están presentes en los lab o ra t o rios dondese alimentan con los derrames o gotas de restos demu e s t ras o con el material que queda en los tubos dela centrífuga o en las mismas centrífugas.Pa ra los huevos de parásitos de la mayoría de las es-p e c i e s , la flotación centrífuga de azúcar es un méto-do muy fácil de usar y altamente ex i t o s o . Sin embar-go , los huevos de tre m a t o d o s , como por ejemplo losde Pa rago n i mus y A l a ri a , con frecuencia colapsarán ose ab rirán y se saldrá su contenido intern o , lo cual aveces puede hacer que sean más difíciles de re c o n o-c e r.Este método es excelente para la demostración deoocitos de la especie Cry p t o s p o ri d i u m . Con los mi-c roscopios que se usan por lo ge n e ral en los consul-t o rios ve t e ri n a ri o s , la interacción entre las pro p i e d a-des ópticas de la solución y los oocitos hacen que losoocitos parezcan pequeños puntos de color rosado arojo que flotan en la superficie del azúcar justo deba-jo del cubre o b j e t o s . Sin embargo , cuando se utilizanm i c roscopios más sofisticados como los que se usanp a ra inve s t i g a c i ó n , el color de los oocitos con fre-cuencia no se observa porque las correcciones de laab e rración esférica en las lentes del objetivo corri ge nla propiedad que hace que los oocitos parezcan ro s a-d o s .O t ra ventaja del procedimiento de flotación con azú-car es que los portaobjetos se pueden examinar du-rante un tiempo una vez que están pre p a ra d o s . Si seevita que los portaobjetos se sequen (colocándoloss o b re una toalla de papel húmeda en una caja de Pe-t ri) y se los guarda re f ri ge ra d o s , mu chos de estosh u evos se pueden observar con éxito durante unosd í a s . Si se colocan los portaobjetos en un org a n i z a d o r

y se los mantiene fríos, i n cluso se los puede mandarcon hielo para obtener ayuda en el diag n ó s t i c o , c o nf recuencia sin tener pro blemas en ver los parásitosc o n t e n i d o s . Los oocitos de Cry p t o s p o ridium tiendena colapsar después de aproximadamente media horay desapare c e n ; los quistes de Giardia presentes conf recuencia aparecerán colapsados y se necesitará ha-bilidad para identifi c a r l o s , i n cluso en pre p a ra c i o n e sen nu evos portaobjetos y en las mu e s t ras que se handejado por un tiempo, los huevos de anquilostomaspueden fo rmar embri o n e s , que los hace muy cl a ros ymás difíciles de observa r. Sin embargo , los huevos dec á s c a ra dura y los oocitos de coccidios se pueden ve rbastante bien durante va rios días.La solución utilizada para la flotación es una soluciónde azúcar saturada que tiene una gravedad específi c ade aproximadamente 1,3. La solución de flotación sel o gra disolviendo azúcar de caña en agua al punto des a t u ración (Fi g u ra 1.9).

Con frecuencia se puede acelerar el proceso pro d u-ciendo la mezcla con calor, se calienta el agua antesde agregar el azúcar o durante el pro c e s o . Un amigopor lo ge n e ral hace la solución de azúcar en un her-vidor doble donde se agrega el azúcar al agua calien-t e . Si se usa calor, es necesario ve ri ficar la grave d a d


Figura 1.9. Cuando se prepara el azúcar para la flotación, porlo general se necesitan aproximadamente 900 g cada 700 mlde agua ( aproximadamente 1300 g/l). Será necesario agre g a rel azúcar lentamente y disolverla revolviendo. Con fre c u e n c i ase puede entibiar el agua para ayudar en la disolución dela z ú c a r, pero se la debe enfriar antes de verificar la gravedadespecífica con un hidrómetro. A algunos les resulta muy útilp reparar la solución de azúcar en un hervidor doble igual quecuando se hace caramelo. Es buena idea cuando el pro d u c t ose ha enfriado agregar una pequeña cantidad de formol (10ml/l) para evitar que el moho crezca en el medio.

e s p e c í fica una vez que se dejó enfriar la solución. Si secalienta la solución durante la pro d u c c i ó n , se puede fo r-mar una gran cantidad de cristales a medida que se en-fría la solución. Estos pueden quedar en la botella de al-m a c e n a m i e n t o . Una vez que se preparó la solución,e sn e c e s a rio agregar un conservante para evitar que cre z c amoho en el agua con azúcar. G e n e ralmente se usan dosc o n s e rvantes distintos, fo rmol y fenol (ácido carbox í l i-

c o ) , y se agregan aproximadamente 5 ml de fo rm a l d e h í-do al 37% o 5 ml de fenol licuado a cada litro . La solu-ción de azúcar también se puede conservar mediante au-t o cl ave y conge l a m i e n t o ,p e ro el autocl ave puede causarla caramelización del azúcar y oscurecer su aspecto. E nlas siguientes fi g u ras se describe el procedimiento deflotación centrífuga de azúcar (Fi g u ras 1.10–1.13).


Figura 1.12. Una vez que la centrífuga se detiene por completo, sepuede levantar el cubreobjetos directamente de la parte superiordel tubo.

Figura 1.10. Mezclar las heces en un vasopequeño y luego volcarlas sobre una gasapara eliminar los sólidos antes de revolver ymezclar con el azúcar. Algunos técnicospasan por alto la etapa de tamizado, pero siesto se hace, los sólidos en la muestra finalpueden hacer que resulte muy difícil deexaminar bajo el microscopio.

Figura 1.11. Una vez que sedecantó el agua del sedimen-to tamizado y centrifugado, sedebe agregar solución deazúcar (aproximadamente 3 a4 ml) y el sedimento debequedar suspendido en la so-lución de azúcar. Es importan-te que se mezcle bien lamuestra y esto resulta másfácil si se usan dos aplicado-res. Se puede usar un mezcla-dor Vortex si los aplicadoresestán insertados en las mues-tras, pero se puede generargran cantidad de burbujas deaire si no se tiene cuidado.

Figura 1.13. El cubreobjetos se debe colocarcon cuidado sobre un portaobjetos para cap-turar la menor cantidad de burbujas de aireque sea posible.

ANÁLISIS DE SEDIMENTACIÓN

La medicina veterinaria usa muy poco los distintosanálisis de sedimentación por las siguientes razones:Los parásitos más comunes se detectan por lo generalusando los métodos de flotación; habitualmente nohay necesidad de fijar las muestras extraídas de cani-nos y felinos (como se dijo anteriormente, esto cam-bia la permeabilidad de los huevos y quistes y por lotanto sus densidades flotantes) y muchos de los tre-matodos y amebas presentes en la materia fecal de losseres humanos no están en las muestras provenientesde perros y gatos. De este modo, los beneficios de lasedimentación por lo general no superan a las desven-tajas, que incluyen la mayor cantidad de material quecon frecuencia se debe examinar, la dificultad paraver diversos protozoos cuando están desparramadosen esta muestra más grande sin la ayuda de la aberra-ción esférica y la cantidad de pasos extra que requie-re el procesamiento. Las muestras sí tienen la ventajade que se pueden conservar de modo tal que una par-te o toda la muestra se puede observar otro día, peroen la mayoría de las clínicas veterinarias, los veterina-rios simplemente no tienen tiempo para volver mástarde y re-examinar los portaobjetos.El procedimiento de sedimentación más básico es el

simple tamizado de la material fecal en agua o solu-ción salina seguido de la sedimentación en un tubosin centrifugación. Un gran porcentaje de las bacteriaspermanecerán en la solución y los huevos más pesa-dos se irán al fondo del tubo. El problema es que porlo general hay una gran cantidad de material que que-da por examinar. Sin embargo, el procedimiento esmejor que nada y casi no tiene costo de preparación.Muchos de los huevos son muy pesados en compara-ción con el agua y por lo tanto con frecuencia seasentarán en un tiempo relativamente corto.Un procedimiento que tiene éxito en la medicina pa-ra seres humanos es el procedimiento de sedimenta-ción en formol/acetato etílico (Figura 1.14). Este mé-todo también es útil en la medicina veterinaria por-que es capaz de encontrar casi todo lo que puede es-tar presente en una muestra de materia fecal. El pro-blema, una vez más, es que con frecuencia hay grancantidad de material para examinar. El proceso limpialas muestras que tienen mucha fibra o mucha grasa,pero por desgracia esto no es tan común en las mues-tras de perros y gatos. La sedimentación en ácido/ace-tato etílico es una técnica hermana de la sedimenta-ción en formol/acetato etílico. En esta técnica, las he-


MATERIALES

•Centrífuga común de mesada con rotor horizontal y soportes para tubos de 16 X 100 mm



•Fieltro de doble pliegue•Hidrómetro: rango de gravedad específica

1,000 a 1,300•Botellas plásticas para lavado •Tubos de centrífuga de fondo redondeado

y de vidrio, de 16 x 100 mm•Aplicadores de madera•Portaobjetos para microscopio•Cubreobjetos de 18 x 18 mm•Marcador•Agua de la canilla• Agitador magnético

REACTIVOS

• Solución de flotación de azúcar: lentamen-

te agregar alrededor de 1000 g de azúcar pu-ra granulada a 1000 ml de agua destilada enun vaso de laboratorio de 4 L sobre un agita-dor magnético.Verificar la gravedad específi-ca (debe ser 1,300; esto es básicamente unasolución saturada).Ajustar, en caso de ser ne-cesario, agregando más agua o más azúcar.

PROCEDIMIENTO1. Con aplicadores (dos funcionan mejorque uno) colocar aproximadamente 1 g deheces en un vaso de cartón.2. Agregar aproximadamente 8 ml de aguade la canilla y dispersar las heces en el aguavigorosamente con los aplicadores. Puedeser que las heces no se separen rápidamen-te; de ser así, dejar descansar la muestra du-rante un corto tiempo para permitir que seablande.3. Tamizar el barro fecal pasándolo por unfieltro a un segundo vaso de cartón.4.Verter el barro tamizado del segundo vasoen el tubo de ensayo de la centrífuga.5. Centrifugar a 800g durante 1 minuto.6. Decantar el sobrenadante.7. Agregar solución de flotación de azúcar a

aproximadamente 1/4 del total y volver asuspender el pellet vigorosamente con dosaplicadores.8. Después de colocar el tubo en la centrífu-ga, llenarlo con solución de azúcar hasta querebalse levemente de modo tal que haya unleve bulto (menisco) en la película de la su-perficie por sobre el borde del tubo.9.Agregar un cubreobjetos a la superficiedel tubo.10. Ca rgar y balancear la centrífuga (asegura r-se de balancearla con otro tubo lleno de azú-c a r ) . C e n t rifugar a 800g durante 10 minu t o s .11. Ret i rar el cubreobjetos levantándolo de-re cho de modo tal que una gota se adhiera alm i s m o . Colocar el cubreobjetos sobre unp o rtaobjetos y examinar con el micro s c o p i o.

FLOTACIÓN CENTRÍFUGA DE AZÚCAR

ces frescas se suspenden en una solución ácida, típica-mente de ácido clorhídrico (elaborado en una propor-ción de 40 partes de HCl concentrado con 60 partesde agua). El resto de la técnica es igual que para elmétodo de sedimentación en formol/acetato etílico.El método de sedimentación en formol/acetato etílicotiende a proporcionar una muestra más limpia que laobtenida con fo rm o l , p e ro no funciona en quistes dep ro t o z o o s . Sin embargo , algunos técnicos pre fi e re nusar el método con ácido/acetato etílico para las mu e s-t ras de materia fecal tomadas de animales salva j e s .


MATERIALES




•Fieltro de doble pliegue•Hidrómetro: rango de gravedad específica

1,000 a 1,300• Botellas plásticas para lavado •Tubos de centrífuga cónicos de vidrio de

15 ml•Tapón de goma•Aplicadores de madera•Portaobjetos para microscopio•Cubreobjetos de 18 x 18 mm

REACTIVOS

• Acetato etílico • HCl diluido: 40 ml de HCl concentrado

en 60 ml de agua.

PROCEDIMIENTO1. Con aplicadores (dos funcionan mejorque uno) colocar aproximadamente 1 g deheces en un vaso de cartón.2. Agregar aproximadamente 8 ml de aguade la canilla y dispersar las heces en el aguavigorosamente con los aplicadores. Puedeser que las heces no se separenrápidamente; de ser así, dejar descansar lamuestra durante un corto tiempo parapermitir que se ablande.3. Tamizar el barro fecal pasándolo por unfieltro a un segundo vaso de cartón.4.Verter el barro tamizado del segundo vasoen el tubo de ensayo de la centrífuga.5. Centrifugar a 800g durante 1 minuto.6. Decantar el sobrenadante.7. Agregar aproximadamente 8 ml desolución ácida mezclando con el aplicador.8. Agregar aproximadamente 5 ml de acetatoetílico, colocar el tapón y agitarvigorosamente apretando el tapón en sulugar.9. Sacar el tapón, cargar y balancear la

centrífuga (asegurarse de balancearla conotro tubo de peso similar). Centrifugar a800g durante 10 minutos.10. Habrá una obstrucción de material en ellugar de la interfaz ácido/acetato etílico.Pasar el aplicador alrededor de la pared devidrio y hacer decantar el acetato etílico, laobstrucción y la solución ácida.11. Examinar el sedimento para detectar lapresencia de huevos.

SEDIMENTACIÓN CON ÁCIDO / ACETATO ETÍLICO

Figura 1.14. Cuando el acetato etílico se mezcla con el agua fecal, el formol o la mezclade ácidos y luego se centrifuga, se formará una capa entre el solvente orgánico y la faseacuosa. Es necesario desalojar esta obstrucción con un aplicador antes de decantar el tu-bo. Se debe tener cuidado al desalojar el material de las paredes del tubo de modo tal queno vuelva a caer en el pellet cuando decante. Si el pellet está en alcohol ácido, probable-mente sea deseable volver a suspenderlo en agua antes de colocarlo en un portaobjetos;de lo contrario, tiende a no formar un lodo sino que se desparrama rápidamente a los bor-des del portaobjetos y se sale.

APARATO DE BAERMANN

A ve c e s , en la medicina ve t e ri n a ria se tienen sospe-chas de infecciones por nematodos que pro d u c e nl a rvas en lugar de huevos que pasan a las heces. E nlos perro s , esto ocurre en infecciones con Cre n o s o-ma vulpis, Fi l a roides hirt h i , Fi l a roides osleri yS t ro n gyloides sterc o ra l i s . En los gatos,A e l u ro s t ro n gy-lus ab s t rusus y Stro n gyloides felis (solo se encuentraen el Pa c í fico Sur) son casi las únicas infe c c i o n e sque dan como resultado la aparición de larvas en lash e c e s . Se puede hacer un agregado poco común aesta lista, p e ro estos son la mayoría de los casos enlos cuales la etapa que pasa a las heces es una larva .F. h i rthi y F. o s l e ri tienen larvas que tienden a no mo-ve rse mu ch o ; si cualquiera de estas fueran el age n t es o s p e choso de signos pulmonares observa d o s , ex i s-ten mu chas pro b abilidades de que el uso de un apa-rato de Baermann no agregará nada al diag n ó s t i c o .Pa ra estas dos larva s , el mejor medio de encontra r l a ses con una flotación con sulfato de zinc.Pa ra las otras especies, el aparato de Baermann (Fi g u-ra 1.15) aumentará las posibilidades de encontrar lasl a rvas que pueden estar re l a t i vamente desparra m a-das en toda la mu e s t ra de materia fe c a l . Una vez quese encontra ron las larva s , h ay que dife renciarlas peroesto en realidad es una tarea re l a t i vamente fácil.A d e-m á s , se debe tener cuidado con el tiempo tra n s c u rri-do desde la toma de la mu e s t ra de las heces utiliza-das para pre p a rar el aparato porque los huevos deanquilostoma son capaces de tener cría y confundirel diag n ó s t i c o . Sin embargo , en su mayo r í a , el méto-do de Baermann es una técnica útil para ve ri fi c a runa infección con cualquiera de estas especies den e m a t o d o s .


MATERIALES


•Embudo de 13 a 15 cm (5 o 6 pulgadas) de diámetro


•Estante para tubos y soporte para embudo•Colador de té o filtro soporte equivalente •Trozo de tubo de paredes finas de 8 a 10

cm (3 o 4 pulgadas) de longitud•Gotero sin el bulbo de goma insertado en

un extremo del tubo de paredes finas, el otro extremo está unido al embudo

•Clamp para el tubo

• Tubos de centrífuga cónicos de vidrio de 15 ml

•Espátula (baja lenguas)•Fieltro de doble pliegue•Portaobjetos para microscopio•Cubreobjetos

REACTIVOS

• Agua

PROCEDIMIENTO1. Con la espátula, separar entre 5 y 15 g deheces y colocarlas en el colador de té (pue-de resultar más fácil desparramar el materialsobre el fieltro y colocar esto en el coladoro, si no se dispone de un colador, se puedesuspender con un hilo sobre la parte supe-

rior del embudo una bolsita hecha con fiel-tro)2. Llenar el embudo con agua de la canilla ti-bia; mover el tubo y el clamp para eliminarlas burbujas de aire que pudieran estar atra-padas.3. Si hay gran cantidad de larvas activas pre-sentes, como ocurre con frecuencia en el ca-so de Aelurostrongylus, unas pocas gotas sepueden examinar después de aproximada-mente una hora, pero puede ser necesariodejar reposar la preparación en el aparato deun día para otro.4. Llenar el tubo de la centrífuga desde elfondo abriendo el clamp (¡RECORDAR quelas larvas de Strongyloides de tercera etapapueden penetrar en la piel!)5. C e n t rifugar y examinar con el micro s c o p i o

APARATO DE BAERMANN

Figura 1.15. Este dispositivo consta de un embudo unido a untubo de goma por medio de un clamp. La materia fecal se co-loca sobre un trozo de gasa o un colador de té y se la suspen-de sobre agua en el embudo. Las larvas salen de las heces ypasan al agua. Con el tiempo, las larvas se asentarán en elfondo del tubo y se las podrá recolectar ya sea colocando ung o t e ro en la punta que gotee a un portaobjetos o centrifugan-do el contenido en un tubo de centrífuga y examinando el se-d i m e n t o .

PRUEBAS DE ANTÍGENOS FECALES

En la actualidad, existen pruebas para detectar los an-tígenos de Cryptosporidium y Giardia cuando estánpresentes en muestras de materia fecal. Estas pruebastienen la ventaja de eliminar la necesidad de confiaren la microscopía. Sin embargo, una desventaja impor-tante es que en la actualidad su uso resulta relativa-mente costoso. Por lo tanto, cuando se ejecuta uncontrol positivo y negativo, una sola prueba puede sermuy costosa. Sin embargo, existen muchas rezones pa-ra pensar que este tipo de pruebas será cada vez máscomún para el diagnóstico de los patógenos relativa-mente difíciles de encontrar.Las pruebas actuales se realizan del modo típico parauna placa de ensayo inmuno-absorbente vinculado aenzimas (ELISA) o para inmuno-ensayos de fase sólida.Es mucho más probable que los veterinarios realicenlos ensayos de fase sólida (Figura 1.16) porque estándiseñados para usarlos con pacientes individuales. Loslaboratorios de diagnóstico es más probable que utili-

cen las placas de ELISA (Figura 1.17) porque ellos rea-lizan un batch de muestras de proceso y tienen mu-chas muestras para analizar al mismo tiempo.Los diversos ensayos ProSpecT® (Remel) para Giardiay Cryptosporidium son ejemplos de estos ensayos.

MÉTODOS DE CULTIVO DE MATERIA FECALEl único método de cultivo de materia fecal para pro-tozoarios capaz de ser realizado en la mayoría de losconsultorios veterinarios es el sistema de cultivo re-cientemente presentado InPouchTM para tricomona-das (BioMed Diagnostics)(Figura 1.18). Este sistematiene pequeños sobres de plástico con medio quepuede ser inoculado con hisopos fecales y los proto-zoarios se cultivan a temperatura ambiente. Se hacomprobado que el sobre da muy buenos resultadosen la aislación de tricomonadas provenientes de he-ces de gatos con diarrea.El kit usado para la detección de organismos en lasheces de felinos estuvo originalmente diseñado para


Figura 1.16. Este es un ejemplo de un inmunoensayo de fasesólida diseñado para usar con una sola muestra (Pro S p e c T ®G i a rd i a / C ryptosporidium Formato Rápido). La prueba es simi-lar a las desarrolladas para detectar diversos antígenos y an-ticuerpos en muestras de sangre o suero. Las heces diluidasse aplican a la membrana y, luego, después de una serie depasos, ocurrirá un cambio colorimétrico en la membrana conmanchas que se oscurecerán si el antígeno está presente enlas heces. Dichas pruebas han sido desarrolladas para detec-tar los antígenos de Giardia y Cryptosporidium. La foto es gen-tileza de REMEL Inc

Figura 1.17. Este es un ensayo ELISA que se ha usado de ru t i-na para detectar antígenos de Cryptosporidium en materia fe-cal (ProSpecT® Cryptosporidium Ensayo de Microplacas; hayun ensayo similar pa-ra Giardia). El costode las placas haceque la prueba seamuy cara, por lo tantosólo se utiliza de ru t i-na en laboratorios dediagnóstico centrali-zados. Por lo generalla muestra se analizacon una muestra dec o n t rol positiva y ne-gativa. Los re s u l t a d o sse pueden leer vi-sualmente o mediante el uso de un lector de ELISA. En la pru e-ba mostrada (A), las cubetas positivas se ponen de color ama-rillo al finalizar la prueba y las negativas quedan transpare n-tes. La intensidad del color se puede utilizar como una apro-ximación para la intensidad de la infección. Las fotos son gen-tileza de REMEL Inc

la detección de Tritrichomonas foetus en muestrasvaginales de hembras de bovinos y todavía se lo co-mercializa sólo para este uso. Por suerte, el procesofunciona bien para las muestras de materia fecal sinuna gran proliferación de bacterias como para que ha-gan que no se puedan leer las muestras. Una vez quese ha incubado la muestra en el sobre, se la puedeexaminar con un microscopio directamente a travésde la pared del sobre utilizando un dispositivo pro-porcionado por el fabricante que aplana y desparramael sobre para poder examinarlo. Si hay tricomonadaspresentes, se las puede sacar con una pipeta para se-guir examinándolas con el microscopio o para pasar-las a otro medio. Este es el primer kit que hace que elcultivo de muestras de este patógeno sea relativa-mente fácil de analizar en el consultorio.


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