UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA CALIFORNIA BIOINGENIERO FACULTAD DE INGENIERIA MEXICALI

LABORATORIO DE BIOQUIMICA Dr. Fernando Amilcar Sols Domnguez M.I. Susana Norzagaray Plasencia

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PRCTICA NO. 5 SOLUBILIDAD Y DESNATURALIZACIN DE PROTENAS

COMPETENCIA

Observar la solubilidad y desnaturalizacin de las protenas con varios agentes fsicos y qumicos mediante la

aplicacin de las tcnicas experimentales de bioqumica y qumica analtica.

MARCO TERICO

La solubilidad de la mayora de las protenas disminuye frente a elevadas concentraciones de sales. Este

efecto, llamado desalado (salting out), resulta muy til aunque no est totalmente comprendido. La dependencia de la solubilidad respecto a la concentracin salina difiere entre protenas. Por ejemplo, a una concentracin de sulfato 0.8 M, el fibringeno precipita, mientras que se requiere una concentracin 2.4 M

para precipitar la albmina srica. El precipitado por salado tambin resulta til para concentrar disoluciones diluidas de protenas. Por otro lado, la desnaturalizacin es la prdida de la estructura de una protena, con o sin prdida de la actividad biolgica, dependiendo el nivel de estructura en el que se llev a cabo la desnaturalizacin. Para desnaturalizar una protena existen varios mtodos, tanto fsicos como qumicos. En los

primeros encontramos el calor, el pH, bajas temperaturas. En los segundos podemos mencionar a los cidos fuertes, urea, detergentes como el SDS (dodecil sulfato de sodio), -mercaptoetanol, ditiothreitol, etc.

MATERIAL 8 tubos de ensaye,

2 cajas Petri, 2 pipetas 10 ml,

Pinzas para tubos de ensaye,

2 vasos para precipitados de 50 ml, 1 vaso pp 250 ml,

REACTIVOS Albmina de huevo,

Leche, Jugo de limn, H2SO4,

HNO3,

HCl y NaOH 10%,

HgCl2 2%, AgNO3 2%, Acido tricloroactico 5%.

EQUIPO 1 parrilla de calentamiento, 1 bao Mara, Metodologa DESARROLLO EXPERIMENTAL

PRIMERA PARTE: DESNATURALIZACIN DE ALBMINA CON CIDOS Y BASES FUERTES

1. Separar la albmina (clara) de la yema de huevo y hacer una dilucin 1:1 con agua destilada.

2. En 3 tubos de ensaye agregar 1 ml de albmina y rotularlos como A-1, A-2 y A-3

3. Al tubo A-1 se adiciona 1 ml de cido sulfrico,

4. Al tubo A-2 se adiciona 1 ml de cido ntrico

5. Al tubo A-3 se adiciona 1 ml de hidrxido de sodio.

6. Se agitan los tubos suavemente para homogeneizar evitando la formacin de espuma y se observa si

se presenta solubilidad o desnaturalizacin de protenas.

7. La yema se separa en 2 porciones en cajas Petri, se rotulan como Y-1 e Y-2

8. En la muestra Y-1 se van adicionando gotas de cido ntrico y se anotan las observaciones.

9. En la muestra Y-2 se van adicionando gotas de gotas de hidrxido de sodio y se anotan las

observaciones y en la otra agregan.

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SEGUNDA PARTE: DESNATURALIZACIN DE ALBMINA CON METALES PESADOS

1. En 2 tubos de ensaye agregar aproximadamente 1 ml de albmina. (Deposita 1 ml de agua purificada en un

tubo de ensaye , para usarlo como indicador del nivelcomo indicador del nivelcomo indicador del nivelcomo indicador del nivel al que debe llegar la muestra de albumina, ya que por la viscosidad

es difcil pipetearla)

2. Al tubo 1 agregar 2 ml de cloruro de mercurio

3. Al tubo 2, agregar 2 ml de nitrato de plata.

4. Agitar los tubos suavemente sin generar mucha espuma

5. Observar la presencia de solubilidad o desnaturalizacin de protenas.

TERCERA PARTE: DESNATURALIZACIN DE ALBMINA CON CIDO TRICLOROACTICO

6. En un tubo de ensaye se agregar aproximadamente 1 ml de albmina (Deposita 1 ml de agua purificada en

un tubo de ensaye , para usarlo como indicador del nivelcomo indicador del nivelcomo indicador del nivelcomo indicador del nivel al que debe llegar la muestra de albumina, ya que por la

viscosidad es difcil pipetearla)

1. Adicionar 1 ml de cido tricloractico.

2. Calentar a bao mara durante 5 min.

3. Dejar enfriar y anotar las observaciones.

PARTE CUATRO: DESNATURALIZACIN DE PROTENAS DE LECHE

1. En 2 tubos de ensaye grandes se agregan 5 ml de leche.

2. Al tubo 1 se adiciona gota a gota jugo de limn hasta observar cambios considerables.

3. Al tubo 2, se adicionan gota a gota HCl 3N hasta observar cambios considerables

CUESTIONARIO

1. Describa el proceso de desnaturalizacin de protenas.

2. Cuando una protena se desnaturaliza, sigue teniendo actividad biolgica?

3. Explique por qu se forman grumos en la leche cuando se adiciona jugo de limn o HCl?

BIBLIOGRAFA 1. Barboza-Corona, JE. Manual de Prcticas de Bioqumica. Divisin de Ciencias de la Vida. Universidad de

Guanajuato. 1. Wilson, K., and Walker, J. 2000. Principles and Techniques of practical Biochemistry. Fifth edition. Cambridge University Press. 2. Robert, JF., and White B.J. 1990. Biochemical techniques theory and practice.1st edition. Waveland Press,

Inc. USA.