prošla nedelja
DESCRIPTION
Prošla nedelja. Imunoaglutinacija (princip, podela, primena) Imunoprecipitacija (princip, podela, primena). ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE SA OBELEŽENIM ANTITELIMA. ANTIGEN -ANTITELO REAKCIJE SA OBELEŽENIM ANTITELIMA. M. M - marker. At. Fc. Fab. Fab. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/1.jpg)
Prošla nedelja
Imunoaglutinacija (princip, podela, primena)
Imunoprecipitacija (princip, podela, primena)
![Page 2: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/2.jpg)
ANTIGEN-ANTITELOREAKCIJE SA OBELEŽENIM
ANTITELIMA
![Page 3: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/3.jpg)
ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE SA OBELEŽENIM ANTITELIMA
M
Fc
Fab
ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA,EIA) - marker ENZIM
IMUNOFLUORESCENCIJA (IF) - marker FLUORESCENTNA BOJA
RADIOIMMUNO ASSAY (RIA) - marker RADIOAKTIVNI IZOTOP
AtM - marker
Fab
![Page 4: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/4.jpg)
Enzimski imuno-test(EIA, ELISA)
Marker je enzim, a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo)
Obavlja se u pločama za mikrotitraciju (pločama sa 96 rupica)
Signal se detektuje kolorimetrijski (pomoću spektrofotometra)
Koristi se za detekciju antigena u tečnim uzorcima (npr. serumu) ili antitela (najčešće u serumu)
Bazira se na principu promene boje supstrata pod dejstvom enzima
Može da bude kvalitativna ili kvantitativna
![Page 5: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/5.jpg)
ELISA detekcija antitela
antigen kojim je obložena ploča
ispitivani serum
![Page 6: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/6.jpg)
InkubacijaIspiranje
6
12
ELISA detekcija antitela
![Page 7: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/7.jpg)
obeleženasekundarna At
EE
E
E
E
E
ELISA detekcija antitela
![Page 8: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/8.jpg)
Inkubacija
EE
E
E
E
E
12
6
ELISA detekcija antitela
![Page 9: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/9.jpg)
Ispiranje
EE
E E
EE
E
E
ELISA detekcija antitela
![Page 10: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/10.jpg)
E
E E
E
12
6
Kolorimetrijska detekcija
ELISA detekcija antitela
![Page 11: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/11.jpg)
ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)
neobeleženaAg-specifičnaAt
uzorak(serum)Ag
![Page 12: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/12.jpg)
Inkubacija
12
6
Ispiranje
ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)
![Page 13: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/13.jpg)
Inkubacija
12
6
Ispiranje
E
EE
E
E
obeleženaAg-specifičnaAt
ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)
![Page 14: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/14.jpg)
Kolorimetrijska detekcija
12
6 E E
dodavanje supstrata
ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)
![Page 15: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/15.jpg)
![Page 16: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/16.jpg)
Imunofluorescencija(IF)
Marker je fluorescentna boja (fluorohrom), a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo)
Signal se detektuje pomoću fluorescentnog mikroskopa ili protočnog citoflourimetra
Koristi se za detekciju antigena (na ili u ćeliji/tkivu) ili antitela (najčešće u serumu)
Bazira se na principu da fluorohromi kada se ozrače svetlom jedne talasne dužine bivaju pobuđeni da emituju svetlo druge talasne dužine (fluorescein – zeleno, rodamin – crveno ...)
![Page 17: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/17.jpg)
IMUNOFLUORESCENCIJA
INDIREKTNA (IIF)(obeleženo sekundarno At)
DIREKTNA (DIF)(obeleženo primarno At)
Detekcija Ag
![Page 18: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/18.jpg)
DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
F
FF
F
fiksiraniuzorak
obeleženaprimarna At
![Page 19: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/19.jpg)
F
FF
F
InkubacijaIspiranje
12
6
DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
![Page 20: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/20.jpg)
F F
Ekscitacija
Fluorescencija
DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
![Page 21: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/21.jpg)
DIF Chlamydia trachomatis
![Page 22: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/22.jpg)
IMUNOFLUORESCENCIJA
INDIREKTNA (IIF)(obeleženo sekundarno At)
DIREKTNA (DIF)(obeleženo primarno At)
Detekcija Ag
Detekcija Ag
Detekcija At
![Page 23: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/23.jpg)
fiksiraniantigen
ispitivani serum
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija i kvantitiranje At u serumu pacijenta)
![Page 24: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/24.jpg)
InkubacijaIspiranje
6
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
![Page 25: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/25.jpg)
Inkubacija
obeleženosekundarno AtF
F
F
F
F
FF
F
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
![Page 26: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/26.jpg)
Inkubacija
FF
F
F
F
FF
F
12
6
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
![Page 27: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/27.jpg)
Ispiranje
FF
F F
FF
F
F
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
![Page 28: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/28.jpg)
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
F
F F
F
Ekscitacija
Fluorescencija
![Page 29: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/29.jpg)
Indirektna Imunofluorescencija
Neutrofili (cANCA)Citoplazmatsko vezivanje
ANCA (anti neutrofilna At protiv citoplazmatskih Ag)
Neutrofili (pANCA)Perinuklearno vezivanje
![Page 30: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/30.jpg)
Indirektna Imunofluorescencija
Glomerulonefritis Goodpasture’s sindrom
(At protiv Ag glomerularne bazalne membrane)
![Page 31: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/31.jpg)
IMUNOFLUORESCENCIJA
INDIREKTNA (IIF)(obeleženo sekundarno At)
DIREKTNA (DIF)(obeleženo primarno At)
Detekcija Ag
Detekcija Ag
Detekcija At
specifičnost
osetljivost
![Page 32: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/32.jpg)
Radio-imunotest (RIA)
Marker je radioaktivni izotop (npr. 125I)
Nedostatak: rad sa radioaktivnošću i odlaganje radioaktivnog otpada
Koristi se za određivanje niskih koncentracija antigena u rastvoru(npr. hormona u krvi)
Vrlo osetljiv kvantitativan test
Meri se vezana radioaktivnost pomoću odgovarajućeg brojača
"for the development of radioimmunoassays of peptide hormones"
Rosalyn Sussman YalowJuly 19, 1921 – May 30, 2011
Nobelova nagrada za fiziologiju ili medicinu 1977
![Page 33: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/33.jpg)
Brzi test za otkrivanje trudnoće
![Page 34: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/34.jpg)
BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (princip)
Detekcija HCG u urinu trudne žene
Koriste se tri vrste antitela:
1. anti-HCG antitelo - obeleženo koloidnim zlatom (slobodno)
2. anti-HCG antitelo – neobeleženo (fiksirano za membranu)
3. anti-imunoglobulinsko antitelo – neobeleženo (fiksirano za membranu)
![Page 35: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/35.jpg)
pozitivan
uzorak (urin)
negativan
uzorak (urin)
+
–
BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (rezultati)
![Page 36: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/36.jpg)
pozitivan
uzorak (urin)
Z Z Z
Z
difuzija Z Z
difuzija
Z
HCG
obeleženoanti-HCG
At
neobeleženoanti-HCG
At
anti-IgAt
+
uzorak(urin)
Z
Z
BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (pozitivan rezultat)
Z Z
![Page 37: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/37.jpg)
negativan
Z Z ZZ
difuzija Z Z
difuzija
ZZ Z–
BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (negativan rezultat)
uzorak (urin)
uzorak(urin) neobeleženo
anti-HCGAt
anti-IgAt
obeleženoanti-HCG
At
![Page 38: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/38.jpg)
anti-imunoglobulinsko antiteloj.Za određivanje količine hormona u krvi koristi se
10.
direktna imunofluorescencijai.U RIA testu se kao obeleživač koristi9.
RIA i ELISAh.Za dokazivanje auto-antitela u serumu koristi se
8.
u ploči za mikrotitracijug.Za dokazivanje bakterije iz roda Chlamydia u cervikalnom brisu koristi se
7.
radioaktivni izotopf.U testu indirektne imunofluorescencije fluorescentnom bojom je obeleženo
6.
jačine boje razgrađenog supstratae.U ELISA testu količina antigena ili antitela određuje se na osnovu
5.
indirektna imunofluorescenca ili ELISA
d.Razgrađeni supstrat od strane enzima u ELISA testu detektuje se
4.
antigena ili antitela u tečnim uzorcimac.ELISA se radi3.
kolorimetromb.Antitelo u ELISA testu obeleženo je2.
enzimoma.ELISA se koristi za detekciju1.
1.____ 2.____ 3.____ 4.____ 5.____ 6.____ 7.____ 8.____ 9.____ 10.____c a g b e j i d f h
![Page 39: Prošla nedelja](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061600/56814b43550346895db845be/html5/thumbnails/39.jpg)
Sledeća nedelja
Predavanje:Imunološka tolerancija: značaj i mehanizmi
Autoimunost: principi i patogeneza
Seminar:Reakcije preosetljivosti