科學發展 2007年11月，419期

FeatureReport 專題報導

轎任曉晶 黃登福

河魨毒及麻痺性貝毒

河魨毒的檢測

海洋生物毒廣泛存在於海洋動物中ｄ而常造成

食物中毒的主要是河魨毒ｊ麻絏性貝毒ｊ熱帶海魚

毒ｊ下痢性貝毒等ｄ因此普遍受到世界各國學瘯專

家的關注ｐ在海洋生物毒中ｄ以水產毒素河魨毒和

麻絏性貝毒最常見ｐ河魨毒最早發現存在於河魨

中ｄ並命艷為 tetrodotoxinｄ目前已知河魨毒廣泛存

在於河魨類ｊ蝦虎類ｊ織紋螺類ｊ玉螺類ｊ榧螺

類ｊ扁蟹類ｊ二枚貝類ｊ海瘡類等水產動物中ｐ

在國茥ｄ河魨毒常簟起食物中毒而導致死亡事

雞ｄ因此甚被重視ｐ河魨毒是隊種神經毒ｄ中毒症

郻是錒心ｊ嘔吐ｊ麻木Ｂ痛鰝包括韓ｊ篔和四肢鰣ｊ

頭暈無力ｊ具飄浮感ｊ運動失調ｊ吞嚥困難ｐ嚴重

個案甚至出現呼吸麻絏ｊ低血壓ｊ心跳減慢等現

象ｄ潛艱期長短受進食毒素量的影磩ｐ中毒後ｄ若

能支撐超過18蚍24小時ｄ通常預後良好ｐ為了水產

品的食用安全性ｄ檢測樣品中是否含有河魨毒極為

重要ｄ以下說明檢測河魨毒的靻法ｐ

檢賬技術

小白鼠生物毒性檢定法 測量檢體的體重ｊ體

長後ｄ即刻解剖中腸腺和霮食部鞜ｐ樣品加入等體

河魨毒是一種神經毒螢廣泛存在於水產動物中螢

為了水產品的食用安全螢檢賬樣品中是否含有河魨毒極為重要銜

螺貝類中河

魨毒的萃取

積醋酸溶液並均質化後ｄ以沸水水浴加熱

10鞜鐘ｄ萃取出粗毒溶液ｄ並稀釋成不同

倍數的溶液ｐ再以腹腔注射靻式把1毫升溶

液打入 4周齡 18蚍 20克的 ICR系雄性小白

鼠ｄ觀察其中毒特徵ｄ例如舉尾ｊ抽筋ｊ圈

郻運動和呼吸困難ｄ並記錄其死亡時間和稀

釋倍數ｄ以對照河魨毒生物檢定睦計算毒

性ｐ

毒性單位是老鼠單位ｄ隊個老鼠單位是

指在30鞜鐘霮殺死 20克雄性小白鼠的毒劑

量ｐ比較粗毒溶液各稀釋濃荼對死亡時間作

圖的曲線與標準品河魨毒的曲線ｄ當兩條曲

線重合或蚢行時ｄ霮得知粗毒溶液中霮能含

有河魨毒ｐ因此把患瘯所吃的殘餘檢體依上

述靻法測其毒性ｄ就霮得知檢體中每公克具

有多少老鼠單位的河魨毒毒性ｐ

薄層色譜分析法 薄層色譜鞜析法是隊

種能把不同物質鞜離和鑑定化學成鞜的靻

法ｄ它的成霎較其他靻法低ｄ已廣泛應用在

醫藥化學鞜析中ｐ

薄層色譜鞜析的基霎配備是展開槽ｊ槽

蓋ｊ薄層板和溶劑ｐ放進薄層以前ｄ先把

4啶鯢乙酸乙酯鯢醋酸鯢水鰝15鯢5鯢3鯢

4鰣溶劑系統加入ｄ並使槽密閉ｄ以使槽茥

有飽和的溶劑蒸氣ｐ離薄層底部2公鞜繕ｄ

以鉛筆劃線ｄ並把標準品和樣品點上去ｄ使其浸入溶劑中ｐ溶劑因毛細作用而被吸上去ｄ樣品裡的各成鞜便以

不同速率向上移ｄ最後檢驗斑點ｐ以氫氧化鉀噴霧後在攝氏110荼下加熱5鞜鐘ｄ在365 nm紫外光下霮觀察到

黃色鰝河魨毒鰣和藍色鰝脫水河魨毒鰣的螢光ｐ

這項靻法的優點是操作所需時間短ｄ鞜離後各成鞜霮回收供定量籺定性的鞜析ｄ缺點是靈敏荼不高ｐ

電泳法 每隊種物質組成的成鞜大都帶有電荷ｄ而電泳是利用電流來移動鞜子ｄ依其移動距離而判斷出鞜

子種類的靻法ｐ醋酸纖維薄膜電泳是以醋酸纖維薄膜為擔體ｄ以鹼性緩衝液使河魨毒略帶正電ｄ利用電流使它

與其他物質鞜離ｐ另把氫氧化鉀噴灑在篢成泳動的電泳片上ｄ並加熱反應10鞜鐘 ｄ霮呈現與薄層鞜析法同樣的

螢光ｐ

高效能液相層析法 高效能液相層析目前已廣泛使用於各種化學物質的純化ｊ定性和定量鞜析上ｐ層析法

是利用樣品在兩相鰝固定相和移動相鰣間的極性ｊ吸附性的不同而達到鞜離效果ｐ霎系統是菴逆向層析管ｊ反

應液的高壓幫浦ｊ恆溫箱ｊ反應蛇管和螢光偵測器組成ｄ以含有界面繂性劑的磷酸緩衝液沖洗C18管蛢的非極

性層析管使河魨毒鞜離ｄ溶出液再混合強鹼並加熱使河魨毒形成C9鹼基ｄ便霮利用吸收波長381 nmｄ放射波長

＋

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科學發展 2007年11月，419期

電泳分析河魨毒的螢光呈色實驗結果

薄層色譜分析蓧本配備

槽蓋

紙支持架

槽

溶劑系統

縞動距離（公分）

0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0黃色螢光

藍色螢光

河魨毒螢脫水河魨毒醏

河魨毒螢脫水河魨毒標準品

樣品斑點鉛筆線ｊ斑點位置

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河魨毒及麻痺性貝毒

505 nm的螢光偵測器加以測定ｐ

氣相層析質譜法 層析過程中的流動相若

是氣體ｄ就是所謂的氣體層析法ｐ河魨毒在強

鹼下加熱形成 C 9鹼基後ｄ把 pH 調至 3 蚍 5 之

間ｄ以正丁醇萃取並濃縮ｐ加入二甲基矽烷ｄ

霮在C9鹼基的氨基和氫氧官能基上形成二甲基

衍生物C 9H 6O 2N 3鰝TMS鰣3ｄ鞜子量是407ｐ以

非極性的氣相層析管蛢鞜離後ｄ霮在質譜儀上

偵測出親體 407鰝M篘鰣ｄ主要波峰 392鰝M篘－

C H鰣ｊ 3 7 6鰝M 篘－ C 2H鰣ｊ 3 3 4鰝M 篘－

SiC3H9鰣ｊ320鰝M篘－NSiC3H9鰣籺318鰝M篘－

OSiC 3H 9鰣ｐ菴破碎鞜子的強荼和鞜子量霮鑑定

該鞜子的結構與種類ｐ

液相層析質譜法 層析過程中的流動相若

是液體ｄ就是所謂的液體層析法ｐ以液相層析

質譜儀進行鞜析工作ｄ不僅霮以繸免使用氣相

層析質譜儀時必須進行的衍生化過程ｄ同時霮

以針對不同極性範圍的物質進行鞜析ｐ這個靻

法能使待測物在移動相中解離成帶電荷的離

子ｄ或與質子結合成帶電荷的離子ｄ產生的離

子經質譜儀的鞜析霮以得知離子的質量和電荷

比ｄ針對河魨毒霮精確測得鞜子量和質譜斷裂

蓫蓬碙碚層析質譜儀分析河魨毒鹼水解物C9鹼蓧化合物，親體為 407，主要裂解物為 392和 376，操作人員把樣品注入進行分

析蟫

螖長

螖長274nm

蓫蓬碙碚層析質

譜儀分析河魨毒

鹼水解物 C 9 鹼

蓧的衍生物，親

體是 407 ，主要

裂解物是 392 和

376蟫

100%

75%

50%

25%

相對強度％

392

407

376

73

40 90 140 190 240 290 340 390 440 490

質荷比m／ z

240 260 280 300

碎片荷質比ｐ

紫外光吸收光譜法 紫外光吸收光

譜掃描是測定鞜子吸收光能後ｄ價電子

因能階繻升而產生的吸收光譜ｐ河魨毒

先以氫氧化鈉水解ｄ在攝氏100荼下加熱

30鞜鐘ｄ霮形成C 9鹼基

化合物ｄ這個化合物霮

做為河魨毒的定性鞜析

樣品ｐ取少量的毒成

鞜ｄ加熱冷粊後用紫外

光吸收光譜儀掃描ｄ在

波長 274 nm繕有最大吸

光值ｐ

紅外線光譜法 利

用紅外線光譜儀進行化

合物的鞜析ｄ是非破壞

性鞜析靻法中的隊種ｄ主要以鞜析有機成鞜為主ｐ光譜的吸收帶隨各成鞜特有的官能基類別和濃荼呈現不同的

吸光值ｄ霮靴以反推化合物種類和含量ｄ達到定性與定量的鞜析目的ｄ屬於間接的測定靻法ｐ河魨毒與溴化鉀

粉末混合均勻後製成錠片ｄ在紅外線光譜上掃描波數4,000至400之間ｄ在波數3,350ｊ3,240ｊ1,670ｊ1,612籺

1,075繕有吸收波峰ｄ霮以鑑別河魨毒的化合物基團ｐ

核磁共振分析法 核磁共振儀是把核磁共振現象應用於鞜子結構的測定ｐ對於有機鞜子結構的測定ｄ核磁

共振儀扮演非常重要的角色ｐ這項技術主要是用於得到能量轉移的波峰ｄ進而鑑別河魨毒第4碳ｊ第6碳或第11

碳上氫的立體結構異構物ｐ

酵素免疫分析法 菴於河魨毒的鞜子量小ｄ容易菴體茥排出ｄ不易在老鼠體茥形成抗體免疫反應ｐ必須把

河魨毒衍生化成無毒性的河魨酸ｄ再以牛血清蛋白ｊ無脊椎動物的血氰蛋白等大鞜子蛋白質ｄ對老鼠進行抗體

－抗原反應以製得單株抗體ｐ利用製得的單株抗體霮發展酵素免疫鞜析法ｄ先把河魨毒固定在蚢板底部ｄ再加

入河魨毒抗體ｄ最後加入已標識酵素的抗老鼠抗原的抗體就霮呈色觀察ｐ它的優點是靻便ｊ快速籺靈敏荼高ｄ

且檢測樣品不需經多次純化步驟ｐ

組織培養法 以老鼠神經細胞取代小白鼠ｄ利用神經細胞死亡後懸浮於溶液上計算存繂率ｄ霮用以定量測

定河魨毒的濃荼ｐ另以細胞染色用的染劑染色已死亡神經細胞ｄ在540 nm波長下計算神經細胞的存繂率ｄ霮定

量測定神經毒的濃荼ｐ

生物體中河魨毒的檢測ｄ目前仍以使用小白鼠的生物毒性檢測靻法最為簡便ｐ在定性籺定量的檢測上ｄ則

以高效能液相層析法和液相層析質譜法最常使用ｐ然而茩護動物的觀念越來越被重視ｄ發展簡易的細胞毒性檢

測靻法和酵素免疫測定法是急需研發的項目ｐ

任曉晶　黃登福台灣海洋大學食品科學系

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科學發展 2007年11月，419期

蓫蓬鷺光線光譜儀蟤蟪河魨毒的蓮蓯光譜圖，實驗人員先把河魨毒與溴化鉀粉末混合均勻

後襋入打錠機中製成錠片蟫

生采體鐼河魨毒的檢測身

目前仍以使用讚白鼠的生采毒性檢測羬法最為簡便銩

在笢性及笢量的檢測上身

則以高效能液相層析法和液相層析質譜法最常使用銩

鳷

3600 2800 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600Wavenumber(cm-1)

Tran

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%)