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POS No: 1

LABORATOIRE DE L’HÔPITAL PROTESTANT

DE NGAOUNDÉRÉ

PROCEDURE OPERATIONELLE STANDART (POS) DU DOSAGE QUANTITATIF DE L’HEMOGLOBINE

GLYQUEE(HBA1C) PRESENTE DANS LE SANG SELON L’ANALYSEUR DCA 2000+ SYSTEMS

Date de

conception:

2/07/2013

Version: 1

I. INTRODUCTION ET INTERET DU DOSAGE DE L’HB A1c

L’hémoglobine A1c résulte de la glycation non enzymatique de l’extrémité N-terminale de la chaîne-β de l’hémoglobine Ao. Le taux d’hémoglobine A1c est proportionnel au taux de glucose sanguin sur une période d’environs 2 mois. De ce fait, l’hémoglobine A1c est considérée comme un indicateur de la glycémie moyenne quotidienne.

II. OBJECTIF DE CETTE POS

Ce document s’inscrit dans le cadre des recommandations des normes ISO 15 189 et présente une méthode convenable, quantitative pour assurer une mesure précise du pourcentage sanguin d’hémoglobine glyquée (HBA1c) en utilisant l’analyseur DCA 2000+.

III. PRINCIPES DU DOSAGE:

La concentration spécifique en hémoglobine A1c et la concentration en hémoglobine totale sont mesurées séparément. Le rapport est exprimé sous forme de pourcentage de l’hémoglobine A1c.10 Tous les réactifs intervenant dans ces deux réactions sont contenus dans la cartouche de réactif del’hémoglobineA1c (figure 1 Pour le dosage de l’hémoglobine totale, on utilise le ferricyanure de potassium pour oxyder l’hémoglobine de l’échantillon en méthémoglobine. La méthémoglobine se fixe alors au thiocyanate et forme un complexe associant thiocyanate et méthémoglobine. C’est Ce complexe coloré qui est mesuré. L’augmentation de l’intensité de la coloration à 531nm est Proportionnelle à la concentration en hémoglobine totale dans l’échantillon.

Pour le dosage spécifiquedel’HbA1c, on utilise une méthode d’inhibition de l’agglutination sur latex. Un agglutinant provoque l’agglutination au latex recouvert d’un anticorps monoclonal de souris spécifique de l’HbA1c. Cette réaction d’agglutination entraîne une diffusion de la lumière plus importante, qui se traduit par une augmentation de l’absorbance à 531nm. Les molécules d’HbA1c présentes dans l’échantillon de sang total entrent alors en compétition pour se fixer sur les sites de liaison des complexes anticorps-latex dont le nombre est limité, entraînant ainsi une inhibition de l’agglutination et une diminution de la diffusion de la lumière. Cette diminution peut être mesurée. Elle correspond à une diminution de l’absorbance à 531nm. La concentration en HbA1cest alors quantifiée à l’aide d’une courbe d’étalonnage de l’absorbance établie par rapport à la concentration en HbA1c.

% HbA1c = [HbA1c] / [Hémoglobine Totale] X 100

Le dosage de l’hémoglobine HBAc1 ne peut être effectué que par tout technicien de laboratoire autorisés à le faire.

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IV. MATERIEL NECESSAIRE : - Les cartouches de réactif : Les cartouches de réactif peuvent être conservées pendant trois

mois à température ambiante jusqu’à la date de péremption .Notez sur le carton d’emballage la date à laquelle vous les avez placées à température ambiante.). conserver le stock de cartouches au réfrigérateur.

- La carte d’étalonnage

- supports de tube capillaire en verre (Les supports de tube capillaire non utilisés peuvent être conservés et utilisés avec un autre lot de cartouches de réactif. Chaque support de tube

- capillaire est conditionné séparément dans un emballage-coque)

- les tubes EDTA/hépariné/citraté.

- Le papier absorbant.

V. PROCEDURE OPERATIONELLE:

Echantillon: L’échantillon de sang peut être obtenu par prélèvement sur le bout du doigt ou par prise de sang veineux. Cependant, cette procédure donne les étapes de l’analyse faites grâce au sang veineux.

ETAPES ACTION1 -Allumer l’analyseur DCA 2000 + en appuyant sur la touche « ON » et le laisser se

réchauffer pendant 1-8 minutes.-« READY: SCAN BAR CODE » s’affiche à l’écran, et l’on entend un bip lorsque l’appareil est prêt à scanner.

2 Prélever le sang sur anticoagulant EDTA ou citrate ou héparine.3 Si un nouveau kit est mis en utilisation pour la première fois, activer l’étalonnage de

l’appareil à l’aide de la carte d’étalonnage. Sinon passer à l’étape 4.Activation de l’Etalonnage : scanner le code barre de la carte d’étalonnage lorsque l’appareil de demande. Apres le scan, un bip signifie que l’appareil s’est étalonné avec succès. L’instrument peut stocker deux étalonnages pour le dosage HbA1c DCA.Chaque étalonnage correspond à un numéro de lot différent.

4 -Enlever la cartouche de réactif de son contenant en déchirant l’une des 3 extrémités délimitées. NB : NE PAS TOUCHER LA ZONE « Optical Window » POUR EVITER L’OBTENTION DES RESULTATS ERRONES.-Découper un support de tube capillaire a utiliser à l’aide d’un ciseau.

5 -Pour Assigner un numéro au patient, presser la touche «MENU/NEXT », jusqu’à ce que « SET SEQUENCE NUMBER » s’affiche à l’écran.-Presser la touche “UP” ou “DOWN” pour choisir les chiffres au-dessus du curseur. Presser “NEXT” pour sélectionner le 2nd ou 3e chiffre-Presser “ENTER” pour sauvegarder le numéro du patient entré.-Presser “ESCAPE” pour revenir à l’analyse.-Presser  « NEXT » pour repartir menu « SCAN BAR CODE ».

6 -Enlever le tube capillaire de son contenant,- le remplir de l’échantillon sanguin en évitant qu’un excès de sang ne touche la partie plastique du tube capillaire. NB : Si nécessaire, essuyer l’excès de sang à l’aide d’un papier absorbant, en évitant que le papier ne touche l’ouverture du tube capillaire.- Important : lorsque le tube capillaire est rempli avec l’échantillon sanguin, l’analyse doit démarrer dans les 5minutes qui suivent.

7 Insérer soigneusement le support de tube capillaire dans la cartouche de réactif jusqu’à ce

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que le support de tube capillaire pénètre complètement.8 Scanner le code-barres de la cartouche de réactif (contenant le numéro de lot et le nom de

l’analyse). Pour se faire :

- insérer la cartouche de réactif dans le détecteur de code-barres  en le tenant de sorte que le code barre soit orienté vers la droite.-Rapidement (en moins d’une seconde), glisser la cartouche du haut vers le bas en passant par le point indiquant le détecteur.-l’on entend un bip, signifiant que le scan s’est déroulé avec succès.-Si l’on n’entend aucun bip, répéter la procédure. Si l’on n’entend toujours pas de bip, se référer à la section 5 « Troubleshooting » du manuel de l’utilisateur (operating manual)

9 Dès l’affichage de «LOAD CARTRIDGE/ PULL TAB/CLOSE DOOR]», soulever l’ouverture du compartiment de la cartouche

- Tenir la cartouche de telle sorte que le code barre soit orienté vers la droite- Insérer la cartouche dans le compartiment jusqu’à l’audition/sensation d’un léger

claquement.- D’un mouvement ralenti, lent et continu, tirer la bande plastique hors de la

cartouche de réactif.- Refermer le compartiment cartouche et éliminer la bande en plastic précédemment

retirée.10 5 secondes Après le chargement de la cartouche de réactif dans l’analyseur DCA™, l’on

entend un bip, et le dosage commence. Patienter 6 minutes pour l’affichage du résultat.11 -Pour interrompre le dosage à n’importe quel moment, presser «  ESCAPE. »

-Dès l’affichage « CANCEL TEST. » presser « ENTER »avant 15 secondes.-Eliminer la cartouche de réactif.

12 Une fois le dosage terminé, l’on entend un bip, et le résultat s’affiche.-Noter le résultat dans un registre de control qualité quotidien avant de retirer la cartouche de réactif

13 Retirer la cartouche de réactif en ouvrant le compartiment cartouche-Pousser et maintenir bas le bouton situé à la droite du compartiment.-Maintenir ce bouton pressé et pousser la barre plastique (sur la cartouche) vers la droite pour débloquer la cartouche.-Tirer la cartouche hors du compartiment et l’éliminer suivant les normes d’élimination des déchets en vigueur à l’hôpital.

VI. INTERFERENCES Des affections comme l’anémie hémolytique, la polycythémie et les états Homozygotes Hubs

et HFC peuvent entrainer l’obtention des résultats HbA1c inférieurs à ceux escomptés. La bilirubine (jusqu’à une concentration de 20 mg/dl), Le facteur rhumatoïde (jusqu’au

titrede1:5120), Les triglycérides (jusqu’à une concentration de1347mg/dl) et les antidiabétiques habituels (Diabinese, Orinase, Tolinase, Micronase, Dymelor et leglyzipide prescrits dans leurs concentration normale) n’interfèrent pas avec le dosage.

Les échantillons de sang présentant une lipémie très élevée, stockés depuis très longtemps ou congelés, ne doivent pas être analysés à l’aide de cette méthode.

VII. PRESENTATION DU RESULTAT

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les résultats d’analyse affichés ne nécessitent aucun calcul supplémentaire. Les concentrations en HbA1c sont comprises dans la plage de mesures comprise entre 2,5 % à 14,0 % d’HbA1c. L’analyse est linéaire dans cette plage de résultats.

En cas d’affichage de résultats < 2.5 % ou bien > 14 % ; Signalez que le résultat est inférieur à 2,5% ou bien > 14 % d’HbA1c. Ne pas recommencer le dosage en utilisant un volume d’aliquote de l’échantillon plus ou moins dilué

Noter la valeur du résultat dans le carnet du patient et dans les registre appropries du laboratoire.

VIII. VALEURS MORMALES

Selon la méthode de dosage utilisée, le taux d’HbA1c est approximativement compris entre 3 et 6 % chez les sujets non diabétiques, entre 6 et 8 % chez les patients dont le diabète est équilibré et peut atteindre 20 % ou plus si le diabète est mal équilibré.

IX. INTERPRETATION

Le médecin prescripteur de L’HB A1c sera responsable de l’interprétation des résultats, selon l’état Clinique du patient au moment de l’examen.

X. LIMITES DE LA METHODE

Le dosage de l’HbA1c DCA donne des résultats exacts et précis relatifs à l’hémoglobine totale pour une plage de mesure comprise entre7et 24g/dl. La majorité des patients ont un taux d’hémoglobine compris dans cet intervalle. Cependant, les patients souffrant d’anémies sévères peuvent présenter des concentrations en hémoglobine inférieures à 7g/dl, alors que les patients souffrant de polycythémie peuvent présenter des concentrations en hémoglobinesupérieuresà24g/dl. Chez ces patients, les concentrations en hémoglobine HbA1c doivent être déterminées par un autre principe de dosage si elles se situent en dehors de la plage de mesure acceptable.

XI. REFERENCES

Bayer Corporation, DCA 2000 Analyzer Operator’s Manual, 1994, Elkhart, IN.

Bayer Corporation, DCA 2000 Hemoglobin A1c Reagent Kit Package Insert, Revised 12/96, Elkhart, IN.

Bayer Corporation, DCA 2000 Quality Control Kit Package Insert, Revised 4/1998, Elkhart, IN.

Knowles, B. J., Haigh, W. B., Michaud, G. C., and Marchesi, V.T. A monoclonal antibody-Based immunoassay for haemoglobin A1c.Diabetes 35(1986):Suppl.94A

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