Title 実験的温阻血腎における尿および腎組織中γ-GTPの研究

Author(s) 沼, 秀親

Citation 泌尿器科紀要 (1987), 33(10): 1562-1568

Issue Date 1987-10

URL http://hdl.handle.net/2433/119313

Right

Type Departmental Bulletin Paper

Textversion publisher

Kyoto University

1562

〔墜轡雪『籍1罰

実験的温阻血腎における尿および腎組織中 γ-GTPの 研究

埼玉医科大学泌尿器科学教室(主 任:岡 田耕市教授)

沼 秀 親

STUDY　 OF　γ-GTP　 ACTIVITY　 IN　 URINE　 AND　 RENAL　 TISSUE

　 OF　 EXPERIMENTAL　 WARM　 ISCHEMIC　 KIDNEY

Hidechika NUMA

From the Department of Urology, Saitama Medical School

(Director: Prof. K. Okada)

　　　　The　 acute　 changes　 of　proximal　 tubule　 function　 and　 its　pathological　 condition　 were　 investigated

by　 measuring(r-GTP)activities　 in　the　 urine　 and　 renal　 tissue　 using　 warm　 ischemic　 kidneys　 of　 adult

dogs(n=34).　 Eight　 kidneys　 were　 kept　 in　 a　 warm　 ischemic　 condition　 throughout　 the　 experimen-

tal　period　 and　 the　 tissue　 was　 extirpated　 from　 the　 kidney　 at　 every　 hour,　 and　 31　 kidneys　 were　 re-

.leased　 from　 the　 30　min　 ischemic　 condition.　 The　 urine　 and　 the　 blood(peripheral　 and　 renal　 artery

and　 vein)were　 collected　 from　 these　 kidneys　 at　 every　 hour　 up　 to　 5　hr.　 The　 kidneys　 observed　 for

urine　 outHow(n罵24)were　 divided　 into　 thrce　 groups　 with　 time;7kidneys(1　 hr),5k三dneys(3　 hr),

and　 12　 kidneys(5　 hr),　 and　 they　 were　 extracted.

　　　　Thcγ 一GTP　 activity　 of　 the　 urine　 showed　 the　 maximum　 value　 of　 851土102　 mIU/ml　 at　 30　min

and　 dccreased　 to　 217土56　 mlU/ml,　 which　 declined　 to　 be　 clQse　 to　 the　 starting　 value　 of　 133±26

mlU/ml,　 at　 5　hr　 after　 the　 warm　 ischemic　 condition　 was　 released.　 The　 r-GTP　 activities　 of　 the　 cor-

tex　were　 325土62　 mIu/mg・P(i　 hr),527土37　 mIu/mg.P(3　 hr),and　 266土44　 mlU/mg.P(5　 hr).　 How-

ever,　 no　 increase　 in　 7-GTP　 activity　 was　 observed　 either　 in　 the　 renal　 vein　 blood,　 or　 in　 the　 cortex

obtained　 from　 the　 8　 kidneys　 kept　 in　 the　 warm　 ischemic　 condition.　 A　 histopathological　 examina-

tion　 showed　 the　 progressive　 changes　 in　 some　 parts　 of　 the　 proximal　 tubules　 after　 release　 from　 the

ischemic　 condition.

　　　　The　 present　 results　 suggest　 that　 an　 extra　 amount　 of　r-GTP　 is　excreted　 and　 discharged　 from　 the

proximal　 tubules　 into　 urine　 by　 warm　 ischemia　 but　 that　 the　 r-GTP　 value　 immediately　 returns　 to　 the

normal　 amount.　 The　 hyperenzymatic　 action　 of　1--GTP　 to　protect　 kidney　 probably　 due　 to　 the　 via-

bility　 of　 the　 proximal　 tubules　 seems　 to　 be　 most　 active　 around　 3　hr　 after　 the　 blood　 reflow.　 The

measurement　 of　urinary　 r-GTP　 activity　 seems　 to　 offer　 some　 useful　 information　 about　 the　function　 of

the　 proximal　 tubule,　 especially　 in　 the　 warm　 ischemic　 kidney.

Key　 words:Experimental　 warm　 ischemic　 kidney,　γ-GTP,　 Proximal　 tubule

緒 言

γ一glutamyltranspeptidase(以 下r-GTPと 略す)

は ヒ ト生体臓器 中,単 位重量あた り腎に最 も多量 に存

在 しD,と くに 近位尿細管の刷子縁部に局在 している

ことがすでに確認 されている2β)1その生理 作用の詳 細

については 目下 のところ不 明な点が多いが,蛋 白の再

吸収に際 しア ミノ酸に作 用す ると考え られている4).

これ までr-GTPの 活性値 は,主 として血清におい

て肝疾患 との関連を臨床評価 されて きた.し か し,r

疾 患においてY-GTPは 尿中に多最に遊出 して くるの

で3・5),そ の尿中活性値 を測定 す る ことは,近 位尿細

管の病態 の存在や消長を示す良い指標の1つ にな りう

る と考 えられ る.こ れ まで多 くは,各 種 腎疾患におい

て,そ の尿中 の活性値を測定 しただけにす ぎず,近 位

尿細管機能 と尿中 γ一GTP活 性値 との関係についての

報告 はあま りな されていない.

腎臓外科 の立場 に お い て 腎血 流を常温阻血す る場

合,阻 血時間は最大30分 間 まで と限定され,こ の間に

血流を再開すれば腎のviabilityを 温存 させ る ことが

できるとされている・腎組織 は常温阻血に よって糸球

体や遠位尿細管 よりも,近 位尿細管で最 も速 く障審 の

沼:実 験的温阻血腎 ・r-GTP

発生するこ とが判 明してお り6),し たが って,阻 血解

除後 の尿中 γ一GTP活 性値 の経時変動は,近 位尿細管

機能 の回復過程を示す マーカーの1つ にな りうるので

はないか と考え,以 下に述べ る実験を試 みた、

Table1.

1563

実 験 方 法

A.実 験手順

1.正 常雑種成犬(約10kg)34頭 を使 用,ネ ンプ

タール静脈麻酔下.ラ クテー トリンゲルの点滴 を終始

続行 し,利 尿状態 とした 、正中切開で開腹 し,経 腹膜

的に両側腎尿管を露出 して,肉 眼的に腎尿路系 に異常

のないことを確認 した後,両 側尿管を切断 して,両 腎

尿,末 梢血,腎 動静脈血 を それぞ れ採取 し,γ 一GTP

活性値 の測定を行な った.

2.26腎 について腎摘 出を行 ない,皮 質 と髄 質に分

け,まー.参考 として肝組織を採取 し,そ れぞれ γ一GTP

活性値 の測定を行な った.

3.8腎V`つ いて,一 側腎の血流を完全に遮 断 し常

温阻血 腎状態(15～20。C)と した.こ れを5時 間まで

継続 し,経 時的に腎組織を採取 し,阻 血前 の組織 とと

もに皮質 と髄質のそれぞれ γ一GTP活 性値 の測定を行

なった.

4.31腎 について,30分 間の常温阻血 の後に これを

解除 し,経 時的に腎尿,末 梢血,腎 動静脈血をそれぞ

れ5時 間 まで 採取 し,γ一GTP活 性値の測定を行 なっ

た.そ の うち,利 尿 の認め られた腎にたい しては経時

的に腎摘出を行ない,そ れ ぞれ皮質 と髄質 のr-GTr

活性値 の測定 を 行 な う一方,組 織学的検索 も施行 し

た.

B.γ 一GTP活 性値の測定法(Tablei)

1.尿 お よび血清

検体は すべて3,000rpm5分 間遠心 し,そ の上精

液について検索 した.市 販のモ ノテス ト γ一GT(ベ ー

リング ・マ ンハ イム社製)1mlを37℃ で10～20分

間予備加温 し,こ れに検体501を 加え混和 し,37℃

でi分 間反応 させ た 後,蒸 留水 を 対照液 と して405

nmの 波長 で比色測定 した.測 定は クイ ックレー ト

(オ リンパス社製)で5回 行ない,2回 目以後 の測定

値の平均値を求 めた.単 位は1分 間に1μmolのP-

nitroanilineを 遊離 さ せ る酵 素量 を1単 位 と して,

mlu/m1で 表示 した,

2.組 織

腎皮質,髄 質 お よび肝 のそれぞれ組織1gに,0,25

Msucro～e9倍 容を加え氷水 下でホモ ジナイズ し,そ

のホモ ジネー トを105,000×G60分 間遠心 して,そ

の上精液 に つ い て尿 お よび 血清の場合 と同様 の方法

Themethodofmeasurementof

r-GTPactivity.

IMaterial

a.urine,serum

b.kidney(cortex,medulla),liver

tissuelg

homogenate

門1.5.000Xg60min.supernatant

proteindetermination:Lowry'smethod

IIEnrymeassay

kit

「4mMしr-glutanyl-p-nitroanilide

40mMGIycylglycine

185mMTrisbuffer,pH8.5

preincubation(37°C,10-20min.)

sample50ｵ1

レea・ ・i・・(37°C,1・i・.)

products(p-nitroaniline)

absorbanceat405nm

※1unit=1μmoLP-nitroaniline/min.

で,γ 一GTPの 活 性 値 を 測 定 した.ま た 蛋 白定 量 を

Lowry法 で 同 時V`行 ない,蛋 白1mgあ た りの活 性

値mlU/mg.protein(以 下mlU/mg.pと 略 す)と

して表 示 した 。

これ ら の計 量 値 はす べ て 平 均 値 ±標 準誤 差(Mean

±S.E.)で 示 し,統 計 処 理 に あ た って はt検 定 を行

な い,P<0.05を もって 有 意 と した.

実 験 成 績

1γ 一GTPの 局 在(Fig.1)

mlU/mgprotein

600

500

400

300

200

goo

50

10

0

8)

・ 至

●

●

軸

b)

ぷ 王

iM

=轟

.:

鯉…

a

o

王Mean±S.E.

a)b)1a)c)JiP<0.005b)c)

LiverCortexMedulla

Fig.1.Localizationofr-GTPactivityinthe

kidney.

1564 泌尿紀要33巻

γ一GTP活 性 値 は,肝5±lmlU/mg・P・ 腎 皮 質

224±25mlu/mg.P,腎 髄 質63±6mlu/mg・Pで 皮

質 部 に多 量 に 存 在 す る こ とが 確 認 され た(p<0.005),

以下,こ の値 をcontrol値 とした.

2.常 温 阻 血 継 続 腎 の組 織 中 γ一GTP活 性 値 の推 移

(Fig.2)

阻 血前 の皮 質 中 お よび 髄 質 中 γ一GTP活 性 値 は,そ

れ ぞ れ196±30mIu/mg.P,70±9mlu/mg・Pで,

阻 血 継続 中 も5時 間 まで の値 に 有意 な変 化 は 認 め な か

った 。

mIU/mgprotein

400

300

(n=8)]IC・rtexMean±S.E.

王 ・・d・・1・

10号1987年

推移を示 した.1時 間 以内に利尿が認め られ,以 後 ほ

ぼ安定 した利尿状態が継続 した.

ml

40

30

20

io

0

王Mea・ ±・・

n:三三≧主唾___._n=17____→ レ_n=12一

L

30

Fig.3.

609012015018D210240270300min.

Changesofurinaryoutputafterrelease

from30minwar皿ische皿ia.

200

1・・一0

0.512345hrs

warmlschemia

Fig.2.Changesofr-GTPactivityinthecortex

andmedullaunderwarmischemia.No

statisticalchangeswereobservedincor-

texandmedulla.

3.常 温阻血解除 後 の 血中r-GTP活 性値 の 推移

(Table2)

腎動静脈血 と末梢血 におけ る,阻 血前 お よび阻血解

除後の γ一GTP活 性値 の推移 は軽微であ った.阻 血に

よる腎か ら血流側への γ一GTPの 流入は,こ の実験 に

おいてはほ とんどない ことが確認 された.

Table2.Changesofserumr-GTPactivityafter

releasefrom30minwarmischemia.

Nostatisticaldifferenceswereobserved

intheseresults.

5.常 温阻血解除後 の 尿 中Y-GTP活 性 値 の 推移

(Fig.4)

利尿の認 め られた24腎 の尿 中 γ一GTP活 性値は,阻

血前133±26mlU/mlで あ ったが,阻 血解除後30分

で851±102mIU!mlと 最高値 を 示 し(pく α005),

以後減少 し て5時 間 で2五7±56mlU/mlと な り,阻

血前値に復す る傾向を示 しtc.

冊IU/mI

iOOO

800

600

400

200

beforewarm

isohemiaf

afterreleasefromW8f111ischemia?

30m th 3h 5h

4.4tO.6tt4.3tO.8ft4.4fO.8114.110.3113.9tO.4tt

(n-23)(n=23)(n.10)(n-10)(n=11)

王MesntS.E.

挫L←_.冨17_→__.冨 で2_

Peripheral

Renalvein4,1tO.34.0士1.04.OtO.24.1士0.44.2士1.1

(n=19)(n=12)(n.8)(n=8)(n.8)

4β 士024.2±0.34,3土O.14.2±0,14.2」=O.6

(n==19)(n=10)(n.8)(n==8)`n=8)

0

、謝3.609.12.15018021・24・ …3…h

release

Fig.4,Changesofr-GTPactivityinurine _afterreleasefrom30minwarmischemia.

Renalartery

↑:mlUlml,":rnean士S且

4.常 温阻血解除後 の尿量の推移(Fig.3)

利尿状態の得 られた24腎 について,そ の尿量の経時

6.常 温阻 血 解 除 後 の 各 群 に お け る腎 γ・GTP活 性

値 の 推 移(Table3)

皮 質 中 の γ一GTP活 性 値 はcontrol群 の224±25

mlU/mg,Pに 対 し,阻 血 解 除 後1時 間 群7腎 で は

325±62mlU/mg.pと 上昇(Pく0.05)し,3時 間 群

沼:実 験的温阻血 腎 ・r-GTP 1565

5腎 で は527±37mIU/mg.Pと 最 高値(P〈0.01)

を示 した が,5時 間 群12腎 で は 減 少 し266±44mlU/

mg,pと な りcontrol群 値 に 回 復 す る 傾 向 を 示 し

た.一 方,髄 質値 に お け る有 意 な変 動 は ほ とん ど認 め

Table3,r-GTPactivityinrenaltissuesafter

releasefrom30minwarmischemia.*;p〈0

.05,**;p<0.01(whencompa-

redwiththeircontrolgroup)

Nostatisticaldifferenceswereobserved

inmedulla.

afterreleasefromwarmischemiafcontrolt

1h 3h 5h

ヤサtt224±25"325±62'

Cortex(n-26)(n-7)

　n527137*+266f44

(n-5)(n-12)

Medulla63±693±3487±3780±11

(n=22)(n-7)(n-5)(n=12)

t:mlU/mg.p,tt:meantS.E.

られなか った.

7組 織学的検索

30分 間の温阻血が近位尿細管へ与える影響を,阻 血

解除後の組織像について光顕 レベ ルで検索 した,阻 血

解除後60分(Fig.5A)で は特 に著変は認め られ なか

った が,180分(Fig.5B)に な る と軽度 の間質の浮

腫,尿 細管 の拡張を認め るようにな り,300分(Fig.

5C)で はそれが さらに顕著 とな り,ま た尿細管細胞 の

相互の結合が,部 分的に弱 くなってい るもの も認め ら

れた。 しか し全体 として,形 態的 および量的には軽微

な変 化にとどまっている ことが判 明した.

8.非 利尿例の γ一GTP活 性値(Fig.6)

7例 の腎は5時 間を経過 しても利尿を認めるこ とは

なか った.こ れ らについて実験後 の検索結果か ら,そ

の阻血前尿中 γ一GTP活 性値 は,利 尿例に比べ る とす

べて高値を示 していた.し か し,そ の5時 間後の皮質

中 γ一GTP活 性値は,利 尿例に比べ高値 または低値を

示 してお り,特 に一定の傾 向は得 られなか った。

駿灘iA'

を じ

Bご 吃3網 働"'こ 断 繭　一

譲驚 零C瀦 ぜ=、 ㌔ ¢∫ド ・'㌦・蓋をゐ

Fig.5.Photomicrographsofproximaltubulesafterreleasefrom30minwarmische-mia(H&Ex200).A:Noremarkablechangeswereobserved(60min).B:Themilddilationofproxi-maltubulesand'edemaofinterstitiumwereobserved(180min).C:Themode-ratedilationofproximaltubules,partialweaklingofcellularconnectionsandedemaofinterstitiumwereobserved

(300min).

mlU/ml

>>oo

1000

900

800

700

600

500

400

300

200

100

0

⑥

0

O

4

Q

OO

④

②

83

mlU/mg.p

1000

900

800

700

600

500

400

300

200

100

0

UrineCortex

Fig.6.Y-GTPactivitiesin7caseswithouturi-

naryoutputduring5hrs.Thevaluein

urineshowedy-GTPactivitybefore

warmischemia,andthatincortexat5

hrafterreleasefrom30minwarmische-

mia.Thevaluesinurinewerefoundto

behigh.Thesedatasuggestedtheexi-

stenceofacertainpathologicalcondition

heforethisexperiment.

考 察

γ一GTPは 腎に おいては 近位尿細管刷子縁部に多量

に局在 していることが,生 化学 的,免 疫学的お よび組

織学的に証 明され ている7～10).本実験 において髄質に

比べ皮質中 に 多量 の γ一GTP活 性値を認 め た こ とで

も,そ のことは肯定された.ま た,腎 におけ る γ一GTP

1566 泌尿紀要33巻10号1987年

と尿 に おけ る γ一GTPの 同一 性 に つ い て も,す で に 確

認 され て い る11・監2).そ して そ の役 割 は,glutathionや

他 のY-glutamylpeptideを 加 水 分 解す る と と も に,

r-glutamyl基 を他 のpeptideや ア ミノ酸 へ 転 移 させ

る こ とで あ り,同 時 に ア ミ ノ酸 の 尿 細管 で の維 持 保 存

に関 与 して い る といわ れ て い る4・13・14).腎に 何 らか の

異 常 が お よぼ され た場 合,た とえ ば 腎血 管 の閉 塞 に よ

る虚 血IS),薬 剤 に よる腎 毒 性16),尿 路 閉 塞 に よる 腎孟

内圧 の 上 昇 お よび外 傷 な ど で,γ 一GTPは 近 位 尿細 管

よ り尿 中 へ逸 脱 お よび 分 泌 され て くる こ とが 考 え られ

る.そ こで γ一GTPの 尿 中 活性 値 を 測 定 す る こ とは,

近 位 尿 細 管 の機 能 お よび病 態 を と ら える の に 有効 で は

ない か と考 え られ た.

著老 は,30分 間 の 常 温阻 血(15～20℃)腎 を作 成 し,

阻 血解 除 後5時 間 まで の尿 中 お よび 組 織 中 の γ一GTP

活 性値 を 測定 し,近 位 尿細 管 にお け る 急性 変 動 を 検 討

した 。 これ まで,温 阻 血解 除 後6時 間 目 よ り数 日間 ま

で の変 動 を検 討 した 報 告 は あ るが17),よ り短 時 間 に お

け る変 動 につ い て の 報告 は な か った.

温阻 血 が 腎 臓 に与 え る影 響 と して,電 顕 レベル の 研

究 が行 なわ れ て い る が18・19),さ らに 山 田20)は 代 謝 の面

か ら検 討 を 行 な い,組 織 内のglycogenやglucose

が消 失 す る時 間 は15～30分 の 間 で あ り,こ れ はmito-

chondriamatrix内 のmitochondria穎 粒 が 消 失

し,flocculantdensitiesが 認 め られ る 所 見 と一 致 す

る こ とを 示 した.し た が って30分 の常 温 阻 血 は,腎 が

不 可 逆 的 に,質 的 変 化 に 陥 る制 限時 間 で あ る と考 え ら

れ た.

尿 中 γ一GTPは 比 較 的安 定 な 物 質 で,人 の 場 合,

pH,浸 透 圧,温 度,尿 中溶 解 物 質 な どの影 響 を 受 け

る こ とが 少 な く,室 温 放置 で1～7時 間,4。C(冷 蔵

庫 保存)で10～14日 間 は そ の活 性 値 に変 動 を もた らす

こ とは な い とい う9・2D.著 者 も予 備 実 験に お いて,犬

の場 合 もほぼ 同 様 で あ る こ とを 確認 して い る.ま た 日

内変 動 が 認 め られ る の で,24時 間 の蓄 尿に つ い て 定 量

す る こ とが,病 態 を と らえ る うえ で必 要 とい う報 告 が

あ る22).し か し本 実験 で は,す べ て30分 間 尿 の新 鮮 尿

に つい て 半 定 量 を 行 ない 検 索 を した.臨 床 の 現 場 に お

い ては,こ の 方 が よ り実 用 に 則 して お り,か つ 急激 な

病 態 の 変 化 に対 応 で き る と考xt:.か ら であ る.

腎 組 織 内 の γ一GTPは,大 部分 がmicrosome分 画

(105,000xG,60分,沈 澱)に 存 在 して い る が,一 部

はsoluble分 画(正05,000×G,上 清)に も認 め られ,

そ の 比 率 は 犬 で は約111で あ る とい う23)本 実験 で

は,ホ モ ジネ ー トの 上精 液 つ ま りsoluble分 画 まで

の測 定 を 行 な い,一 定 の 傾 向 を え る こ と を 目的 と し

た.

測定 は他に,血 液お よび尿中のNa,K,Cr,BUN

について も行 なったが,従 来 の報告6)同 様,30分 間の

常温阻血下 では これ らの値 に変化 を認め るこ とはほ と

んどなか った.

白浜i7)は ラ ットを 用 い て30分 間 の温阻 血腎を作成

し,尿 お よび組織中 γ一GTP活 性値 について,阻 血解

除後6時 間 目お よびその後の変動 を検討 している.そ

れに よると,尿 中 γ一GTP活 性値 は解除後6時 間 目で

最高値(阻 血前の約5倍)を 示 し,そ の後 は12時 間で

正常化 し,以 後減少す る傾 向であるとい う.ま た組織

γ一GTP活 性値 は,6時 間値ではやや減少す るが,後

は一定傾 向を とると している.著 者 の実験では,阻 血

解除後30分 で尿 中 γ一GTP活 性値は最高値(阻 血前 の

約6倍,p<0.0旦)を 示 し,以 後減少 し5時 間で正常

化す る傾 向であったが,そ れで も約2倍 値 を示 した.

組織活性値 に つ い て は,解 除 後3時 間 腎 で 最 高値

(control群 の約2.5倍,p〈0.01)を 示 し,5時 間腎

で正常化す る傾 向を示 した.正 常値 に復す るには,尿

および組織 ともさらに時間 を 要す る もの と考 えられ

る.ま た この間,腎 静脈血 中の γ一GTP活 性値は不変

であ り,い わゆるtubularleakages$)を 生 じ ること

はなか った.上 記事実 を考 え合わせ ると,近 位尿細管

の破壊に よ りr-GTPが,単 に尿中へ逸脱,分 泌 され

ただけでは説 明がつか ない.そ うす ると,腎 組織中の

γ一GTP活 性値の低下を認 めなけれ ば な らな く,逆 に

上昇を示 したこ とは,近 位尿細 管自身 におけるviabi。

lityの 存 在を表 した ものと思われ る.す なわち,3時

間を頂点 としてその前後において,腎 組織温存のため

に,ア ミノ酸 の保存に対す る過酵素活動が行なわれた

ためではないか と考え られた.

5時 間 まで温阻血を継続 した8腎 について興味 ある

結果 を得 た(Fig.2).組 織 中の γ一GTPは,代 謝が

す べて停止す ると考え られる2.5時 間so)を過 ぎても,

その活性値の低下を示 す こ とは なか った とい うこと

と,経 過中に過酵素活動を暗示する活 性値 の上昇を認

め ることがなか った とい うことである.す なわち,前

老 において γ一GTPは 尿中におけるの と同様,組 織中

に おいて も少な くとも5時 間 の虚血下 では,不 活性化

されない安定な物質であると考xら れた.後 者におい

て,虚 血継続状態下では近位 尿細管 のviabilityを 示

す過酵素活動は認め られ ない ことが考xら れた.

光顕的には,30分 間 の温阻血解除後1～2日 目にお

け る検討がな されている6)・ それに よると,尿 細管は

全体数 として10%程 度にmildな 壊 死変化を認めてい

る.本 実験 に お い て 一部の近位 尿細管 に,進 行性 の

沼:実 験 的温阻血腎 ・7-GTP 1567

mildな 尿細管 の拡張 および 尿細管細胞の相互の結合

が弱 まってい るのが認め られ た.30分 間の温阻 血に よ

る影響は,短 時間の うちに も経時的 に進行す ることが

判 明したが,全 体 としては少数 の近位尿細管の変化 し

か認め られ なか った.

7腎 は温阻血解除後5時 間た っても利尿を認め るこ

とはなかった.い ずれ も,阻 血前 の尿中 γ一GTP活 性

値は利尿例 に比ぺ ると高値 または異常高値を示 してお

り,腎 に何 らかの病変がすでに存在 していた ことが想

定された.本 実験における雑 種成 犬の病 的状態を考慮

する必要があ り,著 しい脱水,栄 養不 良お よび フ ィラ

リア症な どをあげ ることができるであろ う.そ の状態

に温阻血 とい う負荷が加わ り,腎 機 能がさらに憎悪 し

たためだ と考 えられた,し か し,阻 血解除後5時 間 目

の腎皮質でその活性値が高値を示 している例 があ り,

前述 の組織温存 の た め の過酵素活動 を 考 え合わせ る

と,短 時間 では無尿を呈 した ものの,さ らに時間 の経

過 とともに利 尿を認めて くるのではないか とも推定 さ

れた,

以上,30分 の温阻血解除後 の尿 お よび 組織中の γ一

GTP活 性値を測定 し,あ わせて組織学 的検索 を行 な

った.そ の結果,尿 中のr-GTP活 性値 の経時的変動

は,近 位尿細管 の機能お よび病態を よく反 映 し,温 阻

血解除後の回復過程を示す マーカーにな りうることが

示唆 された,

従来か ら近位尿細管の機能検査 として,間 接的であ

るが,PSPテ ス トが一般的に施行 されている.し か

し,尿 中の γ一GTP活 性値の測定は直接的 で頻回に行

な うことができ,そ の点において より有益かつ臨床的

である と考 えられた.

結 語

正常雑種成犬を用いて,実 験的に30分 間の温阻血腎

を作成 し,阻 血解除後の尿 中のr-GTP活 性値 を経時

的に測定す ることに よ り,近 位尿細管の機能お よび病

態につ いて検討 した.ま た 同時に,腎 皮質中の γ一GTP

活性お よび病理組織所見について も検索を行ない,以

下の結論を得た,

(1)γ 一GTPは これ まで の報告通 り,腎 皮質中に

多量に活性を認め,髄 質値 の約4倍,肝 値 の約45倍 で

あった(P<0.005).

(2)温 阻血解 除後 γ一GTPは 血流側へ流入す るこ

とな く尿中へ逸脱,分 泌 され るが,速 やか に正常値に

復す る傾向を示 した.

(3)温 阻血解除後,皮 質中のr-GTP活 性値は経

時的に上昇 し,3時 間群5腎 で最高値 を示 した(pく

0.01)が,5時 間群12腎 では正常に復す る傾向を示 し

た.3時 間を頂点 としてその前後において,近 位尿細

管 のviabilityに よる組織 温存 のための過酵素活動が

行 なわれたためだ と考え られた.

(4)温 阻血を5時 間 まで継続 した8腎 において,

その皮質 お よび髄質中の γ一GTP活 性値は経時的変化

を示す ことはなか った.γ 一GTPは 少な くとも5時 間

の虚血状態下で も,不 活性化 され ない安定な物 質であ

る ことと,虚 血継続状態下 では,腎 のviabilityは 示

され ないことが判明 した,

(5)光 顕的には30分 間の温阻血は,近 位尿細管に

対 して形態的 および量に してご く軽微な変化 しか影響

を及ぼさなか ったが,一 部 では進行性であ った.

(6)利 尿が得 られなか った7腎 は,温 阻血前す で

に尿 中 γ一GTP活 性値 の高値 または異常高値が認 めら

れ,本 実験操作に よる阻血 が腎機能の状態を さらYこ憎

悪 したためだ と考え られ た.

(7)尿 中 の γ一GTP活 性値 の経時変動は,近 位尿

細管の機能 および病態を よく反映 し,そ の回復過程 を

示す マー カーの1つ にな りうる と考 えられた.

稿を終えるにあたり,多 大なる御指導ならびに御校閲を賜

った恩師岡田耕市教授に心から感謝の意を表します.ま た本

研究にあたり,終 始御協力を頂いた当教室員高橋美和子嬢な

らびに医局員の方々に深謝致します.

本論文の要旨は第72回日本泌尿器科学会総会ならびに第27

回El本腎臓学会総会において発表した.

文 献

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(1987年6月4日 迅 速 掲 載 受付)