translate enny evluation
TRANSCRIPT
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
1/21
Evaluasi Sistem Deteksi viabilitas-qPCR padaSalmonellaSerovar Enteritidis
yang Hidup dan Mati
Abstrak
Propidium monoazide (PMA) ditambah dengan PCR (viabilitas PCR) digunakan
dalam deteksi patogen yang dibawa oleh makanan hanya untuk mendeteksi
bakteri yang hidup. Awalnya muncul untuk sepenuhnya menghapus sinyal dari
bakteri yang mati keterbatasan viabilitas PCR cepat muncul dalam literatur.
!alam penelitian ini penggunaan PMA dalam viabilitas"#PCR (v"#PCR) dinilai
pada sel"sel $almonella enterica subsp. enterica serovar %nteritidis yang hidup dan
mati. Protokol penanganan PMA telah dimodi&ikasi (durasi inkubasi dalam gelap
konsentrasi PMA) untuk mengevaluasi apakah sinyal negati& lengkap dari
$almonella mati adalah mungkin. 'amun tak satu pun dari modi&ikasi ini
ditemukan dapat meningkatkan penghapusan sinyal #PCR yang diamati yang
masih tersisa pada bakteri mati. Penelitian ini uga menggaris bawahi bahwa PMA
mungkin tiba"tiba menurunkan sinyal #PCR yang diamati pada $. enteritidis
hidup pada konsentrasi rendah. Akhirnya penggunaan sel $. enteritidis yag
dibunuh melalui proses yang mengubah dindingmembran sel atau tidak memberi
kita petunuk untuk menawab pertanyaan tentang non-total extinctiondari sinyal
dari sampel sel"sel yang mati dalam v-qPCR assay. Memang data yang kuat
mengindikasikan bahwa sinyal #PCR sisa diamati pada sel yang tidak dapat di
kultur tidak hanya tergantung pada integritas dindingmembran sel dari bakteri.
Menurut hasil ini penulis menyarankan bahwa untuk sistem deteksi bakteri
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
2/21
bawaan makanan yang cepat dan handal sebuah pengayaan setelah analisis #PCR
harus disiapkan untuk v"#PCR.
1 Perkenalan
Patogen bawaan makanan merupakan sebuah masalah yang penting seperti
yang teradi di %ropa pada tahun *+,* telah dilaporkan sebanyak -,.+/ kasus
pada manusia yang mengakibatkan 0, kematian (%1$A dan %C!C *+,/). 2ntuk
dapat mencegah teradinya wabah tersebut bahan makanan dipantau sesuai
dengan Peraturan 3omisi %ropa *+4*++5 di mana kriteria mikrobiologi
diberikan untuk setiap kategori makanan (3omisi 2ni %ropa *++5). !alam
peraturan ini metode re&erensi yang digunakan untuk mencari keberadaan
patogen bawaan makanan sebagian besar berbasis kultur (misalnya 6$7 ,--0a
,--0b *++, *++* *++0a *++0b). Metode"metode konvensional ini cukup
e&isien dan hanya mendeteksi bakteri yang hidup tetapi memakan waktu dan
tenaga. 7leh karena itu mereka tidak cocok dalam kasus wabah dimana awaban
yang cepat sangat diperlukan.
Metode molekuler secara progresi& diakui sebagai alternati& yang berharga
karena mereka cepat sensiti& dan spesi&ik. 'amun polymerase chain reaction
(PCR) atau real"time PCR (#PCR) memperkuat !'A baik pada bakteri mati
ataupun hidup sebagai !'A tetap stabil setelah kematian bakteri (8i dkk *+,9.
Masters dkk ,--/9. :ol&&s dkk. *++5). !ua teknik potensial dapat digunakan
hanya untuk mendeteksi bakteri hidup. ;ang pertama berdasarkan pada deteksi
mR'A dengan menggunakan reverse"transcriptase (R
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
3/21
teknik deteksi ini membutuhkan ekspresi gen yang ditargetkan yang dapat
bervariasi dalam kondisi stres. $elanutnya R'A sangat sensiti& terhadap
degradasi dalam matriks kompleks seperti makanan. $ecara keseluruhan
penggunaan teknologi R
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
4/21
menyebabkan berkurangnya kemampuan untuk mengekstrak atau memperkuat
!'A masing"masing ($oeima dkk *++4.). 3arena PMA tidak mampu
menembus bakteri dengan dinsing membran sel yang intak hanya !'A dari
bakteri dengan dinding membran sel yang lemah berikatan dan dengan demikian
tidak diperkuat oleh (#) PCR ('ocker dkk *++09. $hapiro *++).
!e&inisi viabilitas bakteri masih menadi subyek kontroversi. ;ang
paling umum adalah> ketika sampel dikeluaran pada media padat yang sesuai
bakteri mati tidak dapat menghasilkan colony &orming unit (C12) sedangkan
bakteri hidup mampu membentuk C12 (
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
5/21
?ach *+,9. %liza#uivel dkk *+,*a *+,*b9 Dose&sen dkk . *+,+9 3im dan 3o
*+,*9 8iang dkk *+,,9. Mamlouk dkk *+,*9. $ingh dkk *+,9. $oeima dkk
*+,*9. van 1rankenhuyzen dkk *+,,) hanya untuk mendeteksi bakteri hidup.
PMA awalnya dilaporkan sepenuhnya menghapus sinyal dari bakteri mati di v"
PCR ('ocker dkk. *++0) dan analisis v"#PCR (Dose&sen dkk. *+,+) tetapi
kemudian beberapa kelemahan dari teknik ini dilaporkan. Memang penanganan
PMA tidak selalu menyebabkan penghapusan lengkap dari sinyal #PCR bakteri
mati (lihat di (1ittipaldi dkk. *+,+)). $ecara khusus penelitian terbaru
menunukkan bahwa penanganan PMA tidak sepenuhnya menghapus sinyal dari
bakteri mati) ukuran amplikon dari #PCR assay adalah pendek (8i dan Chen
*+,9 8uo dkk *+,+9.. Martin dkk *+,9. $chnetzinger dkk *+,) ii) bakteri
target pada konsentrasi tinggi (%liza#uivel dkk *+,*c9. 8i dan Chen *+,9
Pacholewicz dkk *+,9.. Ehu dkk *+,*) iii) konsentrasi Mg*Fdalam reaksi PCR
tidak disesuaikan ('ocker dkk. *++0) atau iv) kandungan lemak dari sampel
makanan adalah tinggi (;ang dkk. *+,,) dan mungkin uga bervariasi sesuai
dengan penanganan pembunuhan (3obayashi dkk *+,+9. 8iang dan 3eeley
*+,*9. 'ocker dkk *++49. ;ang dkk *+,,).
!alam penelitian ini optimalisasi protokol PMA (dengan variasi inkubasi
dan durasi gelap dan konsentrasi PMA) pertama kali dinilai untuk mencapai full
extinctionbakteri mati sinyal #PCR. $etelah itu untuk mengevaluasi angkauan
dinamis dari v-qPCR assay diperiksa umlah yang berbeda dari $almonella
%nteritidis hidup dan salmonella yang dibunuh dengan isopropanol. Akhirnya
untuk lebih memahami mode dari aksi PMA sel"sel $. enteritidis dibunuh oleh
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
6/21
proses yang berbeda yang mempengaruhi atau tidak integritas membrandinding
sel yang bersamaan dianalisis dengan v"#PCR berdasarkan pengamatan kultur
dan mikroskopis. Penerapan umum v"#PCR untuk sistem deteksi $. enteritidis
uga dibahas.
! "a#an dan metode
!1 "akteri strain dan kondisi pertumbu#an
$almonella enterica enteritidis ( B6 0* dari ?elgia salmonella 'RC)
digunakan sebagai bakteri model untuk patogen bawaan makanan =ram"negati&.
$atu koloni tunggal yang khas diinokulasi dalam ,+ ml steril ?rain eart 6n&usion
(?6) di vorteG dan diinkubasi pada 4HC selama sekitar ,0 am. 3ultur sepuluh
mikroliter semalaman (7') ini diinokulasi ke dalam ,+ ml ?6 broth steril yang
baru dan diinkubasi tanpa mengocok selama 5 sampai / am pada 4HC untuk
mendapatkan kultur pada &ase pertumbuhan eksponensial (7! 0++ nm antara +
dan +0) .
!! Pen$a$a#an S enteritidis
3onsentrasi awal $. enteritidis ditentukan dengan melakukan pengenceran
sepuluh kali lipat ,++ Il dari pengenceran "/ sampai "4 diletakkan pada plate
pada 'utrient Agar ('A) dan diinkubasi pada suhu 4 H C semalam. Plate dengan
kurang dari ++ C12 dipertahankan untuk enumerasi dan perhitungan umlah
bakteri awal dinyatakan sebagai colony &orming units ml (C12 ml).
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
7/21
!% &ontrol kematian
Proses pembunuhan digunakan pada $. enteritidis yang hidup dievaluasi
dengan meng"enumerasi sel yang sedang tumbuh dengan meletakkan ,++ ml
sampelpadai plate 'A dan di inkubasi selama */ am pada suhu 4 H C.
!' Penanganan PMA
$ampel seratus mikroliter yang diui dipindahkan pada tabung %ppendor&
,.5ml. !i ruangan gelap (PMA sensiti& terhadap cahaya) 45 IM atau ,5+ IM dari
PMA *+ mM (?iotium> ?
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
8/21
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
9/21
analisis pencairan suhu produk ampli&ikasi dilakukan secara bertahap dengan
meningkatkan suhu dari 0+ H C hingga -5 H C selama *+ menit ( +0 H C *+
detik). 3ontrol positi& menggunakan g!'A dari $. enteritidis pada ,+/kopi dan
kontrol negati& menggunakan !'Ase dan R'ase &ree water (Acros =eel ?elgia)
yang termasuk dalam setiap reaksi #PCR.
!* Analisis data
!*1 S+"R,reen qPCR assay
2ntuk interpretasi $;?RO=reen #PCR assay dua kriteria yang
dipertimbangkan> nilai siklus kuanti&ikasi (C#) dan suhu leleh dari amplikon
(
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
10/21
antara kondisi yang dihitung dan sesuai dengan P"value mereka dikoreksi untuk
hipotesis simultan yang mengui kesesuaian dengan koreksi $idak. Perbedaan
dengan P value S ++5 dianggap berbeda secara statistik.
!/ Alat analisis 0iabilitas bakteriLive / Dead BacLight
!alam rangka untuk membedakan bakteri mikroskop dengan
dindingmembran sel yang lemah (mati) dari orang"orang dengan
dindingmembran sel non"lemah (hidup) alat analisis viabilitas bakteri 86B%
!%A!O ?ac8ight (84++4 probe Molekuler) digunakan sesuai dengan
rekomendasi pabrikan. alat ini menyediakan ui &luoresensi dua warna> $ytoO-
pewarnaan asam nukleat &luorescent hiau (/@+5++ nm) dan propidium yodium
(P6) pewarnaan asam nukleat &luorescent merah (/-+05 nm). $ytoO- dapat
mewarnai semua bakteri dalam suatu populasi sedangkan P6 hanya menembus
dinding membran sel bakteri yang lemah dan menyebabkan pengurangan pada
pewarnaan &luoresensi $;
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
11/21
secara menyeluruh dan diinkubasi pada suhu kamar selama ,5 menit dalam gelap.
$eratus mikroliter agarose *K dalam air &isiologis ditambahkan ke setiap sampel
(akhir konsentrasi ,K agarose).
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
12/21
positi& dan negati& masing"masing memberi hasil positi& dan negati& yang
diharapkan. 2ntuk sampel mati salah satu proses pembunuhan yang paling
umum isopropanol 4+K digunakan untuk menghilangkan bakteri. 3ematian
diperiksa di plate dan sekitar 4 C12 ml (pengulangan pertama) dan + C12 ml
(pengulangan kedua) $. enteritidis ditemukan setelah pemberian isopropanol.
$eperti yang ditunukkan pada =ambar. ,A tidak ada e&ek pemberian
PMA yang diamati pada $. enteritidis yang hidup untuk kedua kali inkubasi gelap
karena pengurangan sinyal rata"rata mereka (QC#) tidak berbeda secara
signi&ikan. Duga seperti yang diharapkan pemberian PMA meginduksi penurunan
sinyal #PCR yang signi&ikan (P ++++,) pada $. enteritidis yang dibunuh dengan
isopropanol. 'amun tidak ada perbedaan signi&ikan yang diamati antara menit ke
5 dan 0+ menit inkubasi gelap (P +@5). Penurunan C# rata adalah ca. / untuk
kedua periode inkubasi. 7leh karena itu peningkatan waktu inkubasi 5 sampai 0+
menit tidak memiliki e&ek yang signi&ikan pada QC# $. enteritidis mati yang
diberikan PMA dan dengan demikian tidak dapat digunakan untuk memperbaiki
protokol.
%1! Pengaru# konsentrasi PMA pada pengurangan sinyal qPCR
2ntuk menyelidiki apakah konsentrasi PMA memiliki e&ek pada
pengurangan sinyal #PCR terkait dengan $. enteritidis mati + 45 dan ,5+ IM
PMA dibandingkan (5 menit inkubasi gelap digunakan untuk semua konsentrasi
PMA). $ebuah rentang dinamis kultur $. enteritidis dari digunakan sepuluh kali
lipat pengenceran 4- sampai - log C12 ml (40 J ,+4 C12 ml menadi 40 J
,+ C12 ml). Pembunuhan dilakukan dengan isopropanol 4+K. %&isiensi
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
13/21
prosedur pembunuhan telah diveri&ikasi untuk setiap pengenceran $. enteritidis
oleh tidak adanya pertumbuhan pada agar nutrien. C#"value sampel mati yang
tidak ditangani dengan PMA (+ IM) dibandingkan dengan 45 dan ,5+ IM
(=ambar. ,?). kontrol #PCR positi& dan negati& masing"masing memberi hasil
positi& dan negati& yang diharapkan.
$eperti yang diharapkan C#"value yang lebih tinggi diamati dengan
perlakuan PMA (QC# ca. 4) dibandingkan tanpa perlakuan PMA (+ M). 'amun
untuk semua pengenceran yang diui C#"value" yang didapatkan dengan 45 dan
,5+ TM PMA tidak berbeda secara signi&ikan. Menariknya pengamatan ini
menunukkan bahwa peningkatan konsentrasi PMA tidak mengurangi sinyal
#PCR sampel $. enteritidis mati.
ambar 1. Pengaruh waktu inkubasi gelap dan konsentrasi PMA pada kultur
yang $. enteritidis hidup dan mati. A. ?oGplot dari periode PMA inkubasi yang
berbeda (5 dan 0+ menit) pada bakteri hidup (n 0) dan mati (n 0) pada @4 log
C12 ml. !elta C#> pengurangan sinyal #PCR antara sampel yang diperlakukan
dan tidak diperlukan dengan PMA 45 pM huru& yang berbeda menunukkan nilai
yang berbeda secara signi&ikan pada P U ++5. ?. Pengaruh tiga konsentrasi PMA
(+ 45 dan ,5+ IM) pada lima suspensi yang berbeda dari sel"sel mati> 4.- 0.-
5.- /.- dan .- C12 ml (n ,).
%! E.ek PMA pada konsentrasi S enteritidis yang berbeda
2ntuk menilai apakah umlah bakteri dalam sampel dapat berdampak pada
pengurangan sinyal v"#PCR bakteri mati empat konsentrasi $. enteritidis
digunakan> 4 /@ 0@ dan @@ log C12 ml. $etiap sampel diui dalam rangkap
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
14/21
tiga dan #PCR dilakukan dua kali pada setiap ulangan. 3ontrol #PCR positi& dan
negati& masing"masing memberi hasil positi& dan negati& yang diharapkan. $.
%nteritidis hidup dan dibunuh dengan isopropanol 4+K diui. %&isiensi prosedur
pembunuhan telah diveri&ikasi oleh tidak adanya koloni di plate untuk semua
konsentrasi $. enteritidis yang diui. C#"value yang diperoleh dengan masing"
masing enis sampel dicatat (=br. *).
Percobaan ini memberikan tiga hasil yang berbeda. Pertama C#"value
yang diperoleh dengan sampel hidup dan mati yang tidak diperlakukan dengan
PMA menyaikan pergeseran signi&ikan tak terduga antara , dan / C# untuk
empat konsentrasi sel yang diui. al ini menggambarkan bahwa kematian itu
sendiri sudah menginduksi penurunan sinyal #PCR yang mungkin disebabkan
oleh hilangnya !'A yang teradi pada langkah panen sel dari sel"sel mati
dengan dinding membran sel yang sangat rusak. 3edua untuk $. enteritidis mati
seperti yang diharapkan C#"value yang diamati dengan sampel PMA treatment
secara signi&ikan lebih tinggi dibandingkan dengan sampel non PMA treatment
untuk semua konsentrasi yang diteliti (=ambar *>. @.@! 0.@! /.@! dan .4! ).
Pergeseran diamati secara signi&ikan lebih tinggi untuk @@ log C12 ml dengan
ca. QC# /5 sedangkan pergeseran sama untuk konsentrasi lainnya dengan QC#
antara *4 dan -. asil ini mengkon&irmasi e&ek PMA pada sampel mati tetapi
uga menunukkan lagi bahwa PMA tidak dapat benar"benar menghapus sinyal
dari sel"sel mati pada semua konsentrasi yang diteliti. 3etiga seperti yang
ditunukkan sebelumnya pada sampel hidup (@.@A dan 0.@A) pada konsentrasi
tinggi (@@ dan 0@ log C12 ml) PMA treatment tidak berpengaruh pada
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
15/21
pengurangan sinyal karena tidak ada perbedaan signi&ikan yang diamati antara
C#"value yang diperoleh pada sel hidup (=ambar *>. @.@A dan 0.@A) dengan PMA
treatment atau tidak. $ebaliknya pada konsentrasi rendah (4 dan /@ log C12
ml) PMA memiliki e&ek yang signi&ikan pada sel yang hidup. Memang C#"value
yang diperoleh dengan sampel hidup dengan PMA treatment secara signi&ikan
lebih tinggi dengan pergeseran antara , dan *0 C# dibandingkan sampel hidup
non PMA treatment (=ambar *>. /.@a dan .4A). Penurunan sinyal dari sel"sel
hidup pada konsentrasi rendah dapat menyebabkan underestimasi bakteri hidup
dan dalam skenario kasus terburuk dapat menyebabkan negati& palsu dengan
umlah yang sangat rendah bakteri hidup. Penurunan sinyal sel yang hidup ini
sebelumnya diamati padaLegionellaspp. (;anez dkk. *+,,) danEscherichia coli
(8iu dan Mustapha *+,/).
ambar *. Pengaruh PMA pada C#"value konsentrasi yang berbeda dari
$.%nteritidis hidup dan mati (n ) .:> tanpa PMA P> dengan PMA 45 IM B>
hidup !> mati. Angka @@ 0@ /@ dan 4 menunukkan konsentrasi sel dalam
log C12 ml. huru& yang berbeda menunukkan nilai yang berbeda secara
signi&ikan pada P U ++5
%% Pengaru# proses pembunu#an yang berbeda ter#adap respon v-qPCR
2ntuk lebih memahami mengapa PMA treatment tidak benar"benar
menghapus sinyal #PCR $. enteritidis mati (antara 4- dan ,, log C12 ml)
empat proses pembunuhan atau stres proses yang berbeda (panas isopropanol
antibiotik atau pembekuan) dianalisis menggunakan tiga protokol evaluai
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
16/21
viabilitas yang berbeda > i) sampel yang di letakan pada plate agar nutrien (teknik
mikrobiologi konvensional) ii) sampel dianalisis dengan v"#PCR (teknik
molekuler) dengan 45 pM PMA dan 0+ menit inkubasi gelap dan iii) sampel
dicelup dengan 8ive !eadO ?ac8ight bakterial Biability kit dan diamati
dengan mikroskop (teknik mikroskopis). %mpat proses pembunuhan atau stres
yang berbeda dipilih untuk bertindak berbeda pada integritas dinding membran
sel. Alkohol (seperti isopropanol) membuat bakteri dehidrasi mengganggu
dindingmembran sel dan menyebabkan koagulasi protein. Panas membuat
denaturasi protein dari dinding dan membran sel &os&olipid menadi lebih cair
menyebabkan gangguan integritas dinding dan membran sel. ?entuk beku kristal
es di dalam bakteri yang dapat membuat ruptur dindingmembran sel. $ampel
yang dibunuh dengan isopropanol panas dan beku dapat menyebabkan persentase
yang tinggi dari bakteri mati dengan dindingmembran sel yang terganggu.
3anamisin memiliki mode aksi yang berbeda. !engan berinteraksi dengan subunit
+$ dari ribosom ini akan menginduksi mistranslasi dan secara tidak langsung
menghambat sintesis protein (Misumi dan 'ocker dan Camper *++-).
!ibandingkan dengan eksperimen kontrol menggunakan bakteri hidup v"
#PCR penurunan sinyal signi&ikan bakteri mati (antara *5 sampai /5 C#) pada
sampel bakteri (n -) yang dibunuh dengan empat proses yang berbeda (=ambar.
).
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
17/21
positi& dan negati& masing"masing memberi hasil positi& dan negati& yang
diharapkan.
2ntuk menyelidiki lebih lanut data ini dalam kaitannya dengan integritas
membran dinding sel hasil v"#PCR dibandingkan dengan umlah plate dan 8ive
dead alat pengamatan mikroskopis (
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
18/21
.). Pengamatan ini menunukkan bahwa hasil v"#PCR tidak ketat berkorelasi
dengan status &isik dari dindingmembran sel bakteri.
' &esimpulan
3arena deteksi cepat patogen bawaan makanan masih menadi tantangan
perbaikan metode yang tersedia saat ini dan yang diterima secara internasional
masih diperlukan. 6$7
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
19/21
dalam percobaan yang berbeda dilaporkan dalam penelitian ini. 6nkubasi gelap
yang lebih panang atau konsentrasi yang lebih tinggi dari PMA mengakibatkan
peningkatan yang signi&ikan dari penurunan sinyal. Penelitian lain menelaskan
kemungkinan perbaikan dari v"#PCR dengan mengganggu lebih lanut dari
dindingmembran sel S enterica! LmonocytogenesdanE colimati sebelum PMA
treatment ('kuipou"3en&ack dkk *+,9. :ang dkk . *+,/a *+,/b9. ;ang dkk
*+,, *+,/). !alam makalah ini bahkan ika pengurangan sinyal lebih baik
sinyal masih diamati pada bakteri mati. al ini dapat menyebabkan overestimasi
dari keberadaan bakteri hidup dalam sampel dan sinyal positi& palsu dengan
bakteri mati. 6ni bukan masalah besar untuk tuuan deteksi karena bakteri yang
terdeteksi harus selalu dikon&irmasi oleh isolasi bakteri.
Penelitian kami uga menggaris bawahi bahwa PMA dapat mengurangi
sinyal bakteri hidup pada konsentrasi rendah dan mengkon&irmasi penelitian
terakhir lainnya (8iu dan Mustapha *+,/9. ;anez dkk *+,,). 6ni
merepresentasikan risiko dari hasil negati& palsu ika sinyal turun di bawah 87!
dari #PCR assay. 'egati& palsu ini tidak dapat diterima dalam sistem deteksi
patogen bawaan makanan di mana toleransi kosong adalah aturan seperti halnya
untuk $. enteritidis (3omisi 2ni %ropa *++5 *+,).
Percobaan terakhir yang dilakukan pada $. enteritidis yang dibunuh oleh
proses yang mengubah atau tidak dindingmembran sel memberi beberapa
petunuk untuk pertanyaan tentang non-total extinctionsinyal sampel mati di v"
#PCR assay. Memang sebagian dari bakteri yang tidak dapat di kultur
(diharapkan akan mati) memiliki membran dinding sel yang utuh. 3arena PMA
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
20/21
mampu menembus hanya bakteri dengan dindingmembran sel yang lemah di v"
#PCR assay bakteri mati dengan membran dinding sel utuh harus memberikan
sinyal yang mirip dengan bakteri hidup. 'amun sampel yang diberikan kanamisin
mengangkat inkoherensi tentang modus tindakan dari v"#PCR. Memang enis
sampel yang dilemahkan ini menampilkan persentase yang tinggi dari bakteri
yang tidak dapat di kultur dengan dindingmembran sel yang utuh meskipun
mereka tiba"tiba memberi salah satu QC# terbaik di v"#PCR. asil ini
menggambarkan bahwa hasil v"#PCR tidak hanya berdasarkan pada integritas
dinding membran sel bakteri.
2ntuk menyimpulkan menurut hasil penelitian ini dan dari tinauan yang
terbaru (1ittipaldi dkk. *+,*) untuk sistem deteksi patogen bawaan makanan
#PCR tidak dianurkan untuk mengganti langkah pengayaan dengan PMA
treatment dalam bentuk yang sekarang . Pada tahap ini pengetahuan saat ini pada
sistem deteksi bakteri patogen bawaan makanan penggunaan pengayaan sebelum
analisis #PCR diikuti oleh kon&irmasi hasil positi& dengan metode berbasis kultur
masih menadi pendekatan yang paling tepat.
ambar. . ?oGplot dari pengaruh PMA 45 pM pada pengurangan sinyal #PCR
sel $. enteritidis yang diberikan dengan isopropanol panas kanamisin atau
pembekuan (n -). V
-
7/26/2019 Translate Enny Evluation
21/21
3$apan 4erima &asi#
Penelitian ini didanai oleh hibah ;lie&& dari 8ayanan 2mum 1ederal ?elgia>
Rantai Makanan 3eselamatan dan 8ingkungan 3esehatan Masyarakat.