v workshop probióticos, prebióticos y salud: evidencia científica · 2018. 9. 25. · francisco...

Resumen de ponencias

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Sumario

V Workshop Probióticos, Prebióticos y Salud: Evidencia Científica

V Workshop Probióticos, Prebióticos y Salud: Evidencia Científica – Hotel Sercotel Sorolla Palace (Valencia) – 23 y 24 de enero 2014

Simposio Microbiota, Probióticos y Prebióticos en GastroenterologíaFrancisco Guarner

Andrés MoyaEduard Cabré

Guillermo Álvarez CalatayudGermán Soriano

Sesión de Usos ClínicosFernando Azpiroz

Miguel GueimondeJonathan Santas

Esther JiménezMª Paz Díaz Ropero

Sesión de InmunonutriciónGabriela Perdigón

Borja SánchezCaroline Hunsche

Malén MassotFrancesca Algieri

Marta ToralNoemí Redondo

Sesión de prebióticosAlfonso Clemente

Sesión de Microbiología y Veterinaria

Petra Louis Arancha Hevia

Claudio HidalgoGonzalo N. Bidart

Jimmy BecerraClara G. de los Reyes

Lucia GuadamuroGaspar Pérez

Emma Allen-VercoeMª Carmen Collado

Marina DíezVictoria Selma

Montserrat NácherGemma González

Emili Barba

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Comité Científico:Francisco GuarnerAscensión MarcosTeresa RequenaEvaristo Suárez Fernando AzpirozAbelardo MargollesMónica de la FuenteGaspar PérezGuillermo Álvarez Juan Miguel Rodríguez

Redacción: Máximo Puertas Martín Traducciones: J. David González-Iglesias González


Microbiota, Probióticos y Prebióticos en GastroenterologíaMicrobiota Intestinal: un Ecosistema dentro del Aparato DigestivoFrancisco GuarnerHospital General Universitari Vall d’Hebron

Antibióticos y MicrobiotaAndrés MoyaCentro Superior de Investigación en Salud Pública de la Consellería de Sanidad de la Generalitat Valenciana

Fibra y MicrobiotaEduard CabréHospital Universitari Germans Trias i Pujol

Empleo de probióticos y prebióticos en GastroenterologíaGuillermo Álvarez CalatayudHospital General Universitario Gregorio Marañón

Empleo de probióticos y prebióticos en HepatologíaGermán SorianoHospital de la Santa Creu i Sant Pau

Sesión de Usos ClínicosDieta, Microbiota y Síntomas DigestivosFernando Azpiroz, Hospital General Universitari Vall d’Hebron

Efecto del uso de antibióticos antes del parto sobre el establecimiento de la microbiota intestinal en el neonatoMiguel GueimondeInstituto de Productos Lácteos de Asturias (CSIC)

Estudio de las propiedades probióticas de AB-Colic para la diminución del llanto excesivo infantilJonathan SantasAB-Biotics

Administración de probióticos a niños prematuros de muy bajo peso: ensayo pilotoEsther JiménezDepartamento de Nutrición, Bromatología y Tecnología de los Alimentos de la Universidad Complutense de Madrid

Lactobacillus fermentum CECT5716 reduce la carga de Staphylococcus en la leche de mujeres que sufren de dolor en el pecho durante la lactancia mejorando la sintomatologíaMª Paz Díaz RoperoBiosearch S.A.

Sesión de InmunonutriciónMicrobiota intestinal : Inmunomodulación por bacterias comensales y probióticasGabriela PerdigónCentro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET), Tucumán, Argentina

Respuesta de células dendríticas intestinales a un péptido inmunomodulador encriptado en una proteína extracelular de Lactobacillus plantarumBorja SánchezInstituto de Productos Lácteos de Asturias, CISC

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Efecto del consumo de una leche fermentada con el probiótico Lactobacillus casei (DN114001) en la respuesta conductual, inmunológica y de estrés oxidativo de ratones viejosCaroline HunscheDepartamento de Fisiología Animal II. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Complutense de Madrid

Cocoa fiber influences the proportion of short chain fatty acids in the intestine and seraMalén MassotDepartamento de Fisiología, Universitat de Barcelona

Evaluation of Lactobacillus fermentum in the dca experimental model of irritable bowel syndrome in ratsFrancesca AlgieriDepartamento de Farmacología. CIBER-EHD, CIBM. Universidad de Granada

The probiotic Lactobacillus coryniformis CECT5711 improves endothelial dysfunction induced by bacterial endotoxinMarta ToralDepartamento de Farmacología, Facultad de Farmacia, Universidad de Granada

Effect of the consumption of Lactobacillus coryniformis CECT5711 strain on the immune response of healthy adultsNoemí RedondoGrupo de Inmunonutrición, ICTAN-CSIC

Sesión de prebióticosConsenso SEPyP sobre prebióticos: concepto, propiedades y efectos beneficiososAlfonso Clemente Instituto de Química Orgánica General, CSIC

Sesión de Microbiología y VeterinariaMicrobial Consortia in the Gastrointestinal TractPetra LouisUniversity of Aberdeen, Rowett Institute, Scotland

Intestinal dysbiosis associeted with systemic lupus erythematosus highlights microbial targets for intervention strategiesArancha HeviaInstituto de Productos Lácteos de Asturias, CISC

Síntesis de exopolisacáridos en Bifidobacterium spp.: funciones biológicas y análisis genómicoClaudio HidalgoInstituto de Productos Lácteos de Asturias, CSIC

Análisis molecular y funcional de los genes y rutas metabólicas implicados en el metabolismo de lacto-N-biosa y galacto-N-biosa en Lactobacillus caseiGonzalo N. BidartInstituto de Agroquímica y Tecnología de Alimentos, CSIC

Síntesis y purificación a escala semi-preparativa de fucosil-oligosacáridos: evaluación in vitro de sus propiedades prebióticas y actividad anti-adhesivaJimmy BecerraInstituto de Agroquímica y Tecnología de Alimentos, CSIC

Habilidad de cepas de Bifidobacterium para modular la microbiota intestinal y la producción de mediadores de respuesta inmune en distintos grupos poblacionales de neonatos. Estudios in vitroClara G. de los ReyesInstituto de Productos Lácteos de Asturias, CSIC


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Menopausia, isoflavonas, equol y poblaciones microbianas intestinalesLucia GuadamuroInstituto de Productos Lácteos deAsturias, CSIC

Gut Microbiota TransplantationEmma Allen-VercoeDepartment of Medicine Queen’s University, Ontario, Canada

Identificación de perfiles transcriptómicos y de microbiota en muestras biológicas no invasivas de niños prematuros de bajo peso con sepsis neonatal frente a sus gemelos control sanosMª Carmen ColladoInstituto de Agroquímica y Tecnología de Alimentos, CSIC

Procedimiento de síntesis eficiente de kojibiosa y estudio de su efecto sobre el crecimiento de bacterias lácticas y bifidobacteriasMarina DíezInstituto de Investigación en Ciencias de la Alimentación CIAL, CSIC-UAM

Descripción de dos especies bacterianas del intestino humano capaces de transformar ácido elágico en urolitinas con actividad anti-inflamatoriaVictoria SelmaCentro de Edafología y Biología Aplicada del Segura, CSIC

Potencial antivírico del dextrano producido por Lactobacillus sakei mn1 frente a virus de salmónidosMontserrat NácherCentro de Investigaciones Biológicas, CSIC

Evaluación de la capacidad de Bacillus cereus var. toyoi para modificar la invasividad de Escherichia coli K88 en células IPEC-J2Gemma GonzálezFacultad de Veterinaria, Universitat Autònoma de Barcelona

Evaluación de la eficacia de Bacillus licheniformis o Butirato Sódico frente a Salmonella Typhimurium en lechonesEmili BarbaFacultad de Veterinaria, Universitat Autònoma de Barcelona


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FRANCISCO GUARNER Servicio de Aparato Digestivo del Hospital

Universitario Vall d’Hebron, Barcelona

El V Workshop Probióticos, Prebióticos y Salud. Evidencia Científica, el más concurrido de los ce-lebrados hasta ahora, con casi 300 inscritos, co-menzó con un Simposio titulado “Microbiota, probióticos y prebióticos en Gastroenterología”. En la mesa redonda presidida por Pilar Nos, jefa del Servicio de Gastroenterología, Digestivo y He-patología del Hospital La Fe (Valencia), intervi-nieron Andrés Moya, director científico de la Fun-dación para el Fomento de la Investigación Sani-taria y Biomédica de la Generalitat Valenciana, Eduard Cabré, del Servicio de Aparato Digestivo del Hospital Germans Trias i Pujol (Badalona), y Francisco Guarner, del Servicio de Aparato Di-gestivo del Hospital Vall D’Hebron (Barcelona) y presidente de la Sociedad Española de Probióticos y Prebióticos (SEPyP). Este último destacó el rol de las bacterias del intestino como un ecosistema dentro del Aparato Digestivo. En esta entrevista cita numerosas evidencias sobre la importancia de la diversidad bacteriana intestinal.

“Entender la microbiota nos va a ayudar a entender muchas patologías de las que hoy tenemos conocimiento insuficiente”

¿Por qué este inicio de workshop de carácter eminentemente clínico o médico?

Con el objetivo de hacer una revisión de cómo están los cono-cimientos sobre la microbiota que pueden ser interesantes para el gastroenterólogo, teniendo en cuenta que probablemente el gastroenterólogo va a ser el médico de la microbiota. Cuando en-tendamos bien todas las funciones de la microbiota, el experto, quizás junto al nutricionista, que va a ayudar al público en general a mejorar y a optimizar su microbiota va a ser el gastroenterólogo. Y también el que más preguntas va a estar recibiendo, y por tanto, es un área en la que hay que profundizar.

Ha comenzado su exposición con la imagen de una vaca…

Sí, porque el principal productor de proteínas en el mundo posible-mente es este mamífero, a pesar de que en su genoma no tiene la capacidad de sintetizar aminoácidos esenciales. En cambio, para nosotros es la principal fuente de proteínas. Con los lácteos, con la carne de vacuno, de ternera, es donde conseguimos proteínas con aminoácidos esenciales. Además esa vaca lo que come son gramíneas, en las que tampoco hay aminoácidos esenciales y sin embargo cada día produce litros de leche, rica en aminoácidos esenciales necesarios para sintetizar proteínas.

¿Cómo se explican esos fenómenos de la vaca y cuál es su relación con este campo?

El secreto de la vaca, que hemos aprendido de los veterinarios, está en un estómago muy complejo, que aloja comunidades bac-terianas, microbianas, levaduras, etc., una multitud de microbios, que son capaces de procesar los carbohidratos complejos de las fibras vegetales, de reducir el nitrato del suelo, producir amonio y empezar a sintetizar proteínas. De tal modo que durante el tránsito gástrico que puede durar de 24 a 48 horas se producen cientos de gramos de proteínas que no han entrado por la boca. Este es un ejemplo de simbiosis entre el mundo microbiano y el mundo de los mamíferos en la naturaleza, que realmente impacta. Nosotros cada día necesitamos los aminoácidos esenciales, los obtenemos en gran parte de esta vaca y la vaca los obtiene de unas bacterias que en su mayoría incluso además desconocemos.

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los que se metabolizan aquí. Hay una actividad sacarolítica que genera muchos de esos productos tróficos, que en buena parte desconocemos.

¿Hay líneas de estudio en este sentido?

Sí, hay mucho interés sobre esto, porque lo que ocurre en el ciego probablemente es lo que tenemos que atender, aprender, porque ahí se están formando productos/procesos que tienen un efecto, que tienen un impacto y es lo que tenemos que intentar enfocar desde la ciencia.

Otros experimentos que ha citado destacan la capacidad de la flora intestinal para sintetizar aminoácidos esenciales. Tam-bién ha hablado de funciones tróficas sobre el sistema inmune gracias al universo microbiano del intestino y a su capacidad para tomar decisiones de defensa o inmunidad en función de la diversidad bacteriana. ¿Toda esta información se puede re-lacionar ya de alguna manera con enfermedades concretas?

Todo esto demuestra que entender la microbiota nos va a ayudar a entender muchas patologías de las que hoy tenemos conocimien-to insuficiente, incluyendo los trastornos funcionales digestivos. Hay ya muchos datos sobre obesidad o diabetes tipo 2, también en cáncer de colon.

El camino no ha sido fácil hasta descifrar todo esto…

Básicamente el problema ha sido que por cultivo no podemos co-nocer bien esta microbiota y ha tenido que recurrirse a técnicas moleculares, de análisis de los genes. Se puede analizar un gen que es el 16S rRNA, presente en el mundo bacteriano. Analizán-dolo se han creado bases de datos, que hoy tienen más de dos millones de secuencias, que permiten identificar el nombre y la diversidad de las bacterias que hay en un determinado entorno.

Ha hablado de datos muy interesantes a partir de este méto-do, gracias a los índices de similaridad. ¿Qué significa esto?

Dada la gran cantidad de secuencias de bacterias distintas que se obtienen, se aplica otro sistema de análisis, que son los índices de similaridad. Consiste en ver la diversidad de bacterias que hay y cuántas copias hay de cada una de esas bacterias para comparar cuánto se parece a otra comunidad distinta. Por ejemplo, sirve para comparar flora intestinal en familias o en el mismo individuo. Esto ha mostrado, por ejemplo, mayor similitud entre muestras de madre e hijo que en las de individuos que no tienen nada que ver y las muestras de hermanos se parecen aún mucho más.

Y si se hace una secuenciación completa, ¿qué se ha visto?

Por el sistema de secuenciar todo, se ve que la mayoría de lo que tenemos son bacterias. También hay muchos virus (1-2%), la ma-yoría fagos, virus asociados a bacterias, arqueas o levaduras. Hay un catálogo de 4 millones de genes de bacterias desconocidas.

¿Cómo ha evolucionado el conocimiento sobre este ámbito bacteriano en relación con el hombre?

Nuestro cuerpo también es un universo para una serie de bacterias que viven con nosotros y que hasta no hace mucho considerába-mos que estaban ahí, estancas, y no servían para nada. En los años 50 o 60 se empezó a disponer de animalarios en los que se podía hacer crecer mamíferos y aves y realizar experimentos en condiciones de completa asepsia sin ningún contacto con bacte-rias. Y en esas circunstancias se ha visto que esos animales son anormales, porque no crecen bien, consumen menos oxígeno. Cuando se les reintroducen bacterias vuelven a crecer y a desarro-llarse bien. Eso quiere decir que las bacterias son necesarias para la nutrición y el desarrollo normal del cuerpo. Lo mismo ocurre con el sistema inmune. Los animales libres de bacterias tienen un sis-tema inmune muy atrófico. Cuando se les reintroducen bacterias se ve que desarrollan el sistema.

¿Qué efectos se han visto en esos animales sin flora conven-cional?

Hay experimentos clásicos que demuestran problemas de nutri-ción por la incapacidad de extraer energía de la comida, trastornos en el vaciado intestinal, trastornos de la motilidad intestinal, estre-ñimiento, etc. Incluso experimentos más recientes observan dife-rencias en el comportamiento y la interacción social, apuntando que el hecho de tener o no colonización bacteriana influye incluso en aspectos tan curiosos como la conducta social. Otros estudios muestran que estos ratones tienen un desarrollo cerebral distinto, su cerebro madura más lentamente.

Este interesante repaso que usted ha hecho sobre los experi-mentos con animales, ¿qué conocimientos ha aportado?

A raíz de todo esto, se ha podido saber que el hecho de tener una microbiota nos ayuda metabólicamente. Hay unas funciones que nos proporciona la flora intestinal, y que sobre todo consisten en recuperar energía de la comida y en la producción de vitaminas, producción de aminoácidos; funciones de defensa, de inmunidad y funciones tróficas, que es lo que menos conocemos. El hecho de que haya bacterias en el intestino está poniendo en marcha meca-nismos a distancia que influyen en cómo madura nuestro cerebro, en cómo madura la conducta y en el sistema inmune.

Ha dicho que quizás la explicación a esas funciones tróficas más desconocidas esté en el ciego, ¿por qué?

En el ser humano, el sitio en el que se alojan gramos de bacterias es el colon. La digestión precisa del estómago y del intestino del-gado. Al ciego llegan agua y residuos, que podían ir directamente fuera. ¿Para qué tenemos un órgano de un metro y medio?, ¿sim-plemente para recuperar el agua? Probablemente tenemos este órgano para alojar bacterias, quizás ahora lo necesitamos menos, pero en otras épocas a lo mejor era más importante, porque lo normal es que al ciego, aparte de llegar agua, lleguen residuos vegetales que no hemos digerido y estos residuos vegetales son

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Sabemos que cada uno de nosotros tiene unos 600.000 genes distintos, 300.000 parecidos en todos los individuos. También se ve que las bacterias que tiene cada uno, no son mezclas al azar, sino estructuras perfectamente jerarquizadas por las propias bac-terias, éstas trabajan en redes metabólicas y saben con quién le va bien trabajar y con quién no les va bien. Esto ha llevado a entender que lo que se ha llamado enterotipos, que son tres modelos de flora intestinal.

¿Hay datos sobre el tercer mundo?

Sí, lo característico del tercer mundo es que tienen muchísima más diversidad de bacterias que en el primer mundo. Por ejemplo, en mi intervención he presentado un estudio que compara muestras fecales de un grupo de Malabo (África), de un poblado indígena de la zona amazónica de Venezuela y de una población urbana de EEUU. Se ve sobre todo en los adultos, no tanto en los niños, que los norteamericanos tienen mucha menos diversidad que los adultos en Venezuela o en África. Esto nos habla de que probable-mente en el primer mundo estamos perdiendo diversidad.

¿Tener más o menos diversidad bacteriana intestinal qué su-pone?

El tener baja diversidad cambia las cosas. Por ejemplo, hay estu-dios que relacionan la menor diversidad con mayor acumulación de grasa, resistencia a la insulina, resistencia a la leptina, etc. Por otra parte, se ha visto en los individuos con baja diversidad que han perdido especies bacterianas que conocemos poco, que son las difíciles de cultivar. Por ejemplo, la enfermedad inflamatoria intes-tinal se asocia a baja diversidad y esta baja diversidad es sobre todo falta de especies poco conocidas que han ido desapareciendo.

¿Cuál es la conclusión de todos estos resultados?

Como conclusión, estamos empezando a entender que proba-blemente en la sociedad desarrollada hemos vencido a muchas enfermedades infecciosas tradicionales, pero probablemente la transmisión vertical de bacterias está alterada y nos estamos colo-nizando con más bacterias del ambiente que no eran las habitua-les. Las bacterias que resisten en el ambiente son las que resisten a las condiciones de vida actuales, y a lo mejor son más agresivas, aunque no sean patógenos clásicos. A la vez estamos perdiendo las bacterias que han colonizado ancestralmente a los homínidos y a los humanos.

¿Por dónde irá el futuro?

Lo que se ve de cara al futuro es que los probióticos y los prebióti-cos pueden ayudar a seleccionar micro-organismos con propieda-des funcionales favorables y utilizarlos. En segundo lugar, cuando vemos que en un individuo faltan sobre todo algunas funciones enzimáticas, podemos intentar repoblar, es decir, intentar la res-titución específica de defectos identificados en situaciones pato-lógicas. La tercera estrategia es el escrutinio de nuevas especies beneficiosas en trasplantes de microbiota con resultado favorable. La identificación de consorcios de bacterias de la flora intestinal humana ayudará en un futuro para un trasplante o reimplante lim-pio.

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ANDRÉS MOYA Director científico de la Fundación

para el Fomento de la Investigación Sanitaria y Biomédica de la Generalitat Valenciana

El Simposio sobre “Microbiota, probióticos y pre-bióticos en Gastroenterología” continuó con la intervención de Andrés Moya, director científico de la Fundación para el Fomento de la Investi-gación Sanitaria y Biomédica de la Comunidad Valenciana y Catedrático de Genética de la Uni-versitat de València, quien habló de antibióticos y microbiota. Este experto presentó un amplio trabajo sobre el estudio de los efectos del trata-miento antibiótico, que revela que la interacción entre hospedador y microbiota “es mucho más importante de lo que estábamos pensando hasta el momento”. También destacó la existencia de herramientas cada vez más sofisticadas para de-terminar la importancia de la microbiota en la fisiología del hospedador humano.

“El estudio del efecto de los antibióticos pone de manifiesto la importancia de la microbiota para restaurar bacterias”

Ha comenzado señalando que el mundo microbiano, de la flora microbiana, es mucho más importante de lo que hasta ahora suponíamos en la configuración del fenotipo del humano, ¿en qué sentido?

Gracias a las nuevas tecnologías -ómicas hemos accedido al mun-do microbiano y hemos empezado a comprobar que el comple-mento de especies microbianas para la fisiología normal del indi-viduo es muy importante. De hecho ya hablamos de la microbiota como un nuevo campo de investigación, algo así como el último órgano ubicuo por investigar, distribuido por toda la geografía de nuestro cuerpo. Podemos hablar de una especie de microbiota ini-cial, procedente de la madre en buena medida, pero no solamente, que se va haciendo progresivamente más compleja y diversa con el desarrollo del organismo, estableciéndose comunidades micro-bionas en diferentes lugares de nuestro cuerpo.

Además usted le ha atribuido robustez funcional a estas mi-crobiotas

Sí, es otra cuestión que es muy importante y que se refiere a la circunstancia de que aunque existan diferencias en la composición de especies de una microbiota localizada en determinado órgano en diferentes personas, muchas veces observamos que lo que ha-cen funcionalmente es lo mismo. Es decir, nos podemos encontrar con poblaciones, con una composición en términos de diversidad bien distinta, pero que en términos de metabolismo y función sean relativamente similares.

Y todo este campo ¿cómo se relaciona con los antibióticos?

Además otras funciones benéficas en el intestino relacionadas con la alimentación, los microorganismos que alojamos como micro-biota también nos protegen de patógenos, por inhibición directa de los mismos, por competición con ellos y también por estimula-ción del sistema inmune, de tal manera que el balance ecológico hospedador y microbiota es un fino equilibrio, que, por ejemplo, se puede romper cuando a una persona se le suministran agentes antimicrobianos. Se introducen como defensa contra patógenos, pero también son agentes antimicrobianos contra nuestra propia microbiota. Por lo tanto no sólo tenemos la cuestión de las re-sistencias que se pueden adquirir por la microbiota, sino también de las alteraciones metabólicas que conlleva la administración de

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quedan tras esos 40 días sin tratamiento no son los mismos que había antes de iniciarlo, porque aunque la diversidad en términos cuantitativos se pueda recuperar no se recupera la misma com-posición o la misma microbiota. De hecho se hacen abundantes grupos bacterianos minoritarios y portadores de genes de resis-tencia. Lo curioso, en cambio, es que desde el punto de vista de la proteómica esta comunidad final se parece a la comunidad de inicio, la anterior al tratamiento antibiótico.

¿Qué comparativas destacan?

Gracias a tamaños de lecturas muy elevadas, tanto a nivel de metatranscriptoma como de metagenoma, identificamos sobre la base de datos, no sólo qué genes son, sino que los asignamos a determinadas especies bacterianas, y lo mismo ocurre con los mensajeros. Haciendo comparativas observamos, por ejemplo, la diversidad total frente a la diversidad activa, esto es, antes, durante y después del tratamiento. Algo interesante que se observa en la diversidad total es una importante presencia de bacteroidetes al día 11 del tratamiento. Sin embargo, cuando miramos la fracción activa, se presenta un salto importante, no al día 11 sino al 14. Es decir, unos días después. Este es un resultado interesante. De nuevo incidir, aunque nos queda investigarlo más cuantitativamen-te, que los agrupamientos según las escalas de los puntos tempo-rales según las escalas ómicas difieren. Esto pone de manifiesto que cada nivel de la jerarquía funcional lleva su ritmo.

¿Cuáles más destacan?

Otra cuestión bastante interesante es que la fracción activa y la fracción total se separan. Desde el punto de vista de la compo-sición hay una cierta proximidad y recuperación de la microbiota después del tratamiento antibiótico, tanto si estamos hablando de presencia de bacterias activas como de bacterias totales. Pero lo activo y lo total forman claramente dos clusters bien separados. Este es otro resultado bastante interesante: no es todo lo que hay, lo que está funcionando es distinto de lo que hay.Por otro lado, cuando lo que examinamos son los mensajeros, los genes expresados, lo que aparece muy discordante con respecto al resto son los puntos de 6 días con tratamiento antibiótico y el 40 días después Al sexto día de terapia tenemos una importante presencia de mensajeros que ponen de manifiesto la presencia de bacteroidetes firmicutes de la familia de los clostridiales y 40 días después del tratamiento una importante presencia de proteobac-terias.

¿A nivel de metabolitos qué se observa?

Los resultados de los mensajeros se confirman también al obser-var el metaboloma, el perfil de metabolitos. Identificamos 382 ma-sas y de nuevo por el análisis del cluster vimos que precisamente los puntos del sexto dia de tratamiento y de 40 después de trata-miento son los que daban mayor nivel de divergencia respecto a los otros puntos. Por otro lado son los que presentan más meta-bolitos. De los 382 fuimos capaces de identificar 50 de ellos, que se pueden agrupar por en diferentes grupos el modelo de cambio de la abundancia con el tiempo del tratamiento.

antibióticos. El uso de antibióticos pone de manifiesto la importan-cia de la presencia de los microorganismos en la fisiología y en el metabolismo del hospedador humano.

¿Cuál son los efectos de los antibióticos?

Determinado tipos de antibióticos destruye un grupo determinado de microorganismo, alterando la red de interacciones que existe con el resto del metabolismo humano.

En concreto, ¿en qué ha consistido su trabajo?

Hemos llevado a cabo un estudio muy integrativo sobre el efecto del tratamiento por antibióticos en un paciente. El estudio es una especie de prueba de concepto y a pesar de ser sobre un solo individuo, sabemos de la trascendencia de lo que hemos llevado a cabo. Es un estudio de un paciente que ingresó en un hospital alemán que, aunque no llegó a desarrollar colitis por Clostridium difficile, sí estuvo bajo tratamiento con antibióticos betalactámi-cos. Básicamente lo que hicimos fue estudiar sistemáticamente qué ocurría a diferentes escalas -ómicas. Así, tenemos el dato de muestreo antes del tratamiento antibiótico, el tratamiento al día 3, al día 6, al día 11, al 14 y 40 días después de haber dejado de tratarse.

¿Qué analizaron y cómo lo llevaron a cabo?

A partir de las muestras fecales, hicimos distintos tipos de estu-dios. Por un lado, tratamos de identificar la diversidad global, a partir del gen 16S rDNA. También la secuenciación de los genes, el metagenoma. Además estudiamos la fracción activa trabajando directamente con el gen 1SS rRNA y los RNA mensajeros (el me-tratranscriptoma). En definitiva, todo lo que es el mundo genético: diversidad, abundancia, fracciones total y activa. Por otro lado, y con el fin de ver los niveles de expresión de las funciones de las bacterias, decidimos hacer estudios del metabolómica (metaboli-tos) y del metaproteoma (proteínas). Esto generó una constelación de resultados a diferentes escalas en seis puntos temporales en un solo paciente.

¿A nivel general qué observaron con este amplio estudio?

En líneas generales se observan cambios importantes a lo largo del tiempo y entre niveles. Es decir, las microbiotas varían por efecto del tratamiento antibiótico, pero también son diferentes entre sí las escalas ómicas de análisis, en el sentido de que los agrupamientos entre los puntos temporales de estudio no son los mismos.

¿Y resultados concretos?

Un primer resultado interesante es observar los cambios en la diversidad de la microbiota total, donde lógicamente ya por el tratamiento de los antibióticos se observa una bajada general en abundancia, y cómo esa diversidad se recupera progresivamente al cabo de 40 días sin tratamiento. Al menos por este indicador de diversidad hay una recuperación. Pero los microorganismos que

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¿Y respecto a las proteínas?

En la parte del proteoma, de proteínas, también hay resultados interesantes. Llegamos a identificar 3.000 proteínas, 48% de ellas con función asignable y en general 1.359 estaban compartidas. Interesante en general es la tendencia cuando hay tratamiento con antibiótico a disminuir las proteínas más abundantes. A lo largo del tiempo hay un incremento en frecuencia de proteínas menos abundantes, en cambio las que son más abundantes tienden a disminuir y probablemente se necesiten más de 40 días para una restauración de proteína habitual. Sorprende, y mucho, la restau-ración funcional del patrón de proteínas, dado que los grupos bac-terianos antes del tratamiento y 40 días después difieren, pero fun-cionalmente se comportan de forma más similar a como lo hacen los puntos bajo exposición al antibiótico..

¿A nivel práctico qué consecuencias puede tener toda esta información?

Hemos podido determinar que las importantes alteraciones obser-vadas durante el tratamiento en el metabolismo de las bacterias tienen importante interacción con el metabolismo del hospedador. Hablamos de biosíntesis de ácidos biliares, vitaminas, sistemas de defensa de las bacterias, presencia de genes de resistencia, etc. Es decir, el estudio del efecto del antibiótico, primero nos ayuda a poner de manifiesto la importancia que tiene la microbiota, en la medida en que es capaz de eliminar bacterias y su posterior restauración. Por otro lado, a pesar de ser un modelo cualitativo, con esta aproximación podemos cuantificar, e incluso ir más allá e integrar toda esta información en un modelo predictivo sobre qué es lo que podría ocurrir como consecuencia de la ingesta de un determinado tipo de antibiótico.

¿En resumen cuáles son en su opinión las principales conclu-siones de este amplio trabajo?

En resumen, ha habido un cambio drástico en la microbiota en respuesta a la terapia antibiótica en el día 11, que correlaciona con los cambios en los metabolitos, en los mensajeros y en la ex-presión de proteínas. Por contra, la microbiota activa resistente al antibiótico exhibe un decrecimiento tres días después del inicio del tratamiento, lo que es un indicativo de un retraso de las respuestas a la administración del mismo en las bacterias totales y activas. En tercer lugar, 40 días después del tratamiento con la terapia, la comunidad se restablece, pero sorprende un grupo de baja abundancia que son las proteobacterias. Otra conclusión es que como consecuencia del tratamiento antibiótico hay una expresión irreversible, una subexpresión de producción de proteínas, y una alteración del estado metabólico de acuerdo con la biodiversidad decrementada o reducida y la riqueza de la microbiota total. Por úl-timo, en contraste, hay interacciones directas potenciales entre las células bacterianas y el metabolismo del hospedador que se han restablecido como consecuencia del tratamiento antibiótico y que es una evidencia de la presencia de la interacción entre ambos.

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EDUARD CABRÉ Servicio de Aparato Digestivo del Hospital

Germans Trias i Pujol (Badalona)

El simposio sobre Gastroenterología se cerró con la intervención sobre fibra y microbiota del doc-tor Eduard Cabré, del Servicio de Aparato Di-gestivo del Hospital Germans Trias i Pujol (Ba-dalona). Entre otras conclusiones, el especialista destacó que la fibra Plantago ovata (Psyllium, Isphagula) es eficaz en el tratamiento del estre-ñimiento crónico funcional y en el control de los síntomas de intestino irritable, y posiblemente también en el mantenimiento de la colitis ulcero-sa inactiva. A nivel general destacó que la inges-tión de fibra (sobre todo de fibra cereal) tiene un efecto preventivo sobre el cáncer colorrectal y que el empleo de fibras viscosas contribuye a mejorar el control metabólico en pacientes diabéticos y dislipémicos.

“La fibra fermentable actúa sobre las bacterias intestinales, y esa fermentación aumenta la biomasa de bacterias”

Al comenzar ha advertido que hablaría de “Fibra, microbio-ta… ¡y más cosas!”… ¿Por?

¿Hay razones para pensar que la fibra pueda ser útil en terapéuti-ca? ¿Son las mismas para todo tipo de fibras?

¿Qué entendemos hoy por fibra?

El concepto de fibra ha variado en los últimos 40 años. A la defini-ción de los años 70, que definía fibra como “polisacáridos de la pa-red de las células vegetales y lignina, resistentes a la hidrólisis por los enzimas digestivos humanos” (Trowell et al. Lancet 1976), se han incorporado otro tipo de sustancias (almidón resistente (AR), inulina, oligosacáridos, disacáridos) y ésta se conoce ahora como fibra funcional. La fibra tradicional es la fibra dietética y el conjunto de todo ello es lo que hoy llamamos fibra.

¿Qué propiedades tiene la fibra?

Tiene básicamente tres en función de las cuales va a tener unas acciones u otras, una es su solubilidad en agua, la segunda es su fermentabilidad por parte de las bacterias intestinales, y la tercera es su viscosidad.

En el caso de la solubilidad, ¿en qué sentido determina accio-nes potencialmente terapéuticas?

La fibra muy insoluble tiene la virtud de mantener sus propiedades físicas cuando está en el interior del intestino y producir un efecto mecánico, de acumulación de residuo y a su vez una capacidad hidrofílica, de captar agua en su seno. Esto va a producir un efecto de masa dentro del colon, va a influir sobre el tránsito colónico acelerándolo, va a permitir menor reabsorción de agua en el co-lon, por ese tránsito más rápido, y la consecuencia final va a ser un aumento del bolo fecal, por lo tanto es lógico pensar que con fibra insoluble vayamos a prevenir y a tratar eficientemente el es-treñimiento. Además la fibra insoluble, por esos mecanismos, tiene otros efectos. Por ejemplo, el efecto de masa colónica permite que los carcinógenos presentes en la luz del colon se puedan diluir y el tránsito colónico más rápido que esos carcinógenos tengan un menor contacto con la mucosa. Por tanto, la fibra insoluble podría tener un papel anticarcinogénico.

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y mejora de la barrera colónica (producción de mucinas, péptidos antimicrobianos, heat-shock proteins, etc.).

¿Y sobre los efectos anticarcinogénicos de la fermentabili-dad?

También han sido bien descritos. En general parece que el butirato tiene un efecto paradójico dependiendo de si hablamos de una cé-lula normal o de una célula neoplásica, tanto in vitro como in vivo. De manera que en células normales, butirato estimula la prolifera-ción de esas células, incluso puede disminuir su grado de diferen-ciación, pero en células neoplásicas el efecto es todo lo contrario, disminuye la proliferación de las células neoplásicas y favorece su diferenciación. Esto sería un efecto beneficioso en el contexto de una neoplasia. Distintos experimentos con animales y humanos ponen de manifiesto este efecto antiproliferativo del butirato.

También se ha referido a efectos del butirato sobre la apopto-sis de las células epiteliales.

Así se ha visto, por ejemplo, en experimentos sobre los efectos de la fermentación de las cáscaras de Plantago ovata, una fibra poco fermentable, en la apoptosis de líneas celulares de cáncer colo-rrectal humano. En todas las líneas celulares analizadas la adición de Plantago ovata aumentó el índice apoptótico, y eso se revertía o reducía al añadir un inhibidor de la caspasa, dando a entender que los productos de fermentación de Plantago ovata influían sobre la apoptosis. De tal manera que los ácidos de grasos de cadena corta resultado de la fermentación de Plantago ovata, producirían un aumento de las caspasas, un aumento de las proteínas proa-poptóticas y una disminución de las antiapoptóticas. El resultado es un aumento de la apoptosis de las células epiteliales.

Ha hablado a continuación de un “importante efecto, a menudo olvidado, de la fermentación de la fibra”, ¿a qué se refería?

Es el hecho de que la fibra fermentable actúa sobre las bacterias intestinales, y esa fermentación aumenta la biomasa de bacterias. Ese aumento podría añadirse al efecto de la fibra insoluble, au-mentando el efecto masa cólico. De esa manera la fibra fermenta-ble, la más soluble, también podría tener un papel en el tratamiento del estreñimiento. Por otra parte, algunas de esas fibras fermenta-bles pueden tener un efecto de favorecer selectivamente especies probióticas, lo que conocemos como efecto prebiótico.

Solubilidad, fermentabilidad y la tercera propiedad de la fibra es su viscosidad, ¿cómo influye esta?

También determina diferentes efectos fisiológicos. La fibra visco-sa retrasa el vaciado gástrico, enlentece la absorción intestinal, es capaz de atrapar ácidos biliares y carcinógenos en su seno y disminuye la absorción de ácidos biliares. Todo eso hace que se pueda atenuar la respuesta glucémica postprandial, que puede ser un efecto beneficioso de cara al control metabólico de pacien-tes diabéticos. También incrementa la excreción fecal de esteroles neutros y eso también puede ayudar al control de las dislipemias.

¿Y desde el punto de vista de la fermentabilidad qué destaca?

Es el mecanismo por el cual la fibra y la microbiota interaccionan. La fermentabilidad de la fibra corre bastante paralela a su solu-bilidad en agua. Como se sabe, el resultado de la fermentación bacteriana de los carbohidratos no absorbidos, de la fibra, produ-ce diversas sustancias entre las cuales las más importantes son los ácidos grasos de cadena corta. Además se producen otros elementos entre ellos gases.

¿Entre los efectos biológicos de los ácidos grasos de cadena corta cuál destacaría?

1) La promoción de la absorción de sodio y agua; 2) son el sustrato energético o fuel preferido para los colonocitos; 3) tienen efectos antiinflamatorios y 4) efectos anticarcinogénicos. Respecto al pri-mer punto, los ácidos grasos de cadena corta se consideran los más importantes promotores de la absorción de sodio y agua en el colon y este podría ser un mecanismo por el que pudieran servir para tratar la diarrea, por ejemplo.

¿Y qué significa que son los sustratos preferidos para los colonocitos?

Se refiere a un efecto ahorrador o productor de energía por parte de la fibra y su fermentación. La oxidación del butirato en el epitelio del colon tiene diferentes funciones metabólicas, por ejemplo, un papel de detoxificación de sustancias extrañas en el colon, puede contribuir a la acetilación de las histonas, y en este sentido, puede tener un papel en mecanismos epigenéticos; participa en la sín-tesis de aminocarbohidratos de manera que esto va a favorecer probablemente la producción de moco en el colon, va a intervenir en la síntesis de esteroles y de ácidos grasos y por tanto va a tener un papel de estabilizador de las membranas celulares, y se va a incorporar al ciclo de Krebs y va a ser un sustrato energético fun-damental para estas células colónicas.

¿Esa oxidación del butirato se puede relacionar con alguna enfermedad digestiva?

Hay situaciones en las que esa oxidación del butirato se produce menos que en condiciones normales y una de ellas es la colitis ulcerosa (CU). Los pacientes con CU oxidan mucho menos, según se ha visto en estudios clínicos. De manera que la CU es una enfer-medad donde hay un déficit de oxidación de butirato, y por tanto, un déficit energético del colon.

También ha hablado de efectos antiinflamatorios…

Sí, se han descrito muchos para los ácidos grasos de cade-na corta. Como resumen: disminución de la activación de NFkB y su traslocación; inhibición de la producción y señalización de interferón-gamma; aumento de la expresión y actividad de PPAR-gamma; modulación del estrés oxidativo (disminución de mielo-peroxidasa, aumento de glutation-S-transferasa y catalasa, etc.),

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Después de este repaso, queda clara la necesidad de deter-minar en cada caso el tipo de fibra al que nos enfrentamos en función de sus propiedades. ¿Qué nos indica esto?

La conclusión es que muchas de las acciones de la fibra son debi-das a su capacidad de ser fermentadas por parte de la microbiota intestinal, pero no todas. De ahí que cambiara el título de mi charla. Otras acciones son atribuibles a sus propiedades físico-químicas, como la disolubilidad o su viscosidad, y en función de su grado de fermentabilidad, solubilidad y viscosidad, los efectos fisiológicos esperables con una determinada fibra son distintos.

¿Y hasta qué punto esos efectos terapéuticos potenciales ocurren en la práctica clínica?

En base a distintas revisiones y metaanálisis, voy a resumirlo, cen-trándome en la prevención y tratamiento del estreñimiento crónico, los síntomas del síndrome de intestino irritable (SII), el tratamiento de la diarrea, los posibles efectos aintiinflamatorios en colitis ulce-rosa y la prevención en cáncer colorrectal. Las evidencias en este momento indican que:1. Plantago ovata (Psyllium, Isphagula) es eficaz en el tratamiento del estreñimiento crónico funcional y en el control de los síntomas de intestino irritable, mientras que la utilidad del salvado u otras fibras insolubles en estas indicaciones es más dudosa.2. El uso de fibra en casos de estreñimiento con dificultad expulsi-va y/o inercia colónica puede ser contraproducente.3. No existe evidencia clínica acerca del uso de fibra para el control de la diarrea, excepto la asociada a nutrición enteral en pacientes no críticos.4. Plantago ovata posiblemente tenga un papel en el tratamiento de mantenimiento de la colitis ulcerosa inactiva.5. La ingestión de fibra (particularmente de fibra cereal) tiene un efecto preventivo sobre el desarrollo de cáncer colorectal6. El empleo de fibras viscosas contribuye a mejorar el control me-tabólico en pacientes diabéticos y dislipémicos.

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GUILLERMO ÁLVAREZ CALATAYUD Sección Gastroenterología y Nutrición Pediátrica.

Hospital General Universitario Gregorio Marañón (Madrid)

Tras el simposio tuvo lugar la mesa redonda “Probióticos y prebióticos en Gatroenterología y Hepatología”, moderada por Ascensión Mar-cos, del Instituto de Ciencia y Tecnología de los Alimentos y Nutrición (ICTAN-CSIC). En ella intervinieron los doctores Guillermo Álvarez Ca-latayud, del Hospital General Universitario Gre-gorio Marañón (Madrid), y Germán Soriano, del Hospital de la Santa Creu y Sant Pau. En su presentación Álvarez Calatayud hizo un amplio repaso al empleo de prebióticos y probióticos en Gastroenterología que centra esta entrevista.

“Si vemos que hay patologías donde hay evidencias científicas contrastadas, ¿por qué los médicos no los empleamos más?”

Para situarnos y dado su campo de trabajo, ¿cuándo comien-za a formarse la microbiota intestinal?

El individuo cuando nace, lo hace con un intestino estéril. A lo largo de los primeros meses y dependiendo de varios factores, va em-pezando a desarrollar la microbiota intestinal. Intervienen factores como el tipo de parto, vaginal o por cesárea, la lactancia materna o artificial, la edad gestacional del niño, la alimentación durante los primeros meses de vida, y otros como la presencia de mas-cotas en casa, el nacimiento en un medio rural o urbano, el país, y también, muy importante, el consumo de antibióticos durante los primeros meses de vida. Todo esto puede alterar la microbio-ta intestinal y todo va haciendo que aproximadamente a los dos años de vida el intestino humano tenga una flora que es la que va a conservar a lo largo de toda la vida, localizándose la mayoría de las bacterias en el colon.

Se ha referido al incremento de la actividad científica como uno de los mayores avances en el mundo de los probióticos, ¿en qué sentido?

Hemos pasado en poco más de 10 años, de la publicación de 175 revisiones y artículos (año 2000) a 1.180 a finales de 2013. Y en ese tiempo, la microbiota intestinal en sí ha pasado de tener 78 pu-blicaciones contrastadas a 2.520. Este avance tan importante va dando una idea del interés que ha ido adquiriendo el mundo de los probióticos y la microbiota, tanto a nivel investigador como clínico.

¿Qué obras de referencia recomienda para estar actualizado en este tema?

La guía de probióticos de la Organización Mundial de Gastroen-terología, accesible a través de su web; una revisión muy buena sobre probióticos, descargable en la página de SEPyP, y el libro Probioticoterapia en Gastroenterología, primer libro en castellano actualizado. También en UpToDate se puede acceder a la revisión que hace cada varios meses el profesor Sartor, donde además de un repaso al empleo en gastroenterología, actualiza con bastante frecuencia la bibliografía sobre el tema.

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cula que un 25% de los pacientes adultos que toman antibióticos van a presentar este efecto secundario importante, hasta un 40% en el caso de los niños. Si bien la evidencia científica sugiere un efecto protector de los probióticos, la revisión Cochrane1 que he presentado, dice que entre las desventajas figuran que los ensayos son heterogéneos, que puede haber riesgos en inmunodeprimidos y que los efectos siempre son específicos de cepa. Esto último es algo que debemos remarcar siempre. De cara al futuro en esta pa-tología es necesario estandarizar protocolos, documentar riesgos/beneficios, coste/beneficio, y fijar la dosis adecuada del probiótico de cada cepa.

Otro tipo es la diarrea asociada a C. difficile, ¿qué datos des-tacan en este caso?

Al margen de las cepas efectivas recogidas en la Guía de la WGO, como más novedoso destaca la terapia con trasplante fecal. Se-gún el metaanálisis2 que he presentado, se ve en los últimos años, da igual que el trasplante sea por el colon o por sonda nasogástri-ca, un beneficio muy importante, incluidos los pacientes con dia-rrea recidivante. En pediatría hay poca experiencia sobre ello.

Sobre la prevención de la diarrea del viajero, ¿qué novedades hay?

He comentado un metaanálisis3 sobre 12 ensayos clínicos según el cual hay ciertas cepas, S.boulardii, LGG y una mezcla de cepas (L acidophilus, L bulgaricus, B bifidum, S thermophilus), con las que se observa un efecto beneficioso.

¿Algún dato más en otros tipos de diarrea?

En otros tipos como la inducida por radioterapia son necesarios más estudios de alta calidad. También hay muy pocos estudios en diarrea asociada a nutrición enteral. Para poderlos recomendar hay que insistir en su estudio.

¿El estreñimiento es otro trastorno en el que está justificada su indicación?

Más que probióticos en el tratamiento del estreñimiento se utili-zan los prebióticos, componente en muchos alimentos de la fibra dietética. Según estudios clásicos, el empleo probióticos y prebió-ticos puede prevenir el estreñimiento crónico en niños y adultos4.

Ha continuado hablando de otro tipo de patología como el SII, ¿qué es lo más destacado en este caso?

Sí, me he referido a un metaanálisis bastante consistente, que re-coge una revisión sistemática de 19 ensayos clínicos en adultos con SII, en los que se utilizó probiótico frente a placebo5. De ma-

Según la guía mundial, ¿cuáles son las indicaciones en gas-troenterología con mayor grado de evidencia?

En cuando a las indicaciones pediátricas de probióticos con evi-dencia de Grado 1a y 1b destacan: tratamiento de la diarrea in-fecciosa aguda, prevención de la diarrea nosocomial, prevención de la diarrea asociada a antibióticos, trastornos intestinales como el cólico del lactante, prevención de la enterocolitis necotrizante, terapia adyuvante de la erradicación de la infección por H. pylori, y brote leve de colitis ulcerosa.

¿Y en adultos?

Se observa que tienen un buen grado de evidencia en el tratamien-to de la diarrea aguda, en la prevención de la diarrea por C. difficile, en la prevención de la diarrea asociada a antibióticos, en trastor-nos intestinales funcionales sobre todo en el SII, en la intolerancia a la lactosa, en el tratamiento del estreñimiento, en el tratamiento de la encefalopatía hepática, en la terapia adyuvante en H. pylori, en el tratamiento de mantenimiento de la colitis ulcerosa, y también en la prevención y mantenimiento de la reservoritis.

El listado es muy amplio, pero centrándonos en las más con-trastadas, ¿por dónde comenzaría?

En el mundo pediátrico, por la diarrea aguda infecciosa. La mayo-ría de guías de gastroenterología pediátrica, recomiendan el em-pleo de ciertas cepas de probióticos en este tipo de diarrea. Y en relación con ella, en resumen parece ser que son más eficaces en gastroenteritis víricas, sobre todo por rotavirus. Son menos efica-ces en prevención y parece que su utilización disminuye la dura-ción de la diarrea de 1 a 2 días, también disminuye la severidad de la misma con un descenso de la frecuencia de las deposiciones, que a la larga produce un descenso del número de ingresos y del tiempo de hospitalización. Se recomienda que el empleo sea pre-coz y que la duración sea mínimo de 5 días, con dosis adecuadas de las cepas recomendadas. Dentro éstas figuran dos lactobacilus (GG y reuteri) y una levadura (saccharomyces boulardii). También hay mezclas de cepas como VSL#3, que necesitan de más ensa-yos clínicos para que puedan aparecer en las guías de recomenda-ciones. En adultos la verdad es que hay pocos metaanálisis sobre esta patología.

Ha continuado hablando del papel de los probióticos en la pre-vención de la diarrea asociada a antibióticos. ¿Por qué esta indicación?

Se ha visto que son seguros para el paciente, conocemos que hay ciertas cepas que son potencialmente beneficiosas, no existe nin-guna interacción medicamentosa y suelen ser fáciles de adminis-trar y a larga resulta barato prevenir esta diarrea frecuente. Se cal-

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es la cepa más adecuada, la dosis necesaria y el tipo de cáncer.También dentro de las futuras aplicaciones, hay que destacar que los probióticos se han ensayado en fibrosis quística, en la en-fermedad celíaca, en alergias, obesidad, malnutrición, enfermos terminales, e incluso en encefalopatía asociada al Sida. También podrían ser beneficiosos en enfermedades metabólicas, alergias alimentarias y prevención del cáncer. Y por último, la microbiota parece tener relación también con el comportamiento, por lo que podría tener algún beneficio más allá del aparato digestivo, por ejemplo, en autismo.

De este amplio resumen ¿qué conclusiones se pueden sacar?

- Los probióticos/prebióticos pueden jugar un papel importante en las enfermedades en las que se altere el equilibrio de la microbiota produciendo un beneficio para la salud.- Es importantísimo saber que la eficacia y seguridad de los pro-bióticos se determinan según el tipo de cada cepa empleada, la dosis dependiente y la duración del tratamiento.- Es verdad que en muchas patologías se hacen necesarios más estudios con ensayos clínicos contrastados (ECC), por la gran va-riabilidad que hay- No debemos generalizar los resultados de los estudios a otro tipo de cepas- Por último, más que una conclusión es una reflexión. Si vemos que hay patologías donde hay evidencias científicas contrastadas, ¿por qué los médicos no los empleamos tanto?

Referencias:1. Johnston BC et al. Probiotics for the prevention of pediatric antibiotic-associated diarrhea. Cochrane Database Syst Rev. 2011 Nov 9;(11):CD0048272. Landy J et al. Review article: faecal transplantation therapy for gastrointestinal disease. Alimentary Pharmacology & Therapeutics. Volume 34, Issue 4, pages 409–415, August 20113. McFarland L.V. Meta-analysis of probiotics for the prevention of traveler’s diarrhea. Travel Med Infect Dis. 2007 Mar;5(2):97-105. Epub 2005 Dec 5.4. Morais M.B. et al. Measurement of low dietary fiber intake as a risk factor for chronic constipation in children. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 1999 Aug;29(2):132-5.5. Moayyedi P et al. The efficacy of probiotics in the treatment of irritable bowel syndrome: a systematic review. Gut. 2010 Mar;59(3):325-326. Gionchetti P et al. Prophylaxis of pouchitis onset with probiotic therapy: a double-blind, placebo-controlled trial. Gastroenterology. 2003 May;124(5):1202-9.7. Mielle E. et al, Effect of a probiotic preparation (VSL #3) on induction and manteinance of remission in children with ulcerative colitis. Gastroenterology. Volume 134, Issue 4, Supplement 1 , Pages A-153, April 20088. Levri K.M. et al. Do probiotics reduce adult lactose intolerance? A systematic review. J Fam Pract. 2005 July;54(07):613-620.9. Van Loo J. et al. The SYNCAN project: goals, set-up, first results and settings of the human intervention study. Br J Nutr. 2005 Apr;93 Suppl 1:S91-8.

nera global se observa una mejora de los síntomas, sobre todo del dolor abdominal, aunque la mezcla de cepas no hace recomendar ninguna en específico.

¿En reservoritis que se ha visto?

Que pueden ser efectivos tanto para evitar la crisis inicial como las recidivas. Un estudio clásico con la mezcla VSL3 frente a placebo, señala que con la mezcla de probióticos se reducen las recidivas, incluso hasta el número de deposiciones va siendo menor a lo largo de los meses6.

¿Y en colitis ulcerosa?

Se ha visto que el probiótico Escherichia coli cepa Nissle 1917 es tan eficaz como el medicamento utilizado para el mantenimien-to de la colitis leve y moderada, la mesalazina. La mezcla VSL#3 también se ha revelado efectiva frente a placebo en la inducción y el mantenimiento de la remisión, tanto en niños como en adultos7.

¿Y en la enfermedad de Crohn?

Aquí la verdad es que los resultados de probióticos y prebióticos son un poco desalentadores y no parece que sean efectivos.

En patología por helicobapter pylori, ¿cuál es la evidencia?

Se han estudiado varias cepas y aunque en principio parecía que podían ser beneficiosos para el tratamiento erradicador, realmente se ve que sólo son efectivos, que también es importante, para reducir los efectos secundarios del tratamiento antibiótico que se aplica en estos pacientes.

Una de las patologías en las que sí parece haber gran eviden-cia es la intolerancia a la lactosa, ¿es así?

En mi charla me he referido a una revisión sistemática8, según la cual la mezcla de dos probióticos en yogures (Streptococcus ther-mophilus y Lactobacillus bulgaricus) era beneficiosa y disminuía los síntomas provocados por la intolerancia a la lactosa.

De las posibles futuras aplicaciones clínicas, ¿cuál destaca-ría?

Son varios los estudios con simbióticos. Hay uno importante, el proyecto SYNCAN9, según el cual parece ser que van disminuyen-do los marcadores cancerígenos por el empleo de determinadas cepas (Oligofructosa e inulina, más LGG, Lactobacillus casei Shiro-ta y Bifidobacterium brevis 12). Aún así, todavía hay que ver cuál

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GERMÁN SORIANO Hospital de la Santa Creu y Sant Pau (Barcelona)

Bajo el título de “Probióticos y prebióticos en Hepatología”, Germán Soriano, del Hospital de la Santa Creu y Sant Pau, hizo un análisis de la posible utilidad de estos microorganismos en hepatología, destacando que los probióticos y prebióticos se encuentran entre las alternativas al tratamiento antibiótico en las enfermedades hepáticas, por su triple capacidad para: modular la flora intestinal; disminuir la permeabilidad intestinal y modular la respuesta inflamatoria (inmunomodulación).

“Los probiótidos y prebióticos, especialmente en combinaciones, pueden ser útiles en el tratamiento de las enfermedades hepáticas”

¿Cómo se justifica la relación entre microbiota, prebióticos, probióticos y enfermedades hepáticas?

El hígado es muy importante cuando hablamos de microbiota por-que es un órgano situado entre el sistema venoso portal y el resto del organismo. Por el sistema venoso portal llega toda la sangre procedente del intestino delgado y del colon al hígado. Cuando hay alteraciones en la microbiota, trastornos en la permeabilidad intestinal, un exceso de nutrientes o tóxicos como el alcohol, las bacterias o sus productos van a ir por la sangre portal y con lo primero que se encuentran es con el hígado, donde van a producir inflamación, esteatosis y fibrosis.

Ha explicado que la interacción entre hígado y bacterias o productos de procedencia intestinal, acaba activando la res-puesta inflamatoria. ¿Qué consecuencias tiene este proceso?

Cuando hay inflamación se lesionan estructuras, en este caso los hepatocitos, que pierden las microvellosidades. Se activan las cé-lulas estrelladas hepáticas, sintetizan colágeno y se produce fibro-sis, y la pérdida de las fenestraciones entre las células endoteliales de los sinusoides, es decir, de los capilares hepáticos.

¿Cuáles son las enfermedades hepáticas más frecuentes y su importancia?

En primer lugar, la esteatohepatitis no alcohólica, de prevalencia creciente por el aumento de la obesidad y el sobrepeso, y la estea-tohepatitis alcohólica, también muy frecuente. El otro gran grupo son las hepatitis crónicas, por el virus B o C. Algunos de los pa-cientes con estas enfermedades evolucionan hacia una cirrosis, que cuando progresa a cirrosis descompensada, da origen a las grandes complicaciones de esta enfermedad: ascitis, infecciones, encefalopatía hepática y hemorragia digestiva. Finalmente, debido a fenómenos inflamatorios repetidos, en algunos pacientes se aca-ba produciendo un tumor hepático, un hepatocarcinoma.

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¿A nivel experimental qué se ha observado?

He presentado tres trabajos con probióticos, que no reflejan nin-gún beneficio sobre la microbiota ni en la translocación bacteriana. Aunque su resumen es bastante desalentador, se sabe que no todos los probióticos ejercen los mismos efectos en una misma situación clínica o experimental y además hay evidencias crecien-tes de que combinaciones de diversos probióticos e incluso de probióticos y prebióticos tendrían un efecto más potente que un solo probiótico.

¿Es el caso de VSL#3 que ustedes han estudiado?

Sí, VSL#3 es una mezcla de 8 probióticos sobre todo Lactobacillus y bifidobacterias. Realizamos un estudio en ratas con cirrosis por CCl4, que concluye que las ratas cirróticas que recibieron VSL#3 presentaron menor translocación bacteriana a ganglios y localiza-ciones extraintestinales que las ratas cirróticas tratadas con agua. Curiosamente no hubo cambios en la flora intestinal y, por tanto, esa menor translocación bacteriana seguramente fue consecuen-cia de un efecto positivo en la barrera intestinal y no de cambios en la microbiota. También observamos un aumento de la concen-tración de ocludina a nivel intestinal y una disminución del daño oxidativo en las que recibieron VSL#3.

¿Qué cambios se observaron sobre el estado proinflamatorio característico de la cirrosis y en la lesión hepática?

El estado proinflamatorio mejoró, pero la lesión hepática no. Es decir, disminuyó la translocación bacteriana y algunas de sus con-secuencias inmunológicas, pero no mejoró la lesión hepática. Sin embargo, otros estudios utilizando estos tratamientos sí han de-mostrado beneficio en la lesión hepática.

En este sentido, ha presentado un modelo de un simbiótico aplicado sobre fibrosis por CCl4.

Sí, en ratas que no llegan a desarrollar cirrosis pero sí fibrosis, que reciben el tratamiento durante 7 semanas (D’Argenio, Liver Int 2013). El preparado simbiótico con L. paracasei B21060, L-glutamina, y los prebióticos Arabinogalactan y Xilo-oligosacáridos, sí consiguió disminuir la lesión hepática evaluada por los niveles de transaminasas y la concentración de fibras de colágeno.

¿A nivel clínico qué datos hay?

Primero hay que destacar algunos problemas con los estudios clí-nicos en este campo: 1) No son fármacos, por tanto las normas reguladoras son diferentes y menos estrictas; 2) Hay escasez de ensayos clínicos de alta calidad; 3) La mayor parte de estudios con un elevado número de pacientes se han realizado en India y Chi-na, pero hay pocos estudios en pacientes occidentales e incluyen un número escaso de pacientes; 4) Hay múltiples probióticos y prebióticos con efectos distintos en diferentes situaciones clínicas. Todo ello hace que sea difícil obtener conclusiones fiables.

¿Cuál es el más grave de estos procesos y qué papel pueden tener probióticos y prebióticos?

La cirroris es la enfermedad hepática más grave y con mayores consecuencias para el paciente. Los eventos fisiopatológicos que ocurren en la cirrosis (también aplicables a la esteatohepatitis al-cohólica/no alcohólica) ayudan a entender por qué probióticos y prebióticos pueden ser útiles en la cirrosis. Los paciente presentan insuficiencia hepática e hipertesión portal y como consecuencia de ello, alteraciones en la microbiota en forma de sobrecrecimien-to bacterial intestinal y de trastornos en la permeabilidad intesti-nal, que aumenta. Debido al incremento de las bacterias a nivel intestinal y a la mayor permeabilidad intestinal, esas bacterias y sus productos pasan de la luz intestinal a localizaciones extrain-testinales, fenómeno conocido como traslocación bacteriana. La translocación bacteriana va a producir alteraciones inmunológicas en forma de déficits y de una respuesta inflamatoria inadecuada. Este estado proinflamatorio va a contribuir a su vez a alteraciones hemodinámicas y al daño celular hepático.

¿Cuáles son las consecuencias más frecuentes?

Si consideramos que las bacterias intestinales están escapando a localizaciones extraintestinales, la consecuencia más lógica es que ocurran infecciones bacterianas. También otros proceso como ascitis-síndrome hepatorrenal, hemorragia digestiva y encefalopa-tía hepática. Esta secuencia fisiopatológica se puede evitar con antibióticos. Su utilidad está demostrada desde hace mucho tiem-po en la prevención de infecciones.

Sin embargo, si los antibióticos son útiles, ¿por qué hay que buscar alternativas?

Los tratamientos antibióticos se asocian cada vez más a la apari-ción de resistencias bacterianas. En cirróticos se está observando que estas infecciones son de difícil manejo y se acompañan de una elevada morbilidad y mortalidad.

¿Es aquí donde surge el interés terapéutico de probióticos y prebióticos en hepatología?

Sí, porque hay que buscar alternativas a los antibióticos.

¿Y por qué pueden ser útiles probióticos y prebióticos?

Debido a sus propiedades, a su capacidad para modular la flora intestinal, para disminuir la permeabilidad intestinal y para modular la respuesta inflamatoria (inmunomodulación). Pueden actuar en la microbiota, en la barrera intestinal y en los trastornos inmuno-lógicos.

¿Hay estudios al respecto?

Sí, en mi presentación he repasado los más representativos sobre la posible utilidad de probióticos y prebióticos en hepatología, tan-to experimentales como clínicos.

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También se ha referido al uso de simbióticos y prebióticos en pacientes cirróticos.

Sí, sobre todo un estudio realizado en China (Liu, Hepatology 2004), que creo que es de los mejor diseñados en el campo de los probióticos y prebióticos en hepatología. Se incluyeron 55 pa-cientes cirróticos con encefalopatía hepática mínima. Tanto en el grupo de tratamiento con simbióticos como en el de prebióticos se observó que disminuyeron las bacterias fundamentalmente pató-genas y aumentaron las bacterias potencialmente beneficiosas en heces. Además disminuyó el porcentaje de pacientes que presen-taba encefalopatía hepática mínima. La función hepática mejoró de forma estadísticamente significativa en el 50% de los pacientes tratados con simbióticos, y no hubo cambios significativos en los tratados con prebióticos. También se demostró una disminución de la endotoxemia y de la amoniemia.

¿Qué conclusiones saca de este amplio repaso?

- Los probiótidos y prebióticos, especialmente en combinaciones de varios de ellos, pueden ser útiles en el tratamiento de las en-fermedades hepáticas- En la cirrosis, los probióticos y prebióticos pueden retrasar la evo-lución de la enfermedad, hay datos que así lo sugieren, así como prevenir algunas de sus complicaciones, especialmente la encefa-lopatía hepática, donde hay más evidencias sobre todo en estos últimos años.- Son precisos más estudios, tanto a nivel experimental como clí-nico, para conocer mejor las posibles aplicaciones y la seguridad de estos tratamientos, así como los mecanismos implicados en sus efectos.

Ha presentado varios trabajos sobre VSL#3.

Sí, en primer lugar un estudio (Loguercio, J Clin Gastroenterol 2005) que evaluó VSL#3 en pacientes con distintas hepatopatías (esteatohepatitis no alcohólica, hepatitis crónica por virus C, ci-rrosis alcohólica, cirrosis por virus C). Se les administró durante 3 meses. Disminuyeron las transaminasas en todos los grupos; me-joró la albúmina y la bilirrubina en cirrosis alcohólica; disminuyó el estado proinflamatorio en la cirrosis alcohólica; disminuyó el daño oxidativo en esteatohepatitis no alcohólica y en la cirrosis alcohóli-ca, y el óxido nítrico en todos los grupos.

¿Parecen resultados muy interesantes?

Sí lo son, pero el estudio en mi opinión tiene un gran problema y es que no dispone de grupos control, lo que hace que las conclu-siones deban tomarse con cierta precaución. No obstante abre toda una serie de líneas de investigación que deben seguirse en estudios doble ciego con placebo.

Ha hablado de otros estudios que emplean VSL#3 como adyu-vante del tratamiento estándar.

Sí, hay estudios con VSL#3 que demuestran que por sí solo no disminuye la presión portal. Sin embargo, he presentado un es-tudio realizado en India (Gupta, Liver Int 2013) que estudia VSL#3 como adyuvante de los β-bloqueantes, que es el tratamiento es-tándar para prevenir la hemorragia por varices en los pacientes con cirrosis. Según los resultados obtenidos, parece que añadir VSL#3 al propanolol aumentaría la eficacia del tratamiento. También he presentado esa estrategia en otro trabajo con probió-ticos como adyuvantes de norfloxacino en la profilaxis de la perito-nitis bacteriana espontánea, una complicación de la cirrosis (Pan-de, Eur J Gastroenterol Hepatol 2012). La mezcla de probióticos que se utilizó fue E. faecalis JPC, C. butyricum, B. mesentericus JPC y bacillus coagulans. En este caso, la adyuvancia probióticos-fármaco no fue útil.

¿Y en encefalopatía hepática hay datos?

Sí, es el campo en el que más se ha publicado, sobre todo en los dos últimos años, con estudios muy interesantes. Hay estudios sobre prevención secundaria en pacientes que ya han tenido una encefalopatía hepática, que revelan una eficacia similar de VSL#3 y lactulosa en la prevención de la recurrencia de la encefalopatía hepática (Agrawal, Am J Gastroenterol 2012). También son inte-resantes los resultados de un trabajo con VSL#3 en la profilaxis primaria de la encefalopatía hepática (Lunia, Clin Gastroenterol He-patol 2013), que a los tres meses de administración revela algunos resultados como estos: disminución del tiempo de tránsito intesti-nal, disminución del sobrecrecimiento bacteriano intestinal, dismi-nución de la amoniemia y reducción del porcentaje de pacientes que presentaba encefalopatía hepática mínima.

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FERNANDO AZPIROZ Jefe Servicio de Aparato Digestivo del Hospital

Universitario Vall D’Hebron, Barcelona

La sesión sobre Usos Clínicos, moderada por el doctor Miguel Mínguez del Hospital Clínico de Valencia, se abrió con la conferencia del doc-tor Fernando Azpiroz, jefe del Servicio de Apa-rato Digestivo del Hospital Universitario Vall D’Hebron (Barcelona), quien centró su exposi-ción en el triángulo formado por dieta, micro-biota y síntomas digestivos. A través de distintos ensayos, Azpiroz demostró la interacción bidi-reccional entre microbiota y dieta, destacando además que la microbiota actúa sobre la sensi-bilidad, los reflejos y el control de la función di-gestiva.

“Además de la interacción entre microbiota y dieta, hay que destacar que la microbiota actúa sobre la sensibilidad y el control de la función digestiva”

A modo de introducción, ¿cómo se justifica esa relación dieta, microbiota y síntomas digestivos?

Normalmente, el contenido intestinal, fundamentalmente los nu-trientes, desencadenan una serie de reflejos, de forma que el apa-rato digestivo adapta su función para llevar a cabo el proceso de digestión. Normalmente todo este proceso pasa desapercibido. Sin embargo, en algunas circunstancias se activan vías sensitivas y se produce percepción consciente de síntomas digestivos. Es-tos síntomas generalmente son leves y afectan a gran parte de la población, pero en algunos casos estos síntomas llegan a ser tan frecuentes o tan intensos que llevan a los pacientes a acudir al médico.

¿Por qué se producen esos síntomas?

Básicamente hay tres mecanismos. Se pueden producir síntomas digestivos porque hay un contenido anormal dentro del tracto di-gestivo, porque la función del tubo digestivo (la motilidad o la se-creción/absorción) no se controla adecuadamente o bien porque existe una hipersensibilidad del tubo digestivo, de forma que estí-mulos fisiológicos activan vías sensitivas y producen los síntomas.

¿Qué alimentos producen síntomas?

Entre los alimentos que los pacientes refieren como inductores de síntomas en primer lugar están las grasas y fritos.

¿Por qué las grasas?

En el laboratorio se puede evaluar la sensibilidad digestiva de una forma relativamente sencilla, hinchando un balón montado sobre una sonda dentro del intestino y pidiendo a los participantes que gradúen la sensación que perciben en una escala. De esta forma se puede observar que los estímulos pequeños que no producen ninguna estimulación de la pared, pasan desapercibidos. Aumen-tando el volumen de distensión llega un momento en el que se activan receptores de tensión en la pared digestiva y empiezan a notarse síntomas. Con volúmenes mayores, los síntomas llegan a nivel de molestia.

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¿Qué papel juega la microbiota en todo esto?

La microbiota no sólo interacciona con el contenido, sino que tam-bién puede modular la sensibilidad del tubo digestivo y los reflejos que controlan la función digestiva.

Por ejemplo, se ha referido la relación entre el empleo de probióticos y cambios en la motilidad intestinal.

Sí, he citado un estudio de Agrawal (Agrawal et al. Aliment Phar-macol Ther, 2009), en el que se comparan los datos del tránsito del intestino delgado de en pacientes a los que se les administró, o un probiótico. En condiciones basales los dos grupos son igua-les, pero tras cuatro semanas de tratamiento el grupo al que se le administra probióticos registra cambios de la motilidad intestinal y del tránsito intestinal, asociados a una disminución de la sensación de distensión.

¿Y desde el punto de vista de la sensibilidad intestinal qué destaca?

Me he referido a un experimento (Adapted from Verdú, Gut 2006) en el que se midió la sensibilidad intestinal en ratones. Un grupo de animales estaba tratado con antibióticos presentaban una hi-persensibilidad intestinal, que a su vez revertía recolonizando la flora. Éstos experimentos indican que la microbiota puede influir la sensibilidad intestinal.

¿Estos datos qué utilidad pueden tener?

Estos datos sugieren que cabe la posibilidad de utilizar la dieta y sus efectos sobre la microbiota intestinal como arma terapéutica. Por ejemplo, en un grupo de pacientes con síntomas digestivos se midió la cantidad de gas que producían y el número de evacuacio-nes a lo largo del día. Tras someterles a una dieta baja en residuos, se observó una modificación del metabolismo de la microbiota con una disminución del gas producido y evacuado. Antes del trata-miento los pacientes referían síntomas de nivel moderado-alto y con el tratamiento dietético, la severidad de los síntomas se redujo de una forma efectiva. Además inicialmente sus síntomas se aso-ciaban a un malestar digestivo y con el tratamiento los pacientes refirieron un cierto grado de bienestar digestivo.

¿Cuál es la conclusión final de esta relación triangular?

Si ponemos todo junto, dieta, microbiota y síntomas digestivos, vemos que hay una interacción bidireccional entre microbiota y dieta, pero además la microbiota modula la sensibilidad y los refle-jos que controlan la función digestiva. Los tres factores, contenido (aportado por la dieta), sensibilidad y función intestinal pueden de-terminar la aparición de síntomas. La microbiota no sólo influencia la aparición de síntomas en pacientes, sino que también en con-diciones normales puede determinar la percepción de bienestar digestivo. Éste es un efecto potencialmente interesante, pero to-davía poco estudiado.

Si con el mismo grupo de sujetos se realiza el mismo experimento, pero añadiendo una segunda sonda a través de la que se infunde una cantidad muy pequeña de lípidos en el duodeno, se observa que se produce una hipersensibilidad: volúmenes que no se per-ciben en condiciones basales, con lípidos producen percepción y volúmenes que se toleran en condiciones basales producen mo-lestia cuando administramos lípidos concomitantemente. Es decir, uno de los mecanismos por los que los lípidos producen síntomas es porque sensibilizan el tubo digestivo y se ha demostrado que este tipo de sensibilización está exagerada en pacientes con sín-tomas funcionales.

¿Y cuál es el papel de la microbiota en todo esto?

Hoy día tenemos datos suficientes como para considerar que el aparato digestivo tiene dos partes. Desde el estómago hasta íleon terminal, el aparato digestivo se dedica a extraer los nutrientes de la dieta. Tras este proceso de digestión y absorción queda un pe-queño residuo que pasa al intestino grueso, donde se utiliza como sustrato que permite la proliferación de la microbiota.

¿Cuál es entonces la función de esa parte del aparato di-gestivo?

Hoy día se puede asumir que la función primordial del intestino grueso es proporcionar un nicho adecuado para albergar la micro-biota; de hecho la mayor parte de la microbiota humana se aloja en el colon.

¿Y qué relación tiene la microbiota con la dieta y con los síntomas?

En primer lugar, hay evidencia de que el contenido intestinal, que proviene de la dieta, tiene una interacción bidireccional con la mi-crobiota. El contenido activa metabólicamente y determina la pro-liferación de la microbiota, y ésta a su vez transforma el contenido. Mediante resonancia magnética nuclear se ha determinado que en sujetos sanos el volumen del contenido del colon es aproxi-madamente de 500-700 ml. Aproximadamente la mitad de este contenido son bacterias. También sabemos que la producción fe-cal diaria es de unos 100 ml. Esto quiere decir que el turn-over del contenido, y, por tanto, de la microbiota, es tremendo y cualquier efecto de la dieta se puede manifestar en 3-4 días.

Ha presentado un ejemplo de cómo la comida modifica el contenido de la microbiota y activa las bacterias…

Sí, se trata de un grupo de sujetos sanos al que en primer lugar estudiamos en su dieta habitual, y después con una dieta alta en residuos durante tres días. Al final de cada periodo se recogió el gas producido durante 6 horas después de administrarles un de-sayuno de prueba mediante una sonda rectal. Los sujetos con su dieta habitual, producen una cantidad de unos 200 ml de gas du-rante 6 horas pospandriales. En los mismos sujetos con una dieta alta en residuos se triplica la producción de gas. Es decir, hay una relación entre dieta, activación metabólica bacteriana y contenido intestinal. Además, en condiciones basales con su dieta habitual los participantes referían una sensación de bienestar digestivo, que desapareció tras tres días de dieta alta en residuos junto con la aparición de síntomas.

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MIGUEL GUEIMONDE Instituto de Productos Lácteos de Asturias (IPLA),

Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC)

El investigador del Instituto de Productos Lácteos de Asturias (IPLA-CSIC) Miguel Gueimonde fue el encargado de iniciar las comunicaciones orales de la sesión sobre Usos Clínicos con un trabajo titulado “Efecto del uso de antibióticos antes del parto sobre el establecimiento de la microbiota intestinal en el neonato”. Entre los firmantes fi-guran, junto al investigador principal, S. Arbo-leya, B. Sánchez, C. G. de los Reyes-Gavilán y A. Margolles, del IPLA-CSIC, además de C. Mila-ni, S. Durante y M. Ventura, del Laboratorio de Probiogenómica, del Departamento de Ciencias de la Vida, de la Universidad de Parma (Italia). En la investigación también han participado los especialistas G. Solís, del Servicio de Pediatría del Hospital Universitario Central de Asturias (SESPA) y N. Fernández, del Servicio de Pedia-tría del Hospital de Cabueñes (SESPA).

“Es necesario desarrollar estrategias para favorecer el establecimiento de la microbiota en prematuros y minimizar el efecto de antibióticos”

¿Por qué surge esta investigación centrada en el neonato?

Porque está demostrado que el establecimiento de la microbiota intestinal comienza con el nacimiento y juega un papel esencial en el desarrollo del intestino, del sistema inmune y la futura salud del individuo.

¿Hay alguna diferencia en el caso de partos prematuros?

Diversos estudios han caracterizado el proceso de establecimiento y desarrollo de la microbiota intestinal en neonatos y sí han de-mostrado alteraciones relacionadas con el parto prematuro. Sin embargo, el efecto de factores concretos, como el uso de antibió-ticos antes del parto, sobre este proceso de establecimiento de la microbiota intestinal es aún desconocido.

En este sentido, ¿qué estudiaron durante la investigación?

Llevamos a cabo un análisis de la microbiota fecal de 40 recién-nacidos (27 prematuros extremos y 13 niños nacidos a término) durante los tres primeros meses de vida.

¿Qué método utilizaron para el estudio?

Se monitorizó el uso perinatal de antibióticos y se determinó la composición de la microbiota intestinal utilizando el análisis del ADNr 16S mediante la tecnología Ion Torrent.

¿Qué resultados obtuvieron?

Los resultados obtenidos permitieron identificar alteraciones en el proceso de establecimiento de la microbiota intestinal en niños prematuros extremos. Del mismo modo, este estudio ha puesto de manifiesto la enorme influencia del uso de antibióticos antes del parto sobre el establecimiento de la microbiota intestinal en el neonato.

¿Qué conclusiones revelan estos datos?

Estos resultados señalan la necesidad de desarrollar estrategias de intervención dirigidas a favorecer el proceso de establecimiento de la microbiota intestinal en el neonato y/o a reducir el impacto de la administración de antibióticos antes del parto.

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JONATHAN SANTAS AB-Biotics, S.A. Parc de Recerca UAB

Jonathan Santas, de la empresa AB-Biotics S. A., con sede en el Parc de Recerca de la Universitat Autónoma de Barcelona (UAB), presentó un tra-bajo centrado en el “Estudio de las propiedades probióticas de AB-Colic para la diminución del llanto excesivo infantil”. De sus principales con-clusiones nos habla en esta entrevista.

“La administración de un compuesto probiótico en niños con cólico reduce los minutos de llanto por día y la duración de los episodios”

¿En qué contexto se sitúa esta investigación?

El síndrome del llanto excesivo infantil, generalmente conocido como cólico infantil, es una de las principales causas de consulta pediátrica durante el primer año de vida.

¿En qué ha consistido el trabajo?

En el estudio se evaluaron in vitro las propiedades probióticas de dos cepas acidolácticas seleccionadas para el tratamiento de có-licos infantiles y posteriormente confirmamos su seguridad y efica-cia en un estudio clínico piloto.

¿Y qué resultados observaron?

Se vio que las cepas presentan buena capacidad de sobrevivir a condiciones gastrointestinales y adherirse al epitelio intestinal, muestran propiedades anti-inflamatorias y capacidad antagonista contra patógenos comúnmente presentes en la microbiota intesti-nal de niños con cólicos. Una característica muy interesante de las cepas estudiadas es que no son productoras de CO2, siendo bue-nas candidatas para evitar molestias al ser administradas a bebés.

¿Qué método siguieron para la validación?

La eficacia de la fórmula probiótica AB-Colic, compuesta por las dos cepas, se evaluó en un ensayo aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo en bebés de entre 21 y 120 días. El es-tudio presentaba las siguientes características diferenciales frente a otros presentes en la bibliografía: una duración del tratamiento inferior (14 días); inclusión de bebés alimentados con leche ma-terna o fórmula; y que presentaban llanto excesivo definido como “un llanto intenso, persistente, incontrolable e inexplicable en niños aparentemente sanos, de una duración mínima de 60 minutos al día, durante 3 o más episodios al día, que tienen lugar en 3 o más días durante al menos 1 semana, y que supone un problema para el normal funcionamiento de la unidad familiar”.

¿Cuál es la principal conclusión del estudio en su opinión?

Los resultados muestran que la administración de la fórmula pro-biótica reduce los minutos de llanto por día una media del 67,5% así como la duración de los episodios.

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ESTHER JIMÉNEZ Departamento de Nutrición, Bromatología

y Tecnología de los Alimentos. Universidad Complutense de Madrid

Un ensayo piloto sobre la administración de pro-bióticos a niños prematuros de muy bajo peso ha centrado la intervención de Esther Jiménez, investigadora del Departamento de Nutrición, Bromatología y Tecnología de los Alimentos de la Universidad Complutense de Madrid. En el trabajo también han intervenido L. Moles, J. de Andrés, M. Gómez, L. Fernández y J.M. Rodrí-guez, del mismo centro, junto a E. Escribano, M. Romero, M.T. Montes, P. Amo, M. Gil, J. Quero y M. Sáenz de Pipaón, del Servicio de Neonatolo-gía del Hospital Universitario La Paz. J. de An-drés, L. Fernández y J.M. Rodríguez pertenecen también a la empresa Probisearch (Tres Cantos, Madrid).

“Hemos comprobado probióticos seguros con gran potencial para colonizar el intestino infantil en niños prematuros”

¿Por qué decidieron llevar a cabo esta investigación?

En un estudio previo, se observó una baja diversidad bacteriana, una alta concentración de bacterias de origen hospitalario y una baja concentración de bifidobacterias y lactobacilos en las heces de niños prematuros.

¿Qué indicaban esos resultados?

Ese estudio sirvió de base para un ensayo piloto de administración de probióticos a niños prematuros de muy bajo peso (<1.200 g), una población especialmente sensible a las infecciones nosoco-miales.

¿Qué se proponían con el ensayo?

Los objetivos de este ensayo fueron: (a) evaluar su seguridad y (b) determinar si eran capaces de colonizar el intestino de niños en los que la antibioterapia es una práctica habitual.

Para ello, ¿qué método utilizaron?

Se administró un probiótico que contenía dos cepas aisladas de leche humana (una perteneciente a la especie Lactobacillus sali-varius y la otra a Bifidobacterium breve) a 6 prematuros; parale-lamente, otro grupo de niños recibió el probiótico comercial Inflo-ran®.

¿Tras el periodo de administración qué se comprobó?

Una semana después del nacimiento, se detectó la presencia de lactobacilos y bifidobacterias (5,7-9 log ufc/g) en las heces de los niños que habían recibido alguno de los dos probióticos. El análisis de los aislados determinó que se trataban de las mismas espe-cies y cepas que se habían administrado. Su concentración se mantuvo constante e, incluso, aumentó a lo largo de las semanas siguientes.

¿Qué significan estos datos?

Los resultados obtenidos indican que ambos probióticos son se-guros para la población diana, tienen un gran potencial para colo-nizar el intestino infantil y favorecen una mayor diversidad bacte-riana. En consecuencia, abren la puerta para ensayos dirigidos a evaluar su eficacia clínica en niños prematuros.

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Mª PAZ DÍAZ - ROPERO Departamento de Ensayos Clínicos

de Biosearch S.A. (Granada)

La sesión sobre usos clínicos concluyó con la in-tervención de María Paz Díaz-Ropero, del De-partamento de Ensayos Clínicos de Biosearch S.A. (Granada), quien presentó la comunicación “Lactobacillus fermentum CECT5716 reduce la carga de Staphylococcus en la leche de mujeres que sufren de dolor en el pecho durante la lactan-cia mejorando la sintomatología”. En el trabajo también figuran como firmantes J. A. Maldona-do-Lobón, O. Bañuelos, A. D. Valero, J. Fonollá y M. Olivares, de la misma empresa, además de M. A. Díaz, de la Unidad de Ginecología del Hospi-tal Virgen de las Nieves (Granada)

“Lactobacillus fermentum CECT5716 reduce la carga de Staphylococcus en la leche de mujeres que sufren dolor en el pecho durante la lactancia”

¿En qué contexto se enmarca esta investigación?

Alrededor del 10% de las mujeres en periodo de lactancia pueden experimentar molestias o dolor en el pecho no asociado con fiebre que se ha relacionado con Staphylococcus.

En ese sentido, ¿qué se proponían con el estudio?

El objetivo era evaluar la efectividad de L.fermentum CECT5716 para reducir la carga de Staphylococcus en las muestras de leche de las mujeres que sufren dolor en el pecho durante la lactancia.

¿Con qué método lo llevaron a cabo?

Se hizo un estudio controlado y doble ciego con mujeres aque-jadas de dolor en el pecho durante la lactancia y con niveles de bacterias totales en la leche superior 1.000 ufc/ml de leche (n=97). Las voluntarias se distribuyeron aleatoriamente en cuatro grupos. Tres grupos recibieron la cepa probiótica durante 21 días a diferen-tes dosis: 3x109 cfu/día; 6x109 cfu/día, 9x109 cfu/día y un grupo control recibió un placebo. En los tiempos 0, 7, 14 y 21 días se cuantificó la carga de Staphylococcus en las muestras de leche mediante PCR cuantitativa y se evaluó el dolor que sentían las mu-jeres mediante encuesta Española de dolor adaptada de McGill.

¿Cuáles fueron los resultados?

El consumo de L.fermentum CECT5716 redujo significativamente (p<0,05) la carga de Staphylococcus en la leche materna de mu-jeres que sufren de dolor de pecho durante la lactancia. Al mismo tiempo se observó una reducción significativa del dolor en estas mujeres desde la primera semana de tratamiento (p<0,05). No se observaron diferencias significativas entre las diferentes dosis.

¿Qué conclusión extraen del trabajo?

El consumo de L.fermentum CECT5716 reduce la carga de Sta-phylococcus en la leche de mujeres con dolor en el pecho durante la lactancia aliviando los síntomas.

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GABRIELA PERDIGÓN Centro de Referencia para Lactobacilos

(CERELA-CONICET) - Universidad Nacional de Tucumán (Argentina)

Gabriela Perdigón fue la primera de las exper-tas internacionales en intervenir en el Work-shop. Esta investigadora argentina, procedente del Centro de Referencia para Lactobacilos (CE-RELA-CONICET), y de la Universidad Nacional de Tucumán(UNT),con sede en Tucumán, fue la encargada de abrir la sesión de inmunonutrición con una charla titulada “Microbiota intestinal: inmunomodulación por bacterias comensales y probióticas”. Perdigón presentó los principales resultados de línea de trabajo de su grupo sobre el efecto inmunomodulador de los probióticos. Entre otros aspectos, destacó que los resultados muestran que el impacto probiótico a nivel in-testinal da señales que influenciarían la respues-tade mucosas y sistémica de manera favorable al huésped.

“Las bacterias probióticas estimulan el intestino de manera distinta a las comensales favoreciendo la respuesta mucosa y sistémica”

¿Por qué este tema sobre inmunomodulación por bacterias comensales y probióticas y no otro?

Porque en mi grupo llevamos mucho tiempo trabajando en probió-ticos y viendo cuáles son sus propiedades en distintas situaciones de patología, como infecciones, enfermedad inflamatoria o cáncer de colon.

Usted misma arrancaba preguntando ¿para qué queremos los probióticos si tenemos las bacterias comensales? ¿Lo puede explicar?

Son bacterias diferentes y por eso desde hace tiempo iniciamos una serie de estudios comparativos entre ambas, cuyos resultados he expuesto a lo largo de mi charla.

¿Y cómo se establece la relación con el sistema inmune?

El ecosistema intestinal es muy complejo y algo muy importante es que en ese ecosistema coexisten todas las células de la respuesta inmune. El intestino es, por ejemplo, uno de los órganos inmuno-lógicos que produce mayor cantidad de inmunoglobulina. El 70% se produce a nivel del intestino. Hablamos de inmunoglobulina A, pero no sólo, ya que es realmente quien va a gobernar o a va a estar muy relacionado con lo que es la inmunidad sistémica.

A este nivel, ¿cuáles son esas funciones inmunes de la micro-biota?

La microbiota intestinal tiene una gran importancia en la madura-ción del sistema inmune y también en un proceso de tolerancia oral que se desarrolla a nivel del intestino. Es decir, la microbiota mantiene la homeostasis intestinal, la inducción de la respuesta inmune y la tolerancia oral. También se ha visto que la microbiota es capaz de producir, a tra-vés de los metabolitos que induce toda la comunidad microbiana, una activación muy importante sobre células del epitelio intestinal. Esto es determinante porque el epitelio intestinal no es una célula cualquiera, sino que podemos decir que es como la directora de orquesta de todo lo que después va a ocurrir o va a poner en funcionamiento a las células que se encuentran subyacentes en la lámina propia del intestino.

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Teníamos que la microbiota Gram(+) y la Gram(-) van a participar tanto en la activación como en la regulación del sistema inmune, que la microbiota Gram(-) estaría más involucrada en la regulación, mientras que la Gram(+) más involucrada en la activación. Esta era nuestra referencia, pero en realidad nosotros vimos que tanto las bacteria Gram(+) como las Gram(-) participan activamente en los dos procesos. También destaca la activación que puede inducir la microbiota intestinal al ser capaz de favorecer o aumentar el número de células IgA. Es capaz de aumentar los marcadores que expresan la activación de los macrófagos y las células dendríticas. La activación inducida no afecta la homeostasis intestinal.

Este es el conocimiento sobre lo que hacen las bacterias co-mensales, pero ¿qué papel cumplen las bacterias probióticas en la estimulación del sistema inmune mucoso asociado a in-testino?

Sabemos que las bacterias de la microbiota normal no toman con-tacto directo con la célula epitelial intestinal. Sin embargo, trata-mos de responder estas preguntas, ¿el probiótico puede interac-cionar con la célula intestinal?, ¿qué mensaje le da ese probiótico a la célula epitelial? Para ello hicimos estudios de microscopía electrónica con dos bacterias probióticas, dos L. casei (CRL 431 y DN114-001), y demostramos que pueden interaccionar con las microvellosidades del epitelio intestinal. Las bacterias comensales no interactúan con la célula epitelial intestinal, no se encuentran adheridas a ella, en cambio las bacterias probióticas sí lo hacen. Y como consecuencia de esa adhesión o activación se produce un gran aumento en la actividad de esas células epiteliales.

¿Qué mecanismos están implicados en esa activación de la célula epitelial? ¿Se induce la expresión y liberación de algu-na citoquina?

Pensamos que podía ser interleucina-6 (IL-6), porque interleuci-na-8 (IL-8) e interleucina-1 (IL-1) dieron resultados negativoa frente al probiótico. Usamos IL-6 porque sabemos que es muy impor-tante en el paso del linfocito B a célula plasmática, que es la pro-ductora de la IgA. Observamos una primera diferencia, la mayor producción de IL-6 por la bacteria probiótica. Para determinar si estas bacterias inducían alguna modificación intestinal o mensaje distinto en la célula epitelial, hicimos un estudio histológico. Obser-vamos que había un aumento de células mononucleadas. Al tratar de identificar qué tipos de mononucleadas eran macrófagos .Ob-servarmos que el probiótico también estimula a la célula epitelial a producir quimoquinas, (quimioatractantes de macrófagos) lo que justificaría el aumento de macrófagos en lamina propia observado.

¿Ese efecto es el mismo en un producto fermentado que en suspensión?

Lo estudiamos y vimos que el efecto es bastante importante tanto si está en leche fermentada como cuando está en suspensión. Así

Pero la microbiota no sólo va a ser tan importante desde el punto de vista de la inducción de respuesta inmune y de regulación, sino que además va a ser clave en la maduración del sistema inmune. Ya desde 1978 hay trabajos que demuestran la importancia de la microbiota en la maduración inmune y mayor competencias de las células, mayor celularidad y maduración. Nosotros hemos com-probado en ratones convencionales, por ejemplo, que a medida que se van colonizando también va aumentando el número de cé-lulas IgA y la IgA total.

Los estudios que ha presentado corroboran efectivamente que el desarrollo y la implantación de la microbiota regulan de forma muy determinante la respuesta inmune y la maduración de las células inmunes. ¿Qué ocurre con esa función inmune cuando ya hablamos de edad adulta?

Cuando llega el estado adulto todos ya tenemos una microbiota completa, en la que hay cantidad de gérmenes Gram(+) y Gram(-). Al preguntarnos y tratar de identificar las funciones de cada pobla-ción y los mecanismos de activación inmune que surgen, algunos trabajos decían que la microbiota Gram(-) era la principal respon-sable de mantener los mecanismos de tolerancia oral (regulación) y que la Gram(+) era la más importante en la inducción (activación) de la respuesta inmune. Después surgieron otros trabajos que se-ñalaban que las bifidobacterias también podían tener algún efecto en los mecanismos de tolerancia oral. En realidad hasta ahora no se sabe exactamente cuál de esas dos poblaciones es la más im-plicada en mantener la población de células reguladoras. Nosotros creemos que son mayoritariamente los Gram(-) y probablemente la población de bifidobacterias .

¿Ahí radica precisamente su interés por estudiar las diferen-cias entre bacterias comensales y probióticas?

Sí, a raíz de esos trabajos, desarrollamos experiencias para com-parar tanto las bacterias comensales como las aún no comensa-les. Comparamos bacterias comensales con un microorganismo probiótico, un L. casei, que ya habíamos estudiado como efectivo en la defensa de infecciones y en cáncer de colon. Observamos que tanto las bacterias Gram(+) como las Gram(-) y la cepa probió-tica indujeron una respuesta de IgA, por tanto, ambas participaban en ese proceso. Cuando profundizamos, aunque a nivel de IgA no habíamos visto diferencias, sin embargo sí vimos diferencias estu-diando dos citoquinas importantes como interferón gamma (IFN-γ) y TNFalfa. Observamos una diferencia entre cepas probióticas y las no probióticas tanto para IFN-γ como para TNFalfa. Si bien con ambas había un aumento, la producción siempre era mucho más importante con la cepa probiótica.

¿Qué otras variables midieron?

Por ejemplo, la interleucina-10 (IL-10). Con la bacteria probiótica aumentaba ligeramente en relación a las bacterias comensales. Ese aumento también se observa en otras células productoras de citoquinas en lámina propia del intestino delgado.

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- Los probióticos y la LFP inducen un claro efecto sobre las células epiteliales intestinales y células inmunes asociadas, favoreciendo la expresión de genes relacionados con la activación inmune, como receptores de señalización, depuración y la producción de cito-quinas.- Los resultados muestran que el impacto probiótico a nivel intesti-nal da señales que influenciarían la respuesta sistémica de manera favorable al huésped.

se vio tanto con un marcador de células dendríticas (33D1) como con otro de macrófagos (F4/80). También vimos que se producía un aumento de ciertos receptores en esos macrófagos y en las cé-lulas, como son los receptores TLR2 y el CD-206. Cuando hicimos la determinación de IgA, aunque no hay diferencias en cuanto al número de células productoras de IgA, sí que la hay en cuanto a la concentración total del IgA secretoria total.Nosotros ya habíamos descrito ese aumento de IgA y su señal positiva en la mucosa intestinal, pero en ratones convencionales normales, no para bacterias probióticas.

En ese sentido, ¿qué observaron con las cepas probióticas?

Al estudiar el efecto del probiótico en mucosas distantes de intesti-no, observamos que al estimular el intestino, se induce una migra-ción de las células a sitios mucosos distantes y después vuelven a la lámina propia del intestino. Observamos el aumento de células IgA+ en bronquios y mamas, lo que indica que la leche fermentada probiótica (LFP) estimula el ciclo de la IgA. Esto nos llevó a demos-trar que las bacterias probióticas, pueden estimular el intestino de manera diferencial a las comensales, e inducen un aumento del ciclo de la IgA, que favorecería también la inmunidad a nivel del árbol respiratorio.También vimos que había una activación importante a nivel de los macrófagos peritoneales, es decir, que ese estimulo intestinal po-día inducir también una activación en otras células distantes como los macrófagos peritoneales. Por otra parte, también había una producción importante de citoquinas, destacando que las las bac-terias probióticas estimulan interferón gamma (IFN-γ) ,TNFα e IL10.

¿Cuál sería la foto final de su modelo después de esta amplia línea de estudios y resultados?

Lo que nosotros proponemos como ejemplo de interacción es que las células probióticas pueden aumentar y favorecer una activación de la célula epitelial y producir interleucina-6 (IL-6), que activa a las células inmunes, tanto macrófagos como dendríticas, y que puede producir una expansión de las células IgA, y aumentar , por tanto, la cantidad de la IgA secretoria total. Además es muy importante que ese estímulo a partir de los probióticos puede aumentar el ci-clo de la IgA, y a través de los nódulos linfáticos mesentéricos y el conducto torácico, aumentar la respuesta de IgA en sitios mucoso distantes como bronquios y en glándula mamaria.

En resumen, ¿cuál es el efecto de la administración de probió-ticos sobre un huésped inmunocompetente?

Las principales conclusiones de nuestra amplia de línea de trabajo indican que:- La administración de probióticos no induce efectos adversos. Induce autorregulación por producción de citoquinas reguladoras IL-10, sin modificación de la homeostasis intestinal.

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BORJA SÁNCHEZ Instituto de Productos Lácteos de Asturias

(IPLA-CSIC)

Las comunicaciones orales de la sesión sobre in-munonutrición comenzó con la intervención de Borja Sánchez, del Instituto de Productos Lác-teos de Asturias (IPLA-CSIC), quien presentó un trabajo sobre la respuesta de células dendríticas intestinales a un péptido inmunomodulador en-criptado en una proteína extracelular de Lacto-bacillus plantarum. Se trata de una investiga-ción en la que también han participado Abelardo Margolles, del mismo centro; David Bernardo, Hafid Al-Hassi, Elizabeth Mann, Stella Knight, del Antigen Presentation Research Group, del Imperial College de Londres, y María Urdaci, de la Universidad de Bordeaux.

“Péptidos encriptados en cepas de probióticos pueden servir para desarrollar nutracéuticos dirigidos a tratar enfermedades inflamatorias”

¿Por qué decidieron estudiar este tema?

Debido a que el tracto gastrointestinal humano (TGI) aloja una gran diversidad bacteriana, en donde la presencia de ciertos niveles de bacterias del ácido láctico (BAL) ha sido correlacionada con un es-tado saludable o de homeostasis. Además, algunas cepas de BAL son utilizadas como probióticos en alimentación humana, desco-nociéndose actualmente muchos de los mecanismos moleculares responsables de sus efectos beneficiosos sobre el hospedador.

En este sentido, ¿en qué aspecto se centró el trabajo?

Nuestro grupo de investigación concentró parte del trabajo en conocer el mecanismo de acción de las proteínas extracelulares secretadas por bacterias del ácido láctico.

¿Qué resultados destacan al respecto?

Hemos identificado un péptido (STp), codificado en una de las proteínas extracelulares mayoritarias de la especie Lactobacillus plantarum, caracterizado por su abundancia en residuos de serina y treonina en su secuencia y por la ausencia de puntos de corte para la mayor parte de proteasas intestinales.

¿Cuál es el papel de ese péptido?

In vitro, este péptido fue capaz de incrementar la producción de interleucina-10 en células dendríticas intestinales (CDIs) aisladas de pacientes sanos. Además, células T vírgenes estimuladas con estas CDIs mostraron un perfil de citocinas regulador, además de cambiar su patrón de migración a piel en lugar de a intestino. Este mismo patrón también se observó en CDIs aisladas de pacientes con Colitis Ulcerosa. De hecho, un reciente estudio en un modelo animal de Colitis Ulcerosa ha evidenciado el poder terapéutico de este péptido.

¿Qué conclusiones extraen de estos datos?

Nuestros datos sugieren que este tipo de péptidos encriptados tie-nen un gran potencial inmunomodulador, pudiendo ser utilizados para el desarrollo de nutracéuticos orientados al tratamiento de enfermedades inflamatorias.

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CAROLINE HUNSCHE Departamento de Fisiología Animal II.

Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Complutense de Madrid

El efecto del consumo de una leche fermentada con el probiótico Lactobacillus Casei (DN114001) en la respuesta conductual, inmunológica y de estrés oxidativo de ratones viejos, centró la inter-vención de Caroline Hunsche, del Departamento de Fisiología Animal II de la Facultad de Cien-cias Biológicas de la Universidad Complutense de Madrid. También figuran entre los firmantes de este trabajo J. Cruces, O. Hernández y M. De la Fuente, del mismo centro universitario.

“El consumo de probióticos puede ser una buena estrategia para aumentar la longevidad saludable, según hemos visto en ratones viejos”

¿A qué responde el estudio de probióticos en el envejecimiento?

En el proceso de envejecimiento se produce un deterioro progre-sivo de todos los sistemas fisiológicos, especialmente de los ho-meostáticos como el sistema nervioso y el inmunitario, afectando también la comunicación que existe entre ellos, lo que constituye el denominado sistema neuroinmunitario. Dicho deterioro está en la base del aumento de morbilidad y mortalidad que tiene lugar al envejecer. Dado el actual envejecimiento de la población, debido al aumento de la esperanza de vida, resulta esencial la búsqueda de estrategias que aumenten la calidad de vida y disminuyan las enfermedades relacionadas con el envejecimiento. Se ha visto que el mantenimiento de una buena salud depende fundamentalmente de factores ambientales y del estilo de vida (aproximadamente en un 75%), mientras que una parcela menor se debe a los factores genéticos (cerca de un 25%). Entre esos factores de estilo de vida, el consumo de alimentos funcionales, y entre ellos se encuentran los probióticos, podría ser relevante para revertir o retrasar el dete-rioro del sistema neuroinmunológico ocasionado durante el enve-jecimiento y consecuentemente aumentar la longevidad saludable de los individuos.

¿Entre esas estrategias están los probióticos?

Estudios previos, aunque muy preliminares, han indicado que las bacterias probióticas parecen aportar beneficios a nivel neurológi-co e inmunológico, lo que podría resultar en una buena estrategia para mejorar la calidad de vida durante la vejez.

En este sentido, ¿en qué se centraba su estudio?

El presente estudio tuvo como objetivo verificar los efectos positi-vos del consumo de un alimento lácteo comercial, con la presencia de una bacteria probiótica, ingerido durante un tiempo corto de 14 días, en una serie de pruebas de comportamiento y en parámetros de función y de estado antioxidantes en células inmunitarias de ratones viejos.

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¿Cómo lo llevaron a cabo?

Se ha administrado a ratones hembras (ICR-CD1) de 72 ± 4 sema-nas de edad una leche fermentada con la presencia del probiótico Lactobacillus casei (DN-11400). Tras dos semanas de tratamien-to, todos los animales fueron sometidos a una serie de pruebas conductuales que evaluaron la habilidad sensoriomotora, la coor-dinación y el vigor neuromuscular, así como también la actividad exploratoria y los niveles de ansiedad. Posteriormente, fue obte-nida la suspensión peritoneal en la que se encuentran las células inmunitarias, analizándose en las mismas su capacidad funcional (fagocitosis, quimiotaxis, actividad antitumoral NK y linfoprolifera-ción) y los niveles de defensas antioxidantes.

¿Qué resultados obtuvieron?

Los resultados mostraron que el consumo de este tipo de alimento mejoró de forma significativa funciones conductuales e inmunita-rias que se encuentran deterioradas durante el envejecimiento. Se ha visto una diminución de los niveles de ansiedad y un aumento de la capacidad sensoriomotora y exploratoria de los ratones. En las células inmunitarias se ha observado una mejora de los pará-metros inmunitarios estudiados, como la quimiotaxis y la prolifera-ción de los linfocitos, la quimiotaxis y la fagocitosis de los macró-fagos y la capacidad de destruición de células tumorales de las células NK, así como la actividad antioxidante de estas células.

¿Esto indica su posible utilización en humanos?

Estudios realizados por nuestro grupo de investigación, demues-tran que los parámetros inmunitarios que se han analizado en el presente trabajo son buenos marcadores de salud, de la velocidad de envejecimiento y sirven como predictores de longevidad. Ade-más, presentan una evolución similar a lo largo de la vida de ani-males de experimentación (ratones) y de los humanos, lo que per-mite, con las reservas correspondientes, la extrapolación de estos datos a los humanos. Por ello, de una forma general, se puede concluir que los resultados de este trabajo sugieren que el consu-mo de este tipo de alimento podría mejorar la funcionalidad a nivel del sistema nervioso e inmunitario en la vejez, planteándose como una buena estrategia para aumentar la longevidad saludable.

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MALÉN MASSOT Departamento de Fisiología, Facultad de Farmacia,

Universidad de Barcelona

Malén Massot, investigadora del Departamento de Fisiología de la Universidad de Barcelona, presentó un trabajo que revela que la fibra de ca-cao influye en la proporción de ácidos grasos de cadena corta a nivel intestinal viéndose también modificada a nivel sérico. En el estudio también figuran como firmantes Àngels Franch, Margari-da Castell y Francisco J. Pérez-Cano, del mismo centro, además de Adele Costabile, Caroline E. Childs y Parveen Yaqoob, del Departamento de Ciencias de la Alimentación y la Nutrición de la Universidad de Reading (Reino Unido).

“La fibra del cacao es capaz de influir claramente en la producción de ácidos grasos de cadena corta tras una intervención nutricional”¿A qué responde el interés por realizar un estudio sobre el cacao?

El cacao contiene fibra y polifenoles que pueden afectar directamen-te al ecosistema intestinal y su relación con el sistema inmunitario.

¿Cuál era el objetivo del trabajo?

Dado que una dieta con un 10% de cacao causa cambios signi-ficativos en la composición de la microbiota de ratas jóvenes, el objetivo del presente estudio era determinar si la dieta de cacao influye en la producción de ácidos grasos de cadena corta (AGCC) en el contenido cecal, las heces y si estos cambios también pue-den ser observados a nivel sistémico. ¿Algún otro dato a confirmar?

Sí, además, los efectos moduladores suelen atribuirse a flavonoi-des pero otros compuestos presentes en el cacao, como la fibra también podrían ser responsables, por ello también se estudió una dieta rica en fibra de cacao.

¿Qué método utilizaron?

Se alimentó a ratas Wistar durante tres semanas con una dieta estándar, una dieta con un 10% de cacao (con 0,2% de polifeno-les, 5,5% de fibra soluble y 16,5% de fibra insoluble) o una dieta rica en fibra de cacao sin polifenoles. Se tomaron muestras de heces y sangre antes de comenzar la dieta y el último día de la misma. Además se recogieron muestras de contenido cecal a día final de estudio. Se midió el pH fecal y cecal tras tres semanas de intervención nutricional, y se determinó la concentración de los principales AGCC en el contenido cecal, heces y suero mediante cromatografía de gases.

¿Qué resultados observaron?

Tanto la dieta de cacao como la de fibra de cacao redujeron el pH de las heces (p<0,05 comparado con el grupo control) y el pH del contenido cecal (p<0,01 frente al grupo control). Tras el metabo-lismo de la microbiota, la dieta rica en fibra de cacao, a diferencia de la dieta rica en cacao, incrementó las concentraciones de los principales AGCC (ácidos acético, butírico y propiónico) en he-ces y contenido cecal (p<0,05 frente al grupo control), que fueron capaces de alcanzar el compartimento sistémico (ácido acético, p=0,029 frente al grupo control).


Estos resultados demuestran que la fibra presente en el cacao es capaz de influir claramente en la producción de AGCC tras una intervención nutricional y, por consiguiente, de promover la salud intestinal.33


FRANCESCA ALGIERI Departamento de Farmacología, CIBER-EHD,

CIBM, Universidad de Granada

Francesca Algieri, del Departamento de Farma-cología de la Universidad de Granada, presentó un trabajo centrado en la evaluación de Lacto-bacillus fermentum en el modelo experimental de DCA del Síndrome del Intestino Irritable (SII) en ratas. En el estudio también figuran como fir-mantes Alba Rodríguez–Nogales, María Pilar Utrilla, Pura Gómez-Matilla, José Garrido-Me-sa, Pedro Zorilla, María Elena Rodríguez-Cabe-zas y Julio Gálvez, del mismo centro, además de Mónica Olivares, de Biosearch (Granada).

“Lactobacillus fermentum es capaz de reducir la hipersensibilidad visceral y mejorar la respuesta inmune alterada en SII”¿En qué contexto se enmarca esta investigación?

El síndrome del intestino irritable (SII) es un trastorno funcional del aparato digestivo de alta prevalencia. Debido a los decepcionantes resultados obtenidos con los tratamientos farmacológicos dispo-nibles hoy en día, la utilización de medicinas alternativas se está convirtiendo en una opción atractiva para muchos pacientes. En este sentido, ¿cuál era el objetivo del trabajo?

El objetivo del estudio fue evaluar los efectos de en un modelo experimental de síndrome de intestino irritable en ratas inducido por administración intracolónica de ácido deoxicólico (DCA).


Se administró DCA una vez al día durante 3 días consecutivos a ratas machos Sprague Dawley (240-320 g), y luego fueros dividi-das en diferentes grupos experimentales: un grupo tratado (n = 10), que recibió por vía oral el probiótico a 109 UFC por día; un grupo sano y un grupo de control con SII que no recibió ningún tratamiento.

¿Qué variables se midieron?

Una y dos semanas después, se analizó de manera semi-cuantita-tiva el reflejo abdominal a la distensión colorrectal (CRD); además, se evaluó el dolor referido con filamentos de Von Frey. Transcurri-das dos semanas de tratamiento, todas las ratas se sacrificaron y se evaluó la expresión de diferentes marcadores en el tejido coló-nico por qPCR.

¿Y cuáles fueron los resultados?

En ambos casos, las ratas que recibieron DCA del grupo control mostraron valores más altos en comparación con las ratas control. Tras una o dos semanas de tratamiento, el grupo tratado mostró una reducción de los valores de CRD y del dolor referido con res-pecto al control. Los resultados de Qpcr revelaron que el Lactoba-cillus fermentum indujo un aumento de la expresión de COX -2 y de TLR3 y TLR4. Además, el probiótico fue capaz de restablecer significativamente la expresión reducida de las mucinas, MUC-2 y MUC-3.

¿Qué indican estos datos?

En conclusión, Lactobacillus fermentum fue capaz de reducir la hipersensibilidad visceral, así como mejorar la respuesta inmune alterada claramente implicada en el síndrome de intestino irritable.

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MARTA TORAL Departamento de Farmacología, Facultad

de Farmacia, Universidad de Granada

La sesión de inmunonutrición continuó con la intervención de Marta Toral, del Departamento de Farmacología de la Universidad de Grana-da, que presentó un trabajo sobre la mejora de la disfunción endotelial inducida por endotoxi-na bacteriana mediante el empleo del probióti-co Lactobacillus coryniformis CECT5711. En la investigación también figuran como firmantes Miguel Romero, Manuel Sánchez, Rosario Jimé-nez y Juan Duarte, del mismo centro, además de Julio Gálvez, del CIBER-EHD de la Universidad de Granada, y Mónica Olivares, del Departa-mento de Investigación de Biosearch.

“Lactobacillus coryniformis CECT5711 protege el endotelio al reducir la sensibilidad vascular al LPS para inducir estrés oxidativo y disfunción endotelial”

¿Por qué surge esta investigación?

Se ha demostrado que los probióticos ejercen un efecto bene-ficioso en distintas alteraciones, además de poder controlar la endotoxemia metabólica. Elevadas concentraciones plasmáticas del lipopolisacárido (LPS) actúa en la pared vascular, provocan-do estrés oxidativo y disfunción endotelial. Numerosos estudios han demostrado cómo los probióticos son capaces de modular la respuesta al LPS a través del receptor tipo Toll 4 (toll-like receptor, TLR4) en el intestino. Sin embargo, no está claro si el probiótico reduce la señalización de TLR4 en células fuera del tracto gas-trointestinal.

En este sentido, ¿qué se proponían?

Nos planteamos como objetivo del estudio evaluar los efectos del probiótico, Lactobacillus coryniformis CECT5711, en la disfunción endotelial inducida por LPS.

¿Qué materiales y métodos utilizaron para ello?

Utilizamos ratones machos, C57BL/6J, de diez semanas de edad. Los animales fueron divididos en dos grupos experimentales (n=14): control y control-tratado. Los ratones tratados recibieron oralmente el probiótico a la dosis de 108 CFU/día. Tras dos sema-nas de tratamiento, a siete ratones de cada grupo se les adminis-tró intraperitonealmente LPS a la dosis de 10mg/kg o el vehículo correspondiente, durante cuatro horas antes del sacrificio. Al final del tratamiento, se llevaron a cabo estudios de reactividad vascular y producción vascular de superóxido, así como la expresión de distintos genes y proteínas a nivel vascular.


L. coryniformis previno la disfunción endotelial observada en el grupo LPS, estudiada a través de la respuesta vasodilatadora de-pendiente de endotelio y óxido nítrico inducia por acetilcolina en anillos de aorta de cada uno de los grupos experimentales. Estas diferencias fueron suprimidas por la apocinina. Además, el trata-miento con el probiótico restauró el aumento de los niveles vascu-lares de superóxido derivados de la actividad del sistema NADPH observado en el grupo LPS. L. coryniformis inhibió la expresión vascular génica y proteica de NOX-1, TLR4, y la fosfoliración de IκBα inducida por LPS.

¿Qué conclusiones extraen de este trabajo?

Nuestro estudio demuestra que L. coryniformis CECT5711 pre-senta un efecto protector del endotelio al reducir la sensibilidad vascular al LPS para inducir estrés oxidativo y disfunción endotelial.35


NOEMÍ REDONDO Grupo de Inmunonutrición ICTAN-CSIC

Las comunicaciones de la sesión de inmunonutri-ción concluyeron con la intervención de Noemí Redondo, del Grupo de Inmunonutrición del Ins-tituto de Ciencia y Tecnología de los Alimentos y Nutrición (ICTAN-CSIC), quien presentó un trabajo sobre “Efectos del consumo de la cepa Lactobacillus coryniformis CECT5711 en la res-puesta immune de adultos sanos”. En la investi-gación también figuran como firmantes Jorge R. Mujico, Ligia D. Díaz, Aurora Hernández, Ali-na Georghe, Esther Nova y Ascensión Marcos, del mismo instituto, además de Marta Bermejo, de la Unidad de Vigilancia de la Salud del CSIC, y Mª Paz Díaz Ropero y Mónica Olivares, de Bio-search S.A. (Granada).

“El consumo de Lactobacillus coryniformis CECT5711 podría actuar como un posible coadyuvante para la vacuna de hepatitis A en adultos sanos”¿En qué contexto se enmarca esta investigación?

Entre las diversas funciones atribuidas a los probióticos, cabe des-tacar su función inmunológica sobre la salud, aunque dicha res-puesta es dependiente del tipo de cepa utilizada. Se enmarca en el posible papel inmunológico atribuido al consumo de bacterias probióticas sobre la salud, el cual es dependiente del tipo de cepa utilizada.

En ese sentido, ¿cuál era el objetivo del trabajo?

El principal objetivo del estudio era analizar el efecto del consumo durante 6 semanas de una cepa determinada, Lactobacillus cory-niformis CECT5711, sobre la respuesta inmune de adultos sanos en un modelo de vacuna de Hepatitis A.


120 adultos sanos se distribuyeron de forma aleatorizada en tres grupos: un grupo placebo, un grupo probiótico y un grupo mixto. Las muestras de sangre se extrajeron al inicio del estudio, después de 2 semanas de tratamiento justo antes de la vacunación y al final del tratamiento después de 4 semanas después de la vacunación.

¿Qué tipo de variables midieron y a través de qué método?

Se llevaron a cabo diferentes análisis para medir la actividad in-munológica: la actividad fagocítica y la actividad Natural Killer, los niveles de citoquinas utilizando la tecnología Luminex, las subpo-blaciones de linfocitos con anticuerpos monoclonales y los anti-cuerpos específicos de la vacuna con ELISA competitiva. Los da-tos se analizaron utilizando el método estadístico de Anova de una vía y el test no paramétrico de Kruskal Wallis para las variables con distribución normal y no normal respectivamente.


Respecto a la actividad fagocítica y natural killer, no hubo diferen-cias entre los grupos a lo largo del tratamiento. En cuanto a los niveles de citoquinas, tampoco se encontraron diferencias, pero sí se observaron cambios en los niveles de linfocitos B (P<0.05) después de las 6 semanas de tratamiento en el grupo Mixto com-parado con el grupo placebo, junto con una tendencia a aumentar de los valores de anticuerpos específicos de la Hepatitis A en dicho grupo (P<0.1).


Estos resultados sugieren que el consumo de la cepa L. corynifor-mis CECT5711 antes de la vacunación tuvo un mayor efecto en la mejora de la respuesta inmune específica y podría actuar como un posible coadyuvante para la vacuna en adultos sanos.

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ALFONSO CLEMENTE Estación Experimental del Zaidín (CSIC)

En el marco del V Workshop “Probióticos, Pre-bióticos y Salud. Evidencia Científica” también se han presentado las bases del consenso científico impulsado por la SEPyP para definir el concep-to, las propiedades y los efectos beneficiosos de los prebióticos. Esta sociedad científica ya definió en su momento, con amplia participación científica, el concepto de probiótico. Para hacer lo mismo en el caso de los prebióticos constituyó un grupo de trabajo que ha presentado sus primeras conclu-siones en Valencia. Alfonso Clemente, miembro del grupo coordinado por Nieves Corzo (CIAL), fue el encargado de hacer la presentación.

Consenso SEPyP sobre prebióticos: concepto, propiedades y efectos beneficiosos

¿Por qué surge este documento de consenso y cuáles son sus objetivos?

Era una necesidad que habían expresado tanto el comité científico de la SEPyP como muchos miembros de la sociedad, un interés lógico teniendo en cuenta el antecedente del documento de pro-bióticos. Entre los objetivos que nos proponíamos destacan el de recoger la información existente y de relevancia en la literatura, dar lugar a un material de referencia en castellano, contribuir a la fusión de conocimientos de distintas áreas (academia/industria) y crear un foro de discusión sobre el estado actual del tema.

Ha dado mucha importancia a la multidisciplinariedad del gru-po, ¿qué áreas están representadas en el mismo y quiénes lo forman?

El enfoque multidisciplinar ha sido particularmente relevante en este trabajo de consenso cubriendo áreas tan diversas como agroalimentación, medicina, industria, microbiología, enzimología y química analítica. El grupo, muy activo, lo coordina Nieves Corzo (CIAL), y lo constituyen : José Luis Alonso (Universidad de Vigo), Fernando Azpiroz (Hospital Valle de Hebrón), María Ángeles Calvo (Universidad Autónoma de Barcelona), Manuel Cirici (Beneo (CAI)), Rosaura Leis (H. Clínico Universitario de Santiago), Felipe Lom-bó (Instituto Universitario de Oncología de Asturias), Inmaculada Mateos (Universidad Complutense de Madrid), Francisco José Plou (ICP, CSIC), Araceli Redondo (Universidad Complutense de Madrid), Patricia Ruas (IPLA, CSIC), Pilar Rupérez (ICTAN, CSIC), María Luz Sanz (IQOG, CSIC) y yo mismo que pertenezco a la Estación Experimental del Zaidín (CSIC).

A modo de índice, y ya que hablamos de un documento, ¿qué epígrafes destacan en este consenso?

Los epígrafes principales de este documento son los siguientes:

- Concepto de prebiótico- Utilización de prebióticos por la microbiota intestinal- Oligosacáridos como prebióticos- Carbohidratos prebióticos emergentes y candidatos- Análisis y caracterización de carbohidratos prebióticos- Evaluación del efecto prebiótico - Efectos beneficiosos de los prebióticos- Perspectivas futuras de investigación

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El análisis y la caracterización es otro capítulo importante en el documento.

Sí, en esta sección se refleja la enorme complejidad de las mez-clas con las que estamos trabajando. Hablamos de di- y trisacári-dos, que pueden llegar incluso hasta a oligosacáridos de grado de polimerización 8. Ese análisis y caracterización es de vital impor-tancia, ya que existe una relación fundamental entre estructura y funcionalidad. El grado de complejidad llega a ser tal, que incluso en algunos trisacáridos no se logra completar el análisis. Dicha complejidad aumenta a medida que va aumentando el grado de polimerización. Por ello para el análisis de estas mezclas comple-jas de oligosacáridos se utilizan técnicas muy diversas tales como cromatografía de gases, cromatografía líquida, espectrometría de masas y RMN.

El documento también hace referencia a cómo se debe eva-luar el efecto prebiótico, ¿cuál debe ser el proceso?

Se han desarrollado un gran número de modelos para evaluar la fermentación (o biodegradabilidad) intestinal de los prebióticos. En la figura que proponemos se reflejan las diferentes fases a seguir para evaluar y validar el carácter prebiótico de un compuesto. En primer lugar, se realizan estudios in vitro, para el escrutinio y se-lección de sustratos con potencial prebiótico, que posteriormente deben ser validados en modelos animales. Para finalizar, el sus-trato seleccionado, con los modelos anteriores, sería candidato para llevar a cabo los estudios de intervención en humanos que permitan evaluar su eficacia en el sitio de acción y demostrar cien-tíficamente su capacidad prebiótica. Esta “hoja de ruta” es similar a la guía de evaluación de probióticos propuesta por otros grupos de expertos científicos (FAO-WHO, 2006).

En cuanto a los efectos beneficiosos (locales y sistémicos), según recoge el documento, ¿qué beneficios están avalados y recogidos en la literatura científica?

En cuanto al concepto de prebiótico ha citado distintas defini-ciones como la de la FAO de 2008 o la de la WGO de 2011, que ya hablan de cambios en la microbiota intestinal con efectos beneficiosos en la salud. En definitiva ¿qué requisitos deben cumplirse para que un ingrediente o alimento pueda conside-rarse como prebiótico?

1. No ser hidrolizado o absorbido en el tracto gastrointestinal su-perior (esófago, estómago y duodeno). Debe ser resistente a la acidez gástrica, a la hidrólisis por enzimas digestivas y no absor-berse en el intestino delgado.2. Ser fermentado selectivamente por bacterias beneficiosas de la microbiota intestinal (modulación de microbiota).3. Ser capaz de inducir efectos fisiológicos beneficiosos para la salud (locales y/o sistémicos).

Respecto a los oligosacáridos, ¿cuáles son los aceptados por la comunidad científica?

La inulina, que está presente en la achicoria, espárrago, ajo o en otros vegetales; la oligofructosa, que bien puede ser derivada de la hidrólisis de la inulina o bien obtenida mediante síntesis enzimática a partir de la sacarosa; los galacto-oligosacáridos (GOS), que son una mezcla compleja de oligosacáridos que normalmente provie-nen de la lactosa por reacciones de transgalactosilación, y la lactu-losa que es un disacárido derivado por isomerización de la lactosa.

El documento también recoge el papel relevante de los oliga-sacáridos de leche humana, ¿por qué destacan?

Se han incluido en el documento por su relevancia en salud en las primeras etapas de la vida y su alto contenido, en niveles de 12-14 gramos por litro de leche materna. Es una mezcla muy compleja, habiendo sido descritos en torno a unos 1.000 compuestos, si tenemos en cuenta los distintos isómeros presentes en la leche humana. De ellos se han caracterizado parcialmente más de 200 siendo completamente identificados unos 80 compuestos. Pre-sentan una estructura diversa en composición, grado de polimeri-zación y presencia de distintos tipos de enlaces. Otras leches de origen animal (vaca, oveja, cabra) presentan un menor contenido en oligosacáridos En un proyecto financiado actualmente por la Junta de Andalucía hemos visto que oligosacáridos procedentes de la leche de cabra presentan similitudes estructurales en relación a los presentes en leche humana, de ahí el interés de estudiar y profundizar en este tipo de oligosacáridos.

Respecto a los carbohidratos prebióticos emergentes, ¿cuá-les destacan?

Los xilooligosacáridos (XOS), la lactosacarosa (LS), los isomaltoo-ligosacáridos (IMOS), los oligosacáridos de soja pero también pre-sentes en otras leguminosas (guisantes, lentejas, garbanzos, etc) y los glucooligosacáridos.Existe otra clasificación, que habla de candidatos a prebióticos y que incluye a los pectooligosacáridos (POS), la polidextrosa (PDX), los exopolisacáridos bacterianos (EPS) y los oligosacáridos de ma-croalgas.

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- Generan ácidos grasos de cadena corta con propiedades anti-inflamatorias, disminución del pH así como la inhibición del creci-miento de especies potencialmente patógenas.- Reducen el tiempo de tránsito intestinal (lactulosa, EFSA). - Parecen reducir el riesgo de padecer ciertas enfermedades in-testinales (cáncer de colon, enfermedades inflamatorias crónicas: colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn…).- Protegen frente a infecciones intestinales. - Protegen frente a la diarrea del viajero u otras -producidas por el uso de antibióticos-. Capacidad inmunomoduladora.- Favorecen la absorción de minerales (Ca, Mg, Fe, Zn).

¿Cuáles son las perspectivas futuras de investigación en pre-bióticos?

Hemos destacado las siguientes:1. Se debe mejorar los métodos de análisis para caracterizar los carbohidratos, facilitando la asignación de propiedades bioactivas 2. El desarrollo de prebióticos de “segunda generación” y el posi-ble diseño de prebióticos con beneficios concretos en salud3. El uso de plataformas ómicas que nos ayuden a evaluar sus posibles efectos beneficiosos 4. La búsqueda de biomarcadores de salud5. Realizar ensayos de intervención humana robustos6. Estudiar nuevas aplicaciones potenciales de los compuestos prebióticos: diabetes mellitus de tipo 2, enfermedades autoinmu-nes, alergias, etc.

Para todo ello, ha concluido, será fundamental el trabajo mul-tidisciplinar de investigadores, profesionales médicos y admi-nistración, ¿en qué sentido?

El trabajo multidisciplinar será fundamental con el objeto de esta-blecer la ingesta óptima diaria de prebióticos, monitorizar sus be-neficios en salud y evaluar posibles efectos secundarios, además de evaluar sus beneficios en salud a largo plazo.

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PETRA LOUIS Rowett Institute of Nutrition and Health.

University of Aberdeen (Scotland)

La sesión de Microbiología y Veterinaria, mode-rada por Mª Carmen Collado, del Instituto de Agroquímica y Tecnología de los Alimentos del CSIC, comenzó con la conferencia de una exper-ta internacional procedente de Escocia, Petra Louis, del Instituto de Nutrición y Salud de la Universidad de Aberdeen, quien centró su ex-posición en el consorcio microbiano en el tracto gastrointestinal. Durante su intervención repasó distintas investigaciones que revelan que tanto la dieta como los prebióticos pueden afectar a la mi-crobiota y modular su equilibrio.

“Los cambios en la ingesta de macronutrientes en la dieta pueden traer consigo cambios rápidos y espectaculares en la composición de la microbiota”

Ha comenzado su exposición hablando sobre el desarrollo y la composición de la microbiota intestinal, ¿qué llama la aten-ción en este proceso?

La microbiota intestinal de los seres humanos se desarrolla en un entorno estrictamente anaeróbico. A pesar de la gran diversidad microbiana existente, y del hecho de que se registra una gran con-centración de bacterias en el colon humano, no presentan una variedad absoluta demasiado alta, y se limitan en su mayoría a los filos Firmicutes y Bacteroidetes. No obstante, en términos relati-vos, sí existe una variedad significativa de especies bacterianas en el cuerpo de un huésped sano, con cifras que, de acuerdo con diferentes autores, van desde los cientos a los miles de especies.

¿De qué efectos beneficiosos para el huésped, producidos por la microbiota, podemos hablar?

Entre sus muchos efectos beneficiosos para el huésped, la micro-biota actúa como barrera contra los patógenos, favorece la esti-mulación inmune, participa en la liberación y transformación de los fitoquímicos de la dieta, xenobióticos y metabolitos del huésped, y participa en la producción de ácidos grasos de cadena corta: acetato, propionato y butirato. Estos ácidos, a su vez, llevan a cabo diferentes funciones, tales como el suministro energético y la regulación del metabolismo del huésped (sensación de sacie-dad, metabolismo lipídico, condicionamiento del comportamiento, etc.), cuentan con efectos antiinflamatorios y anti-carcinogénicos, y también reducen el pH del medio (inhibiendo así la presencia de patógenos y favoreciendo la disponibilidad de calcio).

¿Algún ejemplo para ilustrar esta capacidad de la microbiota intestinal?

Un ejemplo es la actividad de la bacteria Faecalibacterium praus-nitzii en la producción de butirato con potencial efecto anti-carci-nogénico. Otras bacterias pueden mediar en la degradación de polisacáridos para la producción de ácidos grasos de cadena cor-ta, tales como Roseburia hominis, aunque no lo hacen de forma directa sino a través de los intermediarios del proceso de degrada-ción. Un tercer tipo de bacterias son capaces de transformar los ácidos orgánicos que aparecen como resultado de la degradación de polisacáridos en otros ácidos grasos de cadena corta. Es el caso de la Eubacterium hallii, capaz de transformar el lactato en

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heces de los sujetos reveló que contenían elevados niveles de al-midón, en contraste con el resto de sujetos del estudio, en los que dicho porcentaje era prácticamente nulo.

¿Determinaron a qué se debían esos cambios?

Un análisis in vitro realizado posteriormente en las heces de uno de estos dos sujetos mostró que la especie bacteriana Rumino-coccus bromii fue la única capaz de restaurar los niveles de de-gradación normales para el almidón. Postulamos, en vista de es-tos resultados, que Ruminococcus bromii puede resultar clave en el proceso de utilización del almidón, pero es necesario resaltar también la enorme variabilidad individual observada entre los dis-tintos pacientes, que da como resultado, por una parte, grandes diferencias en las respuestas bacterianas, así como la posibilidad de que los cambios causados por los prebióticos traigan consigo consecuencias diferentes en la salud del huésped.

¿Qué conclusiones destacaría hasta el momento de esta línea de trabajo en la que está centrada su grupo?

En primer lugar, podemos concluir, de forma general, que el efec-to de los prebióticos en la microbiota intestinal es más complejo de lo que originalmente se pensaba, y que es posible que ciertas bacterias productoras de butirato puedan contribuir a los efectos beneficiosos para la salud. Asimismo, en segundo lugar, hay que destacar que los cambios en la ingesta de macronutrientes en la dieta pueden traer consigo cambios rápidos y espectaculares en la composición de la microbiota, con los consiguientes efectos sobre la salud. En tercer lugar, hemos observado también que la degra-dación de ciertos carbohidratos de la dieta parece requerir la pre-sencia de algunas especies clave, como Ruminococcus bromii en el caso del almidón resistente. Por último, se sugiere que la varia-ción interindividual en la microbiota intestinal es un factor importan-te en el efecto de la dieta y los prebióticos, por lo que se requieren más investigaciones en el campo de la nutrición personalizada.

butirato. Todos estos procesos bacterianos tienen un efecto direc-to en el pH del medio, que se reduce, lo cual altera el equilibrio mi-crobiológico previo al aumentar, en líneas generales, la proporción de Firmicutes, a la vez que reduce la presencia de Bacteroidetes.

Ha señalado que tanto la dieta como los prebióticos pueden afectar a la microbiota y alterar su equilibrio, ¿alguna inves-tigación al respecto?

He presentado un trabajo que consistió en administrar un suple-mento de inulina prebiótica (10 g/día) a la dieta habitual en 12 voluntarios durante 3 semanas para observar el efecto global en su microbiota. Los cambios en la microbiota se midieron a través de PCR cuantitativa en tiempo real, y analizamos específicamen-te como parte del estudio algunas bacterias capaces de producir butirato.


Un primer resultado reveló un aumento significativo en algunas de estas bacterias productoras de butirato. Sin embargo, la produc-ción de butirato no es en sí misma un rasgo genéticamente cohe-rente para la clasificación de las bacterias, por encontrarse casi siempre en compañía de otras bacterias que no lo producen, de forma que sólo algunas de ellas pueden identificarse con claridad. El uso de PCR resultó no ser suficientemente específico, por lo que recurrimos al gen que codifica la enzima butiril-CoA acetato transferasa para cuantificar las bacterias productoras de butirato.

¿Y qué les llamó la atención?

Como fruto del análisis de ese gen se mostró la existencia de mu-chos clones que se corresponden a productores de butirato que se han llegado a cultivar. De hecho, nuestro estudio revela que la percepción de que ciertas bacterias sean o no cultivables puede no ser realmente el motivo determinante para su cultivo, sino la abundancia y prevalencia de algunas bacterias en comparación con otras. El resultado del estudio reveló que la incorporación de inulina prebiótica a la dieta sirvió para normalizar la producción de butirato en aquellos sujetos en los que ésta era menor de lo ha-bitual, aumentando así el potencial efecto anti-carcinogénico de estos ácidos grasos de cadena corta.

Durante su exposición también se ha referido a otro trabajo sobre el consumo de almidón resistente…

Sí, llevamos a cabo un segundo estudio, en esta ocasión para comparar los efectos de una dieta rica en almidón resistente con los de una dieta sin almidón pero rica en polisacáridos, en un gru-po de 14 pacientes obesos, varones y con síndrome metabólico. El estudio demostraba que la presencia de bacterias Ruminococ-cus del clúster IV aumentaba significativamente durante el período de dieta rica en almidón resistente. En dos sujetos del estudio, no obstante, no se observó dicho incremento. Un análisis de las

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ARANCHA HEVIA Instituto de Productos Lácteos de Asturias

(IPLA-CSIC)

La primera de las comunicaciones orales pre-sentadas durante la sesión de Microbiología y Veterinaria corrió a cargo de Arancha Hevia, del Instituto de Productos Lácteos de Asturias (IPLA-CSIC), que expuso los resultados del tra-bajo titulado “Disbiosis intestinal asociada a lupus eritematoso sistémico”. En el estudio tam-bién figuran como firmantes Silvia Arboleya, Miguel Gueimonde, Borja Sánchez y Abelardo Margolles, del mismo centro español, además de Christian Milani, Sabrina Duranti, Fran-cesca Turroni y Marco Ventura, del Laboratorio de Probiogenómica de la Universidad de Parma (Italia). En él también han participado Patricia López, Adriana Cuervo, Sonia González y Ana Suárez, del Departamento de Biología Funcional de la Universidad de Oviedo.

“Modular poblaciones bacterianas intestinales diana podría ser beneficioso para pacientes con lupus”

¿Por qué una investigación centrada en el lupus?

Porque el lupus eritematoso sistémico (LES) es el prototipo de en-fermedad autoinmune crónica en humanos, caracterizada por una presencia de células inmunes hiperreactivas y una respuesta de autoanticuerpos aberrante contra antígenos celulares citoplasmá-ticos y nucleares, incluyendo ADNds.

¿Cuál es la relación de la microbiota con esta enfermedad?

Aunque hay cada vez una mayor evidencia que sugiere que la mi-crobiota intestinal podría afectar a los síntomas y progresión de la enfermedad, el cómo y porqué la comunidad microbiana influye en la fisiología del LES, aún no ha sido descifrados a día de hoy.

En este sentido, ¿cuál era el objetivo del trabajo?

Hemos realizado un estudio transversal con el objetivo de determi-nar si existe una disbiosis intestinal asociada al LES en pacientes en periodo inactivo de la enfermedad.


Se reclutó un grupo representativo de pacientes con LES conside-rando estrictos criterios de inclusión y exclusión, y se utilizó un pro-tocolo optimizado de análisis del gen 16S rRNA con la plataforma Ion Torrent para obtener el perfil microbiano fecal de los pacientes y compararlo con el de un grupo de individuos control, del mismo sexo y edad.


Como resultado vimos un descenso significativo del ratio Firmi-cutes/Bacteroidetes en individuos con LES. A nivel de género, la microbiota intestinal de lúpicos se caracteriza por un incremento significativo de Bacteroides. De manera notable se detectó una disminución de algunos géneros de Actinobacteria y Firmicutes. Esta disbiosis se refleja en una sobrerepresentación de rutas me-tabólicas de fosforilación oxidativa y utilización de glicanos en la microbiota de lúpicos, así como de canales iónicos y transporta-dores acoplados a iones.

¿Qué revelan estos datos?

Este es el primer estudio que describe una disbiosis intestinal aso-ciada al LES. Nuestros resultados sugieren que estrategias orien-tadas a modular poblaciones bacterianas intestinales diana po-drían ser utilizadas como terapias adyuvantes al actual tratamiento farmacológico del LES.

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CLAUDIO HIDALGO Departamento de Microbiología y Bioquímica.

Instituto de Productos Lácteos de Asturias (IPLA-CSIC)

La sesión de Microbiología y Veterinaria conti-nuó con la comunicación presentada por Clau-dio Hidalgo, del Instituto de Productos Lácteos de Asturias (IPLA-CSIC), que se centró en la “Síntesis de exopolisacáridos en Bifidobacterium spp.: funciones biológicas y análisis genómico”. En el trabajo también figuran como firmantes B. Sánchez, Abelardo Margolles y P. Ruas Madiedo, del mismo centro español, además de C. Milani y M. Ventura, del Laboratorio de Probiogenómica de la Universidad de Parma (Italia).

“Parece que los EPS son cruciales para entender la fisiología de las bifidobacterias y su interacción con el hospedador”

¿Por qué una investigación centrada en los exopolisacáridos (EPS)?

Los exopolisacáridos (EPS) bacterianos han sido objeto de interés científico por la implicación de estos polímeros exocelulares tanto en la formación de biopelículas como por actuar como factores de virulencia en ciertos microorganismos. Recientemente se está investigando la relevancia de su papel como mediadores de la co-municación entre bacterias productoras y el ambiente que las ro-dea, así como su contribución en la salud del hospedador.

Y dentro de este campo, ¿su grupo en qué aspecto se ha cen-trado?

En nuestro grupo estamos estudiando la síntesis de EPS en el género Bifidobacterium, que son habitantes del tracto gastrointes-tinal humano al que pertenecen cepas específicas con característi-cas probióticas. Las bifidobacterias sintetizan EPS para protegerse durante el tránsito por el tracto gastrointestinal, lo que favorece su persistencia en el intestino humano.

En este sentido, ¿qué han observado en esta investigación?

El análisis in silico de 28 genomas pertenecientes a 10 especies/subespecies de bifidobacterias nos ha permitido comprobar la gran ubiquidad de clusters eps cuyo contenido en G+C (∼50-56%) es menor que el del genoma competo (∼60%). Se ha encontra-do una amplia variabilidad en el número de genes y organización estructural de los clusters eps entre especies. Sin embargo, las 9 cepas de B. animalis subsp. lactis presentaron idéntica arquitec-tura genética.

¿Algún otro dato de interés?

Por otro lado, también estamos estudiando las propiedades bioló-gicas de los EPS de bifidobacterias que estarían relacionadas con la modulación de la respuesta inmune del hospedador, así como la de su microbiota. Estos polímeros parece que son cruciales para entender la fisiología de las bifidobacterias y su interacción con el hospedador.

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GONZALO N. BIDART Instituto de Agroquímica y Tecnología

de los Alimentos CSIC

El análisis molecular y funcional de los genes y rutas metabólicas implicados en el metabolismo de Lacto-N-biosa y Galacto-N-biosa en Lacto-bacillus casei fue el tema en el que se centró la comunicación de Gonzalo N. Bidart, del Insti-tuto de Agroquímica y Tecnología de Alimentos (CSIC), que firma el trabajo junto a J. Rodríguez Díaz, V. Monedero y M.J. Yebra, pertenecientes al mismo instituto.

“Lactobacillus casei BL23 es capaz de utilizar lacto-N-biosa o galacto-N-biosa como únicas fuentes de carbono en el medio de cultivo”


Lactobacillus casei BL23 tiene reconocidas propiedades probióti-cas y su capacidad de colonizar el tracto gastrointestinal de niños recién nacidos depende de su habilidad para utilizar los carbohi-dratos disponibles durante la lactancia materna. En este sentido, la lacto-N-biosa es el núcleo mayoritario de los oligosacáridos de leche humana, mientras que la galacto-N-biosa es el núcleo prin-cipal de la O-glicosilación de proteínas presentes en este fluido biológico.

¿Su grupo qué ha demostrado al respecto?

Por una parte hemos sido el primer grupo que ha demostrado la capacidad de bacterias del género Lactobacillus de utilizar estos disacáridos presentes en la leche humana como fuente de carbo-no. Del mismo modo hemos caracterizado las rutas metabólicas de ambos disacáridos en la cepa probiótica Lactobacillus casei BL23, donde hemos encontrado un operón responsable en parte del metabolismo de ambos disacáridos.

¿A nivel genómico qué han determinado?

A nivel genómico hemos determinado y caracterizado cada uno de los genes presentes en el operón descrito en el trabajo, que codi-fica las enzimas que participan en el metabolismo de ambos disa-cáridos. Dentro del operón hemos encontrado un gen regulador de la familia GntR, una galactosamina-6P deaminasa/isomerasa, una N-acetil-galactosamina-6P deacetilasa, una fosfo-β-galactosidasa de la familia 35 y cuatro genes que codifican para las distintas su-bunidades de la enzima II de un sistema de transporte PTS.

¿Algún otro dato más de interés?

Para los oligosacáridos de la leche humana, de los cuales forma parte la lacto-N-biosa, han sido caracterizadas varias propiedades bioactivas entre las que se encuentran la actividad prebiótica, inhi-bitoria de adhesión de bacterias enteropatógenas e inmunomodu-ladora entre otras. Es también importante destacar que hoy en día esta clase de oligosacáridos no se encuentra presente en ninguna de las leches de fórmulas disponibles en el mercado, debido a la falta de un método eficiente para obtener los mismos.

¿Qué implicaciones pueden tener estos datos?

Estos datos sugieren un potencial prebiótico para la galacto-N-biosa y lacto-N-biosa, que a diferencia de los utilizados hoy en día como los FOS y GOS, serían capaces no solo de estimular eficientemente el crecimiento de bacterias del género Bifidobacte-rium, sino también del género Lactobacillus. Por otra parte a partir del conocimiento de las enzimas involucradas en el metabolismo de estos oligosacáridos podrían desarrollarse procesos dirigidos a lograr la síntesis de los mismos. 44


JIMMY BECERRA Instituto de Agroquímica y Tecnología

de los Alimentos CSIC

Otra de las comunicaciones presentadas en la sesión de Microbiología y Veterinaria estuvo centrada en la “Síntesis y purificación a escala semi-preparativa de fucosil- oligosacáridos: eva-luación in vitro de sus propiedades prebióticas y actividad anti-adhesiva”. Jimmy Becerra, del Instituto de Agroquímica y Tecnología de Ali-mentos (IATA) del CSIC, fue el encargado de presentar este estudio en el que también figuran como firmantes J. M. Coll-Marqués, J. Rodríguez Díaz, V. Monedero y M.J. Yebra, todos ellos del mismo instituto.

“Los fucosil-oligosacáridos fucosil-alfa-1,3/1,6-N-acetilglucosamina presentan un efecto prebiótico y actividad anti-adhesiva contra patógenos intestinales”

¿Cómo surge esta investigación?

Los fucosil-oligosacáridos (FUS) son componentes de la leche hu-mana y se han propuesto para ellos varias funciones biológicas importantes, destacando un efecto prebiótico y actividad anti-ad-hesiva contra patógenos intestinales.

¿En qué ha consistido el trabajo?

Tres α-L-fucosidasas, AlfA, AlfB y AlfC de Lactobacillus casei BL23 han sido clonadas y purificadas previamente, las cuales hidrolizan in vitro FUS naturales y presentan también actividad de transfuco-silación. Con el objeto de obtener cantidades adecuadas de FUS para ensayar su actividad biológica, las reacciones de transfuco-silación de AlfB y AlfC se escalaron y los productos resultantes se purificaron por HPLC semipreparativo. Se obtuvo un rendimiento de 4.2 mg/ml de fucosil-α-1,3-N-acetilglucosamina y 9.3 mg/ml de fucosil-α-1,6-N-acetilglucosamina.

¿Qué trataron de determinar?

Esos disacáridos fueron utilizados en ensayos in vitro para deter-minar sus propiedades prebióticas potenciales con 20 cepas de Lactobacillus y su capacidad de inhibir la unión de cepas entero-patógenas de Escherichia coli (EPEC) a la línea celular intestinal humana HT-29.

¿Qué observaron al respecto?

Se determinó que 8 de las 20 cepas de Lactobacillus crecen en presencia de FUS, de las cuales, 6 utilizaron fucosil-α-1,3-N-acetilglucosamina, 1 fucosil-α-1,6-N-acetilglucosamina y 1 ambos disacáridos. Curiosamente, al igual que habíamos observado para la cepa BL23, todas las cepas de L. casei excretan L-fucosa al me-dio de cultivo, metabolizando únicamente la N-acetilglucosamina, mientras que las cepas de Lactobacillus rhamnosus consumen tanto la L-fucosa como la N-acetilglucosamina del disacárido. En cuanto a la actividad anti-adhesiva de los FUS, se evidenció que ambos disacáridos presentan distintos niveles de inhibición de la adhesión de cepas EPEC a la línea celular HT-29.

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CLARA G. DE LOS REYES-GAVILÁN Instituto de Productos Lácteos de Asturias CSIC

Clara G de los Reyes-Gavilán ha presentado una comunicación sobre la habilidad de cepas de Bifidobacterium para modular la microbiota intestinal y la producción de mediadores de res-puesta inmune en distintos grupos poblacionales de neonatos, a partir de estudios in vitro. En la investigación también figuran como firmantes S. Arboleya, N. Salazar y M. Gueimonde, del mis-mo instituto, además de B. Bahrami, S. Macfar-lane y G. Macfarlane, del Grupo de Microbiolo-gía y Biología del Intestino de la Universidad de Dundee (Reino Unido), y G. Solís, del Servicio de Pediatría del Hospital Universitario Central de Asturias (SESPA) y N. Fernández, del Servicio de Pediatría del Hospital de Cabueñes (SESPA)

“Hemos visto importantes diferencias en la modulación de la microbiota intestinal, dependiendo de la microbiota basal del grupo poblacional”


La microbiota intestinal desempeña un papel clave en el mante-nimiento de la salud. La colonización microbiana del intestino del neonato empieza inmediatamente después del parto e influye en el desarrollo del intestino y del sistema inmune. Algunos estudios han evidenciado importantes diferencias en el establecimiento de esta microbiota en distintos grupos de neonatos.

Dentro de este ámbito, ¿qué se proponían con el trabajo y cómo lo llevaron a cabo?

Determinar el impacto de la adición de cepas bifidobacterias pro-bióticas sobre la microbiota intestinal de diferentes grupos de re-cién nacidos y adultos así como el posible efecto modulador de la microbiota intestinal sobre la capacidad de estas cepas de bifido-bacterias de estimular la producción de marcadores de respues-ta inmune por células del epitelio intestinal del colon. Para ello, realizamos cultivos fecales a pH libre, adicionados con cepas de bifidobacterias de distintas especies.

¿Qué observaron?

En dichos cultivos, encontramos importantes diferencias en la modulación de la microbiota intestinal y en los niveles de ácidos grasos de cadena corta producidos, dependiendo de la microbio-ta basal del grupo poblacional (adultos, niños prematuros, niños alimentados con leche de fórmula y niños alimentados con leche materna). De hecho, el grupo de población fue predominante res-pecto a las características de la bifidobacteria añadida, en la deter-minación de la dinámica de la microbiota intestinal.

¿Algún otro dato a destacar?

Sí, a pesar de lo anterior, la adición de cepas de bifidobacterias pertenecientes a dos especies habituales en el intestino del neo-nato (B. bifidum y B. breve) en un modelo de colon distal en cultivo continuo produjo efectos claramente diferentes, tanto en la diná-mica de la microbiota fecal como en la producción de mediadores de respuesta inmune por la línea de epitelio intestinal HT-29 en contacto con el cultivo fecal.

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LUCÍA GUADAMURO Instituto de Productos Lácteos de Asturias CSIC

La primera parte de la sesión de Microbiología y Veterinaria concluyó con la intervención de Lucía Guadamuro, del Departamento de Micro-biología y Bioquímica del Instituto de Productos Lácteos de Asturias (IPLA-CSIC), que presentó el trabajo titulado “Menopausia, isoflavonas, equol y poblaciones microbianas intestinales”. En él también figuran como firmantes A.B. Fló-rez, B. Mayo y S. Delgado, del mismo centro, además de A. Suárez, Servicio de Digestivo del Hospital Universitario Central de Asturias, y J. M. Fernández Iñarrea, del Área de Obstetricia y Ginecología del Hospital de Cabueñes (Asturias).

“Nuestro trabajo sugiere un metabolismo de las isoflavonas personal, pudiendo participar microorganismos distintos en cada individuo”

¿Cuál es el origen de este trabajo, bajo un título tan sugerente?

Las isoflavonas de soja (daidzeína, genisteína, gliciteína) se em-plean en el tratamiento de los síntomas de la menopausia debido a su actividad estrogénica. El equol, derivado de la daidzeína, es el compuesto con mayor actividad hormonal. Sin embargo, sólo entre un 20 y un 30% de las mujeres occidentales son capaces de producirlo. Esta producción está relacionada con la presencia de poblaciones microbianas en el intestino involucradas en su meta-bolismo que no están bien caracterizadas.

En este sentido, ¿qué se proponían con la investigación?

El trabajo forma parte de un estudio sobre los efectos que el tra-tamiento con isoflavonas de soja durante la menopausia tienen sobre las poblaciones microbianas intestinales y cómo estas po-blaciones determinan el metabolismo de las isoflavonas. En este trabajo en concreto se estudiaron los niveles de isoflavonas y equol en la orina a lo largo de seis meses de un grupo de 18 mujeres menopáusicas en tratamiento con un concentrado comercial de isoflavonas (Fisiogen, Zambon; 80 mg). Durante este periodo, se estudiaron también mediante PCR a tiempo real los grupos bac-terianos más representativos en heces [bacterias totales, grupo Atopobium, filum Bacteroidetes, bifidobacterias, clostridios (gru-pos Clostridium cocoides y Clostridium leptum), enterobacterias y lactobacilos].


En función de los valores de equol en orina, las mujeres se asig-naron a cuatro categorías: altamente productoras (1000-40.000 nM), productoras de niveles bajos y constantes (20-80 nM), no productoras (0-10 nM) y degradadoras (100-3 nM). Estas catego-rías, sin embargo, no han podido correlacionarse de forma clara con cambios en las poblaciones bacterianas analizadas.

¿Qué indican estos datos en su opinión?

Los resultados sugieren que, aún resultando en los mismos pro-ductos finales, las poblaciones que metabolizan las isoflavonas pueden ser distintas en cada mujer. Este resultado complica una posible intervención dirigida a aumentar, por ejemplo, los biotipos productores de equol.

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EMMA ALLEN-VERCOE Associate Professor Dept. of Molecular and Cellular

Biology. University of Guelph (Canadá)

La experta canadiense Emma Allen-Vercoe, del Departamento de Biología Molecular y Celular de la Universidad de Guelph, fue la encargada de abrir la segunda parte de la sesión sobre Micro-biología y Veterinaria. Su intervención se centró en los trasplantes de microbiota intestinal, a tra-vés de una nueva técnica que supone un paso más en el clásico trasplante fecal, permite reproducir in vivo un ecosistema microbiano terapéutico, con el empleo de probióticos, que se ha demos-trado eficaz en los casos presentado en la charla.

“En el futuro el estudio funcional del ecosistema microbiano será un elemento crítico de todas las revisiones médicas integrales”

Su planteamiento en la charla ha partido de la importancia de la microbiota en la salud humana, ¿en qué sentido?

Pues sí, al contrario de lo que se puede pensar, la salud de los seres humanos depende de la salud de su microbiota. En realidad, los humanos somos meros receptáculos para los microbios que transportamos y debemos cambiar nuestro enfoque al respecto. Existen más bacterias en el intestino humano que gente en todo el planeta. Existe una inmensa diversidad, con entre 500 y 1.000 especies diferentes de bacterias alojadas en los intestinos.

¿Cómo debe ser esa relación con la microbiota?

La relación con nuestra microbiota se basa fundamentalmente en el mantenimiento de un equilibrio que mantenga esa gran di-versidad. Ello dará lugar a un ecosistema sano con redundancia funcional que tendrá como resultado mayor resistencia ante las enfermedades. Por el contrario, una baja diversidad de especies bacterianas puede dar lugar a un ecosistema pobre en el que el desequilibrio traiga consigo una discapacidad funcional que impli-que una mayor susceptibilidad ante las enfermedades.

¿En la práctica es así? ¿Somos responsables de nuestra mi-crobiota?

A pesar de la importancia vital de nuestros microbios, el uso con-tinuado de diferentes productos antisépticos en nuestra vida diaria genera un entorno hostil para su desarrollo. Los casos de extinción bacteriana masiva en el ser humano tienen un gran impacto en la salud, y estos casos pueden deberse a diferentes causas, cuyo origen se intenta explicar a través de diferentes hipótesis, como la de la higiene, que defiende que estamos evitando que se produz-ca una adecuada colonización bacteriana al mantener niveles de limpieza demasiado elevados, o la de la microbiota desaparecida, que mantiene que estamos alterando los adecuados procesos de colonización entre generaciones mediante el uso de antibióticos. Como ya es sabido, este uso de antibióticos, especialmente en las primeras etapas de la infancia, puede resultar especialmente problemático. Una incidencia repetida de ataques a la microbiota causa inmen-sos cambios de los que el ecosistema intestinal no puede recupe-rarse. No obstante, la función del ecosistema se mantiene a través de los diferentes individuos.

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este hecho, nos hemos preguntado si podemos curar una enfer-medad al sustituir la microbiota dañada. Esta reflexión es el origen de la terapia de los ecosistemas microbianos, o MET, en sus siglas en inglés.

Para tratar de responder a esa cuestión han comenzado cen-trándose en la infección por Clostridium difficile, ¿por qué en este proceso?

Porque es una enfermedad de la que sabemos que el origen es una alteración del ecosistema intestinal. Se trata de una bacte-ria Gram positiva estrictamente anaerobia que forma esporas y es parte de la microbiota intestinal. La falta de diversidad en el ecosistema intestinal permite un crecimiento desmesurado de la Clostridium difficile en su nicho, y la producción de toxinas por parte de esta bacteria daña el epitelio intestinal. El trasplante fecal o la bacterioterapia fecal pueden emplearse en el tratamiento de esta infección.

¿En qué consiste la técnica?

En el proceso se selecciona un donante, que por lo general es un familiar cercano y se somete a análisis en busca de diferentes enfermedades que pueden transmitirse a través de las heces. Si el donante pasa los análisis, se coordina el momento de la donación al paciente. El mecanismo de aplicación consiste en un homoge-neizado fresco que se aplica al paciente en un plazo de menos de 6 horas, bien a través de un enema rectal o de una colonoscopia, un tubo nasogástrico o por vía oral, en cápsulas. Los resultados son favorables en más de un 90% de los casos, con una rápida resolución de la ICD y muy pocos casos de recidiva.

Pero ustedes han querido dar un paso más…

Sí, porque esta terapia fecal resulta un tanto primitiva y no está del todo definida. Además, es difícil de regular y controlar y no es popular entre el personal médico. Así pues, cabe plantearse si podemos emplear microbios cultivados para crear heces falsas o artificiales. En colaboración con el equipo de la Dra. Elaine Petrof, de la Queen’s University, nuestro plan era desarrollar el concepto de trasplante fecal mediante el uso de bacterias puras: los probió-ticos. Estos probióticos, agrupados bajo el nombre en inglés de “RePOOPulate”, se cultivan a partir de un único individuo sano y controlado, y con ello se intenta mitigar las reservas existentes con respecto a la seguridad, reproducibilidad, modo de administración y fecha de caducidad del tratamiento. No se trata en realidad de una idea nueva, pero en el pasado la barrera que impedía su desa-rrollo era la percepción de que las bacterias intestinales no podían cultivarse.

¿Ustedes sí lo han conseguido?

Sí, nuestro estudio ha logrado cultivar con éxito diferentes bacte-rias en los “robointestinos”, entre las que destacan la Dorea longi-catena, Eubacterium eligens, Eubacterium limosum, Eubacterium rectale, Eubacterium ventriosum, Roseburia faecalis, Roseburia intestinalis y Ruminococcus torques.

¿En su opinión en qué punto se encuentra el conocimiento so-bre la microbiota?

La cuestión no es tanto discernir qué especies se encuentran en ese ecosistema, sino qué están haciendo esas especies. Dicho de otro modo, para comprender la salud, debemos estudiar los ecosistemas intestinales. Hasta la fecha sólo hemos accedido a la información biológica de entre un 30 y un 50% de la microbiota intestinal, y se entiende que el resto de microorganismos que for-man parte de ella no se pueden cultivar, o mejor dicho, todavía no se han logrado cultivar.

¿Por qué esa dificultad en el cultivo?

Los microbios en estado natural casi siempre se dan como parte de comunidades microbianas, suelen beneficiarse de las asocia-ciones con otros microbios o con sus huéspedes y su crecimiento no es normalmente logarítmico. Además, casi nunca tienen acce-so a fuentes ricas en nutrientes. Sin embargo, en el laboratorio, los microbios casi siempre se mantienen de forma independiente en forma de cultivo puro, y por lo general deben adaptarse para sobrevivir en dicho entorno. Además, su crecimiento a menudo es logarítmico y se les proporciona acceso a fuentes ricas en nu-trientes.

¿Qué relación tiene esto con la línea de trabajo de su grupo?

Nuestro trabajo trata de replicar las condiciones naturales del in-testino humano en lo que hemos llamado “robointestinos”, unos recipientes o biorreactores que actúan como un quimiostato y son capaces de hacer crecer comunidades de microorganismos en cultivo continuo, agregando medio de cultivo nuevo constan-temente con una frecuencia biológicamente relevante y eliminando de forma constante el cultivo líquido gastado o residual, lo que significa que el volumen del cultivo se mantiene constante. Me-diante el uso de estos quimiostatos podemos lograr comunidades estables y constantes en las que el crecimiento mantiene una tasa constante y los parámetros también se mantienen estables.

¿Cómo se alimentan esos “robointestinos”?

Se alimentan con heces frescas y tratan de imitar el ecosistema del intestino distal. Se trata, por supuesto, de un sistema sin huésped, que puede emplearse para fomentar el crecimiento de anaerobios intestinales especialmente exigentes.

Basados en este método de reproducción, están estudiando la posibilidad de trasplantar la microbiota, ¿cuál es el funda-mento de este novedoso abordaje?

Existe una asociación entre los ecosistemas disfuncionales y varias enfermedades, como el síndrome del intestino irritable, el asma, la diabetes, la obesidad o el autismo, por mencionar sólo algunos. La relación entre la causa y el efecto, no obstante, todavía no se ha descifrado por completo, y es posible que una mala alimentación combinada con el mal uso de los antibióticos sea la clave. Ante

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microbiota y reforzar estos ecosistemas mediante, por ejemplo, una dieta a medida. Además, no se emplearán antibióticos de amplio espectro sin aplicar también las medidas necesarias para proteger la microbiota. Dicho futuro será la cuna en la que naz-ca la “simbiontología”, una nueva especialidad médica, fruto de la combinación de la medicina, la ecología microbiana y las ciencias nutricionales.

¿Lo han aplicado ya a algún caso concreto?

Sí, tratamos a dos mujeres de edad avanzada con infecciones re-currentes y graves por C. difficile con RePOOPulate, para poner a prueba nuestro diseño en abril y junio de 2011. El RePOOPulate se creó en Guelph, se trasladó al Hospital General de Kingston y se administró una dosis de 100 ml a través de una colonoscopia. Ambas pacientes se recuperaron en un plazo de dos días y se han mantenido libres de la infección por C. difficile desde entonces, a pesar de numerosas exposiciones posteriores a antibióticos.

¿Qué significa esto?

Que el quimiostato ha demostrado ser un buen sustituto para el entorno in vivo, y este ecosistema terapéutico ha probado ser ca-paz de colonizar a nuestras pacientes. Además, presenta ventajas con respecto a los probióticos estándar al haber mostrado su efi-cacia, y también con respecto a la bacterioterapia fecal, al ser un método más seguro, definido, controlable, reproducible, estable y que goza de mayor aceptación.

De cara al futuro, ¿por dónde van a continuar sus trabajos?

En la actualidad estamos a la espera de poder proseguir con los ensayos clínicos, aunque nos encontramos ante algunas dificulta-des, como el hecho de que el RePOOPulate no se encuentra ins-crito en ninguna categoría de clasificación de medicamentos. Sin embargo, el servicio de salud canadiense está colaborando con nosotros para determinar los parámetros de seguridad necesarios. Además, estamos entablando relaciones con nuevos socios co-merciales para tratar de acelerar el proceso.Asimismo, estamos estudiando las fórmulas aplicadas hasta ahora en un intento por incrementar la diversidad con nuevos cultivos aislados, incluyendo bacterias que muestran actividad anti-C. diffi-cile in vitro. Además, estamos desarrollando modelos de estudio de los “robointestinos” con animales, en un intento por imitar la destrucción del ecosistema intestinal y su consiguiente restaura-ción con RePOOPulate.

¿Para cuándo su aplicación a otras enfermedades?

También estamos desarrollando diferentes ecosistemas de distin-tos donantes, y estudiando el potencial que esta terapia tiene en el tratamiento de otras enfermedades que presentan la disbiosis intestinal como rasgo principal, tales como la obesidad, el autismo regresivo o la enfermedad del intestino irritable.

¿Cómo modificará esto la clínica digestiva del futuro?

Idealmente, en el futuro, el estudio funcional del ecosistema mi-crobiano será un elemento crítico de todas las revisiones médicas integrales. Será posible mejorar la funcionalidad del ecosistema en el mantenimiento de la salud mediante la manipulación de la

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Mª CARMEN COLLADO Instituto de Agroquímica y Tecnología de los

Alimentos (IATA-CSIC)

Las comunicaciones orales de la segunda parte de la sesión de Microbiología y Veterinaria co-menzaron con la intervención de María Carmen Collado, del Grupo de Probióticos y Bacterias Lácticas del Instituto de Agroquímica y Tecnolo-gía de los Alimentos, quien presentó un trabajo sobre identificación de perfiles transcriptómicos y de microbiota en muestras biológicas no inva-sivas de niños prematuros de bajo peso con sepsis neonatal frente a sus gemelos control sanos. En el estudio también han participado C. Bäuerl y G. Pérez Martínez, del mismo centro, además de M. Cernada, M. Gormaz y M. Vento, del Grupo de Perinatología y del Departamento de Neonato-logía del Hospital Universitario y Politécnico La Fe. También figura como firmante E. Serna, del Instituto de Investigación Sanitaria (INCLIVA) de Valencia.

“Nuestros resultados sugieren una relación directa entre la microbiota y la sepsis neonatal, que puede servir para el diagnóstico temprano”

¿Cuál es la importancia de la sepsis neonatal que centra la investigación?

La sepsis neonatal es la primera causa de morbilidad y mortali-dad en recién nacidos prematuros. Alteraciones en el patrón de colonización intestinal podrían aumentar el riesgo de infecciones microbianas y de sepsis y colitis necrotizante en niños prematuros.

En ese sentido, ¿qué se proponían con este estudio?

En el trabajo, mediante el empleo de muestras no invasivas, ana-lizamos el impacto de la sepsis neonatal en la microbiota y en la respuesta de las células epiteliales intestinales en niños prematu-ros de bajo peso que se compararon con sus correspondientes hermanos gemelos sanos.

¿Qué revelaron los resultados?

Los resultados mostraron diferencias estadísticamente significati-vas en el microbioma analizado mediante qPCR y pirosecuencia-ción del gen 16S ribosomal así como de la respuesta génica en enterocitos exfoliados obtenido mediante microarrays. Los datos obtenidos permitieron distinguir los niños prematuros con sepsis frente de sus gemelos sanos, a pesar de la gran variabilidad en-tre las parejas gemelares. La diversidad microbiana fue diferente en ambos grupos, observándose que las Proteobacterias (familia Enterobacteriaceae) fueron mayoritarias en el grupo de sepsis que también presentaba menores niveles de Bifidobacterium spp.

¿Algún otro dato de interés?

Sí, además, se identificó un conjunto específico de 510 genes ano-tados, expresados de forma diferencial en los niños con sepsis frente a sus gemelos sanos.

¿Qué indican estas observaciones?

Nuestros resultados sugieren una relación directa entre la micro-biota y la enfermedad y la necesidad de una mayor investigación con el objetivo de confirmar algunos de los biomarcadores que se han detectado en este trabajo utilizando métodos mínimamente invasivos que contribuyan al diagnóstico temprano de la enferme-dad y nuevas estrategias que reduzcan su incidencia en los niños prematuros.

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MARINA DÍEZ MUNICIO Instituto de Investigación en Ciencias

de la Alimentación (CIAL)

“Procedimiento de síntesis eficiente de kojibio-sa y estudio de su efecto sobre el crecimiento de bacterias lácticas y bifidobacterias” es el título del trabajo presentado por Marina Díez Muni-cio, del Instituto de Investigación en Ciencias de la Alimentación (CIAL), entre cuyos firmantes también figuran T. García Cayuela, A. Montilla, M.C. Martínez Cuesta, C. Peláez, T. Requena, M. Herrero y F.J. Moreno, todos del mismo ins-tituto.

“Hemos desarrollado un nuevo procedimiento de síntesis de kojibiosa que permite obtener este disacárido con potencial prebiótico de forma sencilla, económica y con alto rendimiento”

¿Por qué un estudio sobre la kojibiosa? ¿Cuál es su impor-tancia?

La kojibiosa es un disacárido formado por dos unidades de gluco-sa, unidas por un enlace a(1-2), que se encuentra de forma natural, aunque en niveles muy bajos, en alimentos como la miel o la cer-veza1. Este disacárido puede sintetizarse enzimáticamente aunque los métodos disponibles actualmente utilizan sustratos muy cos-tosos, son tediosos, llevan implícita la formación de subproductos y/o tienen una baja eficiencia de producción2. Esos hechos expli-can la limitada disponibilidad comercial de la kojibiosa y su elevado precio, por lo que su empleo está muy limitado a pesar de las apli-caciones potenciales que presenta en la industria agro-alimentaria y farmacéutica. La kojibiosa podría emplearse para prevenir pa-tologías del sistema gastrointestinal, controlar el metabolismo de carbohidratos y en el tratamiento de enfermedades víricas.

¿Qué novedad pretendían aportar con este trabajo?

En este trabajo se ha desarrollado un nuevo proceso de síntesis de kojibiosa, económico y fácilmente escalable, que da lugar a la producción de kojibiosa con un alto rendimiento (38%) y grado de pureza (60-99%), valores muy superiores a los de los métodos actualmente utilizados. Por tanto, este procedimiento permite la obtención de kojibiosa a un precio muy inferior al de su actual valor de mercado, posibilitando así el desarrollo de productos que per-mitan explotar su potencial actividad en el campo de la nutrición y la salud.

¿En qué consiste este nuevo proceso?

Hemos desarrollado un método de obtención de kojibiosa que em-plea como sustratos de partida sacarosa y lactosa. La transgluco-silación enzimática de la lactosa empleando una enzima dextran-sacarasa de Leuconostoc mesenteroides da lugar a un trisacárido que es un derivado galactosilado de la kojibiosa. La posterior libe-ración de kojibiosa se produce por tratamiento con la levadura Sa-ccharomyces cerevisiae e hidrólisis con la enzima β-galactosidasa de Kluyveromyces lactis.

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En relación con los probióticos y prebióticos, ¿cuál es la im-portancia de este disacárido y del proceso desarrollado?

La kojibiosa presenta un alto potencial prebiótico por su resistencia a la digestión gastrointestinal y la estimulación selectiva de bacterias beneficiosas probióticas, como Bifidobacterium y Lactobacillus.Los estudios de fermentación in vitro con cultivos puros de di-ferentes microorganismos probióticos realizados en este trabajo han permitido demostrar que la kojibiosa sintetizada mediante el procedimiento de síntesis desarrollado es selectivamente metabo-lizada por varias cepas de lactobacilos (Lactobacillus acidophilus, L. reuteri, L. rhamnosus, L. casei), así como por Bifidobacterium breve y Streptococcus salivarius. Por tanto, el procedimiento desarrollado se puede considerar como un método eficaz para la obtención de nuevos ingredientes alimentarios con potencial prebiótico para mejorar la salud gas-trointestinal.

Referencias:1. Díez-Municio et al., 2013. Patente Española P201331333.2. Nakada et al., 2003. Chapter 9 in Oligosaccharides in Food and Agriculture, ACS Symposium Series.

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VICTORIA SELMA Centro de Edafología y Biología Aplicada

del Segura CEBAS (CSIC)

Descripción de dos especies bacterianas del intes-tino humano capaces de transformar ácido elági-co en urolitinas, es el estudio llevado a cabo por el Grupo de Calidad, Seguridad y Bioactividad de Alimentos vegetales del Centro de Edafología y Biología Aplicada del Segura CEBAS (CSIC), que ha presentado Victoria Selma durante la se-sión. Entre los firmantes también figuran D. Bel-trán, R. García-Villalba, J.C. Espín y F.A. Tomás Barberán.

“Hemos descrito dos especies bacterianas pertenecientes a la familia Coriobacteriaceae, capaces de transformar ácido elágico en distintas urolitinas”

¿En qué contexto se enmarca este trabajo?

La identificación de las bacterias de la microbiota intestinal capa-ces de producir urolitinas es un objetivo de interés científico de-bido a los efectos de estos metabolitos sobre la salud humana (protección cardiovascular y propiedades anti-inflamatorias y anti-carcinogénicas) y al potencial desarrollo de alimentos funcionales.

¿La producción de estos metabolitos por parte del organismo por qué se carateriza?

La capacidad de producción de urolitinas es muy variable entre individuos y esto se ha asociado a las diferencias interindividuales en la microbiota colónica. Esto puede implicar que el consumo de alimentos como nueces, granada, fresas, etc, que contienen ácido elágico, pueda ejercer distintos efectos en la salud según la microbiota de las personas. Por tanto, la identificación de las especies bacterianas encargadas en la producción de urolitinas podría ser útil para convertir a las personas no productoras en productoras y así beneficiarse de la actividad biológica descrita para las urolitinas.

En ese sentido, ¿qué se proponían con la investigación y qué han conseguido?

En este estudio llevado a cabo en el marco de los proyectos CSD2007-00063 (Fun-C-Food; Consolider Ingenio 2010) y CICYT AGL2011-22447, describimos dos especies bacterianas per-tenecientes a la familia Coriobacteriaceae, aisladas del intestino humano, capaces de transformar ácido elágico en distintas uroli-tinas. Por este motivo, una de ellas, se ha denominado Gordoni-bacter urolithinfaciens, sp. nov. con la cepa CEBAS1/15PT (=DSM 27213T =CCUG 64261T) como la cepa tipo de G. urolithinfaciens. La producción de urolitinas por G. urolithinfaciens y la otra espe-cie descrita hasta la fecha dentro del género Gordonibacter, Gor-donibacter pamelaeae DSM 19378T, ocurre en fase estacionaria de crecimiento siendo por tanto metabolitos secundarios de es-tas bacterias. Hemos desarrollado un método de producción de urolitinas basado en el uso de dichos microorganismos. Tanto el uso de dichos microorganismos para producir urolitinas como el método para conseguirlo forman parte de una solicitud de patente (P201330400) a nombre del CSIC.

¿Algún otro dato de interés derivado de este estudio?

El análisis HPLC-MS mostró la producción in vitro de distintas urolitinas tales como la pentahidroxi-urolitina (urolitina M-5), te-trahidroxi-urolitina (urolitina M-6) y urolitina C en cultivos puros de dichas bacterias. En consecuencia, para la producción de otras urolitinas como la urolitina A, urolitina B e isourolitina A son nece-sarias otras bacterias u otras condiciones de cultivo.54


MONTSERRAT NÁCHER Centro de Investigaciones Biológicas (CIB-CSIC)

Montserrat Nácher, del Centro de Investigaciones Biológicas (CIB-CSIC) y del Instituto de Agro-química y Tecnología de Alimentos (IATA-CSIC), presentó un trabajo sobre el potencial antivírico del dextrano producido por Lactobacillus sakei MN1 frente a virus de salmónidos. En el estudio también figuran como firmantes N.A. Ballesteros, N. Peña Vidal, A. Prieto, S. Rodríguez, S.I. Pérez y P. López, del CIB-CSIC, además de R. Aznar, del IATA-CSIC y de la Universidad de Valencia.

“El dextrano producido por Lactobacillus sakei MN1 ha demostrado tener actividad antiviral frente a virus de salmónidos”

¿Cuál es el origen de este trabajo?

Algunas bacterias ácido lácticas son capaces de sintetizar, a partir de sacarosa, homopolisacáridos denominados dextranos, com-puestos de glucosa con enlaces α-(1,6) en su cadena principal y con ramificaciones α-(1,3), α-(1,4) y/o α-(1,2). Estos biopolímeros se utilizan como espesantes, sustitutos de plasma y como matri-ces en columnas de Sephadex®.

¿Qué objetivo se proponían?

El objetivo del presente estudio era ensayar (tanto in vitro como in vivo) la actividad antiviral del dextrano producido por Lactobacillus sakei MN1 frente a dos de los virus de salmónidos que provocan grandes pérdidas económicas en acuicultura: el virus de la necro-sis pancreática infecciosa (VNPI) y el virus de la necrosis hemato-poyética infecciosa (VNHI).


En los estudios in vitro, se utilizaron diferentes concentraciones de los dextranos producidos por L. sakei MN1 y otras bacterias lácticas, así como de dextranos comerciales.


Todos los dextranos ensayados mostraron actividad antiviral fren-te al VNPI, requiriéndose una concentración entre 1 y 3 mg mL-1 para obtener un 50% de inhibición. Sin embargo, frente al VNHI el dextrano producido por L. sakei MN1 mostró una actividad antiviral marcadamente superior, obteniéndose una inhibición del 50% con una concentración de tan sólo 0,5 mg mL-1.

¿E in vivo qué se vio?

En los estudios in vivo, se suministraron dos concentraciones del dextrano producido por L. sakei MN1 (50 μg/pez y 10 μg/pez), du-rante los tres días previos a la infección con cada uno de los virus ensayados. Con dosis de 50 μg/pez se obtuvieron porcentajes de supervivencia relativa del 70 % para VNHI y del 85 % para VNPI.

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GEMMA GONZÁLEZ Facultad de Veterinaria de la Universitat

Autònoma de Barcelona

“Evaluación de la capacidad de Bacillus cereus var. Toyoi para modificar la invasividad de Es-cherichia coli K88 en células IPEC-J2” fue el trabajo presentado dentro de la sesión de Micro-biología y Veterinaria por Gemma González, del Servei de Nutrició i Benestar Animal (SNiBA) de la Universitat Autònoma de Barcelona (UAB). Del mismo centro también figuran como firman-tes D. Solá Oriol y S.M. Martín Orúe. Los otros autores son M. Cerdá Cuéllar, del Centre de Re-cerca en Sanitat Animal (CReSA, UAB-IRTA) y del Institut de Recerca i Tecnologia Agroalimen-tàries (IRTA), además de M. Castillo, de Rubi-num S.A. (Barcelona)

“El probiótico Bacillus cereus var. Toyoi podría reducir la invasividad de E. coli a nivel ileal”

¿De qué hipótesis partían en este estudio?

Como hipótesis se consideró que Bacillus cereus var. Toyoi (Toyo) puede interferir en los mecanismos de autoinducción bacteriana (quorum sensing (QS)) inhibiendo la expresión de factores de viru-lencia de microorganismos patógenos.

¿Cómo lo estudiaron?

Se realizaron dos ensayos in vitro. En el primero se evaluó la in-vasividad de E. coli (fimbriada (K88) o no fimbriada (NF)) sobre un cultivo celular de epitelio intestinal porcino (IPEC-J2) tras cultivarse con su propio sobrenadante, el de cultivos puros de Toyo, o de sus co-incubados. En un segundo ensayo se evaluó la invasividad ce-lular tras la incubación de E. coli (K88 y NF) con el sobrenadante de la digesta ileal o colónica obtenida de 32 lechones suplementados o no con el probiótico (109 UFC/g).

¿Qué resultados obtuvieron en el primer ensayo?

En el primer ensayo se observó un incremento de la invasividad de ambas cepas de E. coli cuando fueron crecidas con su propio sobrenadante, sugiriendo una activación de los sistemas de QS de tipo autoinductor-2 (AI-2). Sin embargo, cuando se crecieron con el sobrenadante de co-incubaciones de E. coli y Toyo no se observaron incrementos en la invasividad.

¿Y en el segundo?

En el segundo ensayo, la incubación de E. coli con los sobrena-dantes ileales de los animales suplementados, produjo una reduc-ción de la invasividad en comparación con los control. No se vieron diferencias con los sobrenadantes de colon.


Los resultados obtenidos sugieren que el probiótico Bacillus ce-reus var. Toyoi podría reducir la invasividad de E. coli a nivel ileal ac-tuando sobre los mecanismos de comunicación bacteriana y más particularmente degradando o inhibiendo las señales tipo AI-2.

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EMILI BARBA Facultad de Veterinaria de la Universidad

Autónoma de Barcelona

El Servicio de Nutrición y Bienestar Animal del Departamento de Ciencia Animal y de los Ali-mentos, de la Universidad Autónoma de Barcelo-na, cerró la sesión de Microbiología y Veterinaria con una comunicación centrada en la “Evalua-ción de la eficacia de Bacillus Licheniformis o butirato sódico frente a Salmonella Typhimu-rium en lechones”. La presentación la hizo Emili Barba, al que acompañan entre los firmantes L. Castillejos y S. M. Orúe, del mismo centro, ade-más de V.F. Buttow Roll, de la Universidad Fede-ral de Pelotas (Brasil), y J.J. Mallo, de Norel S.A. (Madrid).

“La administración de Bacillus licheniformis o de butirato sódico protegido puede reducir la colonización y excreción de Salmonella Typhimurium en lechones”

¿Cuál era el objetivo del trabajo?

El objetivo era evaluar la eficacia de Bacillus licheniformis (Proporc; Norel S.A.) o del butirato sódico (Gustor BP70; Norel S.A.) frente a Salmonella Typhimurium en lechones.


Se utilizaron 72 lechones (28 días) distribuidos en 24 corrales y 3 grupos experimentales: CTR sin aditivos; PRO (1 kg/Tm de PRO-PORC equivalente a 109 UFC/kg) y BUT (3kg/Tm de GUSTOR BP70 70% butirato sódico protegido con grasa vegetal). Tras una semana de adaptación, los animales se inocularon oralmente con Salmonella Typhimurium (1 x 108 UFC).

¿Qué variables midieron?

Durante el ensayo (16 días) se monitorizó el consumo y el peso de los animales. Tras la inoculación se evaluó la consistencia fecal, la temperatura rectal (24 y 72 h post-inoculación, PI) y la excreción de Salmonella (días 1 y 7 PI). Los días 4 y 8 PI se sacrificó un ani-mal de cada corral para valorar la respuesta inflamatoria (TNF-α y Pig-Map plasmáticos) y la presencia de Salmonella en colon.


No se registraron diferencias significativas en los parámetros pro-ductivos ni tampoco en la consistencia fecal, en la temperatura rectal o en los indicadores inflamatorios. Sin embargo sí se obser-vó una reducción en la prevalencia de Salmonella en heces a día 7 PI (75, 75, 100 %; P=0,074) y en colon a día 8 PI (50, 63, 88 %; P=0.043), para PRO, BUT y CTR.


Los resultados obtenidos demuestran que la administración de Bacillus licheniformis (109 UFC/kg) o de butirato sódico protegido (3 ppm) puede reducir la colonización y la excreción de Salmonella Typhimurium en lechones.

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