v8 serum protein spe kit - diachel3) [multi language... · the v8 serum protein spe kit is intended...

V8 Serum Protein SPE Kit

REF 800500

HL-2-2157P 2011-02(3) [Multi Language V8 Serum Protein SPE Kit].indd 1 29/9/11 16:10:52

2



3

ContentsEnglish ..................................................................................................................... 4

Français ..................................................................................................................11

Deutsch ...................................................................................................................19

Italiano ................................................................................................................... 27

Español .................................................................................................................. 35

Português ................................................................................................................41

Ελληνικά ............................................................................................................... 49

Русский ................................................................................................................. 57


4


EnglishINTENDED PURPOSEThe V8 Serum Protein SPE Kit is intended for the separation and quantitation of serum proteins by Capillary Electrophoresis (CE).

Serum contains over 100 individual proteins, each with a specific set of functions which are subject to specific variation in concentration under different pathological conditions1. Since the introduction of moving boundary electrophoresis by Tiselius2, and the subsequent use of zone electrophoresis, serum proteins have been fractionated on the basis of their charge at a particular pH. The V8 Serum Protein SPE Kit utlises an alkaline buffer to separate serum proteins into 6 main classes (albumin, alpha-1 globulin, alpha-2 globulin, beta-1 globulin, beta-2 globulin and gamma globulin). Each of the electrophoretic zones, with the exception of albumin, normally contain at least 2 components. The relative proportions of these fractions have proven useful aids in the diagnosis and prognosis of certain disease states3-5.

WARNINGS AND PRECAUTIONSThe reagents contained in this kit are for in-vitro diagnostic use only. Do not ingest or pipette by mouth any kit component. Wear gloves when handling all kit components. Refer to the product safety data sheet for risk and safety phrases and disposal information.

COMPOSITIONV8 SPE Buffer. REF HL-3-2198SA (1 x 500 tests).1. Each bottle contains enough SPE Buffer for the completion of 500 tests. The buffer is ready for use and should be placed in the appropriate location on the Helena V8 instrument as instructed in the operator manual.V8 SPE Diluent. REF HL-3-2199SA (3 x 20ml).2. Each kit contains enough SPE Diluent for the completion of 500 tests. The diluent is ready for use and should be placed in the appropriate location on the Helena V8 instrument as instructed in the operator manual.Filter. REF HL-3-2130SA (x1).3. The filter unit should be applied to the inlet pipe of the SPE Buffer bottle connector of the Helena V8 instrument as instructed in the operator manual. This filter is single use and should be replaced when the Serum Protein Buffer is replaced.Sample cups. REF HL-3-2134SA (4 x 36).4. The sample cups should be loaded on to the Helena V8 instrument according to the operator manual.


en

5

Other kit components. 5. Each kit contains Instructions for Use.

USAGE MATRIxThe number of tests per bottle of buffer may be less than 500 when system throughput is less than 100 tests per session. Approximate yield per bottle according to number of tests is given below:

100+ tests per session: 500 tests per bottle 60 - 100 tests per session: 450 tests per bottle 40 - 60 tests per session: 400 tests per bottle < 40 tests per session: 350 tests per bottle

STORAGE AND SHELF-LIFEV8 SPE Buffer. REF HL-3-2198SA V8 SPE Diluent. REF HL-3-2199SA The SPE Buffer and SPE Diluent should be stored at 15…30°C and are stable until the expiry date indicated on the label. Opened bottles of Buffer are stable on board the instrument for 6 months at 15…30°C. Opened bottles of Diluent are stable for 6 months at 15…30°C, when capped. SPE Buffer and SPE Diluent are clear, colourless solutions. If changes to the appearance of the SPE Buffer or SPE Diluent are noted, for example cloudiness indicating microbial contamination, discard the liquids. DO NOT FREEZE THE LIQUIDS

ITEMS REQUIRED BUT NOT PROVIDEDREF 830100 V8 Storage Buffer REF 830200 V8 Maintenance Buffer REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack

OPTIONAL ITEMSREF 800501 Supplemental Buffer Pack

REF 800300 V8 Immunodisplacement Kit REF 820500 V8 Free Kappa / Free Lambda Kit REF 821400 V8 Anti IgD / Anti IgE Kit - if conducting serum or urine immunodisplacement

REF 800412 Urine Preparation Buffer SPE REF VS20002 Sartorius VivaSpin 20 Centrifugal Concentrators REF GEHE17-0853-02 GE Healthcare NAP-5 Desalting Columns - if conducting urine protein analysis


6


SAMPLE COLLECTION AND PREPARATIONFor serum protein analysis, freshly collected serum is the specimen of choice as plasma samples will contain a large fibrinogen band between the beta and gamma fractions. Samples can be stored at 2…8°C for up to 7 days and up to 1 month at -20°C. If samples are to be stored frozen, they should be refrigerated immediately and frozen within 8 hours of collection. Storing samples at 2…8°C can result in protein degradation, particularly, but not exclusively of complement fractions. Consequently, after 7 days storage at 2…8°C detection of a distinct beta-2 region may no longer be possible. DO NOT store samples at room temperature - the sample will degrade rapidly. Samples which contain cryoglubulins may become viscous or tubid after refrigeration or freezing. It is advisable to warm these samples to room temperature before analysis. For urine analysis, freshly collected urine (24 hour collection) is the specimen of choice. Samples can be stored at 2…8°C for up to 7 days. For longer storage periods, it is recommended to store samples at -70°C, for up to 1 month. DO NOT store samples at -20°C. Urine samples must be de-salted before analysis on the V8 system, using one of the optional urine preparation buffer and device combinations listed above.

INTERFERING FACTORSHaemolysis may cause false elevation in the alpha-2 and beta fractions.1. Inaccurate results may be obtained on specimens left uncovered, due to 2. evaporation.The presence of radiopaque contrast media can cause the alpha-2 and beta 3. regions of the electropherogram to apppear elevated.

STEP BY STEP PROCEDUREEnsure that the waste container drawer is on-board.1. Before switching on the V8, ensure that Storage Buffer, Maintenance Buffer and 2. disposable cups are on-board and in their correct positions. For correct installation of all consumables, please refer to the operator manual.Launch Platinum 4V and begin a new CE session. In Platinum 4V, select ‘CE 3. SYSTEM’ from the drop down menu, choose ‘DEFAULT METHOD’ and ensure that SPE or SPE Urine is selected depending upon the assay required.Switch on the Helena V8 as instructed in the operator manual.4. For individual test ordering please refer to the operator manual.5.


en

7

When prompted by the V8 (and if required) install the V8 SPE Buffer bottle in to the 6. fluid bottle compartment of the Helena V8 and ensure it is in the correct location. For correct installation of the V8 SPE Buffer bottle, ensure that a fresh filter unit is applied to the inlet pipe of the buffer bottle connector prior to its installation on the Helena V8 (refer to the operator manual).Installation of V8 SPE Buffer bottle will automatically open a ‘DEFINE BUFFER’ 7. window prompt in Platinum 4V. Scan or enter the barcode number into the buffer position field matching the bottle position.Ensure that the appropriate reagent barcode information is loaded into Platinum 4V 8. by selecting ‘CE SESSION’ from the drop down menu. Click ‘DEFINE REAGENTS’ and ensure the barcode information for the diluent has been entered and that the location of the reagent information corresponds with the intended vial location on-board the V8.Remove the lid from the V8 SPE Diluent and ensure that the bottle is placed 9. correctly in the reagent bottle area (please refer to the operator manual). When the V8 is ready to accept samples for operation, the instrument will pulse red.10. Place each primary sample tube into the sample rack ensuring that the barcode is 11. clearly visible through the rack window (please refer to the operator manual).Load sample racks onto the left-hand side of the V8 sample transport area and 12. close lid as instructed in the operator manual.The V8 will automatically commence analysis of all loaded samples, and the results 13. will be transferred to Platinum 4V.After analysis, and if required, initiate V8 shut-down mode by switching off the 14. instrument as instructed in the operator manual.It is important that the V8 is post-conditioned correctly at the end of the day.15. Please refer to the operator manual.

INTERPRETATION OF RESULTSIt is recommended that any evaluation of the CE traces is performed against normal values produced for this method in each individual laboratory. For a complete review of serum protein evaluation, see Ritzmann, S.E, 19825. Studies show that the values are the same for both males and non-pregnant females. Some differences are seen in pregnant females at term and women on oral contraceptives. Age has some effect on normal levels. Cord blood has a decreased total protein, albumin, alpha-2 and beta fractions; slightly increased alpha-1 and normal or increased gamma fraction (largely of maternal origin). The gamma globulins drop rapidly until about 3 months of age, while other fractions have reached adult levels by this time. Adult levels of the gamma globulins are not reached until 10-16 years of age. The albumin decreases and beta globulin increases over the age of 40.


8


QUALITY CONTROLHelena Biosciences CEtrol Serum Controls (Cat. no. 802400 and 802500) can be used to verify all phases of the Serum Protein procedure. Refer to the package insert for the appropriate assay values.

LIMITATIONSDue to the inherant limitations of resolution and sensitivity of Capillary Electrophoresis, it is theoretically possible that some monoclonal gammopathies may not be detected by this analytical method. If the clinical case presentation is sugestive of a gammopathy the electropherogram should be closely examined for any sign of abnormality. If in doubt, attempt to immunotype any abnormal gammaglobulins present by Immunodisplacement and/or agarose gel Immunofixation.

REFERENCE VALUESUsing 39 normal specimens from male and female donors with an age range of 17-64 years, the following normal ranges were obtained (these are presented as a guideline only):

Protein Fraction Mean (%) ± 2SD Range

Albumin 62.18 54.70 - 69.66

Alpha-1 3.83 2.63 - 5.03

Alpha-2 7.68 4.87 - 10.48

Beta-1 7.27 5.35 - 9.19

Beta-2 4.75 2.38 - 7.11

Gamma 14.30 9.69 - 18.90

PERFORMANCE CHARACTERISTICSHelena Biosciences has determined the following performance characteristics as a guideline. Each laboratory should establish its own performance data.


9

en

Precision:

Within Assay Reproducibility (n = 96)

Between Assay Reproducibility (n = 120)

Mean (%) C.V. (%) Mean (%) C.V. (%)

Albumin 63.8 0.5 62.4 1.3

Alpha-1 3.8 3.6 4.5 3.3

Alpha-2 7.2 1.3 10.2 4.9

Beta-1 7.3 1.6 6.5 6.7

Beta-2 4.1 1.9 4.7 2.5

Gamma 13.9 1.0 11.8 3.5

Sensitivity: The V8 Serum Protein SPE Kit can detect serum proteins at levels of 208µg/ml (0.208g/L).

Accuracy: Comparison against a commercially available semi-automated serum protein gel method gave:

y = 1.1964x -4.9686, r2 = 0.9308

BIBLIOGRAPHYAlper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1. 1974; 291 : 287-290.Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, 2. Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : 524.Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and 3. Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, 1979.Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 4. pages 579-582, 1986.Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of 5. Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


10



11

fr

FrançaisUTILISATIONLe V8 Serum Protein SPE Kit (Kit V8 Protéines sériques, SPE) est utilisé pour la séparation et la quantification des protéines sériques par électrophorèse capillaire (CE).

Le sérum contient plus de 100 protéines qui ont chacune des fonctions spécifiques et qui peuvent subir des variations quantitatives en fonction de divers états pathologiques1. Depuis l’introduction par Tiselius2 de la mobilité électrophorétique et l’utilisation postérieure de l’électrophorèse de zone, les protéines sériques sont fractionnées en fonction de leur charge à un pH déterminé. Le kit V8 Serum Protein 6-band Zoom utilise un tampon alcalin pour séparer les protéines sériques en 6 fractions principales (albumine, alpha 1 globuline, alpha 2 globuline, bêta 1 globuline, bêta 2 globuline et gammaglobuline). Chaque fraction, à l’exception de l’albumine, contient normalement au moins 2 composants. La proportion relative de ces différentes fractions peut aider à établir un diagnostic et un pronostic pour certains états pathologiques3-5.

AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONSLes réactifs du kit sont à usage diagnostique in vitro uniquement. Ne pas ingérer ou pipeter à la bouche aucun composant. Porter des gants pour la manipulation de tous les composants du kit. Se reporter aux fiches de sécurité des composants du kit pour la manipulation et l’élimination.

COMPOSITIONV8 SPE Buffer (tampon Protéines sériques, SPE). RÉF HL-3-2198SA 1. (1 x 500 analyses). Chaque flacon contient assez de tampon SPE Buffer pour réaliser 500 analyses. Le tampon est prêt à l’emploi et doit être mis dans l’emplacement approprié de l’instrument Helena V8 comme indiqué dans le manuel d’utilisation.V8 SPE Diluent (diluant Protéines sériques, SPE). RÉF HL-3-2199SA 2. (3 x 20 ml). Chaque kit contient assez de diluant échantillon SPE Diluent pour réaliser 500 analyses. Le diluant échantillon est prêt à l’emploi et doit être mis dans l’emplacement approprié de l’instrument Helena V8 comme indiqué dans le manuel d’utilisation.


12


Filtre. RÉF HL-3-2130SA (x 1).3. Le filtre doit être placé sur le tuyau d’arrivée du raccord du flacon de tampon SPE Buffer de l’instrument Helena V8 comme indiqué dans le manuel d’utilisation. Ce filtre est à usage unique et doit être remplacé lorsque le tampon Protéines sériques est remplacé.Cupules échantillons. RÉF HL-3-2134SA (4 x 36). 4. Les cupules échantillons doivent être chargées sur l’instrument Helena V8 conformément aux instructions du manuel d’utilisation.Autres composants du kit.5. Chaque kit contient une notice d’utilisation.

NOMBRE D’ANALYSES Le nombre d’analyses par flacon de tampon peut être inférieur à 500 lorsque le système travaille avec moins de 100 analyses par session. Le rendement approximatif par flacon en fonction du nombre d’analyses effectuées est indiqué ci-dessous :

Plus de 100 analyses par session : 500 analyses par flacon 60 - 100 analyses par session : 450 analyses par flacon 40 - 60 analyses par session : 400 analyses par flacon Moins de 40 analyses par session : 350 analyses par flacon

STOCKAGE ET CONSERVATIONTampon V8 SP6 Zoom Buffer. RÉF HL-3-2181SA Diluant V8 SP6 Zoom Diluent. RÉF HL-3-2182SA Le tampon SP6 Zoom Buffer et le diluant SP6 Zoom Diluent doivent être conservés à 15…30 °C ; ils sont stables jus-qu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette. Une fois placés dans l’instrument, les flacons ouverts de tampon sont stables 6 mois à 15…30 °C. Les flacons ouverts de diluant sont stables 6 mois à 15…30 °C, s’ils sont rebouchés. Le tampon SP6 Zoom Buffer et le diluant SP6 Zoom Diluent sont des solutions transparentes et incolores. En cas de modification de l’aspect du tampon SP6 Zoom Buffer ou du diluant SP6 Zoom Diluent, par exemple, un aspect floconneux indiquant une contamination bactérienne, jeter la solution. NE PAS CONGELER LES SOLUTIONS.

MATÉRIEL NÉCESSAIRE NON FOURNIRÉF 830100 V8 Storage Buffer RÉF 830200 V8 Maintenance Buffer RÉF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack


13

fr

MATÉRIEL OPTIONNELRÉF 800801 Lot de tampon supplémentaire RÉF 800300 Kit V8 Immunodisplacement (immunodéplacement V8) RÉF 820500 Kit V8 Free Kappa / Free Lambda (anti-kappa libre / anti-lambda libre V8) RÉF 821400 Kit V8 Anti IgD / Anti IgE (anti-IgD / anti-IgE V8) - en cas d’immunodéplacement de sérum ou d’urine

RÉF 800411 Tampon Urine Preparation Buffer SP6 Zoom (préparation d’urine SP6 zoom)RÉF VS20002 Concentrateurs par centrifugation VivaSpin 20 de Sartorius RÉF GEHE 17-0853-02 Colonnes de dessalement NAP-5 de GE Healthcare - en cas d’analyse de protéines sériques

PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONSPour les analyses des protéines sériques, l’utilisation de sérum fraîchement prélevé est fortement recommandée car les échantillons de plasma laissent apparaître une large bande de fibrinogène entre les fractions bêta et gamma. Les échantillons peuvent être conservés 7 jours à 2…8 °C ou 1 mois à 20 °C. S’il est nécessaire de congeler les échantillons, ils doivent être réfrigérés immédiatement et congelés dans les 8 heures suivant le prélèvement. La conservation des échantillons à 2…8 °C peut entraîner une dégradation des protéines, en particulier, mais pas uniquement les fractions du complément. Par conséquent, après 7 jours de conservation à 2…8 °C, la détection d’une zone bêta 2 différenciée risque de ne plus être possible. NE PAS conserver les échantillons à température ambiante, car ils se dégradent rapidement. Les échantillons qui contiennent des cryoglobulines peuvent présenter un aspect visqueux ou trouble après la réfrigé-ration ou la congélation. Il est conseillé de ramener ces échantillons à température ambiante avant d’effectuer l’analy-se.

Pour l’analyse d’urine, l’utilisation d’urine fraîchement prélevée (prélèvement dans les 24 heures) est fortement re-commandée. Les échantillons peuvent être conservés 7 jours à 2…8 °C. Pour une conservation plus longue, il est recommandé de conserver les échantillons à 70 °C, pendant 1 mois maxi-mum. NE PAS conserver les échantillons à 20 °C. Les échantillons d’urine doivent être dessalés avant l’analyse sur l’instrument V8 à l’aide de l’une des combinaisons de tampon de préparation d’urine et de dispositif de dessalement en option indiqués ci-dessus.


14


FACTEURS INTERFÉRENTSEn cas d’hémolyse de l’échantillon, vous risquez d’obtenir des résultats faussement 1. élevés pour les fractions alpha-2 et beta.Vous risquez d’obtenir des résultats erronés avec des échantillons ayant subi une 2. concentration par évaporation.En cas de présence de produit de contraste radio-opaque, il est possible que les 3. zones alpha 2 et bêta de l’électro phorégramme présentent une forte concentration.

MÉTHODOLOGIES’assurer que le chariot du réservoir à déchets est placé sur l’instrument.1. Avant d’allumer le V8, s’assurer qu’il dispose de tampon de stockage, de tampon 2. de maintenance et de cupules jetables correctement mis en place. Consulter le manuel d’utilisation pour savoir comment mettre en place correctement les consommables.Lancer Platinum 4V et initier une nouvelle session d’électrophorèse capillaire (CE). 3. Dans Platinum 4V, sélectionner CE SYSTEM (Système d’électrophorèse capillaire) dans le menu déroulant, cliquer sur DEFAULT METHOD (Méthode par défaut), puis s’assurer que l’option SPE ou SPE Urine est sélectionnée, en fonction de l’analyse requise.Allumer le Helena V8 conformément aux instructions du manuel d’utilisation.4. Consulter le manuel d’utilisation pour savoir comment réaliser une analyse 5. spécifique.Quand le V8 l’indique (et si cela est nécessaire), placer le flacon de tampon V8 6. SPE Buffer dans le compartiment à flacon du V8 en s’assurant qu’il est mis dans l’emplacement correct. Pour une mise en place correcte du flacon de tampon V8 SPE Buffer, s’assurer qu’un filtre neuf est placé sur le tuyau d’arrivée du raccord du flacon de tampon avant de le placer dans l’instrument Helena V8 (consulter le manuel d’utilisation).La mise en place du flacon de tampon V8 SPE Buffer entraîne automatiquement 7. l’ouverture d’une fenêtre DEFINE BUFFER (Définir tampon) dans Platinum 4V. Scanner ou saisir le numéro du code-barre dans le champ d’emplacement de tampon correspondant à l’emplacement du flacon.S’assurer que les informations du code-barre du réactif approprié sont chargées 8. dans Platinum 4V en sélectionnant CE SESSION (Session d’électrophorèse capillaire) dans le menu déroulant. Cliquer sur DEFINE REAGENTS (Définir les réactifs) et s’assurer que les informations du code-barre du diluant ont été saisies et que l’emplacement indiqué du réactif correspond à l’emplacement prévu pour le flacon dans le V8.Enlever le couvercle du diluant V8 SP6 Zoom Diluent et s’assurer que le flacon est 9. correctement mis en place dans la zone des flacons de réactif (consulter le manuel d’utilisation).


15

fr

Lorsque le V8 est prêt à accepter des échantillons pour les analyser, il clignote en 10. rouge.Placer chaque tube d’échantillon initial dans le portoir en s’assurant que le 11. code-barre est clairement visible dans la fenêtre du portoir (consulter le manuel d’utilisation).Charger les portoirs échantillons sur le côté gauche de la zone de transport des 12. échantillons du V8, puis fermer le couvercle comme indiqué dans le manuel d’utilisation.Le V8 démarre automatiquement l’analyse de tous les échantillons chargés et les 13. résultats sont transmis à Platinum 4V.Après l’analyse, et si vous le désirez, initier le mode d’arrêt du V8 en éteignant 14. l’instrument comme indiqué dans le manuel d’utilisation.Il est important que la mise hors service en fin de journée du V8 soit 15. effectuée correctement. Consulter le manuel d’utilisation.

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATSIl est recommandé au laboratoire de réaliser chaque évaluation en comparant les électrophorégrammes de l’électrophorèse capillaire aux valeurs normales obtenues dans les mêmes conditions. Pour une interprétation complète, se référer à Ritzmann, S.E, 19825. Différentes études montrent que les valeurs normales sont les mêmes pour l’homme et la femme non enceinte. Certaines différences sont observées chez la femme enceinte à terme et chez la femme sous contraceptif oral. Les valeurs normales varient suivant l’âge. Le sang de cordon présente une diminution des protéines totales ainsi que de l’albumine, des alpha-2 et des beta ; la fraction des alpha-1 présente une légère augmentation et celle des gamma est normale ou présente une augmentation (en grande partie d’origine maternelle). Les gammaglobulines diminuent rapidement jusqu’à un âge d’environ 3 mois, alors que les autres fractions atteignent les valeurs adultes à cet âge. La valeur adulte des gammaglobulines n’est pas atteinte avant 10-16 ans. Après 40 ans, l’albumine diminue et les beta-globulines augmentent.

CONTRÔLE QUALITÉLes contrôles CEtrol Serum Control d’Helena Biosciences (réf. 802400 et 802500) peuvent être utilisés pour vérifier toutes les phases de l’analyse des protéines sériques. La notice indique les valeurs appropriées du dosage.


16


LIMITESEn raison des limites inhérentes de résolution et de sensibilité de l’électrophorèse capillaire, il est théoriquement pos-sible que certaines gammapathies monoclonales ne soient pas détectées par cette méthode analytique. Si le cas pré-sente des signes cliniques suggérant une gammapathie, il convient d’examiner attentivement l’électrophorégramme afin de détecter tout signe d’anomalie. En cas de doute, essayer d’effectuer l’immunotypage des gammaglobulines anormales éventuellement présentes par immunodéplacement et/ou immunofixation sur gel d’agarose.

VALEURS DE RÉFÉRENCELes plages normales suivantes ont été obtenues à partir de 39 échantillons normaux, provenant de donneurs hommes et femmes âgés entre 17 et 64 ans (ces valeurs ne sont données qu’à titre indicatif) :

Fraction de protéines Moyenne (%) Plage ± 2 écarts-types

Albumine 62,18 54,70 - 69,66

Alpha-1 3,83 2,63 - 5,03

Alpha-2 7,68 4,87 - 10,48

Beta-1 7,27 5,35 - 9,19

Beta-2 4,75 2,38 - 7,11

Gamma 14,30 9,69 - 18,90

PERFORMANCESHelena Biosciences a déterminé à titre indicatif les performances suivantes. Chaque laboratoire doit établir ses propres données de performance.

Précision :

Reproductibilité intra-dosage (n = 96)

Reproductibilité inter-dosages (n = 120)

Moyenne (%) CV (%) Moyenne (%) CV (%)

Albumine 63,8 0,5 62,4 1,3

Alpha-1 3,8 3,6 4,5 3,3

Alpha-2 7,2 1,3 10,2 4,9

Beta-1 7,3 1,6 6,5 6,7

Beta-2 4,1 1,9 4,7 2,5

Gamma 13,9 1,0 11,8 3,5

Sensibilité : Le kit V8 Serum Protein SPE peut détecter des protéines sériques à une concentration de 208 µg/ml (0,208 g/l).


17

fr

Exactitude : Une analyse de comparaison par rapport à une méthode automatisée d’analyse des protéines sériques par électro-phorèse capillaire a donné le résultat suivant :

y = 1,1964x -4,9686, r2 = 0,9308

BIBLIOGRAPHIEAlper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1. 1974; 291 : 287-290.Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, 2. Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : 524.Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and 3. Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, 1979.Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 4. pages 579-582, 1986.Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of 5. Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


18



19

de

DeutschANWENDUNGSBEREICHDer V8 Serum Protein SPE Kit dient zur Auftrennung und Auswertung von Serumproteinen mittels Kapillarelektrophorese (CE).

Serum enthält über 100 einzelne Proteine, jedes mit einer Reihe spezifischer Funktionen, die unter verschiedenen pathologischen Bedingungen gewissen spezifischen Konzentrationsschwankungen unterliegen1. Seit der Einführung der Kapillarelektrophorese durch Tiselius2 und die darauf folgende Nutzung der Zonenelektrophorese sind Serumproteine aufgrund ihrer elektrischen Ladung bei einem bestimmten pH-Wert fraktioniert worden. Mit dem V8 Serum Protein SPE Kit werden Serumproteine mithilfe eines alkalischen Puffers in 6 Hauptfraktionen (Albumin, Alpha-1-Globulin, Alpha-2-Globulin, Beta-1-Globulin, Beta-2-Globulin und Gamma-Globulin) aufgetrennt. Mit Ausnahme des Albumins enthält jede der Elektrophoresezonen in der Regel mindestens 2 Komponenten. Die relativen Ausmaße dieser Fraktionen haben sich bei der Diagnose und Prognose bestimmter Erkrankungen als nützliches Hilfsmittel erwiesen3-5.

WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMENDie Reagenzien dieses Kits sind nur zur In-vitro-Diagnostik bestimmt. Nicht einnehmen oder mit dem Mund pipettieren. Beim Umgang mit den Kitkomponenten Handschuhe tragen. Siehe Sicherheitsdatenblatt bezüglich der R- und S-Sätze sowie Informationen zur Entsorgung.

INHALTV8 SPE Buffer. REF HL-3-2198SA (1 x 500 Tests).1. Jede Flasche enthält ausreichend Serumproteinpuffer für 500 Tests. Der Puffer ist gebrauchsfertig und muss, wie im Bedienungshandbuch angegeben, auf dem V8-Gerät von Helena in die entsprechende Position platziert werden.V8 SPE Diluent. REF HL-3-2199SA (3 x 20 ml).2. Jede Flasche enthält ausreichend SPE Diluent für 500 Tests. Der Probenverdünnungspuffer ist gebrauchsfertig und muss, wie im Bedienungshandbuch angegeben, auf dem V8-Gerät von Helena in die entsprechende Position platziert werden.Filter. REF HL-3-2130SA (x1).3. Wie im Bedienungshandbuch beschrieben das Filtersystem an die Zuleitung des Flaschenanschlusses für den SPE Buffer am V8-Gerät von Helena anbringen. Dieser Filter ist ein Einmalfilter und muss mit Auswechseln des Serumproteinpuffers ebenfalls ausgetauscht werden.


20


Probengefäße. REF HL-3-2134SA (4 x 36).4. Das Gerät nach Anleitung des Helena-V8-Bedienungshandbuchs mit den Probengefäßen bestücken.Weitere Kitkomponenten.5. Jedes Kit enthält eine Gebrauchsanweisung.

VERWENDUNGSMATRIxDie Anzahl der Tests je Pufferflasche kann unter 500 liegen, wenn der Systemdurchsatz weniger als 100 Tests pro Durchlauf beträgt. Im Folgenden finden Sie eine ungefähre Ausbeute pro Flasche nach Anzahl der Tests:

100+ Tests/Durchlauf: 500 Tests/Flasche 60 – 100 Tests/Durchlauf: 450 Tests/Flasche 40 – 60 Tests/Durchlauf: 400 Tests/Flasche <40 Tests/Durchlauf: 350 Tests/Flasche

LAGERUNG UND STABILITÄTV8 SPE Buffer REF HL-3-2198SA V8 SPE Diluent REF HL-3-2199SA Der SPE Buffer und das SPE Diluent sollten bei 15 bis 30 °C gelagert werden und sind bis zum aufgedruck-ten Verfallsdatum stabil. Geöffnete Pufferflaschen sind auf dem Gerät bei 15 bis 30 °C 6 Monate stabil. Geöffnete Flaschen mit Diluent sind verschlossen bei 15 bis 30 °C 6 Monate stabil. SPE Buffer und SPE Diluent sind klare, farblose Lösungen. Die Lösungen verwerfen, wenn Veränderungen im Erscheinungsbild von SPE Buffer oder SPE Diluent be-merkt werden. Eine Trübung weist beispielsweise auf eine mikrobielle Kontamination hin. LÖSUNGEN NICHT EINFRIEREN.

NICHT MITGELIEFERTES, ABER BENÖTIGTES MATERIALREF 830100 V8 Storage Buffer REF 830200 V8 Maintenance Buffer REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack

OPTIONAL ZU VERWENDENDE PRODUKTEREF 800501 Supplemental Buffer Pack REF 800300 V8 Immunodisplacement Kit REF 820500 V8 Free Kappa / Free Lambda Kit REF 821400 V8 Anti-IgD / Anti-IgE Kit - bei Durchführung von Immunodisplacement im Serum oder Urin


21

de

REF 800412 Urine Preparation Buffer SPE REF VS20002 Sartorius VivaSpin 20 Centrifugal Concentrators REF GEHE17-0853-02 GE Healthcare NAP-5 Desalting Columns - bei Durchführung einer Proteinanalyse im Urin.

PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNGFür Serumproteinanalysen ist frisch entnommenes Serum das Untersuchungsmaterial der Wahl, da Plas-maproben zwischen der Beta- und Gammafraktion eine große Fibrinogenbande enthalten. Proben können bei 2 bis 8 ℃ bis zu 7 Tagen und bei -20 °C bis zu 1 Monat gelagert werden. Wenn Proben eingefroren werden sollen, müssen sie sofort gekühlt und innerhalb von 8 Stunden nach Ent-nahme eingefroren werden. Aufbewahren der Proben bei 2 bis 8 ℃ kann zu einem Proteinabbau, insbesondere der Komplementfrak-tionen, führen. Folglich kann bei einer Lagerung bei 2 bis 8 ℃ nach 7 Tagen der Nachweis einer eindeutigen Beta-2-Region nicht mehr möglich sein. Proben NICHT bei Raumtemperatur lagern - die Probe wird schnell abgebaut. Proben mit Kryoglobulinen können nach Kühlen oder Einfrieren viskös oder trübe werden. Es ist anzuraten, diese Proben vor dem Testen auf Raumtemperatur zu bringen.

Das Untersuchungsmaterial der Wahl für die Urinanalyse ist frisch gesammelter Urin (24-Stunden-Sammelurin). Proben können bei 2 bis 8 ℃ bis zu 7 Tagen gelagert werden. Für längere Lagerzeiten können die Proben bis zu einem Monat bei -70 °C aufbewahrt werden. Proben NICHT bei -20 °C aufbewahren. Urinproben sind vor dem Testen auf dem V8-System mit einem der oben aufgeführten optionalen Urinvor-bereitungspuffer (Urine Preparation Buffer) und Gerätekombinationen zu entsalzen.

STÖRFAKTORENHämolytische Proben können falsche Alpha-2- und Betafraktionen zeigen.1. Proben, die über längere Zeit unabgedeckt stehen, können durch Verdunstung 2. falsche Ergebnisse liefern.3. Die Anwesenheit von röntgendichtem Kontrastmittel kann verursachen, dass die 3. Alpha-2- und Beta-Regionen des Elektropherogramms erhöht erscheinen.


22


SCHRITT-FÜR-SCHRITT METHODEVergewissern Sie sich, dass sich der Einschub für den Abfallbehälter im Gerät 1. befindet.Vergewissern Sie sich vor Einschalten des V8, dass sich Lager- und 2. Wartungspuffer sowie Einweggefäße auf dem Gerät in den richtigen Positionen befinden. Im Bedienungshandbuch ist beschrieben, wie das Verbrauchsmaterial richtig eingesetzt wird.Starten Sie Platinum 4V und legen eine neue CE-Sitzung an. Wählen Sie aus dem 3. Dropdown-Menü in Platinum 4V ‘CE SYSTEM’ (CE-System) und dann ‘DEFAULT METHOD’ (Standardmethode). Achten Sie darauf, dass je nach erforderlichem Test SPE oder SPE Urine angewählt ist. Schalten Sie das V8-Gerät von Helena wie im Bedienungshandbuch beschreiben 4. ein.Für Einzeltestanforderungen siehe Bedienungshandbuch.5. Setzen Sie nach Aufforderung des V8 (und bei Bedarf) die Flasche V8 SPE Buffer 6. in das Fach für Flüssigreagenzien des V8 ein. Achten Sie dabei auf die korrekte Position. Zu einem korrekten Einsetzen der Flasche V8 SPE Buffer gehört, dass vor Einsetzen in das V8-Gerät von Helena an die Zuleitung zum Flaschenanschluss ein neues Filtersystem angebracht wird (siehe Bedienungshandbuch). Mit Einsetzen der entsprechenden Flasche V8 SPE Buffer wird automatisch in 7. Platinum 4V ein Fenster mit der Eingabeaufforderung ‘DEFINE BUFFER’ (Puffer festlegen) angezeigt. Scannen oder geben Sie die Barcodenummer in das der Flaschenposition entsprechende Feld „Pufferposition“ ein. Überprüfen Sie, ob der richtige Reagenzienbarcode in die Platinum 4V geladen 8. wurde, indem Sie aus dem Dropdown-Menü ‘CE SESSION’ (CE-Sitzung) wählen. Klicken Sie auf “DEFINE REAGENTS” (Reagenzi-en festlegen) und vergewissern Sie sich, dass die Position der Reagenzieninformation mit den vorgesehenen Positionen der Fläschchen auf dem V8 übereinstimmt.Nehmen Sie die Verschlusskappe von der Flasche V8 SPE Diluent und 9. vergewissern Sie sich, dass sich die Flasche in ihrem entsprechenden Reagenzienfach befindet (siehe Bedienungshandbuch).Das V8 blinkt rot, wenn es für die Aufnahme von Proben betriebsbereit ist.10. Setzen Sie alle Primärprobenröhrchen in das Probenrack ein. Dabei darauf 11. achten, dass der Barcode durch das Rackfenster deutlich zu erkennen ist (siehe Bedienungshandbuch). Die Probenracks links in den V8-Probentransportbereich stellen und wie in dem 12. Bedienungshandbuch beschrieben den Deckel schließen. Das V8 beginnt automatisch mit der Analyse aller geladenen Proben. Die 13. Ergebnisse werden an die Platinum 4V-Software übertragen. Bei Bedarf nach Testende das V8 herunterfahren, indem es wie in dem 14. Bedienungshandbuch beschrieben ausgeschaltet wird.


23

de

Am Ende eines Arbeitstags muss das V8 unbedingt wieder richtig aufbereitet 15. werden. Siehe Bedienungshandbuch.

AUSWERTUNG DER ERGEBNISSEEs wird empfohlen, die Auswertung der CE-Spuren gegen Normalwerte durchzuführen, die in dem jeweiligen Labor für diese Methode ermittelt wurden. Für einen vollständigen Überblick über die Auswertung von Serumproteinen siehe Ritzmann, S.E, 19825. Studien haben gezeigt, das für Männer und nicht schwangere Frauen die Werte gleich sind. Man hat bei schwangeren Frauen nahe dem Geburtstermin und bei Frauen, die orale Verhütungsmittel benutzen, einige Abweichungen festgestellt. Das Alter kann Auswirkungen auf die Normalwerte haben. Nabelschnurblut hat einen verringerten Gesamtproteingehalt sowie verringerte Albumin, Alpha-2- und Beta-Fraktionen; leicht erhöhte Alpha-1 und normale bzw. erhöhte Gamma-Fraktion (weitgehend mütterlicher Herkunft). Die Gammaglobuline fallen bis zum Alter von 3 Monaten rasch ab, wohingegen andere Fraktionen bis dahin bereits Erwachsenenwerte erreicht haben. Bei den Gammaglobulinen werden Erwachsenenwerte erst im Alter zwischen 10 und 16 Jahren erreicht. Im Alter von über 40 Jahren verringert sich das Albumin, und das Betaglobulin ist erhöht.

QUALITÄTSKONTROLLEHelena Biosciences CEtrol Serum Controls (Kat. Nrn. 802400 und 802500) können für die Bestätigung aller Phasen der Serumproteinbestimmung verwendet werden. Siehe Packungsbeilage für die entsprechenden Testergebnisse.

EINSCHRÄNKUNGENAufgrund der inhärenten Einschränkungen von Auflösung und Empfindlichkeit der Kapillarelektrophorese ist es theoretisch möglich, dass einige monoklonale Gammopathien mit dieser Analysemethode nicht nach-gewiesen werden können. Wenn der vorliegende klinische Fall auf eine Gammopathie hindeutet, sollte das Elektropherogramm genau auf Anzeichen einer Abnormalität untersucht werden. Im Zweifelsfall sollte ver-sucht werden, eventuell vorhandene abnormale Gammaglobuline durch Immunodisplacement und/oder Im-munfixation im Agarosegel zu typisieren.


24


REFERENZWERTEVon 39 normalen Proben von männlichen und weiblichen Spendern zwischen 17 und 64 Jahren wurden die folgenden Normalwerte ermittelt (diese gelten nur als Richtlinie):

Proteinfraktion Mittelwert (%) ± 2s-Bereich

Albumin 62,18 54,70 - 69,66

Alpha-1 3,83 2,63 - 5,03

Alpha-2 7,68 4,87 - 10,48

Beta-1 7,27 5,35 - 9,19

Beta-2 4,75 2,38 - 7,11

Gamma 14,30 9,69 - 18,90

LEISTUNGSEIGENSCHAFTENFolgende Leistungseigenschaften wurden von Helena Biosciences als Richtlinien ermittelt. Jedes Labor muss seine eigenen Werte ermitteln.

Präzision:

Reproduzierbarkeit innerhalb des Tests (n = 96)

Reproduzierbarkeit zwischen den Tests (n = 120)

Mittelwert (%) VK (%) Mittelwert (%) VK (%)

Albumin 63,8 0,5 62,4 1,3

Alpha-1 3,8 3,6 4,5 3,3

Alpha-2 7,2 1,3 10,2 4,9

Beta-1 7,3 1,6 6,5 6,7

Beta-2 4,1 1,9 4,7 2,5

Gamma 13,9 1,0 11,8 3,5

Empfindlichkeit: Die CE V8-Serumproteinmethode kann Serumproteine mit Werten von 208 µg/ml (0,208 g/l) nachweisen.

Genauigkeit: Der Vergleich mit einer handelsüblichen halb automatischen Gelmethode zum Nachweis von Serumproteinen ergab:

y = 1,1964x -4,9686, r2 = 0,9308


25

de

LITERATURAlper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1. 1974; 291 : 287 - 290.Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, 2. Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : 524.Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and 3. Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, 1979.Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 4. pages 579 - 582, 1986.Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of 5. Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


26



27

it

ItalianoSCOPO PREVISTOIl V8 Serum Protein SPE Kit viene utilizzato per la separazione e quantizzazione delle proteine seriche mediante elettroforesi capillare (CE).

Il siero contiene oltre 100 singole proteine, ciascuna con specifiche funzioni, le quali variano la loro concentrazione a seconda delle differenti condizioni patologiche in corso1. Dall’invenzione dell’elettroforesi a fronte mobile ad opera di Tiselius2, e il successivo utilizzo dell’elettroforesi di zona, le proteine del siero sono state frazionate in base alla loro carica ad un particolare pH. V8 Serum Protein SPE Kit utilizza un tampone alcalino per separare le proteine del siero in 6 classi princi-pali (albumina, alpha-1 globulina, alpha-2 globulina, beta-1 globulina, beta-2 globulina e gamma globulina). Ciascuna delle zone elettroforetiche, ad eccezione dell’albumina, contiene normalmente almeno 2 componenti. Le relative proporzioni, di queste frazioni, dimostrano l’utilità nella diagnosi e prognosi di certe malattie3-5.

AVVERTENZE E PRECAUZIONII reagenti contenuti in questo kit sono destinati esclusivamente alla diagnostica in vitro. Non ingerire né pipettare con la bocca i componenti del kit. Indossare guanti durante l’uso dei componenti del kit. Per le indicazioni relative ai rischi e alla sicurezza e per le informazioni sullo smaltimento, fare riferimento alle schede tecniche dei prodotti.

COMPOSIZIONEV8 SPE Buffer. REF HL-3-2198SA (1 x 500 test).1. Ciascun flacone contiene sufficiente SPE Buffer per il completamento di 500 test. Il tampone è pronto per l’uso e deve essere collocato in una posizione appropriata sullo strumento Helena V8 secondo le istruzione del manuale utente.V8 SPE Diluent. REF HL-3-2199SA (3 x 20 ml). 2. Ciascun kit contiene sufficiente SPE Diluent per il completamento di 500 test. Il diluente del campione è pronto per l’uso e deve essere collocato in una posizione appropriata sullo strumento Helena V8 secondo le istruzione del manuale utente.Filtro. REF HL-3-2130SA (x 1).3. L’unità del filtro deve essere applicata al condotto di ingresso del connettore del flacone di SPE Buffer dello strumento Helena V8 secondo le istruzioni del manuale utente. Questo filtro è monouso e deve essere sostituito con il cambio del tampone sieroproteico.


28


Coppette per campioni. REF HL-3-2134SA (4 x 36). 4. Le coppette per campioni devono essere caricate nello strumento Helena V8 secondo il manuale utente.Altri componenti del kit.5. Ogni kit contiene le istruzioni per l’uso.

MATRICE UTILIZZATAIl numero di test per flacone di tampone può essere inferiore a 500 se il rendimento del sistema è inferiore a 100 test per sessione. Il rendimento approssimativo per flacone in base al numero di test è riportato di seguito:

100+ test per sessione: 500 test per flacone 60 - 100 test per sessione: 450 test per flacone 40 - 60 test per sessione: 400 test per flacone < 40 test per sessione: 350 test per flacone

CONSERVAZIONE E STABILITÀV8 SPE Buffer. RIF HL-3-2198SA V8 SPE Diluent. RIF HL-3-2199SA SPE Buffer e SPE Diluent devono essere conservati a 15..30°C e sono stabili fino alla data di scadenza ri-portata sull’etichetta. I flaconi aperti di tampone lasciati all’interno dello strumento sono stabili per 6 mesi a 15…30°C. I flaconi aperti di diluente sono stabili per 6 mesi a 15…30°C, se richiusi. SPE Buffer e SPE Diluent sono soluzioni incolori trasparenti. Se si notano cambiamenti nell’aspetto di SPE Buffer o SPE Diluent, ad esempio torbidezza indicativa di contaminazione microbica, gettare i liquidi. NON CONGELARE I LIQUIDI

MATERIALI NECESSARI, MA NON IN DOTAZIONEREF 830100 V8 Storage Buffer REF 830200 V8 Maintenance Buffer REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack

MATERIALI OPZIONALIRIF 800501 Supplemental Buffer Pack

RIF 800300 V8 Immunodisplacement Kit RIF 820500 V8 Free Kappa / Free Lambda Kit RIF 821400 V8 Anti IgD / Anti IgE Kit - in caso di esecuzione di immunosostituzione di siero o urina


29

it

RIF 800412 Urine Preparation Buffer SPE RIF VS20002 Sartorius VivaSpin 20 Centrifugal Concentrators RIF GEHE17-0853-02 GE Healthcare NAP-5 Desalting Columns - in caso di analisi delle proteine urinarie

RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONIPer l’analisi delle proteine del siero, i campioni ideali sono costituiti dal siero fresco in quanto i campioni del plasma contengono un’ampia banda di fibrinogeno tra le frazioni beta e gamma. I campioni possono essere conservati a 2…8°C per un massimo di 7 giorni e per 1 mese a -20°C. Se i campioni devono essere conservati refrigerati, dovrebbero essere congelati immediatamente ed entro 8 ore dalla raccolta. La conservazione dei campioni a 2…8°C può determinare la degradazione delle proteine in particolare, ma non limitatamente alle frazioni complementari. Di conseguenza, dopo 7 giorni di conservazione a 2…8°C potrebbe non essere più possibile rilevare una distinta regione beta-2. NON conservare i campioni a temperatura ambiente - il campione subisce un rapido degrado. I campioni contenenti crioglobuline possono diventare viscosi o torbidi dopo la refrigerazione o il congela-mento. È consigliabile scaldare tali campioni a temperatura ambiente prima dell’analisi.

Per l’analisi delle urine, l’urina fresca (raccolta nelle 24 ore precedenti) è il campione da preferire. I cam-pioni possono essere conservati a 2…8°C fino a 7 giorni. Per periodi più lunghi di conservazione si consiglia di conservare i campioni a -70°C, fino ad 1 mese. NON conservare i campioni a -20°C. I campioni di urina devono essere desalinizzati prima dell’analisi sul sistema V8, utilizzando uno dei tampo-ni di preparazione delle urine opzionali e le combinazioni di dispositivi elencate sopra.

FATTORI D’INTERFERENZAL’emolisi può causare falsi incrementi delle frazioni alfa-2 e beta.1. Si possono ottenere risultati inattendibili se i campioni vengono conservati non 2. coperti, a causa dell’evaporazione.La presenza di mezzi di contrasto radiopachi può causare la visualizzazione di un 3. valore elevato delle regioni alpha-2 e beta dell’elettroferogramma.


30


PROCEDURAControllare che il cassetto del contenitore dei rifiuti sia on-board.1. Prima di accendere il V8 controllare che il tampone di conservazione e il tampone 2. di manutenzione e le coppette monouso siano on-board e nelle loro corrette posizioni. Per la corretta installazione di tutti i materiali di consumo consultare il manuale utente.Eseguire Platinum 4V e avviare una nuova sessione CE. In Platinum 4V selezionare 3. ‘CE SYSTEM’ dal menu a tendina, fare clic su ‘DEFAULT METHOD’ e assicurarsi che sia selezionato SPE o SPE Urine secondo il dosaggio richiesto.Accendere il dispositivo Helena V8 come descritto nel manuale utente.4. Per l’ordine individuale dei test fare riferimento al manuale utente.5. Quando richiesto dal V8, installare il flacone del V8 SPE buffer nello scomparto del 6. flacone fluido di V8 e controllare che sia nella posizione corretta. Per la corretta installazione del flacone V8 SPE buffer controllare che venga applicata un’unità filtro nuova al condotto di ingresso del connettore del flacone del tampone prima dell’installazione sul dispositivo Helena V8 (fare riferimento al manuale utente).L’installazione del flacone V8 SPE buffer aprirà automaticamente un prompt della 7. finestra ‘DEFINE BUFFER’ in Platinum 4V. Eseguire una scansione oppure inserire un numero del codice a barre nel campo di posizione del tampone che corrisponde alla posizione del flacone.Controllare che l’informazione sul codice a barre del reagente sia caricata in 8. Platinum 4V selezionando ‘CE SESSION’ dal menu a tendina. Fare clic su ‘DEFINE REAGENTS’ e controllare che le informazioni sul codice a barre per il diluente siano state inserite e che la posizione delle informazioni sul reagente corrisponda alla posizione prevista della fiala on-board di V8. Togliere il coperchio da V8 SPE Diluent e controllare che il flacone sia collocato 9. correttamente nell’area del flacone del reagente (fare riferimento al manuale utente).Quando il V8 è pronto per accettare i campioni per l’uso lo strumento lampeggerà 10. di rosso.Posizionare ogni provetta di campione primaria nel rack per campioni controllando 11. che il codice a barre sia chiaramente visibile attraverso la finestra del rack (fare riferimento al manuale utente).Caricare iI rack dei campioni sul lato sinistro dell’area di trasporto dei campioni V8 12. e chiudere il coperchio seguendo le istruzioni del manuale utente.V8 inizierà automaticamente l’analisi di tutti i campioni caricati e i risultati verranno 13. trasferiti a Platinum 4V.Dopo l’analisi, e se richiesto, avviare il V8 in modalità arresto spegnendo lo 14. strumento come indicato nel manuale utente.È importante che V8 sia postcondizionato correttamente a fine giornata. 15. Fare riferimento al manuale utente.


31

it

INTERPRETAZIONE DEI RISULTATISi consiglia ad ogni singolo laboratorio di valutare le tracce di CE rispetto ai valori normali prodotti per questo metodo. Per una completa valutazione delle sieroproteine, vedere Ritzmann, S.E., 19825. Studi dimostrano che i valori proteici rimangono invariati per entrambi i sessi. Alcune differenze si possono verificare nelle gestanti a termine e in donne che utilizzano contraccettivi orali. L’età produce alcuni effetti sui valori normali. Il sangue cordale presenta minori frazioni di proteine totali, albumina, alfa-2 e beta; lieve aumento alfa-1, rimane invariata oppure aumenta la frazione gamma (in gran misura da origini materne). Le gammaglobuline si riducono rapidamente fino ai 3 mesi di età circa, mentre altre frazioni hanno raggiunto i livelli dell’età adulta già in questa fase. Le gammaglobuline non raggiungono i livelli dell’età adulta fino ai 10 - 16 anni. Oltre i 40 anni, l’albumina diminuisce e le beta globuline aumentano.

CONTROLLO QUALITÀHelena Biosciences CEtrol Serum Controls (Cod. num. 802400 e 802500) può essere utilizzato per verificare tutte le fasi della procedura sieroproteica. Per maggiori informazioni sui valori attesi fare riferimento al foglietto illustrativo presente nella confezione.

LIMITIA causa dei limiti intrinseci della risoluzione e della sensibilità dell’elettroforesi capillare, in via teorica è possibile che questo metodo analitico non sia in grado di rilevare alcune gammopatie monoclonali. Se la presentazione del caso clinico indica una gammopatia, l’elettroferogramma deve essere esaminato con atten-zione per rilevare la presenza di anomalie. In caso di dubbio, tentare di immunotipizzare eventuali gamma-globuline anomale presenti tramite immunosostituzione e/o immunofissazione con gel di agarosio.


32


VALORI DI RIFERIMENTOUtilizzando 39 campioni normali provenienti da donatori di entrambi i sessi e di età compresa tra 17 e 64 anni, sono stati ottenuti i seguenti range (forniti a puro titolo indicativo):

Frazione proteica Media (%) ± 2SD range

Albumina 62,18 54,70 - 69,66

Alfa-1 3,83 2,63 - 5,03

Alfa-2 7,68 4,87 - 10,48

Beta-1 7,27 5,35 - 9,19

Beta-2 4,75 2,38 - 7,11

Gamma 14,30 9,69 - 18,90

CARATTERISTICHE PRESTAZIONALILe caratteristiche prestazionali sotto riportate sono state determinate da Helena Biosciences a titolo di linee guida. Ciascun laboratorio dovrà pertanto elaborare i propri dati prestazionali.

Precisione:

Riproducibilità entro il dosaggio (n = 96)

Riproducibilità tra i dosaggi (n = 120)

Media (%) C.V. (%) Media (%) C.V. (%)

Albumina 63,8 0,5 62,4 1,3

Alfa-1 3,8 3,6 4,5 3,3

Alfa-2 7,2 1,3 10,2 4,9

Beta-1 7,3 1,6 6,5 6,7

Beta-2 4,1 1,9 4,7 2,5

Gamma 13,9 1,0 11,8 3,5

Sensibilità: Il kit sieroproteico CE V8 può rilevare le sieroproteine a livelli di 208 µg/ml (0,208 g/l).

Precisione: Dal paragone con il metodo in gel sieroproteico semi-automatico disponibile in commercio è risultato:

y = 1.1964x -4.9686, r2 = 0.9308


33

it

BIBLIOGRAFIAAlper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1. 1974; 291 : 287 - 290.Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, 2. Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : 524.Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and 3. Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, 1979.Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 4. pages 579 - 582, 1986.Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of 5. Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


34



35

es

EspañolOBJETIVO PREVISTOEl V8 Serum Protein SPE Kit está pensado para la separación y cuantificación de proteínas séricas mediante electroforesis capilar (EC).

El suero contiene más de 100 proteínas individuales, cada una con un conjunto específico de funciones, que están sujetas a variación específica en su concentración en diferentes estados patológicos1. Desde la introducción de la electroforesis con límite móvil por Tiselius2 y el uso posterior de la electroforesis en zona, las proteínas séricas se han fraccionado de acuerdo con su carga en un pH concreto. El kit de SPE de proteínas séricas V8 utiliza un tampón alcalino para separar las proteínas séricas en 6 clases princi-pales (albúmina, alfa-1 globulina, alfa-2 globulina, beta-1 globulina, beta-2 globulina y gamma globulina).. Cada una de las zonas electroforéticas, a excepción de la albúmina, normalmente contiene al menos 2 componentes. Las proporciones relativas de estas fracciones han demostrado ser ayudas útiles en el diagnóstico y el pronóstico de determinadas enfermedades3-5.

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONESLos reactivos contenidos en este kit son exclusivamente para uso diagnóstico in vitro. No ingiera ni pipetee con la boca ningún componente del kit. Lleve guantes al manipular todos los componentes del kit. Consulte la ficha técnica de seguridad del producto para ver las frases de riesgo y seguridad y la información sobre eliminación.

COMPOSICIÓNV8 SPE Buffer. REF HL-3-2198SA (1 x 500 pruebas).1. Cada frasco contiene tampón de proteínas séricas suficiente para la realización de 500 pruebas. El tampón está listo para su uso y debe colocarse en la localización adecuada en el instrumento Helena V8 como se indica en el manual del usuario.V8 SPE Diluent. REF HL-3-2199SA (3 x 20 ml). 2. Cada kit contiene suficiente diluyente de muestras de proteína para realizar 500 pruebas. El diluyente de muestras está listo para su uso y debe colocarse en el lugar apropiado del instrumento Helena V8, tal como se indica en el manual del operador.Filtro. REF HL-3-2130SA (x 1).3. La unidad de filtro debe aplicarse al conducto de entrada del conector del frasco de SPE Buffer del instrumento Helena V8 como se indica en el manual del usuario. Este filtro es de uso único y debe sustituirse cuando se cambie el tampón de proteínas séricas.


36


Copas de muestra. REF HL-3-2134SA (4 x 36).4. Las copas para muestras deben cargarse en el instrumento Helena V8 de acuerdo con el manual del usuario.Otros componentes del kit.5. Cada kit contiene sus Instrucciones de uso.

MATRIZ DE USOEl número de pruebas por frasco de tampón podría ser inferior a 500 cuando el rendimiento del sistema sea de me-nos de 100 pruebas por sesión. A continuación se indica el rendimiento aproximado por frasco según el número de pruebas:

100+ pruebas por sesión: 500 pruebas por frasco 60 - 100 pruebas por sesión: 450 pruebas por frasco 40 - 60 pruebas por sesión: 400 pruebas por frasco < 40 pruebas por sesión: 350 pruebas por frasco

CONSERVACIÓN Y PERÍODO DE VALIDEZTampón V8 SPE. REF HL-3-2198SA Diluyente V8 SPE. REF HL-3-2199SA El tampón SPE y el diluyente SPE deben conservarse a 15-30 °C y permanecen estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Los frascos abiertos del tampón permanecen estables dentro del instrumento durante 6 meses a 15-30 °C. Los frascos abiertos de diluyente permanecen estables durante 6 meses a 15-30 °C, cuando están cerrados. El tampón SPE y el diluyente SPE son soluciones transparentes, incoloras. Si se aprecian cambios en el aspecto del tampón SPE o el diluyente SPE, por ejemplo, turbidez que indica contami-nación microbiana, deseche los líquidos. NO CONGELE LOS LÍQUIDOS

ARTÍCULOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOSREF 830100 V8 Storage Buffer REF 830200 V8 Maintenance Buffer REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack

ARTICULOS OPCIONALESREF 800501 Paquete de tampón suplementario

REF 800300 Kit de inmunodesplazamiento V8 REF 820500 Kit de kappa libre / lambda libre V8 REF 821400 Kit de Anti IgD / Anti IgE V8 - si se realiza inmunodesplazamiento en suero u orina


37

es

REF 800412 Tampón de preparación de orina SP6 REF VS20002 Concentradores de centrífuga Sartorius VivaSpin 20 REF GEHE17-0853-02 GE Columnas de desalación NAP-5 de GE Healthcare - si se realizan análisis de proteínas en orina

RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRASPara el análisis de proteínas en el suero, la muestra de elección es el suero recién recogido, porque las muestras de plasma contendrán una gran banda de fibrinógeno entre las fracciones beta y gamma. Las muestras pueden conservarse a 2-8 °C durante hasta 7 días y hasta 1 mes a -20 °C. Si las muestras deben conservarse congeladas, deben refrigerarse inmediamente y congelarse en el plazo de 8 horas después de la recogida. Conservar las muestras a 2-8 °C puede conducir a degradación de las proteínas, especialmente, pero no exclusiva-mente, de fracciones de complemento. En consecuencia, después de 7 días de conservación a 2-8 °C, podría no ser posible ya la detección de una región beta-2 diferenciada. NO conserve las muestras a temperatura ambiente: la muestra se degradará rápidamente. Las muestras que contienen crioglobulinas pueden hacerse viscosas o turbias después de la refrigeración o congela-ción. Es aconsejable calentar estas muestras a temperatura ambiente antes del análisis.

Para el análisis de orina, la muestra de elección es orina recién recogida (recogida de 24 horas). Las muestras se pueden guardar a una temperatura entre 2 y 8 °C hasta 7 días. Para períodos de conservación más largos, se recomienda conservar las muestras a 70 °C, durante hasta 1 mes. NO conservar las muestras a -20 °C. Las muestras de orina deben desalinizarse antes del análisis en el sistema V8, usando una de las combinaciones opcionales de tampón y dispositivo de preparación de la orina enumeradas antes.

FACTORES DE INTERFERENCIALa hemólisis puede producir una falsa elevación de las fracciones alfa-2 y beta.1. Pueden obtenerse resultados inexactos en muestras que se dejan destapadas, 2. debido a la evaporación.La presencia de medios de contraste radiopacos puede hacer que las regiones 3. alfa-2 y beta del electroferograma parezcan elevadas.


38


PROCEDIMIENTO PASO A PASOCompruebe que el cajón contenedor de residuos esté instalado.1. Antes de activar el V8, compruebe que el tampón de almacenamiento, 2. mantenimiento y las cubetas desechables estén instaladas y en sus posiciones correctas. Consulte el manual del operador para la correcta instalación de todos los consumibles.Ejecute Platinum 4V e inicie una nueva sesión de CE. En Platinum 4V, seleccione 3. ‘CE SYSTEM’ (sistema CE) en el menú desplegable, seleccione ‘DEFAULT METHOD’ (método predeterminado) y seleccione SPE o bien SPE Urine en función del ensayo que desee realizar.Active el Helena V8 tal como se indica en el manual del operario.4. Consulte el manual del operario para solicitar pruebas individuales.5. Cuando el V8 se lo indique (en caso necesario), instale la botella de V8 SPE 6. buffer en el compartimento para botellas de fluido del Helena V8 y compruebe que esté en la posición correcta. Para instalar correctamente la botella de V8 SPE buffer, compruebe que el conector del tubo de entrada de la botella de tampón esté equipado con un filtro nuevo antes de instalarlo en el Helena V8 (consulte el manual del operador).Al instalar la botella de V8 SPE buffer, se abrirá automáticamente la ventana 7. ‘DEFINE BUFFER’ (definir tampón) en Platinum 4V. Escanee o introduzca el número del código de barras en el campo de posición del tampón correspondiente a la posición de la botella. Asegúrese de que la información apropiada del código de barras del reactivo se 8. carga en Platinum 4V seleccionando “CE SESSION” (SESIÓN CE) en el menú desplegable. Haga clic en “DEFINE REAGENTS” (DEFINIR REACTIVOS) y compruebe que la información del código de barras del diluyente se ha introducido y que la localización de la información del reactivo se corresponde con la localización del vial prevista en el interior del V8. Retire la tapa del diluyente V8 SPE y asegúrese de que el frasco se coloca 9. correctamente en el área de la botella de reactivos (consulte el manual del operario).Cuando el V8 esté preparado para recibir las muestras, el instrumento parpadeará 10. en color rojo.Coloque cada tubo de muestra primaria en el soporte de muestras y compruebe 11. que el código de barras sea claramente visible a través del visor del soporte (consulte el manual del operador).Cargue los soportes de muestras en el lado izquierdo del área de transporte de 12. muestras del V8 y cierre la tapa como se indica en el manual del operador.El V8 comenzará automáticamente el análisis de todas las muestras cargadas y los 13. resultados se transferirán a Platinum 4V.Después del análisis, en caso necesario, inicie la operación de apagado del V8 14. desconectando el instrumento tal como se indica en el manual del operador.


39

es

Es importante realizar el post acondicionamiento del V8 correctamente al 15. final de la jornada. Consulte el manual del operador.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOSSe recomienda que cualquier evaluación de los resultados de EC se realice frente a valores normales producidos para este método en cada laboratorio individual.

Para una revisión completa de la evaluación de las proteínas séricas, véase Ritzmann, S.E, 19825. Los estudios demuestran que los valores son los mismos para varones y mujeres no embarazadas. Se ven algunas diferencias en mujeres embarazadas a término y en mujeres que reciben anticonceptivos orales. La edad tiene algún efecto sobre los niveles normales. La sangre del cordón tiene menos proteínas totales y fracciones de albúmina, alfa-2 y beta; una fracción de alfa-1 ligeramente aumentada y una fracción gamma normal o aumentada (fundamentalmente de origen materno). Las gamma globulinas caen rápidamente hasta aproximadamente los 3 meses de edad, mientras que otras fracciones han alcanzado niveles de adulto en este período. Los niveles de adulto de gamma globulinas no se alcanzan hasta 10-16 años de edad. La albúmina disminuye y la beta globulina aumenta pasados los 40 años.

CONTROL DE CALIDADPueden usarse los Helena Biosciences CEtrol Serum Controls (N.ºs. de Cat. 802400 y 802500) para verificar todas las fases del procedimiento de proteínas séricas. Consulte en el prospecto los valores adecuados del ensayo.

LIMITACIONESDebido a las limitaciones inherentes de la resolución y la sensibilidad de la electroforesis capilar, es teóricamente posible que algunas gammapatías monoclonales puedan no detectarse mediante este método analítico. Si la presen-tación del caso clínico sugiere una gammapatía, debe examinarse cuidadosamente el electroferograma por si mues-tra cualquier signo de anormalidad. Ante cualquier duda, intente inmunotipificar cualquier gammaglobulina anormal presente mediante inmunodesplazamiento y/o inmunofijación con gel de agarosa.

VALORES DE REFERENCIAUsando 39 muestras normales de donantes varones y mujeres con un rango de edad de 17-64 años, se obtuvieron los siguientes intervalos normales (se presentan sólo como orientación).


40


CARACTERÍSTICAS FUNCIONALES

Helena Biosciences ha determinado las siguientes características de rendimiento como orientación. Cada laboratorio debe establecer sus propios datos de rendimiento.

Precisión:

Reproducibilidad en el mismo ensayo (n = 96)

Reproducibilidad entre distintos ensayos (n = 120)

Media (%) C.V. (%) Media (%) C.V. (%)

Albúmina 63,8 0,5 62,4 1,3

Alfa-1 3,8 3,6 4,5 3,3

Alfa-2 7,2 1,3 10,2 4,9

Beta-1 7,3 1,6 6,5 6,7

Beta-2 4,1 1,9 4,7 2,5

Gamma 13,9 1,0 11,8 3,5

Sensibilidad: El método de proteínas séricas V8 con EC puede detectar proteínas séricas a niveles de 208 µg/ml (0.208 g/L).

Exactitud: La comparación frente a un método semiautomatizado de gel de proteínas séricas disponible comercialmente dio:

y = 1,1964x -4,9686, r2 = 0,9308

BIBLIOGRAFÍAAlper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1. 1974; 291 : 287 - 290.Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, 2. Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : 524.Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and 3. Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, 1979.Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 4. pages 579 - 582, 1986.Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of 5. Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


41

pt

PortuguêsOBJECTIVO DO KITO V8 Serum Protein SPE Kit é indicado para a separação e quantificação das proteínas séricas por Electroforese Capilar (EC).

O soro contém mais de 100 proteínas individuais, cada uma com um conjunto específico de funções, que estão sujeitas a variações específicas de concentração em diferentes estados patológicos1. Desde a introdução da electroforese de frente móvel, por Tiselius2, e da utilização subsequente da electroforese de zona, que as proteínas séricas têm sido fraccionadas com base na sua carga num pH específico. O Kit V8 Serum Protein SPE (Kit V8 de Proteínas Séricas SPE) utiliza um tampão alcalino para separar as proteínas séricas em 6 classes principais (albumina, globulina alfa-1, globulina alfa-2, globulina beta-1, globulina beta-2 e gamaglobulina). Cada uma das zonas electroforéticas, com excepção da albumina, contém normalmente pelo menos 2 componentes. As proporções relativas destas fracções têm demonstrado ser úteis para o diagnóstico e prognóstico de certos estados de doença 3-5.

ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕESOs reagentes incluídos no kit destinam-se apenas a uso em diagnóstico in vitro. Não ingerir nem pipetar com a boca nenhum dos componentes do kit. Usar luvas ao manusear todos os componentes do kit. Consultar a ficha de dados de segurança do produto no que respeita às frases de risco e segurança e informações sobre eliminação.

COMPOSIÇÃOV8 SPE Buffer. REF. HL-3-2119SA (1 x 500 testes). 1. Cada frasco contém suficiente tampão SPE Buffer para efectuar 500 testes. O tampão está pronto a ser utilizado e deve ser colocado no local apropriado do instrumento Helena V8, tal como indicado no manual do operador.V8 SPE Diluent. REF HL-3-2199SA (3 x 20 ml).2. Cada frasco contém suficiente diluente SPE Diluent para efectuar 500 testes. O diluente está pronto a ser utilizado e deve ser colocado no local apropriado do instrumento Helena V8, tal como indicado no manual do operador.Filtro. REF. HL-3-2130SA (x 1). 3. O filtro deve ser instalado no tubo de entrada do conector do frasco de tampão SPE Buffer do instrumento Helena V8, tal como indicado no manual do operador. Este filtro serve para uma única utilização e deve ser substituído quando se substitui o tampão de proteínas séricas.


42


Cúpulas de amostras. REF. HL-3-2134SA (4 x 36). 4. Os copos de amostras devem ser carregados no instrumento Helena V8 tal como indicado no manual do operador.Outros componentes do kit.5. Cada kit contém Instruções de Utilização.

MATRIZ DE UTILIZAÇÃOO número de testes por frasco de tampão pode ser inferior a 500 quando a produtividade do sistema for inferior a 100 testes por sessão. A produção aproximada por frasco de acordo com o número de testes é indicado abaixo:

100+ testes por sessão: 500 testes por frasco 60 - 100 testes por sessão: 450 testes por frasco 40 - 60 testes por sessão: 400 testes por frasco < 40 testes por sessão: 350 testes por frasco

CONSERVAÇÃO E PRAZO DE VALIDADEV8 SPE Buffer (Tampão). REF HL-3-2198SA V8 SPE Diluent (Diluente). REF HL-3-2199SA O Tampão SPE e o Diluente SPE devem ser conservados a 15…30°C e permanecem estáveis até ao prazo de validade indicado no rótulo. Os frascos abertos de Tampão são estáveis quando instalados no instrumento durante 6 meses a 15…30°C. Os frascos abertos de Diluente são estáveis durante 6 meses a 15…30°C, se estiverem tapados. O Tampão SPE e o Diluente SPE são soluções límpidas e incolores. Caso se detectem alterações no aspecto do Tampão SPE ou do Diluente SPE, por exemplo turvação indi-cativa de contaminação microbiana, eliminar os líquidos. NÃO CONGELAR OS LÍQUIDOS.

COMPONENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOSREF 830100 V8 Storage Buffer (tampão de conservação) REF 830200 V8 Maintenance Buffer (tampão de manutenção) REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack (embalagem do tabuleiro para resíduos clínicos)


43

pt

COMPONENTES FACULTATIVOSREF 800501 Supplemental Buffer Pack (Embalagem de tampão suplementar)

REF 800300 V8 Immunodisplacement Kit (Kit de Imunodeslocamento) REF 820500 V8 Free Kappa / Free Lambda Kit REF 821400 V8 Anti IgD / Anti IgE Kit - caso se efectue imunodeslocamento de soro ou urina

REF 800412 Urine Preparation Buffer SPE (Tampão de preparação da urina) REF VS20002 Sartorius VivaSpin 20 Centrifugal Concentrators (Concentradores centrífugos) REF GEHE17-0853-02 GE Healthcare NAP-5 Desalting Columns (Colunas de dessalinização) - caso se efectue a análise das proteínas urinárias

COLHEITA E PREPARAÇÃO DE AMOSTRASNo caso de análise das proteínas séricas, a amostra de eleição é o soro recentemente colhido, dado que as amostras de plasma conterão uma banda larga de fibrinogénio entre as fracções beta e gama. As amostras podem ser conservadas a 2…8ºC durante um máximo de 7 dias e até 1 mês a -20ºC. Se as amostras tiverem de ser conservadas congeladas, devem ser imediatamente refrigeradas e congeladas num período de 8 horas após a colheita. A conservação de amostras a 2…8°C pode resultar na degradação de proteínas, especialmente, mas não exclusivamente, das fracções do complemento. Consequentemente, após 7 dias de conservação a 2…8°C, pode já não ser possível detectar uma região beta-2 distinta. NÃO conservar as amostras à temperatura ambiente - a amostra sofrerá uma degradação rápida. As amostras que contêm crioglobulinas podem ficar viscosas ou turvas após refrigeração ou congelação. É aconselhável aquecer estas amostras à temperatura ambiente antes da análise.

No caso de análise de urina, a amostra de eleição é a urina recentemente colhida (recolha em 24 horas). As amostras podem ser conservadas a 2…8ºC durante um máximo de 7 dias. No caso de períodos de conservação mais longos, recomenda-se conservar as amostras a -70°C, durante um máximo de 1 mês. NÃO conservar as amostras a -20°C. As amostras de urina devem ser dessalinizadas antes da análise no sistema V8, utilizando um tampão opcional de preparação da urina e as combinações do dispositivo acima indicadas.


44


FACTORES DE INTERFERÊNCIAA hemólise pode causar uma elevação falsa das fracções alfa-2 e beta.1. Podem obter-se resultados inexactos em amostras que permaneçam descobertas, 2. devido à evaporação.A presença de meios de contraste radiopaco pode fazer com que as regiões alfa-2 3. e beta do electro-ferograma se apresentem elevadas.

PROCEDIMENTO PASSO A PASSOCertificar-se de que o tabuleiro do recipiente de resíduos está instalado.1. Antes de ligar o V8, certificar-se de que o tampão de conservação, o tampão de 2. manutenção e as cúpulas descartáveis estão instalados e nas posições devidas. Consultar o manual do operador para determinar qual a instalação correcta de todos os consumíveis.Efectuar o arranque do Platinum 4V e iniciar nova sessão de electroforese capilar 3. (EC). No Platinum 4V, seleccionar “CE SYSTEM” (Sistema de CE) no menu pendente, clicar em “DEFAULT METHOD” (Método predefinido) e certificar-se de que é seleccionado “SPE” ou “SPE Urine” dependendo do ensaio a ser realizado.Ligar o Helena V8 tal como indicado no manual do operador4. Para encomendar testes individuais, consultar o manual do operador.5. Quando indicado no V8 (e se necessário), instalar o frasco de tampão V8 SPE 6. Buffer no compartimento de frascos de fluido do Helena V8 e certificar-se de que está correctamente posicionado. Para efectuar a instalação correcta do frasco de tampão V8 SPE Buffer, instalar um novo filtro no tubo de entrada do conector do frasco de tampão antes de o instalar no Helena V8 (consultar o manual do operador).A instalação do frasco de tampão V8 SPE Buffer abrirá automaticamente uma 7. janela com a mensagem ‘DEFINE BUFFER’ (definir tampão) no Platinum 4V. Realizar o scan ou introduzir o número do código de barras no campo de posição do tampão que corresponde à posição do frasco.Certificar-se de que as informações do código de barras do reagente apropriado 8. são carregadas no Platinum 4V, seleccionando “CE SESSION” (Sessão de EC) no menu pendente. Clicar em “DEFINE REAGENTS” (Definir reagentes) e certificar-se de que foram introduzidas as informações do código de barras do diluente e que o posicionamento da informação do reagente corresponde à posição prevista do frasco no V8.Retire a tampa dos frascos do Diluente V8 SPE, certificando-se de que o frasco 9. está correctamente posicionado na área de frascos de reagentes (consultar o Manual do Operador).Quando o V8 estiver pronto para aceitar amostras para operação, o instrumento 10. emitirá uma luz intermitente vermelha.


45

pt

Colocar cada tubo de ensaio inicial no suporte de amostras, certificando-se de que 11. o código de barras é claramente visível através da janela do suporte (consultar o manual do operador).Carregar os suportes com amostras no lado esquerdo da zona de transporte de 12. amostras do V8 e fechar a tampa, dcomo indicado no manual do operador.O V8 iniciará automaticamente a análise de todas as amostras carregadas e os 13. resultados serão transferidos para o Platinum 4V.Depois de efectuada a análise, iniciar o modo de desligar o V8, desligando o 14. instrumento como indicado no manual do operador.É importante que o V8 seja correctamente acondicionado no fim do dia.15. Consultar o manual do operador.

INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOSRecomendamos que se faça uma avaliação dos traços de EC e da sua comparação com os valores normais produzidos para este método em cada laboratório individual. Para uma revisão completa da avaliação de proteína sérica, consultar Ritzmann, S.E., 19825. Certos estudos demonstraram que os valores são iguais nos homens e nas mulheres não grávidas. Verificam-se algumas diferenças nas mulheres grávidas no fim da gravidez e nas mulheres a tomar contraceptivos orais. A idade exerce algum efeito sobre os níveis normais. O sangue do cordão tem um total reduzido de fracções de proteína, albumina, alfa-2 e beta; um leve aumento de alfa-1 e um aumento ou um nível normal da fracção de gama (quase toda de origem materna). As gamaglobulinas decrescem rapidamente até cerca dos 3 meses de idade, ao passo que, por esta altura, já as outras fracções atingiram os níveis adultos. Os níveis adultos das gamaglobulinas não são alcançados até aos 10-16 anos de idade. A albumina diminui e a betaglobulina aumenta depois dos 40 anos de idade.

CONTROLO DA QUALIDADEOs controlos Helena Biosciences CEtrol Serum Controls (N.ºs de cat. 802400 e 802500) podem ser utilizados para verificar todas as fases do procedimento das proteínas séricas. Consultar o folheto informativo da embalagem que indica os valores apropriados do ensaio.

LIMITAÇÕESDevido às limitações inerentes da resolução e sensibilidade da Electroforese Capilar, existe a possibilidade teórica de algumas gamapatias monoclonais não poderem ser detectadas por este método analítico. Se a apresentação do caso clínico for sugestiva de uma gamapatia, o electroferograma deve ser atentamente exa-minado para detecção de quaisquer sinais de anormalidade. Em caso de dúvida, tentar efectuar a imuno-tipagem das gamaglobulinas anormais presentes por Imunodeslocamento e/ou Imunofixação em gel de aga-rose.


46


VALORES DE REFERÊNCIAUtilizando 39 amostras normais de homens e mulheres doadores com idades dos 17 aos 64 anos, obtiveram-se as seguintes variações normais (que são aqui apresentadas apenas como orientação),

Fracção de proteína Média (%) ± 2SD Amplitude

Albumina 62,18 54,70 - 69,66

Alfa-1 3,83 2,63 - 5,03

Alfa-2 7,68 4,87 - 10,48

Beta-1 7,27 5,35 - 9,19

Beta-2 4,75 2,38 - 7,11

Gama 14,30 9,69 - 18,90

CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHOA Helena Biosciences determinou as seguintes características de desempenho apenas para orientação. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios dados de desempenho.

Precisão:

Reprodutibilidade dentro do ensaio (n = 96)

Reprodutibilidade entre ensaios (n = 120)

Média (%) C.V. (%) Média (%) C.V. (%)

Albumina 63,8 0,5 62,4 1,3

Alfa-1 3,8 3,6 4,5 3,3

Alfa-2 7,2 1,3 10,2 4,9

Beta-1 7,3 1,6 6,5 6,7

Beta-2 4,1 1,9 4,7 2,5

Gama 13,9 1,0 11,8 3,5

Sensibilidade: V8 Serum Protein SPE Kit pode detectar proteínas séricas em níveis de 208 µg/ml (0,208 g/l).

Precisão: A comparação com um método semi-automatizado de análise em gel das proteínas séricas, comercialmente disponível, deu o seguinte resultado:

y = 1,1964x -4,9686, r2 = 0,9308


47

pt

BIBLIOGRAFIAAlper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1. 1974; 291 : 287-290.Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, 2. Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : 524.Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and 3. Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, 1979.Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 4. pages 579-582, 1986.Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of 5. Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


48



49

el

ΕλληνικάΣΚΟΠΟΣ ΓΙΑ ΤΟΝ ΟΠΟΙΟ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙΤο κιτ V8 Serum Protein SPE Kit προορίζεται για το διαχωρισμό και τον ποσοτικό προσδιορισμό των πρωτεϊνών ορού μέσω τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης (CE).

Ο ορός περιέχει περισσότερες από 100 διαφορετικές πρωτεΐνες, κάθε μία από τις οποίες εκτελεί ένα συγκεκριμένο σύνολο λειτουργιών και υφίσταται συγκεκριμένες διακυμάνσεις στη συγκέντρωση, ανάλογα με τις διαφορετικές παθολογικές καταστάσεις1. Από την πρώτη χρήση της ηλεκτροφόρησης κινούμενου μετώπου από τον Tiselius2 και τη μετέπειτα χρήση της ηλεκτροφόρησης ζώνης, οι πρωτεΐνες ορού κλασματώνονται με βάση το φορτίο τους σε συγκεκριμένο pH. Το κιτ πρωτεϊνών ορού SPE V8 χρησιμοποιεί ένα αλκαλικό ρυθμιστικό διάλυμα για τον διαχωρισμό των πρωτεϊνών του ορού σε 6 κύριες τάξεις (αλβουμίνη, α-1 σφαιρίνη, α-2 σφαιρίνη, β-1 σφαιρίνη, β-2 σφαιρίνη και γ σφαιρίνη). Κάθε μία από τις ηλεκτροφορητικές ζώνες, με εξαίρεση την αλβουμίνη, περιέχει συνήθως 2 ή περισσότερα συστατικά. Οι σχετικές αναλογίες αυτών των κλασμάτων έχει αποδειχτεί ότι αποτελούν χρήσιμα βοηθήματα στη διάγνωση και την πρόγνωση ορισμένων παθολογικών καταστάσεων3-5.

ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣΤα αντιδραστήρια που περιέχονται σε αυτό το κιτ προορίζονται αποκλειστικά για in vitro διαγνωστική χρήση. Μην καταπίνετε και μην αναρροφάτε με το στόμα κανένα από τα συστατικά του κιτ. Να φοράτε γάντια κατά το χειρισμό όλων των συστατικών του κιτ. Ανατρέξτε στο φύλλο δεδομένων ασφάλειας του προϊόντος για τις φράσεις κινδύνου και ασφάλειας, καθώς και για πληροφορίες σχετικά με την απόρριψη.

ΣΥΝΘΕΣΗV8 SPE Buffer. REF HL-3-2198SA (1 x 500 εξετάσεις).1. Κάθε φιάλη περιέχει αρκετή ποσότητα διαλύματος SPE Buffer για τη διενέργεια 500 εξετάσεων. Το ρυθμιστικό διάλυμα είναι έτοιμο για χρήση και θα πρέπει να τοποθετείται στην κατάλληλη θέση στο όργανο Helena V8, σύμφωνα με τις οδηγίες που αναγράφονται στο εγχειρίδιο χρήσης.V8 SPE Diluent. REF HL-3-2199SA (3 x 20 ml).2. Κάθε κιτ περιέχει αρκετή ποσότητα διαλύματος SPE Diluent. για τη διενέργεια 500 εξετάσεων. Το διάλυμα αραίωσης δείγματος είναι έτοιμο για χρήση και θα πρέπει να τοποθετείται στην κατάλληλη θέση στο όργανο Helena V8, σύμφωνα με τις οδηγίες που αναγράφονται στο εγχειρίδιο χρήσης.


50


Φίλτρο. REF HL-3-2130SA (x1).3. Η μονάδα φίλτρου θα πρέπει να εφαρμόζεται στο σωλήνα εισόδου του συνδέσμου της φιάλης του διαλύματος SPE Buffer του οργάνου Helena V8, σύμφωνα με τις οδηγίες που αναγράφονται στο εγχειρίδιο χρήσης. Αυτό το φίλτρο είναι μιας χρήσης και θα πρέπει να αντικαθίσταται όταν αντικαθίσταται το διάλυμα Serum Protein Buffer.Υποδοχείς δειγμάτων. REF HL-3-2134SA (4 x 36).4. Οι υποδοχείς δειγμάτων θα πρέπει να τοποθετούνται στο όργανο Helena V8 σύμφωνα με το εγχειρίδιο χρήσης.Άλλα συστατικά του κιτ.5. Κάθε κιτ περιέχει οδηγίες χρήσης.

ΜΗΤΡΑ ΧΡΗΣΗΣΟ αριθμός των εξετάσεων ανά φιάλη ρυθμιστικού διαλύματος ενδέχεται να είναι μικρότερος από 500, όταν η δυνατότητα εκτέλεσης του συστήματος είναι μικρότερη από 100 εξετάσεις ανά περίοδο λειτουργίας. Η απόδοση ανά φιάλη με βάση των αριθμό των εξετάσεων, κατά προσέγγιση, παρέχεται παρακάτω:

100+ εξετάσεις ανά περίοδο λειτουργίας: 500 εξετάσεις ανά φιάλη 60 - 100 εξετάσεις ανά περίοδο λειτουργίας: 450 εξετάσεις ανά φιάλη 40 - 60 εξετάσεις ανά περίοδο λειτουργίας: 400 εξετάσεις ανά φιάλη < 40 εξετάσεις ανά περίοδο λειτουργίας: 350 εξετάσεις ανά φιάλη

ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣΡυθμιστικό διάλυμα SPE V8. REF HL-3-2198SA Διάλυμα αραίωσης SPE V8. REF HL-3-2199SA Το ρυθμιστικό διάλυμα SPE και το διάλυμα αραίωσης SPE θα πρέπει να φυλάσσονται σε θερμοκρασία 15...30 °C και παραμένουν σταθερά έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα. Οι ανοιγμένες φιάλες του ρυθμιστικού διαλύματος παραμένουν σταθερές στο όργανο για 6 μήνες σε θερμοκρασία 15...30 °C. Οι ανοιγμένες φιάλες του διαλύματος αραίωσης παραμένουν σταθερές επί 6 μήνες σε θερμοκρασία 15…30 °C, όταν είναι πωματισμένες. Το ρυθμιστικό διάλυμα SPE και το διάλυμα αραίωσης SPE είναι διαυγή, άχρωμα διαλύματα. Εάν παρατηρηθούν αλλαγές στην εμφάνιση του ρυθμιστικού διαλύματος SPE ή του διαλύματος αραίωσης SPE, για παράδειγμα θολερότητα, η οποία υποδεικνύει επιμόλυνση από μικρόβια, απορρίψτε τα υγρά. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ ΤΑ ΥΓΡΑ


51

el

ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΟΥΝΤΑΙ ΑΛΛΑ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙREF 830100 V8 Storage Buffer REF 830200 V8 Maintenance Buffer REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack

ΠΡΟΑΙΡΕΤΙΚΑ ΕΙΔΗREF 800501 Συσκευασία συμπληρωματικού ρυθμιστικού διαλύματος

REF 800300 Κιτ ανοσολογικής εκτόπισης V8 REF 820500 Κιτ ελεύθερων κ αλύσων/ελεύθερων λ αλύσων V8 REF 821400 Κιτ αντι-IgD / αντι-IgE V8 - σε περίπτωση διενέργειας ανοσολογικής εκτόπισης ορού ή ούρων

REF 800412 Ρυθμιστικό διάλυμα παρασκευής ούρων SPE REF VS20002 Σωληνάρια συμπύκνωσης με φυγοκέντρηση VivaSpin 20 της Sartorius REF GEHE17-0853-02 Στήλες αφαλάτωσης NAP-5 της GE Healthcare - σε περίπτωση διενέργειας ανάλυσης λευκωμάτων στα ούρα

ΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΤΟΥ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣΓια την ανάλυση πρωτεϊνών ορού, το προτιμώμενο δείγμα είναι ορός που έχει συλλεχθεί πρόσφατα, καθώς τα δείγματα πλάσματος θα δώσουν μια μεγάλη ζώνη ινωδογόνου μεταξύ των κλασμάτων βήτα και γάμμα. Τα δείγματα μπορούν να φυλάσσονται σε θερμοκρασία 2…8 °C επί έως και 7 ημέρες και επί έως και 1 μήνα στους -20 °C. Εάν τα δείγματα πρέπει να φυλαχθούν στην κατάψυξη, θα πρέπει να ψύχονται αμέσως και να καταψύχονται εντός 8 ωρών από τη συλλογή. Η φύλαξη των δειγμάτων σε θερμοκρασία 2…8 °C μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα αποικοδόμηση πρωτεϊνών και ειδικά, αλλά όχι αποκλειστικά, των κλασμάτων του συμπληρώματος. Κατά συνέπεια, μετά από φύλαξη επί 7 ημέρες σε θερμοκρασία 2…8 °C, ενδέχεται να μην είναι πλέον δυνατή η ανίχνευση μιας διακριτής περιοχής βήτα-2. ΜΗ φυλάσσετε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου - το δείγμα θα αποικοδομηθεί ταχέως. Τα δείγματα που περιέχουν κρυοσφαιρίνες ενδέχεται να εμφανίσουν υψηλό ιξώδες ή θολερότητα μετά την ψύξη ή την κατάψυξη. Συνιστάται να αφήνετε αυτά τα δείγματα να φθάσουν σε θερμοκρασία δωματίου πριν από την ανάλυση.

Για ανάλυση ούρων, το προτιμώμενο δείγμα είναι ούρα που έχουν συλλεχθεί πρόσφατα (συλλογή 24ώρου). Tα δείγματα μπορούν να αποθηκευθούν σε θερμοκρασία 2…8 °C για έως και 7 ημέρες. Για περιόδους φύλαξης μεγαλύτερης διάρκειας, συνιστάται η φύλαξη των


52


δειγμάτων σε θερμοκρασία -70 °C, έως και 1 μήνα. ΜΗ φυλάσσετε τα δείγματα σε θερμοκρασία -20 °C. Τα δείγματα ούρων πρέπει να αφαλατώνονται πριν από την ανάλυση στο σύστημα V8, με χρήση ενός από τους προαιρετικούς συνδυασμούς ρυθμιστικού διαλύματος παρασκευής ούρων και συσκευής, οι οποίοι παρατίθενται παραπάνω.

ΠΑΡΑΓΟΝΤΕΣ ΠΑΡΕΜΠΟΔΙΣΗΣΗ αιμόλυση ενδέχεται να προκαλέσει ψευδή αύξηση των κλασμάτων α2 και β.1. Είναι δυνατό να ληφθούν ανακριβή αποτελέσματα από δείγματα που 2. παρέμειναν ακάλυπτα, λόγω εξάτμισης.Η παρουσία ακτινοσκιερών σκιαγραφικών μέσων μπορεί να έχει ως 3. αποτέλεσμα οι περιοχές α-2 και β του ηλεκτροφορήματος να εμφανίζονται αυξημένες.

ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΒΗΜΑ ΠΡΟΣ ΒΗΜΑΒεβαιωθείτε ότι το συρτάρι του δοχείου απόβλητων βρίσκεται στο όργανο.1. Προτού ενεργοποιήσετε το όργανο V8, βεβαιωθείτε ότι το ρυθμιστικό 2. διάλυμα φύλαξης, το ρυθμιστικό διάλυμα συντήρησης και οι αναλώσιμοι υποδοχείς βρίσκονται στο όργανο και στις σωστές θέσεις τους. Για τη σωστή εγκατάσταση όλων των αναλωσίμων, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης.Πραγματοποιήστε εκκίνηση του λογισμικού Platinum 4V και ξεκινήστε μια νέα 3. περίοδο λειτουργίας CE. Στο λογισμικό Platinum 4V, επιλέξτε «CE SYSTEM» από το αναπτυσσόμενο μενού, επιλέξτε «DEFAULT METHOD» και βεβαιωθείτε ότι είναι σημειωμένη η επιλογή SPE η SPE Urine, ανάλογα με τις απαιτήσεις της ανάλυσης. Ενεργοποιήστε το όργανο Helena V8, σύμφωνα με τις οδηγίες που 4. αναγράφονται στο εγχειρίδιο χρήσης. Για παραγγελία μεμονωμένων εξετάσεων ανατρέξετε στο εγχειρίδιο χρήσης.5. Όταν σας ζητηθεί από το όργανο V8 (και εάν είναι απαραίτητο), εγκαταστήστε 6. τη φιάλη του διαλύματος V8 SPE Buffer στο διαμέρισμα φιαλών υγρού του οργάνου Helena V8 και βεβαιωθείτε ότι βρίσκεται στη σωστή θέση. Για τη σωστή εγκατάσταση της φιάλης του διαλύματος ρυθμιστικού διαλύματος V8 SPE Buffer, βεβαιωθείτε ότι εφαρμόζεται μια νέα μονάδα φίλτρου στο σωλήνα εισόδου του συνδέσμου της φιάλης ρυθμιστικού διαλύματος πριν από την εγκατάσταση της στο όργανο Helena V8 (ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης). Η εγκατάσταση της φιάλης του διαλύματος V8 SPE Buffer θα ανοίξει αυτόματα 7. ένα παράθυρο μηνύματος «DEFINE BUFFER» στο λογισμικό Platinum 4V. Σαρώστε η εισαγάγετε τον κωδικό στο πεδίο της θέσης του ρυθμιστικού διαλύματος που αντιστοιχεί στη θέση της φιάλης.


53

el

Βεβαιωθείτε ότι οι κατάλληλες πληροφορίες γραμμικού κώδικα των 8. αντιδραστηρίων έχουν καταχωριστεί στο λογισμικό Platinum 4V, επιλέγοντας «CE SESSION» από το αναπτυσσόμενο μενού. Κάντε κλικ στο πλήκτρο «DEFINE REAGENTS» (Ορισμός αντιδραστηρίων) και βεβαιωθείτε ότι έχουν εισαχθεί οι πληροφορίες γραμμικού κώδικα για το διάλυμα αραίωσης και ότι η θέση των πληροφοριών για το αντιδραστήριο αντιστοιχεί στη θέση στην οποία προορίζεται να τοποθετηθεί το φιαλίδιο στο όργανο V8. Αφαιρέστε το καπάκι από το διάλυμα αραίωσης SPE V8 και βεβαιωθείτε ότι 9. η φιάλη είναι σωστά τοποθετημένη στην περιοχή φιαλών αντιδραστηρίου (ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης).

10. Όταν το όργανο V8 είναι έτοιμο να δεχτεί δείγματα για εκτέλεση ανάλυσης, 11. ένα κόκκινο φως θα αναβοσβήνει στο όργανο.Τοποθετήστε κάθε πρωτογενές σωληνάριο δείγματος στο φορέα δειγμάτων, 12. διασφαλίζοντας ότι ο γραμμικός κώδικας είναι σαφώς ορατός μέσω του παράθυρου του φορέα (ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης). Τοποθετήστε τους φορείς δειγμάτων στην αριστερή πλευρά της περιοχής 13. μεταφοράς δειγμάτων του οργάνου V8 και κλείστε το καπάκι, σύμφωνα με τις οδηγίες που αναγράφονται στο εγχειρίδιο χρήσης.Tο όργανο V8 θα ξεκινήσει αυτόματα την ανάλυση όλων των δειγμάτων που 14. έχουν φορτωθεί και τα αποτελέσματα θα μεταφερθούν στο λογισμικό Platinum 4V.Μετά την ανάλυση, και εάν απαιτείται, ξεκινήστε τον τρόπο τερματισμού 15. λειτουργίας του οργάνου V8 απενεργοποιώντας το όργανο συμφώνα με τις οδηγίες που αναγράφονται στο εγχειρίδιο χρήσης. Είναι σημαντικό να εκτελέσετε σωστή συντήρηση του οργάνου V8 μετά τη 16. χρήση, στο τέλος της ημέρας. Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης.

ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝΣυνιστάται οποιαδήποτε αξιολόγηση των ιχνών CE να εκτελείται έναντι των φυσιολογικών τιμών που έχουν προσδιοριστεί για τη μέθοδο αυτή σε κάθε μεμονωμένο εργαστήριο. Για μια πλήρη ανασκόπηση της αξιολόγησης των πρωτεϊνών του ορού, βλ. Ritzmann, S.E, 19825. Οι μελέτες καταδεικνύουν ότι οι τιμές είναι ίδιες τόσο για τους άνδρες όσο και για τις μη έγκυες γυναίκες. Παρατηρούνται ορισμένες διαφορές σε γυναίκες στο τελευταίο στάδιο της κύησης και σε γυναίκες που λαμβάνουν αντισυλληπτικά από του στόματος. Η ηλικία επιδρά σε κάποιο βαθμό στα φυσιολογικά επίπεδα. Το αίμα από τον ομφάλιο λώρο έχει μειωμένη ολική πρωτεΐνη, αλβουμίνη και κλάσματα α2 και β, ενώ παρουσιάζει ελαφρώς αυξημένο κλάσμα α1 και φυσιολογικό ή αυξημένο κλάσμα γ (κυρίως μητρικής προέλευσης). Το επίπεδο των γ σφαιρινών μειώνεται


54


ταχέως έως την ηλικία των 3 μηνών περίπου ενώ, στην ηλικία αυτή, τα άλλα κλάσματα φτάνουν στο επίπεδο των ενηλίκων. Οι γ σφαιρίνες φτάνουν στο επίπεδο των ενηλίκων σε ηλικία 10-16 ετών. Η αλβουμίνη μειώνεται και η β σφαιρίνη αυξάνεται μετά την ηλικία των 40 ετών.

ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣΤα διαλύματα ελέγχου Helena Biosciences CEtrol Serum Controls (αρ. κατ. 802400 και 802500) μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την επαλήθευση όλων των φάσεων της διαδικασίας προσδιορισμού πρωτεϊνών ορού. Ανατρέξτε στο ένθετο συσκευασίας για τις κατάλληλες τιμές της ανάλυσης.

ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙΛόγω των εγγενών περιορισμών της διακριτικής ικανότητας και της ευαισθησίας της τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης, θεωρητικά είναι δυνατό να μην ανιχνευθούν ορισμένες μονοκλωνικές γαμμαπάθειες με αυτή την μέθοδο ανάλυσης. Εάν η εμφάνιση του κλινικού περιστατικού υποδηλώνει κάποια γαμμαπάθεια, το ηλεκτροφόρημα θα πρέπει να εξεταστεί προσεκτικά για τυχόν παθολογικά σημεία. Εάν έχετε αμφιβολίες, προσπαθήστε να πραγματοποιήσετε προσδιορισμό ανοσοτύπου οποιασδήποτε παθολογικής γάμμα σφαιρίνης που υπάρχει στο δείγμα με τη μέθοδο ανοσολογικής εκτόπισης ή/και με τη μέθοδο ανοσοκαθήλωσης σε πήκτωμα αγαρόζης.

ΤΙΜΕΣ ΑΝΑΦΟΡΑΣΧρησιμοποιώντας 39 φυσιολογικά δείγματα από άνδρες και γυναίκες δότες με εύρος ηλικίας 17-64 έτη, ελήφθησαν τα παρακάτω φυσιολογικά εύρη τιμών (δίνονται αποκλειστικά ως κατευθυντήρια οδηγία):

Κλάσμα πρωτεΐνης Μέση τιμή (%) Εύρος ± 2 τυπικές αποκλίσεις (SD)

Αλβουμίνη 62,18 54,70 - 69,66

α1 3,83 2,63 - 5,03

α2 7,68 4,87 - 10,48

β1 7,27 5,35 - 9,19

β2 4,75 2,38 - 7,11

γ 14,30 9,69 - 18,90

ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣΗ Helena Biosciences έχει προσδιορίσει τα ακόλουθα χαρακτηριστικά απόδοσης ως κατευθυντήρια οδηγία. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τα δικά του δεδομένα απόδοσης.


55

el

Πιστότητα:

Αναπαραγωγιμότητα εντός της ανάλυσης (n = 96)

Αναπαραγωγιμότητα μεταξύ αναλύσεων (n = 120)

Μέση τιμή (%) C.V. (%) Μέση τιμή (%) C.V. (%)

Αλβουμίνη 63,8 0,5 62,4 1,3

α1 3,8 3,6 4,5 3,3

α2 7,2 1,3 10,2 4,9

β1 7,3 1,6 6,5 6,7

β2 4,1 1,9 4,7 2,5

γ 13,9 1,0 11,8 3,5

Ευαισθησία: Tο κιτ V8 Serum Protein SPE Kit μπορεί να ανιχνεύσει πρωτεΐνες ορού σε επίπεδα της τάξης των 208 µg/ml (0,208 g/L).

Ακρίβεια: Η σύγκριση έναντι μιας ημιαυτόματης μεθόδου προσδιορισμού πρωτεϊνών ορού σε πήκτωμα, η οποία διατίθεται στο εμπόριο, έδωσε:

y = 1,1964x -4,9686, r2 = 0,9308

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑAlper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1. 1974; 291 : 287-290.Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, 2. Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : 524.Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and 3. Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, 1979.Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 4. pages 579-582, 1986.Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of 5. Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


56



57

ru

РусскийНАЗНАЧЕНИЕV8 Serum Protein SPE Kit (шестиполосный комплект SPE V8 для определения сывороточных белков) предназначен для разделения и количественного анализа сывороточных белков с помощью капиллярного электрофореза (КЭ).

В сыворотке содержится больше 100 различных белков, обладающих определенными свойствами и изменяющимися определенным образом по концентрации при различных патологических состояниях1. С момента внедрения Tiselius2 электрофореза в свободном потоке и последующего применения зонного электрофореза сывороточные белки были разделены с уровнем их заряда при соответствующем значении pH. В комплекте V8 Serum Protein SPE Kit (комплект для определения сывороточных белков методом электрофореза сывороточных белков на аппарате V8 (SPE)) используется щелочной буферный раствор для разделения сывороточных белков на 6 основных классов (альбумин, альфа-1-глобулин, альфа-2-глобулин, бета-1-глобулин, бета-2-глобулин и гамма-глобулин). В каждом проведенном электрофорезе, за исключением альбумина, содержится, как минимум, 2 компонента. Относительное содержание этих фракций оказалось полезным показателем в диагностике и прогнозе некоторых патологических состояний3-5.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИРеактивы, содержащиеся в этом комплекте, предназначены только для диагностики in vitro. Не глотайте и не капайте пипеткой в рот какие-либо компоненты комплекта. При манипуляциях со всеми компонентами комплекта используйте перчатки. Данные по безопасности продукта и сведения об утилизации приведены в спецификации продукта в отношении безопасности.


58


СОСТАВV8 SPE Buffer. REF HL-3-2198SA (1 x 500 анализов) - буфер для анализа 1. сывороточных белков. Каждый флакон содержит SPE Buffer (буфер для анализа сывороточных белков) в количестве, достаточном для 500 анализов. Буфер для анализа сывороточных белков готов к применению, и его следует помещать в соответствующее место на инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве пользователя.V8 SPE Diluent. REF HL-3-2199SA (3 x 20 мл) – разбавитель для анализа 2. сывороточных белков SPE V8. В каждом комплекте содержится количество SPE Diluent (разбавитель SPE), достаточное для проведения 500 анализов. Pазбавитель готов к применению, и его следует помещать в соответствующее место на инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве пользователя.Фильтр. REF HL-3-2130SA (x1).3. Фильтр следует устанавливать на входную трубку переходника для флакона с буфером для анализа сывороточных белков инструмента Helena V8 согласно инструкции в руководстве пользователя. Фильтр предназначен для одноразового использования, и при замене буфера для сывороточных белков его тоже следует заменять.Стаканчики для образцов. REF HL-3-2134SA (4 x 36). 4. Стаканчики для образцов следует устанавливать на инструменте Helena V8 согласно руководству пользователя.Прочие компоненты комплекта.5. В каждом комплекте имеется инструкция по применению.

ПРИМЕНЕНИЕ MAtRIxКоличество тестов во флаконе может быть менее 500, если производительность системы менее 100 тестов за сеанс. Ниже представленная приблизительная продуктивность флакона, исходя из количества тестов:

100 и более тестов за сеанс: 500 тестов во флаконе 60—100 тестов за сеанс: 450 тестов во флаконе 40—60 тестов за сеанс: 400 тестов во флаконе Менее 40 тестов за сеанс: 350 тестов во флаконе


59

ru

ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИV8 SPE Buffer — буферный раствор SPE для аппарата V8. REF HL-3-2198SA V8 SPE Diluent — разбавитель SPE для аппарата V8. REF HL-3-2199SA Буферный раствор SPE и разбавитель SPE следует хранить при температуре 15-30°C; они сохраняют стабильность до истечения срока годности, указанного на этикетке. Буферный раствор сохраняет стабильность при температуре 15—30°C в течение 6 месяцев после вскрытия флаконов при нахождении их в аппарате. Разбавитель сохраняет стабильность при температуре 15—30°C в течение 6 месяцев после вскрытия флаконов, если закрыть их крышками. Буферный раствор SPE и разбавитель SPE представляют собой прозрачные бесцветные растворы. При изменении внешнего вида буферного раствора SPE и разбавителя SPE, например, помутнении (что означает микробную контаминацию), утилизируйте жидкости. НЕ ЗАМОРАЖИВАЙТЕ ЖИДКОСТИ

НЕОБХОДИМЫЕ КОМПОНЕНТЫ, НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИREF 830100 V8 Storage Buffer — буфер для хранения REF 830200 V8 Maintenance Buffer — буфер для поддержания REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack — выдвижной контейнер для медицинских отходов

НЕОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ КОМПОНЕНТЫREF 800501 Supplemental Buffer Pack —дополнительный пакет с буферным раствором

REF 800300 V8 Immunodisplacement Kit — комплект для иммуновытеснения на аппарате V8. REF 820500 V8 Free Kappa / Free Lambda Kit — набор антисывороток к свободным каппа-цепям / к свободным лямбда-цепям для аппарата V8. REF 821400 V8 Anti IgD / Anti IgE Kit— набор антисывороток к IgD / к IgE — для электрофореза сыворотки или мочи с иммуновытеснением на аппарате V8

REF 800412 Urine Preparation Buffer SPE — буферный раствор для подготовки образца мочи REF VS20002 Sartorius VivaSpin — 20 концентраторов для центрифуг REF GEHE17-0853-02 GE Healthcare NAP-5 колонок для обессоливания — для проведения анализа мочи на белок


60


ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВДля анализа на сывороточные белки оптимальным образцом является свежесобранная сыворотка, поскольку при использование для этих целей плазмы приведет к выявлению широкой полосы фибриногена между полосами бета- и гамма-фракций. Образцы можно хранить до 7 дней при температуре 2—8°C и до 1 месяца при температуре -20°C. Если образцы подлежат хранению в замороженном виде, их следует охладить тотчас после сбора и заморозить в течение 8 часов. Хранение образцов при температуре 2—8°C может привести к разрушению белков, особенно (но не только) принадлежащих к фракциям комплемента. Следовательно, спустя 7 дней хранения при температуре 2—8°C четкое определение области бета-2 может оказаться невозможным. ЗАПРЕЩАЕТСЯ хранение образцов при комнатной температуре — это приведет к их быстрому разрушению. Образцы, содержащие криоглобулины, после охлаждения или замораживания могут стать вязкими или мутными. Рекомендуется нагревать такие образцы перед анализом до комнатной температуры.

Для проведения анализа мочи оптимальным образцом является свежесобранная (в течение 24 часов) моча. Образцы могут храниться при температуре 2—8°C до 7 дней. При необходимости более длительного хранения рекомендуется хранить образцы при температуре -70°C до 1 месяца. ЗАПРЕЩАЕТСЯ хранение образцов при температуре -20°C. Перед анализом на аппарате V8 образцы мочи следует обессолить с помощью комбинации одного из дополнительных буферных растворов для подготовки мочи и устройства, перечисленных ниже.

ПОБОЧНЫЕ ФАКТОРЫГемолиз может вызывать ложное повышение альфа-2- и бета-фракций.1. Неточные результаты возможны из-за испарения, когда образцы оставляют 2. в незакрытом виде.Наличие рентгенконтрастного вещества может привести к подъему областей 3. альфа-2 и бета-фракций на электрофореграмме.

ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРАУбедитесь, что имеется выдвижной контейнер для отходов.1. До перехода к V8 убедитесь, что имеется буфер для хранения, буфер для 2. поддержания и одноразовые чашечки для проб, и они находятся на приборе в соответствующих положениях. Установка всех расходных материалов описана в руководстве пользователя.


61

ru

Запустите Platinum 4V и начните новый сеанс электрофореза. В Platinum 3. 4V выберите, из выпадающего меню, ‘CE SYSTEM’ (СИСТЕМА КЭ), затем ‘DEFAULT METHOD’ (МЕТОД ПО УМОЛЧАНИЮ) и выберите SPE или SPE Urine в зависимости от того, какой анализ требуется провести. Включите анализатор Helena V8, как описано в руководстве пользователя. 4. Выбор определенных анализов описан в руководстве пользователя.5. Когда V8 запросит (и, если это требуется), установите флакон с буфером 6. V8 SPE в отделение для буферных растворов на анализаторе Helena V8 и убедитесь, что он находится в правильном положении. Для правильной установки буфера убедитесь, что на входном отверстии переходника для буферной трубки используется новый фильтр (см. руководство оператора). Установка флакона SPE буфера на V8 произойдет автоматически, затем 7. откроется окно в Platinum 4V ‘DEFINE BUFFER’ (ОПРЕДЕЛЕНИЕ БУФЕРА). С помощью сканера или вручную введите штрих-код в соответствующее поле положения буфера, совпадающее с положением флакона. Убедитесь в том, что в Platinum 4V загружен соответствующий штрихкод 8. реагента, выбрав в выпадающем меню «CE SESSION» (Сеанс КЭ). Щелкните «DEFINE REAGENTS» (Определить реагенты) и убедитесь в том, что данные штрихкода разбавителя введены, а расположение информации о реагенте соответствует расположению целевого флакона в аппарате V8.Снимите крышку с разбавителя SPE на аппарате V8 и удостоверьтесь в 9. правильном расположении флакона в предназначенной для него области (см. руководство по эксплуатации).Когда V8 будет готов для проведения анализа, подсветка анализатора будет 10. мигать красным светом.Поместите образцы в первичных пробирках в штатив и убедитесь, что штрих-11. код четко виден через окошечко штатива (см. руководство пользователя). Загрузите штатив с образцами в левую половину транспортера проб V8 и 12. закройте крышку, как описано в руководстве пользователя. V8 автоматически начнет анализ всех загруженных образцов, и результаты 13. будут передаваться в Platinum 4V. После анализа и, ели есть необходимость, запустите режим завершения 14. работы V8, выключив инструмент, как описано в руководстве пользователя. Важно, чтобы V8 был правильно установлен в конце дня.15. См. руководство пользователя.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВРекомендуется проводить оценку дорожки КЭ против нормальных значений, полученных данным методом в каждой лаборатории. Полный обзор анализа сывороточных белков приведен в работе Ritzmann, S.E, 19825. Исследования показали, что значения у мужчин и небеременных женщин одинаковы. У беременных на поздних сроках и женщин, принимающих


62


противозачаточные средства, имеются некоторые отличия. Некоторое влияние на нормальные значения оказывает возраст. В пуповинной крови снижено содержание общего белка, альбумина, альфа-2- и бета-фракций, несколько повышено содержание альфа-1-фракции, а содержание гамма-фракции нормально или повышено (в основном материнского происхождения). Гамма-глобулины быстро снижаются к 3-месячному возрасту, в то время как другие фракции к этому времени достигают величин, характерных для взрослых. Уровни гамма-глобулинов, характерные для взрослых, достигаются только к 10-16-летнему возрасту. Содержание альбумина и бета-глобулина повышается после 40 лет.

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВАДля верификации всех стадий процедуры анализа сывороточных белков можно использовать контрольные сыворотки Helena Biosciences CEtrol Serum Controls (кат. номера 802400 и 802500). Соответствующие показатели приведены во вкладыше к упаковке.

НЕДОСТАТКИВ связи с присущими капиллярному электрофорезу ограничениями разрешения и чувствительности существует теоретическая вероятность того, что этот аналитический метод окажется неприменимым в диагностике некоторых моноклональных гаммапатий. Если клинические данные позволяют заподозрить гаммапатию, следует тщательно изучить электрофореграмму на предмет отклонений. В случае сомнений следует предпринять попытку иммунотипирования всех патологических гаммаглобулинов путем иммуновытеснения и/или иммунофиксации в геле агарозы.

НОРМАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИПо 39 образцам доноров мужчин и женщин в возрасте 17-64 лет определены следующие нормальные показатели (представлены только для справки):

Белковая фракция Среднее значение (%) Диапазон + 2SD

Альбумин 62,18 54,70 - 69,66

Альфа-1 3,83 2,63 - 5,03

Альфа-2 7,68 4,87 - 10,48

Бета-1 7,27 5,35 - 9,19

Бета-2 4,75 2,38 - 7,11

Гамма 14,30 9,69 - 18,90


63

ru

ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДАВ компании Helena Biosciences определены следующие характеристики, которые можно использовать как справочные. В каждой лаборатории необходимо установить собственные характеристики метода.

Точность:

Воспроизводимость в пределах одного анализа (n = 96)

Воспроизводимость между анализами (n = 120)

Среднее значение (%)

Коэффициент вариации (%)

Среднее значение (%)

Коэффициент вариации (%)

Альбумин 63,8 0,5 62,4 1,3

Альфа-1 3,8 3,6 4,5 3,3

Альфа-2 7,2 1,3 10,2 4,9

Бета-1 7,3 1,6 6,5 6,7

Бета-2 4,1 1,9 4,7 2,5

Гамма 13,9 1,0 11,8 3,5

Чувствительность: Комплект V8 Serum Protein SPE Kit способен выявлять сывороточные белки при концентрации 208 мкг/мл (0,208 г/л).

Достоверность: Сравнение с коммерческим полуавтоматическим методом определения сывороточных белков с помощью гель-электрофореза дал следующий результат:

y = 1,1964x -4,9686, r2 = 0,9308

ЛИТЕРАТУРАAlper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1. 1974; 291 : 287-290.Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, 2. Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : 524.Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and 3. Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, 1979.Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 4. pages 579-582, 1986.Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of 5. Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


Helena Biosciences EuropeQueensway South, Team Valley Trading Estate, Gateshead, Tyne and Wear, NE11 0SD, United Kingdom

Tel +44 (0)191 482 [email protected]

©2010-2011; HL-2-2157P 2011/02 (3)

www.helena-biosciences.com


v8 serum protein spe kit - diachel3) [multi language... · the v8 serum protein spe kit is intended...

Documents