PENENTUAN PROTEIN SERUMDENGAN METODA BIURET( KINGSLEY )

3

+ 3 ml dietil eter , 2 campur , kocok kuat- kuat , sekali-sekali tutup dibuka kemudian pusingkan 10 menit

4 3 Ambil 2 ml

Ambil 2 ml

1 7,5 ml Na2SO4 23 % 0,5 ml serum vortex 20 detik ( cam- pur pelan-pelan )117,5 ml H2O + 0,5 ml Standard S Ambil 2 ml

B : Ambil 2 ml H2O

PT s I s a A 2

PT = PROTEIN TOTAL

A = ALBUMIN + 4 ml REAGENS S = STANDARD BIURET B = BLANKO

BACA : Kolorimeter Klett : filter 55 atau Spektrofotometer

Perhitungan

Bila H2O = 0 R TP R B R A R B PT = X C S g/dl A = X C S g/dl RS R B Rs R B G = T P A g/dl B = 2 ml H20 + 4 ml R. Biuret

Bila R B = 0 R PT R APT = X C S g/dl A = X C S g/dl atau RS R S PT = R PT X 15,4 g/dl A = R A X 15,4 g/dl G = PT A g/dl

Bila pada pemeriksaan yang saudara lakukan didapatkan kadar albumin darah yang rendah . Jelaskan keadaan apa saja yang dapat menimbulkan hipoalbuminemia ini !

H A R G A N O R M A L TOTAL PROTEIN ( TP ) = 5 8 g/dl ( g% )

Albumin = 3,5 5,5 g/dl

Globulin = 1,5 3 g/dl

REAGEN BIURET : CuSO4 & NaOH / KOH OH UREACO - H2N Cu NH2CO NH2 NH HN C = OCO - H2N-K K-NH2-CO NH2 OH OH

Terbentuk : Kupri potasium Biuret atau Biuret Potasium Kuprihidroksida CO-NH2NCO-NH22 guguskarbamilDisebut Biuret karena reaksi ini positif untuk biuret atau biurea, tapi ternyata reaksi ini positif juga bila terdapat 2 atau lebih ikatan peptida dan 2 atau lebih gugus karbamil .

2 ikatan peptida R1 R2 R3 NH2 C CONH C CONH C COOH 3 asam amino H H H

dan

2

REAGEN BIURET : POSITIF NH2 UREA1. Biurea C = O, S,NH,H2 NH2 NH C = O C = O NH2 NH22. Bikarbamil CONH2 , S, NH, H2 KARBAMIL N CONH2 CONH2

3. 2 ikatan peptida R1 R2 R3 NH2 C CONH C CONH C COOH H H H CH2 CH COOH4. Asam amino histidin HN N NH2

Reagen Biuret positif dengan adanya minimal 2 ikatan peptida

R1 R2 R3 NH2 C CONH C CONH C COOH H H H

DIPEPTIDA : 2 asam amino = 1 ikatan peptida TRIPEPTIDA : 3 asam amino = 2 ikatan peptida POLIPEPTIDA lebih besar daripada 10 asam amino PROTEIN lebih besar dari 100 asam amino

1. PENENTUAN KADAR GLUKOSA DARAH DIGUNAKAN SERUM OLEH KARENA SERUM TIDAK MENGANDUNG FIBRINOGEN

PENENTUAN KADAR PROTEIN SERUM MENURUT KINGSLEY BERGUNA : 1. membantu menegakkan diagnosis 2. status gizi

A. Na2SO4 1/3 jenuh mengendapkan fibrinogen B Na2SO4 1/2 jenuh ( Na2SO4 23 % ) mengendapkan ( NH4 )2 SO4 jenuh fibrinogen dan globulin C. Na2SO4 jenuh mengendapkan fibrinogen, globulin, albumin

SERUM : PT = A + G

PT A = G

PLASMA : PT = A + G + F

PT- A = G + F

PT = protein total PT - A = G + F A = albuminG = globulinF = fibrinogen

4. PROTEIN + CuSO4 + BASA UNGU / VIOLET

5. 1. Dietil eter, lipid Na2SO4 23%

2. globulin

3. albumin dan Na2SO4 23 %

Guna dietil eter : 1. menggumpalkan globulin 2. menghilangkan kekeruhan oleh karena lipid1

REAGENS BIURET1 . GIES : CuSO4 3% dan KOH 10% CuSO4 peka thd autoreduksi

2. WEICHSELBAUM : K-NA tartrat ( stabilisator , Cu+2O tak terbentuk ) CuSO4.5H2O , NaOH KJ (mencegah autoreduksi )

3. GORNAL, BARDAWILL, DAVID : K-Na tartrat, CuSO4 dan NaOH 10%

4. WELKER : CuSO4 1% dan NaOH 40%

PENURUNAN KADAR ALBUMIN PLASMA ( HIPOALBUMINEMIA )KEHILANGAN ALBUMIN : Kebocoran albumin di ginjal pada penyakit nefritis, sindroma nefrotik.PASOKAN PROTEIN YANG INADEKUAT : T.B.C, keganasan, gangguan pencernaan protein, gangguan penyerapan asam amino, penurunan intake protein.GANGGUAN SINTESIS : sirosis hatiKATABOLISME PROTEIN MENINGKAT : Diabetes mellitus yang berat, tirotoksikosisHAMIL DAN LAKTASIPENGENCERAN PLASMA / KEHILANGAN PROTEIN : sesudah perdarahan hebat, dehidrasi berat, luka bakar hebat7. KELAINAN GENETIK

SEPARASI PROTEIN

1. FRAKSINASI : Garam ( salt ) dan Pelarut ( solvent ) Salting out : Presipitasi protein oleh Na2SO4/(NH4)2SO4 Tiap protein berbeda sifat pengendapannya2. ELEKTROFORESIS : Pergerakan molekul di medan listrik Perbedaan kecepatan migrasi partikel bermuatan pada medan listrik 3. ULTRACENTRIFUGE : Variasi masa dan bentuk molekul . Protein dengan BM besar akan mengendap paling cepat 4. KROMATOGRAFI : Perbedaan pola pergerakan antara fase gerak dan fase diam untuk memisahkan komponen (berupa molekul) yang berada pada larutan. Molekul yang terlarut dalam fase gerak, akan melewati kolom /kertas yang merupakan fase diam . Adanya perbedaan ukuran, bentuk, muatan molekul dan kelarutan partikel , kecepatan pergerakan akan berbeda .5. ANALISIS IMMUNOKIMIA : Perbedaan struktur molekul thd reaksi antisera . Ab tertentu akan terikat dengan antigen yang sesuai

STOOL CHROMATOGRAPHY

Karbohidrat Laktosa Feses

E I A Ag - Ab - E Ag-E + Ab Ag Ab - E + SUBSTRAT WARNA

S / Ag + Ab S / AgAb Ab : TERBATAS

ENZYME IMMUNO ASSAY

RADIO IMMUNO ASSAY

Ag* + Ab Ag* Ab ( * label radioaktif ) S / Ag + Ab S / Ag Ab

Ab : TERBATAS

STANDARD CALIBRATION CURVEAbsorbanceSTANDARD

****`*