prošla nedelja

Prošla nedelja

Imunoaglutinacija (princip, podela, primena)

Imunoprecipitacija (princip, podela, primena)

ANTIGEN-ANTITELOREAKCIJE SA OBELEŽENIM

ANTITELIMA

ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE SA OBELEŽENIM ANTITELIMA

M

Fc

Fab

ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA,EIA) - marker ENZIM

IMUNOFLUORESCENCIJA (IF) - marker FLUORESCENTNA BOJA

RADIOIMMUNO ASSAY (RIA) - marker RADIOAKTIVNI IZOTOP

AtM - marker

Fab

Enzimski imuno-test(EIA, ELISA)

Marker je enzim, a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo)

Obavlja se u pločama za mikrotitraciju (pločama sa 96 rupica)

Signal se detektuje kolorimetrijski (pomoću spektrofotometra)

Koristi se za detekciju antigena u tečnim uzorcima (npr. serumu) ili antitela (najčešće u serumu)

Bazira se na principu promene boje supstrata pod dejstvom enzima

Može da bude kvalitativna ili kvantitativna

ELISA detekcija antitela

antigen kojim je obložena ploča

ispitivani serum

InkubacijaIspiranje

6

12

ELISA detekcija antitela

obeleženasekundarna At

EE

E

E

E

E

ELISA detekcija antitela

Inkubacija

EE

E

E

E

E

12

6

ELISA detekcija antitela

Ispiranje

EE

E E

EE

E

E

ELISA detekcija antitela

E

E E

E

12

6

Kolorimetrijska detekcija

ELISA detekcija antitela

ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)

neobeleženaAg-specifičnaAt

uzorak(serum)Ag

Inkubacija

12

6

Ispiranje

ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)

Inkubacija

12

6

Ispiranje

E

EE

E

E

obeleženaAg-specifičnaAt

ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)

Kolorimetrijska detekcija

12

6 E E

dodavanje supstrata

ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)

Imunofluorescencija(IF)

Marker je fluorescentna boja (fluorohrom), a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo)

Signal se detektuje pomoću fluorescentnog mikroskopa ili protočnog citoflourimetra

Koristi se za detekciju antigena (na ili u ćeliji/tkivu) ili antitela (najčešće u serumu)

Bazira se na principu da fluorohromi kada se ozrače svetlom jedne talasne dužine bivaju pobuđeni da emituju svetlo druge talasne dužine (fluorescein – zeleno, rodamin – crveno ...)

IMUNOFLUORESCENCIJA

INDIREKTNA (IIF)(obeleženo sekundarno At)

DIREKTNA (DIF)(obeleženo primarno At)

Detekcija Ag

DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

F

FF

F

fiksiraniuzorak

obeleženaprimarna At

F

FF

F

InkubacijaIspiranje

12

6

DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

F F

Ekscitacija

Fluorescencija

DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

DIF Chlamydia trachomatis

IMUNOFLUORESCENCIJA

INDIREKTNA (IIF)(obeleženo sekundarno At)

DIREKTNA (DIF)(obeleženo primarno At)

Detekcija Ag

Detekcija Ag

Detekcija At

fiksiraniantigen

ispitivani serum

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija i kvantitiranje At u serumu pacijenta)

InkubacijaIspiranje

6

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)

Inkubacija

obeleženosekundarno AtF

F

F

F

F

FF

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)

Inkubacija

FF

F

F

F

FF

F

12

6

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)

Ispiranje

FF

F F

FF

F

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)

F

F F

F

Ekscitacija

Fluorescencija

Indirektna Imunofluorescencija

Neutrofili (cANCA)Citoplazmatsko vezivanje

ANCA (anti neutrofilna At protiv citoplazmatskih Ag)

Neutrofili (pANCA)Perinuklearno vezivanje

Indirektna Imunofluorescencija

Glomerulonefritis Goodpasture’s sindrom

(At protiv Ag glomerularne bazalne membrane)

IMUNOFLUORESCENCIJA

INDIREKTNA (IIF)(obeleženo sekundarno At)

DIREKTNA (DIF)(obeleženo primarno At)

Detekcija Ag

Detekcija Ag

Detekcija At

specifičnost

osetljivost

Radio-imunotest (RIA)

Marker je radioaktivni izotop (npr. 125I)

Nedostatak: rad sa radioaktivnošću i odlaganje radioaktivnog otpada

Koristi se za određivanje niskih koncentracija antigena u rastvoru(npr. hormona u krvi)

Vrlo osetljiv kvantitativan test

Meri se vezana radioaktivnost pomoću odgovarajućeg brojača

"for the development of radioimmunoassays of peptide hormones"

Rosalyn Sussman YalowJuly 19, 1921 – May 30, 2011

Nobelova nagrada za fiziologiju ili medicinu 1977

Brzi test za otkrivanje trudnoće

BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (princip)

Detekcija HCG u urinu trudne žene

Koriste se tri vrste antitela:

1. anti-HCG antitelo - obeleženo koloidnim zlatom (slobodno)

2. anti-HCG antitelo – neobeleženo (fiksirano za membranu)

3. anti-imunoglobulinsko antitelo – neobeleženo (fiksirano za membranu)

pozitivan

uzorak (urin)

negativan

uzorak (urin)

+

–

BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (rezultati)

pozitivan

uzorak (urin)

Z Z Z

Z

difuzija Z Z

difuzija

Z

HCG

obeleženoanti-HCG

At

neobeleženoanti-HCG

At

anti-IgAt

+

uzorak(urin)

Z

Z

BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (pozitivan rezultat)

Z Z

negativan

Z Z ZZ

difuzija Z Z

difuzija

ZZ Z–

BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (negativan rezultat)

uzorak (urin)

uzorak(urin) neobeleženo

anti-HCGAt

anti-IgAt

obeleženoanti-HCG

At

anti-imunoglobulinsko antiteloj.Za određivanje količine hormona u krvi koristi se

10.

direktna imunofluorescencijai.U RIA testu se kao obeleživač koristi9.

RIA i ELISAh.Za dokazivanje auto-antitela u serumu koristi se

8.

u ploči za mikrotitracijug.Za dokazivanje bakterije iz roda Chlamydia u cervikalnom brisu koristi se

7.

radioaktivni izotopf.U testu indirektne imunofluorescencije fluorescentnom bojom je obeleženo

6.

jačine boje razgrađenog supstratae.U ELISA testu količina antigena ili antitela određuje se na osnovu

5.

indirektna imunofluorescenca ili ELISA

d.Razgrađeni supstrat od strane enzima u ELISA testu detektuje se

4.

antigena ili antitela u tečnim uzorcimac.ELISA se radi3.

kolorimetromb.Antitelo u ELISA testu obeleženo je2.

enzimoma.ELISA se koristi za detekciju1.

1.____ 2.____ 3.____ 4.____ 5.____ 6.____ 7.____ 8.____ 9.____ 10.____c a g b e j i d f h

Sledeća nedelja

Predavanje:Imunološka tolerancija: značaj i mehanizmi

Autoimunost: principi i patogeneza

Seminar:Reakcije preosetljivosti