c o c c i d i o s i s i n t e s t i n a...
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C O C C I D I O S I S I N T E S T I N A L
PARASITOS EMERGENTES
Hospital Infantil de México Federico GómezUniversidad Nacional Autónoma de MéxicoDra. Rosamaría Bernal Redondo
Coccidias intestinalesApicomplexa
Anillos Polares
Microtúbulos
Roptrias (Factor Estimulador de Penetración)
Retículo Endoplásmico
Esporozoíto y Merozoíto
Micropilo
Núcleo Mitocondria
Membrarna subpedicular
Conoíde
Micronemas
METABOLISMO
• anaerobio • glucolisis• sin ciclo de pentosas• carbohidratos• amilopeptina• ácidos grasos• sin fosforilación oxidativa• sintetiza poliamidas• AMPc, CaM
No construye:• azúcares• amino-ácidos• nucleótidos
Convierte nucleósidos a nucleótidosMitocondria atípicaNutrientes del huéspedIntracelular y extracitoplasmático
GENOTIPIFICACION
Genotipo 1 Antroponótico sólo humano C. hominisGenotipo 2 ZoonóticoBovino, Ovino y PorcinoC. parvum
TRANSMISION FECAL-ORAL
MALOS HABITOS HIGIENICOSDEFICIENCIAS SANITARIASCONTACTO CON ANIMALESALMEJAS, OSTION, MEJILLÓN
ALIMENTOS:COSECHA – CONSUMOFresas, lechuga, albahacaResistente a cloro
Ciclo de vida C. cayetanensis
Ortega Y. CDC ATLANTA 2000
Esquizogonia intracelularintracitoplasmáticaGametogonia intracelularEsporogonia fuera del huésped
Exquistacióninterna
Ooquiste noesporulado
cigoto
CICLO BIOLOGICO DE Isospora belli
esquizogonia
gametogonia
esporogoniaooquiste
esporozoíto
Enterocito
huésped
♀
♂
Moléculas asociadas a patógenos (PMP)Receptores de reconocimiento (TLR2 – TLR4)β defensina humana-2 (HBD-2)NF-λB (factor de transcripción) Inhiben la apoptosis (6-48 hrs)
CITOCINAS:Interferon - γ 1L-4 1L-8, Prostaglandinas, Oxido nítricoTNF-α (f. de necrosis tumoral), TGF-β (factor de crecimiento)Actuan sobre Cel. cebadas, PMN, linfocitos, NKiller y liberan mediadores pro-inflamatorios
Respuesta Innata
Célula presentadora de AgLinfocitos T (respuesta celular)Cél citotóxicas (Tc) Th 1Cél. cooperadoras Th 2Cél. T CD4+ (lámina propria)
Incremento de cél T que inducen atrofia e hiperplasiaOoquistes en nódulos linfáticos mesentéricos y en cél. MLinfocitos B (respuesta humoral) Anticuerpos IgG, IgM, IgA e IgE locales. IgA secretora bloquea la penetración
Respuesta Adaptativa
PATOGENIA
Tubo Digestivo (FARINGE-RECTO) Epitelio BronquialAdhesión, Invasión, Ruptura
de células epitelialesAtrofia y destruye microvellosidades Conducto biliar (colecistitis)
Altera permeabilidad, diminuyela absorción de agua, electrolitos, aumento de la secreción Ocasiona diarrea acuosa Infiltrado inflamatorio Hiperplasia de criptas
Inmunocomprometidos:Diarrea voluminosa, malestar general, pérdida de peso y aguaDolor abdominal, náusea, vómito, fiebre y asteniaEvacuaciones 20/24 horas. Deshidratación, choque hipovolémicoy muerte. <200 CD4+ situación grave
C L I N I C A
Inmunocompetentes:Diarrea acuosa y agudaDeshidratación leveSe autolimita
Diagnostico EtiologicoOoquistes C. hominis y
C. parvumExámen directo teñido con azul de Löeffler con un aumento de
40x.
PARASITOLOGICO
Ooquistes 4 – 6 µm
Soluciones con densidad(δ) >1.0ZnS04 δ - 1.18° y 1.19° bauméIdentificación de ooquistesSeco debil (10x)Seco fuerte (40X)Método cualitativo Faust, 1954Modificada por la NCCLSMétodo cuantitativo Ferreira 57
Coproparasitoscópicos (CPS)concentración por flotación
Técnica de Faust
T I N C I Ó N DE KINYOUN
Preparación permanente• Elaboración de frotis• Fijar con calor• Fijar con metanol• Tinción de Kinyoun:• Fucsina básica, H2SO4 yverde brillante• Lavar con agua corriente• Observación 100x con aceite de inmersión• Montaje en resina
Ooquistes 4 – 6 µm
METODO DE CONATIN
Ooquiste de Cryptosporidium sp. con CONATIN, se observan los cuatro esporozoítos de 4.6 a 4.8 µm de largo por 0.7 a 0.9
µm en la parte más ancha.
CONCENTRACIONTécnica de RitchieACLARAMIENTOIncubación con NaOH 0.1NTINCION - Kinyoun
Ramírez & Bernal Parasitología 1988;1:14
OOQUISTE DE C. hominis y C. parvum
ESPOROBLASTO
ESPOROZOITOS
ESPOROQUISTE
OOQUISTEESPORULADO
OOQUISTE NOESPORULADO EN HECES
4-6 µm
2 a 4 hrs
132 ooquistes inician unainfección. Viables a 4 °C y22 °C, soportan -20 °C
PARED 0.04 µm
cuerpo residual
OOQUISTE DE C. hominis y C. parvum
Pared del Ooquiste 0.04 µmrica en uniones disulfuro Capa Externa de 5 nm
material filamentoso yglicoproteínas ácidas
Zona de separación de 5 nm
Capa central rígida 10 nmelectrodensa lipídica yglicoproteíca, ácido-alcoholresistente
Capa Interna de 20 nmglicoproteíca, rigidez y elasticidadOoquiste Esporulado
Del Coco y colab, 2009
línea desutura
Cyclospora cayetanensisPRUEBAS ESPECIALES
Esporulación in vitrodicromato de K 2.5%
Autofluorescencia Luz Ultravioleta 365 nm
Reducción de D-xilosa y Vitamina B12Grasa en heces
Ooquiste de Cyclospora cayetanensis
OOQUISTE
ESPOROZOITO
ESPOROQUISTE
8 – 10 Micrometros Pocos ooquistesen heces
Ooquiste de Isospora belli
Ooquiste 20 – 30 µm
Ooquiste inmaduro con un esporoblasto
Ooquiste maduro con dos esporoquistes
Esporoquistes con cuatro esporozoitos cada uno (tetrazoico)
Ooquiste 20 – 30 µm
esporoquiste
esporozoíto
AutofluorescenciaCristales de Charcot-Leyden
INMUNOFLUORESCENCIA
• Anticuerpos marcados con fluoresceína
• Luz ultravioleta (495 nm)• Cualitativa y cuantitativa
INMUNODIAGNOSTICO
E L I S ACAPTURA DE ANTÍGENO
•Anticuerpos marcados con enzimas
•Fosfatasa alcalina (405 nm) Peroxidasa (450 nm)
•Sistemas de amplificación (Biotina/estreptoavidina)
•Cuantitativo UDO
Correa,D. Técnicas modernas en Inmunología. 2000
DIAGNOSTICOMOLECULAR
INDICACIONDISPONIBILIDAD
PRODUCTO BIOLOGICOMETODOLOGIA
PCR Dx en lab. clínicoRFLP (polimorfismo de
la longitud de los fragmentosde restricción ) para
diferenciar especie y genotipificación