���������������� ����-1 ������������������������������ !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���
"�#..��#/�0� ��
�&,�$#*� "1�"2�
����,��%34#�*#$ ��% ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6 /�(�"7��,*���!(������5!�'� �� ��%��8��"�#..�*#$ �5���� ���%34#� ���*#��"�#$%��*#$ �
���- 2552
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
���������������� ����-1 ������������������������������ !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���
"�#..��#/�0� ��
�&,�$#*� "1�"2�
����,��%34#�*#$ ��% ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6 /�(�"7��,*���!(������5!�'� �� ��%��8��"�#..�*#$ �5���� ���%34#� ���*#��"�#$%��*#$ �
���- 2552 �#�#$0#;"7��� ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
���������������� ����-1 ������������������������������ !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���
�$-%� ,� ��
�&,�$#*� "1�"2�
����,��%34#�*#$ ��% ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6 /�(�"7��,*���!(������5!�'� �� ��%��8��"�#..�*#$ �5���� ���%34#� ���*#��"�#$%��*#$ �
���- 2552
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
�&,�$#*� "1�"2�(2552) ���������������� ����-1��������������������������� ��� !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%��� "�#..��#/�0� *$. .("�#$%��*#$ �). ��&�$/?: �%34#�*#$ ��% ��*#$ ��% 5���-�#�$�*# ��6. -3���� ���-*�-& : ���5�������� �$%���/$ � ��. 3��-�5%��#; ��,�5���#� ����� �$%���/$ ��.#� ��.�#��� 0�5*�
���� ����-1 "7��#*-�� ���"����$�(�%�*,�"7������-��$�(��%(���� �-,��)���)��*,�
� � ���-� ��� #��� (� A �� ,/� ��$��$�B�- %.��� �-$� ( �� ( * )� �� %����� %� ����� ��- � !(� �����* #� % � ,����)� /� ���������������� � � �� �-1 �� !+� � (�����& )������������������������������� !�"�#$%��� �&' ��)* ���/�"����--���-������-��
� ��� ������ / �(�5 !�'���������������� � � �� �-1$ %+������ %� ������� ��� �� �������"�� �� ����� ����������� ����� ��������� �� !�"� #$ %�� � � &' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���
������������������� ��+ ������������������������������� !�"�#$%��� �&' ����� � � �& )� � � � �$% +� � � � � � #� �� +� )* � ,* � � � � �+� � ,� � � -" � #$ %� � � 3 � ,� � � � )� �, �����#�&$0#;���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#� �,*���%���������)* -��(��� � ��/�� ��� � � � ��� � #� � #* �� #� ���� ,*��� ������� � �+ � ��-�� # �� #��- ���� ��-�#�� % � #$ �- #�$��� ����% +�$B������*����������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"�����)* *#0�����$�-/����������*#0�*�$#������$�� �B��%�
������ �� �� /����������������� ���� -1 /#( !+�$%+ ������%� ������� ��������������%��"���������������������������� 3�$�( ���������������������� !�"�#$%��� /����/#( !+������%��"����$,��%+� �(�����&)��)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#� ��3�$�( �( �� ���&) � ���� $%+ � ����) * �, *��� ������� ��+ � ��-��# ��# ��- ���� ��-�# �� % �# $ �- # �$��� ����, *���% � ���� �����/��� �� � � � ��� �# � �# * ��# � ��%�� ,/�����������$�(/#( !+�� ,���%��������� ����-1 $%+������%� ������� �������� ������%��"����
����� D� ��)�D�*������* #� % � �+ ����* ,������ #� &$0 #;���/�"����--���-��� /�������� ��� �#��#*��#�$,��%+�$�(�� ��E����&)������������������������������� !� "�#$%��� �&' � ��) �����������$�(/#( !+������� ����-1
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
HMGB1 Expression in Human Gingival and PDL Fibroblast Activated by Periodontopathic Bacteria.
AN ABSTRACT BY
RUNGTIWA PUNPA
Presented in Partial Fulfillment of the Requirements for the Master of Science Degree in Periodontology
at Srinakharinwirot University March 2009
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
Rungtiwa Punpa. (2009). HMGB1 Expression in Human Gingival and PDL Fibroblast Activated by Periodontopathic Bacteria. Master thesis, M.S. (Periodontology). Bangkok: Graduate School, Srinakharinwirot University. Advisor Committee: Assoc. Prof. Dr. Narongsak Laosrisin, Dr. Nirada Dhanesuan .
High mobility group box1 (HMGB1) protein is nuclear protein which is recognized as late inflammatory cytokine but plays important roles in many inflammatory diseases. Our previous study showed highly expression of HMGB1 in both human gingival and PDL fibroblast after activated by E. coli vs lipopolysaccharide (LPS). Objectives: To investigate the expression of HMGB1 in both human gingival and PDL fibroblasts after the activation of periodontopathic bacteria in mRNA and protein levels. Materials and Methods: Human gingival and PDL fibroblasts were cultured and activated by purified LPS of Porphyromonas gingivalis (Pg.) or culture supernatant of Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa.) or sonicated extract of Pg . The expression of HMGB1 ,mRNA and protein levels, were determined by RT-PCR and Western blot respectively. Results: Both HMGB1 mRNA and protein expression were upregulated in human gingival fibroblast when activated by LPS of Pg, while only HMGB1 protein level was upregulated in PDL fibroblast. While limited change of HMGB1 mRNA and protein level in both cells were found when activated by culture supernatant of Aa. or sonicated extract of Pg. Conclusions : The results showed that only the purified LPS of Pg. can activate the expression of HMGB1 in gingival and PDL fibroblasts.
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
"�#..��#/�0� ��(��
���������������� ����-1 ������������������������������ !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���
�� �&,�$#*� "1�"2�
��)�%���& %�#����%34#�*#$ ��% ��)�%�"7��,*���!(������5!�'��� ��%��8��
"�#..�*#$ �5����� ���%34#� ���*#��"�#$%��*#$ � �� ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6
................................................................-3����%34#�*#$ ��%
(���5�������� � ��.� �� �%��#*%6��&�) *%�$�(.......���� ���- /.5. 2552
-3���� ���-*�-& "�#..��#/�0� -3���� ������"��"�,� .........................................................."��0�� .........................................................."��0�� (���5�������� � $/. 3��-�5%��#; ��,�5���#�) (���5�������� � $/.. $#/�/� *�5��&��#$0#;)
........................................................��� ��� ...w....................................................��� ���(����� �$/..�#��� 0�5*�) (���5�������� �$/.3��-�5%��#; ��,�5���#�) ..........................................................��� ��� (����� �$/..�#��� 0�5*�) ..........................................................��� ���
(x8)�,* 5�������� � $/..��-��%��� -�&�$� �)
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
�����2��34���� "�#..��#/�0�y�%���+�B����� �8�3���)�)* -*� �,* �������-B�����B�� ,���� #(����-3���� ���� $,�� x8)*#�% �������/��-&3 ���5�������� � $%���/$ � ��.3��-�5%��#; ��,�5���#� "��0��-*�-& "�#..��#/�0� �������� �$%���/$ ��.#� ��. �#��� 0�5*� ��� ���-*�-& "�#..��#/�0� $�(��&3���)-B�"�!�'� ����B���*$�� )� 8����)�-#�����,��A $�( �"��� ����,����$B�*#�% ��-�%+���+�)* ������ � �������/��-&3���5�������� � $%���/$ ��.#� $#/�/� *�5��&��#$0#; ���x8)�,* 5�������� �$%���/$ ��.#� ��-��%��� -�&�$� �$�(��&3��,* "7���� ������-)��-��������"��"�,�"�#..��#/�0� ��������)-B�����B����)��������,��A�����*#�% �* $%+���)-*� ��&3���*���)�"�#..��#/�0���) �-*� � �8�3� #(�!+� �������/��-&3����� �$%���/$ ��.#� ��.�#�#�%�'3� ���30���&�, ����� � ��.�*�/� 5���&D�/ $�(��&3�����B������+��z{�*%��&����&"����,��A�����$B�*#�% �������� � $%���/$ � ��� � �� D� �B���%��,*���%��������/�������� ��� �#��#*��#� �� /%�0� ATCC33277 ���-&3$%���/$ ��.#���#'}� �%�$��� � ���$%���/$ ��.#�5�#�$#/ � �%�5&�D�- $�(��+��z{�*%��&����&"��3��,��A�����$B�*#�% ������-&3�)���)�$�(�)��"~#�%�#��� D�-*#����'}*#$ � -3�$%���/$ 5����� ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6 $&�$,��$�(��)����,* ���������)-B�����B�"7�� ,���� $)� $�(�&���+x8)*#�% �-�,�������/��-&3 �#�� ���� x8)"7�$�(�%� #(� $�(��)�����%���&����-� ��)�B��%������B�������5!�'�
�&,�$#*� "1�"2�
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
����5
����6 7�8� 1 �����.............................................................................................................................1 D8 #��%�.......................................................................................................................1 -*� &,�� � �����*#�% ............................................................................................3 -*� �B�-%.�����*#�% ...............................................................................................3 ��������*#�% .....................................................................................................4 ������*-#������*#�% ............................................................................................. 4 � �#}�������*#�% ...................................................................................................6
2 �<���=�����������6���6��>8<.....................................................................................7
��-"�#$%����%���.........................................................................................................7 /�������� ��� �#��#*��#��%���-"�#$%����%��� .............................................................8 ��-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$����%���-"�#$%����%���............................11 ���� ����-1...............................................................................................................14 �$��$�����-�������� ����-1................................................................................15
3 �������������������........................................................................................................19
����B������&, �%*� ,��.wwwwwwwwwwwwwwwwwwww...wwwww20 �����)��-��(�� ��$�(��)�����*#�% .................................................................................20 ���$����-*� "7�/#'�)* $-�#- MTT assaywwwwwwwww..wwwwww.22 *#0����*#�% wwwwwwwww.wwwwwwwwwwwwwww...wwwwww..23 *#-�����)� 8�wwwwww.wwwwwwwwwwwwwwww...wwwwww...27
4 ����������...................................................................................................................28 ���$����-*� "7�/#'�������)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#� wwwwwwwwwwwwwwwwwwwwww...................................................28
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
����5 (�E<)
����6 7�8� 4 (�E<)..........................................................................................................................28 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(� ����&)���������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' �
�)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*�#�w.ww..wwwwwwww28 ���$����-*� "7�/#'�������)* �,*���%���������)* -��(��� ���/������� � ��� �#��#*��#�wwwwwwwwwwwww.................................................30 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(� ����&)���������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' � �)* �,*���%���������)* -��(��� ���/�������� ��� �#��#*��#�.....wwwww31 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(�����&)� ��������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' ��)* �,*� �� �����-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$���www wwwwwww..34
5 <H�������=�������IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII37
�D#"�� x�wwwwwwwwwwwwwwwwww..wwwwwwwwwwww37 �$��&"wwwwwwwwwwwwwwwwwwww..wwwwwwwwwww...42 ���3��&�� wwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwww..ww43 "��*%�# ,�x8)*#�% wwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwww..ww52
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
��5J�����
���� 7�8�
1 ����"1��% $�( �-*� �&����$�(x�#��� /�������� ��� �#��#*��#�..w....................wwwww.9 2 ����"1��% �,���-����-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$���wwwwwwwww12 3 �%�'3������� ���-� ��#��"����wwwwwwwwwwwwwwwwwwww..w...14 4 �$��$������ ����-1�,����������+� �(��,��Awwwwwwwwwwwwwwwww..17
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
��5J�H�K����<� H�K����<� 7�8�
1 �����-����)�������� ����w.....................................................................................15 2 �������������%(����� ����-1 wwwwwwwwwwwwwww.wwwwwwww.16 3 �����$,�����x����$�������%�-*� "7�/#'�����/�"����--���-� �� /�������� ���#��#*��#�$�( �x��,�����w.wwwwwwwwwwww.wwwwww...28
4 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(�����&)������������������������)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#�������������)�����-*� ) ���E�x�#�D%34�/����������-*� ) ���E��"����wwwwwwwwwwwwww.wwww.wwwwwwwwww.w29
5 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(�����&)� �������������������� !�"�#$%��� �&' ��)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#� ������������)�����-*� ) ���E�x�#�D%34�/����������-*� ) ��
�E��"����wwwwww.wwwwwwwwwwwwwwwww...wwwwwww..30 6 �����$,�����x����$�������%�-*� "7�/#'���,*���%����������/�������� ��� �#��#*��#� $�( �x��,�����wwwwwwwwwwwwwwwwwwwww.wwwww31 7 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"����
�(�����&)���������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' � �)* �,*���%��������-��(��� ���/�������� ��� �#��#*��#�.wwwwwwwww...32 8 �����)�����-*� ) ���E�x�#�D%34�/������������� ����-1 ���-*� ) �� �E��"�������� ����-1 �(�����&)����������������������������������������� ����� !�"�#$%��� �&' ��)* �,*���%���������)* -��(��� ���/�������� ��� �#��#*��#�wwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwww..ww....33
9 ���������������� ����-1 �����%� ������� �������� ������%��"���� �(� ����&)���������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' ��)* �,*��� �����-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$����$���wwwwww..ww.35 10 �����)�����-*� ) �E�x�#�D%34�/������������� ����-1���-*� ) ���E�
�"�������� ����-1 �(�����&)����������������������������������������� ����� !�"�#$%��� �&' ��)* �,*��� �����-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$���wwwwww.wwwwwwwwwwwwwww...wwwwwwwww..36
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
��5J�H�K����<� (�E<)
H�K����<� 7�8�
11 ����/ �0#�B��#�����-"�#$%����%������"1��% $�(��( *)��wwwwwwwwwww.37
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
����� 1 ����
�� ���� �����������-1 ( High mobility group box 1 , HMGB1) � !"# $%�"&"'(�)�*+,*-."/��' $0�'1 30 45�67).8 #-$9:$.'9 $0*��(.8; ������������*<= (HMG boxes) <@69� !":A8"�B�&�9 (����"�� (DNA binding domains) 7)0 :A8" )';5�6� !"*$( (acidic tail) 7%A�(J������������-1 +,*-."/�� !":A8" $0*��K"@69&�9"J8�-)�;:(1) �����������-1 �A8;*'$5L'K".'5�6K)';�;A'9&�9"J8�-)�;:7)0���5�'5%A�*'$7:(9��*&�9(����"�� �B"M(.7*A 5$'":-$J �B6" (transcription) *'$+�(7�� (replication) 7)0 8�((�)�� $�-���J�"�B6" (V(D)J recombination) P"*'$Q@*R'$0;0%A��'/�8A'�����������-1 M�AM(.�L'*B(�;,AK$S����5�'5�T/'0U';P"�<))= 7%A/����5�'5U';"�*�<))=(.8;(2)
�����������-1 :'�'$+/�M(.P"�"SW��;S6�%A'9X 7)0:'�'$++,*K)B69��*�'*�<))=M(.K)';�"J( ��A" �<))=#�#"M<%= (monocyte) 7�*#-$7Y� (macrophage) �<))=�Z["B9K)�(�)S�( (endothelial cell) �<))=�("M($%J* (dendritic cell) 7)0�<))=*).'��"SW��$�;� (smooth muscles cell) 5�6+,**$0%Z." ��*'$Q@*R'/�8A'�<))=#�#"M<%=7)07�*#-$7Y� �0:'�'$+K)B69 �����������-1 ��S6�+,**$0%Z."#(;:'$/JRU';P"&�97�-5��$�; (exogenous bacterial endotoxin) ��A" M)#/# )�7<--'M$(= (lipopolysaccharide: LPS) � !"%." K$S� ��S6�+,**$0%Z."#(;M<#%M-"=�B*�:� (proinflammatory cytokine) ��A" 5,���$=�"-#-$<J:7Y-�%�$= (tumor necrosis factor: TNF) � !"%."(3-5) #(;*'$K)B69�����������-1 &@W"*B��8)'7)0 $J�'15�6*$0%Z." "�*�'*"BW";B9:'�'$+K)B69�'*�<))=5�6+,*5L')'; (damage cell) K$S��*J(*'$%'; (necrotic cell) 7%AM�AK)B69�'**'$&�B(%B8��9&�9�<))= (apoptotic cell)
*'$K)B69&�9�����������-1 �0��[)%A�*'$*$0%Z."*$0�8"*'$�B*�:�K)';(.'" #(;:'�'$+*$0%Z."*'$�/J6� $J�'15,���$=�"-#-$<J:7Y-�%�$=P"�<))=���(�)S�(&'8�"J(#�#""J8�-)�;$=5�6�)�W;9P"K.�9 eJ�B%J*'$ (primary blood mononuclear culture) 7)0*'$�/J6��BW"&�9#��)*Z)5�6P�.P"*'$;@(�*'0 (adhesion molecule) $8�5BW9;B9*$0%Z."*'$K)B69M<#%M-"=5�6*A�PK.�*J(*'$�B*�:�M(.7*A 5,���$=�"-#-$<J:7Y-�%�$= 7)0 �J"�5�$=)J8-J"-8 (interleukin-8: IL-8) P"�<))= �Z["B9K)�(�)S�((.8;(6) �����������-1 ;B9���5�'5%A�*'$�*J(#$-%A'9 X 5�6�*�6;8&.�9*B�*'$�B*�:�M�A8A'�0� !"*'$�B*�:�7���T�;�/)B"K$S�7���$SW�$B9 ��A" #$-M&&.��B*�:� (arthritis)(7,8) #(;/�8A' �������
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
2
����-1 ��*'$�/J6�$0(B�P"�;S6��Z&.�%A�5�6�B*�:� (inflammatory synovial tissue) 7)0 &�9�K)85�6K)B69�'*�;S6��Z&.�%A� (synovial fluid) �'*[,. k8;#$-M&&.��B*�:� $8�M +@9:U'80�S6" X M(.7*A :U'80%J(��SW�P"*$07:�)S�( (sepsis)(9) #(;�����������-1 +,*�B(8A'� !"M<#%M-"=5�6K)B69��*�'-A�"&.'9�.'*8A'M<#%M-"=�"J(�S6" X (late mediator) P"*$0�8"*'$&�9*'$�B*�:� 7)0 m��Z�B"M(.��-8'�/;';'�P"*'$;B�;BW9�����������-1P"[,. k8;P"K.�9TZ*�TJ"�/S6�)(�B%$'*'$�:�;��8J%&�9[,. k8;)9 7%A�;A'9M$*�%'�;B9/�8A'��*'$Q@*R'5�67:(9+@9�5�'5&�9�����������-1 *B�#$-P"�A�9 '*�;,A".�;�'*
#$- $J5B"%=�B*�:� (periodontitis) � !"#$-%J(��SW�5�6��*'$�B*�:�7���$SW�$B9 #(;/�8A'��*'$5L')';&�9�"SW��;S6��*�6;8/B" (connective tissue) 7)0*$0(,*��.'Ym" (alveolar bone) *'$�*J(#$- $J5B"%=�B*�:�"BW"��-8'�:B�/B"n=*B���SW�*A�#$-5�6:L'-Bo(10) -S� 7�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= (Aggregatibacter actinomycetemcomitans; Aa) /�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: (Porphyromonas gingivalis; Pg) 75"�"��$))' Y�$=<B;�n�;<J: (Tannerella forsythensis; Tf) /;'nJ*L'�"J(&�9#$- $J5B"%=�B*�:� (pathogenesis of periodontitis) &@W"�;,A*B�-8'�:�(Z)$0K8A'9 m��B;%A'9 X 5BW9 m��B;5'9(.'"�"J(&�97�-5��$�;*A�#$-7)0 m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�; (virulent factors) "BW" X $A8�*B� m��B;5'9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*'; #(;*$0�8"*'$&�9*'$�*J(/;'nJ:U'/&�9#$- $J5B"%=�B*�:�:A8"PKoA7).8� !"[)�'�'**'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*';%A�7�-5��$�;*A�#$-K$S�%A� m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�; <@69�K"�6;8"L'PK.�*J(*'$5L')';&�9�"SW��;S6�%'��'M(. �'*5�6M(.*)A'8�'&.'9%."7).88A'�����������-1 ��*'$7:(9��*P"�<))=K)';�"J( 7)0���5�'5%A�#$-5�6�*J(*'$�B*�:� �;A'9M$*�%'�5�6[A'"�';B9��*'$Q@*R'+@9*'$7:(9��*&�9 �����������-1 P"�<))=K$S��"SW��;S6��A�9 '*".�; ��*'$Q@*R'&�9 *"JRp= "B"5�:"�;=7)0-10(11) M(.Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=&�9�"ZR;=5BW9P"$0(B��'$=���"��7)0$0(B�# $%�"U';P"�<))= $8�5BW9;B9Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1P"�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=&�9�"ZR;=P":U'805�6��*'$*$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9��SW���#-M) (Escherichia coli; E coli. ) (.8; -10[,.8J�B;�@9:"P�Q@*R'%A�;�(+@9*'$7:(9��*&�9 �����������-1&�9�<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=��S6�+,**$0%Z."(.8;:A8"&�9��SW�*A�#$- $J5B"%= <@69[)&�9*'$7:(9��*&�9������� ����-1 P"�<))=�K)A'"BW"�0�A8;�nJ�';+@9*)M**'$�*J(/;'nJ:U'/&�9#$- $J5B"%=$8�M +@9*'$P�. $0#;�"=�'**'$� )�6;"7 )9$0(B�&�9*'$7:(9��*&�9#��)*Z)�"J("�WP"*'$� !"�-$S6�9K�';5�6�A9��W+@9:U'80&�9*'$� !"#$-%A�M M(.
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
3
���������������� ��� *'$8J�B;-$BW9"�W��-8'��ZA9K�';�/S6�Q@*R'+@9*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"�<))= MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=��S6�M(.$B�*'$*$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: (lipopolysaccharide of Pg.) :A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: (Sonicated extract of Pg.) 7)0:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= ( Aa. culture supernatant) �������������� ��� #$- $J5B"%=� !"#$-%J(��SW��"J(K"@69<@69*A�PK.�*J(/;'nJ:U'/%A��8B;80 $J5B"%=P"$, 7��&�9*'$�B*�:�7���$SW�$B9�B"� !"[)�'�'**'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*';5L'PK.�*J(�'*'$7:(95'9-)J"J*M(. #$- $J5B"%=�0�*J(/;'nJ:U'/*B��K9S�* ���";@( $J5B"%= 7)0*$0(,*��.'Ym" 7)0"L'M :,A*'$:,o�:�;Ym"P"5�6:Z( m��B;5�6:L'-Bo5�65L'PK.�*J(#$- $J5B"%= -S� 7�-5��$�;*A�#$- M(.7*A /�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: 7)07�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= $8�5BW9 m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�;(B9*)A'8(.8; �;A'9M$*�%'�*'$5L')';�8B;80 $J5B"%=;B9�*�6;8&.�9*B�-8'�:�(Z)$0K8A'9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*';7)07�-5��$�;*A�#$- #(;��S6���*'$$Z*$'"&�97�-5��$�;<@69:A9[)PK.��*'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*';%A�7�-5��$�; 5L'PK.��*'$[)J%M<#%M-"=7)0K)B69:'$�B*�:�%A'9X ��*�'�'*�<))=&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*'; ��A" #�#"M<"= 7�*#-$7Y� � !"%." "�*�'*"BW"�<))=&�9$A'9*';5�6�;,A�$J�815�6�*J(*'$�B*�:� ��A" �<))=:$.'9�:."P;K$S�MY#�$�)':%= (fibroblast) ;B9:'�'$++,*�K"�6;8"L'PK.K)B69:'$M<#%M-"=�'**'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"��A"*B" <@69:'$M<#%M-"=�K)A'"�W:A9[)*$05�%A��<))=� s'K�'; 5L'PK.�*J(*'$�B*�:� 7)0*'$5L')';�8B;80 $J5B"%=%'��'M(. �����������-1 �B(� !"#-$�'%J"# $%�"<@69�0�;,AU';P""J8�-)�;:7%A*�:'�'$+/�P"M<#% /)':<@�M(.P"�'9�<))= P"*'$Q@*R'$0;0%A��'/�8A'�����������-1 M�AM(.�L'*B(�;,AK$S����5�'5�T/'0P"�<))=(1) ;B9/�8A'�����������-1 :'�'$++,*&B���*"�*�<))=#(;�<))=�'9 $0�U5<@695L'K".'5�6� !"�K�S�"M<#%M-"= #(;� !"M<#%M-�=5�6+,*K)B69��*�'�A89K)B9��S6��5�;�*B�M<#%M-"=5�6�"J(�S6"X �<))=K)';�"J(:'�'$+K)B69�����������-1 ��*�'"�*�<))= ��A" #�#"M<"= 7�*#-$7Y� �<))=�Z["B9K)�(�)S�( �<))=�("M($=%J* 7)0�<))=*).'��"SW��$�;� $8�5BW9;B9:'�'$+K)B69�'*�<))=5�6+,*5L')';K$S��*J(*'$%'; ��*'$Q@*R'&�9 *"JRp= "B"5�:"�;= /.Q.2549(11) /�8A'P":U'80 *%J��*'$7:(9��*&�9�����������-1 �;,AP"$0(B�K"@69�;,A7).8 P"�<))=MY#�$ �)':%=&�9���";@( $J5B"%=&�9�"ZR;=P":U'80 *%J5�6�)�W;9#(;M�AM(.$B�*'$*$0%Z."P(X5BW9P"$0(B�
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
4
�'$=���"��7)0$0(B�# $%�"U';P"�<))= 7%AM�A/�8A'��# $%�"�����������-1K)B69��*�'P"�'K'$�)�W;9�<))= "�*�'*"BW";B9Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=&�9�"ZR;=P":U'805�6+,**$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9��SW���#-M) /�8A'��*'$7:(9��*5�6�/J6�&@W"&�9�����������-1 P"$0(B���:�<"���$= �'$=���"�� �T/'0:U'805�6�)�W;9P"�'K'$�)�W;9�<))=5�6��<�$B6�� !":A8" $0*��(.8;�5A'"BW" 7%A;B9-9M�A/�*'$�/J6�&@W"&�9# $%�" �����������-1 5BW9P"7)0"�*�<))=��A"�(�;8*B�U'805�6M�AM(.��*'$*$0%Z."P(X �'*[)*'$8J�B;(B9*)A'8 �@95L'PK.-10[,.8J�B;:"P�5�6�05L'*'$Q@*R'�/J6��%J�+@9�5�'5&�9��SW�*A�#$- $J5B"%=�B*�:�5�6��%A�*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"�"SW��;S6� $J5B"%=5BW9:�9�"J( ������������ ��� *'$8J�B;-$BW9"�W� !"*'$Q@*R'U';P"K.�9 eJ�B%J*'$�)�W;9�<))=�/S6�Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"$0(B��'$=���"��7)0$0(B�# $%�"P"�<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))= MY #�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=5�6�/'0�)�W;97)0+,**$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: :A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: 7)0:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= � $�;��5�;�*B��<))= MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=5�6�/'0�)�W;9#(;M�A+,**$0%Z."P(X � �� �!�"�#!$
− Periodontitis : #$- $J5B"%=�B*�:�
− High mobility group box 1 : �����������-1
− Human periodontal ligament fibroblast : �<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=
− Human gingival fibroblast : �<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*�"ZR;=
− Periodontopathic bacteria : ��SW�*A�#$- $J5B"%= ����%��� &'������ ��� �"S6�9�'*#$- $J5B"%=�B*�:�� !"#$-%J(��SW��$SW�$B9<@69:A9[)5L'PK.��*'$5L')';�8B;80 $J5B"%= *'$�*J(#$- $J5B"%=�B*�:�"BW"%.�9�'QB; m��B;K)';�;A'9$A8�*B" m��B;5�6:L'-Bo-S���SW�*A�
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
5
#$- /�$=MY#$#�7":�J9�J8')J: 7)0 7�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":=� !"7�-5��$�;7*$�)�5�6M�A%.�9P�.��*<J��"P"*'$��$Jo�%J�#% <@69��-8'�:B�/B"n=*B�*'$�*J(#$- $J5B"%=�B*�:� 5L'PK.��*'$5L')';�8B;80 $J5B"%=�;A'9$8(�$�87)0$Z"7$9 ��S6���*'$$Z*$'"&�97�-5��$�;(B9*)A'8 5BW9%B8��SW���97)0 m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�; 5L'PK.��*'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*'; :A9[)PK.�<))=U,�J-Z.�*B" (immune cell) K)B69:'$�B*�:�%A'9 X #(;"�*�'*�<))=U,�J-Z.�*B"7).8/�8A'�<))=&�9$A'9*';��9*����5�'5�;A'9�'*P"*'$�*J(/;'nJ:U'/&�9#$- $J5B"%=��A"*B" /�8A'�<))=&�9$A'9*'; ��A" �<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0 ���";@( $J5B"%= � !"%." :'�'$++,**$0%Z."7)0��*'$7:(9��*7)0K)B69:'$�B*�:���A"*B"(12,13) <@69�<))=5BW9 2 �"J("�W � !"�<))=P"�"SW��;S6��*�6;8/B"&�9$A'9*';5�6�;,A�$J�815�6M(.$B�*'$$Z*$'"�'*7�-5��$�;*A�#$- $J5B"%=7)0 m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�;#(;%$9 �<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;="BW"M�A�/�;97%A�A8;-9:U'/���";@( $J5B"%=�5A'"BW" ;B9�A8;<A��7<� (repair) $B�� )�6;" (remodel) 7)0*'$:$.'9PK�A (regeneration) &�9*$0(,*��.'Ym"7)0�-)S��$'*Ym"M(.(14) �����������-1 /�� !"#-$�'%J"# $%�"5�6/�P""J8�-)�;:7)0;B9/�8A'�����������-1:'�'$++,*&B���*"�*�<))=#(;�<))=�'9 $0�U5 <@69����������� -1 ��-Z1:��B%J � !"M<#%M-"=5�65L'K".'5�6P"�A89�8)'K)B9 "�*�'*"BW"�����������-1 ;B9:'�'$+*$0%Z."PK.�*J(*'$K)B69&�9:'$M<#%M-�=5�6��[)%A�*'$�*J(*'$�B*�:�7)0���5�'5:L'-Bo%A�*'$�*J(#$-5�6�*�6;8&.�9*B�*'$�B*�:�K)';#$-(6)
(B9"BW" [,.8J�B;�@9:"P�5�6�05L'*'$Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1P"�<))=MY#�$ �)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=��S6�M(.$B�*'$*$0%Z."(.8; m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�;&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J:7)07�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= <@69M(.7*A M)#/# )�7<--'M$-=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: :A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: 7)0:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= <@69/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J:7)07�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= �� m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�9��SW��;,AK)';�"J( 5�6�A8;PK.��SW���-8'�:'�'$+P"*'$$Z*$'"�8B;80 $J5B"%=7)0:A9[)PK.)B*R10&�9$�;#$-��-8'�$Z"7$9&@W"
M)#/#/)�7<--'$=M$(=� !":A8"["B9�<))=�BW""�*&�9��SW�7�-5��$�;�"J(7*$�)� �'**'$Q@*R' M)#/#/)�7<--'$=M$(=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: :'�'$+�K"�6;8"L'PK.�<))=$A'9*'; ��A" �<))=MY#�$�)':%= K)B69M<#%M-"=M(. ��A" �J"�5�$=)J8-J" 1 ��%.'7)0 5,���$=�"-#-$<J: 7Y-�%�$= (15) :A9[)PK.�*J(*'$5L')';�"SW��;S6� $J5B"%=7)0*'$)0)';&�9*$0(,*
:A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J:7)0:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= *��� m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�9��SW��;,A
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
6
K)';�"J(��A"*B" #(;/� m��B;*A�#$-5�6:*B(M(.�'*:A8")�;�'*7�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= ��A" )J8#-5�*<J" M<#%5�*<J" ���"M<�=;A�;:)';# $%�"5�6��SW� )( )A�;��*"�*�<))= :L'K$B�/�$=MY#$#�7":�J9�J8')J:"BW"/�8A' m��B;*A�#$-5�6:*B(M(.�'*:A8":*B(�<))=7%*&�9/�$=MY#$#�7":�J9�J8')J:5�6/�8A'��-8'��*�6;8&.�9*B�*'$5L')';&�9�8B;80 $J5B"%=7)0*$0(,*��.'Ym"M(.7*A M)# #/)�7<--'M$(= Yu���$�; v�7�**),%J"J" 7)0# $%�"7�"%J��"
[,.8J�B;�@9�)�9�K�"8A' m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�;5BW9:�9�"J((B9*)A'8:'�'$+*$0%Z."PK.�<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=7:(9��*�����������-1P" $J�'15�6:,9&@W"��S6��5�;�*B�:U'805�6M�AM(.$B�*'$*$0%Z." *'$5�6�<))= MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=:'�'$+K)B69������� ����-1P" $J�'15�6:,9&@W""BW" �'�5L'PK.5$'�+@9�5�'5&�9�����������-1 %A�/;'nJ*L'�"J(7)0*'$(L'�"J"M &�9#$- $J5B"%=�B*�:� �/S6�� !"7"85'9P"*'$$B*R'#$- $J5B"%=%A�M ���� (�'���� ���
5BW9�<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=�0/�*'$7:(9��*&�9�����������-15�6:,9&@W"��S6�M(.$B�*'$*$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: K$S� :A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: K$S�:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":=
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
����� 2 ���� ����������������������
���������� ��� ������������������������������������������� ��!�����"�#$����
"%��&�� 1. )��&����"*����+ 2. -��*�.)�)#��� ���������+)��&����"*����+ 3. ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����*�+)��&����"*����+ 4. ��2��3#�+�-1 5. +�+���0)"���*�����2��3#�+�-1
��������������� )��&����"*����+�&6�)��"� �27 ����#��������+��7 ��� #�����!���������7 ���7��������-�
������ ���+��.8� �!��&��%�����9�������������������+.8������9����.8�������: -��;��!���� ���)��&����"*����+ (pathogenesis of periodontitis) �&6�� �"�����#����#0+0�����������������+&8�$�����%������!��9 ���$":$�����)��&����"*����+ �7� �+��������%�)�� (periodontopathic bacteria) ����%����+:�������*������#���%+�"�.8�(16) 0����+��������%�)���$�%��� �&6�"�����#"������!��$���� ��� !��������)��&����"*����+� ����"�����������# �+��������%�)��&����"*����+����!��9�&6��+�������2�� ���#�+����#%"���������0�����������9�"�+)" (gram-negative anaerobic bacteria) (10) �2%� ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* -��*�.)�)#��� ����������� ����������� .��*0��;��0�� �&6�"�� �+��������%�)���$�%��� #��#�&8����#����#�:����"%��Q �2%� ��)-)&���0����*�� *�����3��0#*"%��Q 0��������0�#�����&�������&����"*���":������R�#��:�#������%����� #���������������"%�#�#��#��+%�2� S�����#�#-�;*��$�%��-��;��!���� ���)��&����"*����+�+&8������++R�#��:�#������%����� (host immune response) ���+�������������� -��;��R�-���)�� &����"*����+�%���$9%�����&6���#������"�+���������++R�#��:�#������%�����"%��+��������%�)�����&8����#����#�:��������+������� ) ����"�+���������++R�#��:�#��� �#����!��$���� ������"���$�������0)"���* �2%� )-��"����� �� (prostaglandin) �������*������ ���#��*���)��0���.��"��*(17) ���0��*�����++R�#��:�#������%����� �2%� )#)��0�*
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
8
�#�)���. �&6�"�� ������ � �0��*����%�����������%+����X������ �������+ �2%� �0��*�����������$�7��.)+�+���"* (fibroblast) ����#��SS���$������!��$�$�������0)"���*�����"�+���������++R�#��:�#���2%��� 0�������0)"���*�$�%��� ��%�������+"%��0��*�&Y�$#�� �!��$���� �������+ ����!���������&����"* ��#S������!������� ���+��.8�"�##�� �(18,19)
����� ���! � ��������������������������
-��*�.)�)#��� �������� �&6��+�������2�� ���#�+����#%"���������0�����������9�"�+)"���#����#�#-�;*�+)��&����"*����+ 0���#���������-+�%�#����#�!��9�����������+������ -��;��R�-���)��&����"*) ��!��$�)��#����#�:��������!��&��%����!���������7 ���7��&����"*������ ���+��.8� ��#��S"��-+�27 �-��*�.)�)#��� �������������&\������&6�)��&����"*����+(20) ) ��]-��+����X���#���� !�����)��(21) -+#����"� �27 �-��*�.)�)#��� ������������� ��#7�����&\��#����:�-��#�� � �����-+���#�#-�;*��$�%��-��*�.)�)#��� ���������+)��&����"*����+�����&\������&6�)�������++ �2%� )���+�$���(22) -��*�.)�)#��� �������� #�&8����#����#�:����$���2�� ("���� 1) ���2%���$��27 �#����#��#��S������:������7 ���7��&����"*����%����$����X�������)��#����#�:������ �(23) &8����#����#�:�����$�%�� � � ���%
��"#� (Capsule) ��&0�����-��*�.)�)#��� �������� �&6�����$������� (dense and amorphous capsule) 0���S7�� ��%��&6����"�������!��92�� $����0������%+�-7 �����0��*����27 �2�� �� ) �&����+�& ���)-���0����*�� *�^����)�)-���#��* (polysaccharide heteropolymer) ���#����#$��S�� 15 ��)��#"� ��&0���� �$:�#���%��+Q��7��+:���R����� ���������������+��&0��� ���������������$*)-���0����*�� * �� ���"��� ) ��27 ����-�;:*���"��-+ �� ���"���� �-+�%�#����#��#��S������:����������%��7 ���7��� ����(24) ������ ���&0�����!�$��������#7���&6������&Y�����!�$�+�27 ��-7��&Y��������!��������++R�#��:�#������%����� ��#���������-+�%� ��&0����� -��*�.)�)#��� �������� � ��������� ���������3��� &����"*�+-7 �������.8�(25)
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
9
"���� 1 �� �&8����#����#�:����������") �-��*�.)�)#��� ��������(26) Tissue destruction Host invasion Collagenase Trypsin-like protease Gelatinase Aminopeptidase Phospholipase A Alkaline phosphatase Acid phosphatase Chondroitin sulfatase Hyaluronidase Keratinase Heparinase Nuclease Epitheliotoxin Fibroblast growth inhibitors Endotoxicity LPS-induced bone resorption Volatile sulfur compounds Short-chain acid end products Indole Ammonia H2S
Degradation of plasma protease inhibitors Degradation of iron transport proteins Inhibition of polymorpho- Nuclear leukocytes Chemotaxis inhibitors Decrease phagocytosis Lysis and intracellular killing Resistance to Cs killing Cs-3/Cs-5 degradation Immunoglobin protease Fibrinolysin Superoxide dismutase NADH oxidase Free-radical formation
�������� "�������-� .�/� ������ (Lipopolysaccharide; LPS) ��)-)&���0����*�� *�&6��%������0��*2 ��������27 ��+�������2�� ���#�+�&6�&8�
���#����#�:��������+��������%�)��&����"*$���2�� )#���:������)-)&���0����*�� *&����+ ��� 3 �%�� �7� ��&u �� (Lipid A) ���*)-���0����*�� * (core polysaccharide) ��� )����"��� (O antigen) �#7���+��������%�)��&����"*���9�"�+)"���%�����&����"* (periodontal pocket) �+��������&�%����)-)&���0����*�� * 0�����)-)&���0����*�� *�&6����"������#����#�!��9�����������+���"�+���������++R�#��:�#����)��&����"*����+ ��)-)&���0�
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
10
���*�� *���-��*�.)�)#��� �������� ��#��S�$������!��$��0��*�%����� �2%� �0��*����������� $����0)"���*� � �2%� �������*������ 1 �+"��, �������*������ 6 ������#��*���)��0���.��"��* �%����$���� ����!������7 ���7��&����"*����������������� ��(27,28) ��#� ������":���$��0��*������������������ ������&\��)��&����"*����+$����������*������ 6 0���#�&��#�X�����%�������� ������&\�����#��R�-�$�7��&�"�(29)
;!����� (Frimbriae) .u#�+����&6�)��������������%+����X-7 �����0��*���-��*�.)�)#��� �������� �&6��%������7������&��-7 �����0��* ) �.u#�+���2%��������� ��������27 ��+-7 ���������7 ���7���$�7��(30) .u#�+������-��*�.)�)#�������������#��S�+%�� ��&6� 5 2�� (31) -��*�.)�)#��� �������� ���-�;:*���-+.u#�+����&6�2�� ��� 2 �#����#��#��S������:�����0��*��7��+:���� �#����%����-�;:*���-+#�.u#�+���2�� �7��(32) ������ �����.u#�+�����#��:X�#+"����":���$�#����"�+���������++R�#��:�#������%�����(33) ?� !�#����� (hemagglutinin)
^��#����"���� �&6���:%#���)&�"��������%+����X��7��$:�#�0��*2 �������-��*�.)�)#��� �������� 0��� �%��&6�)#���:�����2����������"� (adhesin molecules) �2%�� ����+.u#�+��� �&6����"�������2��!�$�+"����+���-�;:*���-��*�.)�)#��� ���������2%���(34) ^��#����"����#����#��#��S�����+�+�#3 ��7� � � (erythrocyte) ��7�����+�����0��*����#3 ��7� � �#�"�++�����0��*�����#��S+�+^��#����"�������-��*�.)�)#��� �������� ) �#���������-+�%�^��#����"�������-��*�.)�)#��� �������� ���-�;:* ATCC 33277 ��#��S�!��$���� ���+��:%#���#����"�"��������#3 ��7� � �(35) �� �^��#����"�������-��*�.)�)#��� �������� ���&6�&8����#����#�:��������%�����#�$��27 ���#��S���%+����X�"��$�7��� �
��C��"!��D������������!���"�E�����"��� (Extracellular proteolytic enzyme)
-��*�.)�)#��� �������� ��#��S���"��3��0#*)&�"���� (proteinase) � �$���2�� 0�����3��0#*�$�%��� S7��%��&6���3��0#*���#����#!��-�����-��*�.)�)#����������� ��3��0#*�� ��#��S�%������)&�"������%�����������":�����"�+���������++R�#��:�#������%����� ��3��0#* �$�%��� � ���% ���&0��-(trypsin-) �����-(thiol-) �����0�)���"��)&�"���� (caseinolytic proteinase) ���#���3��0#*�&&"�� � 2 2�� � ���% ���0��)-�-��� �&+"� �� ��#�)��&+"�� � (glycylpropyldipeptidylaminopeptidase) ��� ���0��)-�-���&+"�� �(glycylpropylpeptidase) 0�����3��0#*�$�%��� �#�+�+���!��9����!��$�)��&����"*#�����:����#���� � ��#S���!��$�-��*�.)�)#��� �������� ����+�������2�� �7���-�%����������&��%��7 ���7��
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
11
&����"*� ������ �(36,37) ) �-+�%�)&�"�������-��*�.)�)#����������� ��#��S���� ����0��*� ��0��* (whole cell) ���� �������� �0��* (cell extracts) ���� �������!��$��0��*�"�) ��2���7������� (cell sonicates) ���� �����7��+:���R���������������27 ����"���#�
������ ������� (Protein antigens) (38)
�&6�)&�"�����-+�����7��$:�#�0��*�%��������-��*�.)�)#����������� 0�����#��S���":���$��%�������������"�+� ����#� �����#��S"��-+� ���0��#������&\��)��&����"*����+ ������� ������� ������!��"���!��!� ��������������������
��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* ���X���&�%���&6���%� 2�� ���#�+����#%�2����0�����������9�"�+)" #����#�#-�;*�+)��&����"*����+�:���� (aggressive periodontitis) (39) ) �-+��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* S�������� 40-100 ������&\������&6�)��&����"*����+�:����(40) &8����#����#�:���������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* �2%� ���)����0�� (leukotoxin) )-��#��*).���������*���)��0"* ��)#���0�����^�+�"���.��"��* (polymorphonuclear leukocyte chemotaxis-inhibiting factor) ��#).�0"*0&�-��0���.��"��* (lymphocyte-suppressing factor) �����)-)&���0����� * 0���2%���$��27 ���#��S���9�"�+)"��� !���2���"���%� ���2%��&�� 2%���!��$��27 ���#��S$�+$������&Y��������%������ � ("���� 2) ��������"�� (Bacteriocin) �&6�)&�"��������") ��+��� �������#�w�;�x ������+� ��+��� ����2�� �7��� � ) � �+�����)�0�������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* ���"�� �#� ������%� ���"�)��+ 0���� (actinobacillin) #�+�+�������� ����������9�"�+)"�����"�&)"����� �0������� (Streptococcus sanquis) ������"�)��+0��� ���)�0� (Actinobacillus viscosus) ) ��!��$���7��$:�#�0��* (cell membrane) #�����&������&���:X�#+"�����$�����%����������0��*�!��$����)#���:���3�Q $�7���������#�&��:������%R������0��*��#��S0�#������%R�����0��*� �#���� ��%����$� ���3��� (DNA) ���*��3��� (RNA) ���)#���:���������������+������9�"�+)"����+�������� �S���!����
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
12
"���� 2 �� �&8��%�)�������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* (41)
Factors that promote colonization and persistence in the oral cavity - Adhesions - Invasins - Bacteriocins - Antibiotic resistance Factors that interfere with the hostNs defenses - Leukotoxin - Chemotactic inhibitors - Immunosuppressive proteins - Fc-binding protein Factors that destroy host tissue - Cytotoxins - Collagenase - Bone resorption agents - Stimulators of inflammatory mediators Factors that inhibit host repair of tissue - Inhibitors of fibroblast proliferation - Inhibitors of bone formation
��������� (collagenase) ���&����+������%R������0��*�����7 ���7��"%��Q�%���$9%�#���������&6��%��&����+ �#7�������� )��&����"*#��-+�%�&��#�X����������������#�!���������� �������������S���!����� ������������+�������+�������������%+����X��7 ���7�������� -��;��R�-&�%��������������#�����#���) �"��������!�����������������%����7 ���7��&����"*� �!��$���� )��&����"* �"%��&8:+��� �&6������#�+�������%����$":�!��9����������������S���!����� �#����������0��*����7 ���7��+����X���#��������+ � ���% )-��#��*).���������*�0��* ����.)+�+���"* "�+����"%��27 �$�7����$������27 ��!��$�&�%��������������#� (42) �"����"�� (cytotoxin)
#����������������+ ^��-���+�* �0)"���0�� (heat-labile cytotoxin) ������") � ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* �&6��0)"���0�� ���#����#!��-�� ����&6�&8����#����#�:����2�� $�������#���"%��.)+�+��� � ���% �0)"���0�� ���&�%�����#������$������27 � #�� !�$��)#���:� 50 ��)� ��"� 0�����#��S�+� �������" ���3�������.)+�
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
13
+���"* (43) ������� ��-+�%�#��0)"���0��������%+�����0��*#�� !�$��)#���:� 8 ��)� ��"� -+�%���#��S�+� �����-��#!��������.)+�+���"*� �(44)
�������"�� (Leukotoxin) ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* ���")&�"�����"��� � !�$��)#���:�
116 ��)� ��"� (116 kDa immunomodulating protein antigen) ����� ���%+����X��7��$:�#�0��*2 ����(45) ���������%� ���)����0�� 0����&6�-��*-.��*##���)&�"�� (pore-forming protein) 0�����#��S�!�������)��.u��* )-��#��*).���������* ���)��0"* ����0��*����++R�#��:�#���7��Q � ���% ���0��* ) �����!��$���7��$:�#�0��*��� �����9�������#�# :�����������%����������0��*����!��$��0��*"�� (necrosis) ������: ���������)����0����#��S�!�����0��*����++R�#��:�#��� ��&6����$��%������#%��#��S��+�:#���"�+���������++R�#��:�#������%����� �!��$�#����&�%����3��0#*$���2�� �%����$�#��������+����!��&��%����!���������7 ���7�� ��� ���)����0������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* 0�)���-*+���#��S�$������!��$���� "���++� "���� ���0��*)&��#�*��)��0"* (promyelocytic cell) ���
��C��"!��D������������!���"�E�����"��� (Extracellular proteolytic enzyme)
��3��0#*�%������)&�"�������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* �2%� ���&0��-���* )&�"�)����*"�� ��3��0#* (trypsin-like proteolytic enzyme) 0���-+�%�#����#�#-�;*�+�R������������������)��&����"*����+(46) �����-+�%���3��0#*����:%#�� ��#��S� �"������-��#!��������0��*��7��+:�������$�7��������-����� �� (47) ��#� ���#���������%������ ���� (IgG) ����� (IgA) �����3# (IgM) (48)
�������� "�������-� ��)-)&���0����*�� * �&6�&8��%�)������!��9#������%��$���� ����!�����0��*���
��7 ���7��&����"* ������������ )��&����"*����+ ��)-)&���0����*�� *�����������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* ��#��S���":���0��*�%�����) ��]-����%������ �7� )#)��0"* ����#�)���. �$�#�������"�0)"���*����������+ �2%� �������*����������� ���#��*���)��0���.��"��* �!��$���� �������+������ �������������� ��(49)
�P������������Q�����E#!��R�!�� (Immunosuppressive factors) ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* �#�&8����#����#�:����$�����%��
�����#��S�+� �$�7��+����������&Y��������%����� 0���� ���% �������27 ���#��S���"��3��0#*�����#��S�+� ��������� ���3��� ���*��3��� ���)&�"�������0��* (50)
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
14
��T��C!����-1 (HMGB1) ����������� ��T��C!����-1
��2��3#�+�-1 (High molecular group box protein : HMGB1) �&6�)&�"��������%�����������0������-+#�&��#�X 30 &} �&6��#�2������:%#��2��3#�)&�"�� (high-mobility group protein super family) 0���&����+ ��� ��2��3#�+� (HMGB) ��2��3#���3� (HMGN) �����2��3#��� (HMGA) �"%����:%#�#�2��"%��������%���!� +����!�$������ (functional sequence motif) �%���!� +����!�$�����������2��3#�+� ������%� ��2��3#�+3��0* (HMG boxes) �%���!� +����!�$�����������2��3#���3� ������%� �%��+���������)�)0# (nucleosomal binding domain) �%���!� +����!�$�����������2��3#��� ������%� ����^:� (AT-hook)
"���� 3 ���X������2��3#�)��#�"��)&�"�� (Revised nomenclature for the HMG chromosomal proteins)(51)
HMG proteins
HMG motif protein
Functional motif Root symbol New name
(canonical HMGs) Old name (canonical HMGs)
HMG-box proteins NBD proteins ATH proteins
HMG-box NBD ATH
HMGB HMGN HMGA
HMGB1,2,�n HMGN1,2,�n HMGA1,2,�n
HMG-1/HMG-2 HMG-14/HMG-17 HMG-I/HMG-Y/HMG-C
ATH; AT-hook, HMG; high mobility group, NBD; nucleosome binding domain
)�������������2��3#�+� (HMGBs) &����+ ��� 3 �%�� (domains) � ���% ��2��3#�
+��0* (HMG boxes) 0����&6��%��+��� ���3��� (DNA binding domains) ����%��&�������&6��� (acidic tail) 0�����2��3#�+3��0* �+%��&6� ��2��3#�+��0*�� (HMG box A) �����2��3#� +��0*+� (HMG box B)(52) (R�-&����+ 1)
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
15
R�-&����+ 1 �� �)�������������2��3#�+� (HMGBs) (6)
���#� :Yang H.,et al.(2005) The cytokine activity of HMGB1. J of Leuko Bio;78:1-8.
�����2��3#�+�-1 ��#�:��*-++�)��)#)0# 13q12 ��2��3#�+�-1 ��#��S+�+ ���3���
(DNA binding domains) ���#�+�+��"%������ ������� ���3��� �!�$������2%�����R�-������)�)0# (nucleosomes) �����+�:#�� ���������� (gene transcription) (6,53)
������"�����������T��C!����-1 ��2��3#�+�-1 �%���$9%-+�&6�)��#�"��)&�"������������� ������ ���-+���0)"-���0�#��+���0��* ��2��3#�+�-1 ����#��S���7�����$�%���������������0)"-���0�#��2%������0��* (cell cycle) ��������������"%�#� -+�%���2��3#�+�-1 �#%� �!�� ���%$�7�#�+�+���]-�����0��* ��-+�%���2��3#�+�-1��#��SS���+�������0��*) ��0��*+��&���R�0���#��:X�#+"��&6��0)"���*(54-55) ) ���2��3#�+�-1 ��#��S���":���$���� ���$�������0)"���*���#���"%��������+���#�+�+���!��9"%������� )����������������+�������+$���)�� �2%� �R���"� �27 ����������7� (sepsis)(9) �R������#����$�����&� �]��+-��(acute lung injury)(56) )�����������+ (arthritis)(7,8) ) ���2��3#�+�-1 �&6��0)"���*���$������#��%������2����%��0)"���*2�� �7�� Q (late acting cytokine) �����+���������������+(57) ) �����������-+��2��3#�+�-1 R��$�����":���#�)���.�&6����� 8-12 2��)#� ��2��3#�+�-1�%��X9���%�����"��+�9X���7� "��+�9X���!�$�+�� ���0*�����2�����)-� �0* (receptor for advanced glycation end product :RAGE) ���"��+)��-���* (toll-like receptor 2,4 :TLR2,4)(54,58)
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
16
R�-&����+ 2 �� ��������$�����2��3#�+�-1 (Pathways of HMGB1 secretion) ���#� :Yang H.,et al.(2005) The cytokine activity of HMGB1. J of Leuko Bio;78:1-8.
�0��*$���2�� ��#��S$�����2��3#�+�-1 ���#�����0��* (R�-&����+ 2) �2%� )#)�
�0�* �#�)���. �0��*+:���$�� ��7� �0��*� �� �*"������0��*����#��7 �����+ �&6�"�� ��#� �����#��S$������0��*���S���!����$�7���� ���"��(59-61) ) �-+�%��0��*��#��S$�����2��3#�+�-1 ��R������S�����":�� (actively) ����0��*$���) �"�� (passively) ����������-+#�$�����2��3#�+�-1 �� )#)��0�*����#�)���.���S�����":��) ����-��R��������+������� (exogenous bacterial endotoxin :LPS) $�7��0)"���*����+ (proinflammatory cytokine :TNF,IL-1,IFN) ��� $���) �"�����0��*���S���!����$�7���� ���"��(6) ) ���2��3#�+�-1��#��S���":�����"�+�����������+����%��%���X9�����#����$�� (injury signal) "%��0��*R�#��:�#��������%���������� �
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
17
"���� 4 +�+�������2��3#�+�-1"%��0��*�����7 ���7��"%��Q(6) Cells HMGB1 Effects Macrophages/monocytes Endothelial cells Neutrophils Epithelial cells Dendritic cells Smooth muscle cells
1) Increase TNF mRNA and protein release; increase
IL-1α,β, IL-1RA, IL-6, IL-8, MIP-1α and β release.
2) Release after LPS stimulation. Induces expression of adhesion molecules (ICAM-1, VCAM-1) and RAGE; induces cytokine release (TNF and IL-8) and expression of MCP-1, tPA, and PAI-1. Increase TNF, IL-1β and IL-8 gene expression. Increase enterocyte permeability. 1) Increase TNF, IL-1α, IL-6, IL-8, and IL-12
release. 2) Increase CD40, CD54, CD58, CD80, and CD83
expression. Cause cell migration and cytoskeleton reorganization.
Inflammation Increase neutrophil adhesion, inflammation, regulation of fibronolysis Inflammation Increase bacterial translocation Dendritic cell maturation Chemotaxis
Tissue Effects
Brain Lung Intestine Joints Heart Others
Induces fever, anorexia, taste aversion, and weight loss; induces brain cytokine expression (TNF, IL-1, and IL-6). Cause acute lung injury, increased pulmonary levels of TNF, IL-1β and MIP-2, lung edema, and neutrophil accumulation. Cause intestinal barrier of dysfunction and bacterial translocation. Induces arthritis and inflammation Arrhythmia Bactericidal activity
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
18
#�����������2��3#�+�-1 ���$���) ��0��*�����++R�#��:�#����#� ��0��*����%������7��Q �2%� ����������� El Gazzar M. (2006) (62) � ���������"�+�����������+�����2��3#�+�-1 ) ����":���#�)���. �����)-)&���0������* -+#����$�����2��3#�+�-1 ���%����������$����� ���0��* ������ 8 2��)#����$���#������: ������ 48 2��)#� Wang H ����X� (1999) (3) ��������$�����2��3#�+�-1 �#7�����":���#�)���. �����)-)&���0������* �������*������-1 (IL-1) ������#��*���)��0���.��"��* -+#����$�����2��3#�+�-1 ���%����������$����� ���0��* (culture supernatant) ������ 8 2��)#����$���#������: ������ 18 2��)#� ������ �����������$�����2��3#�+�-1 ��0���# (serum) -+#����$�����2��3#�+�-1 $�������":�������� 8-32 2��)#� ���0��*2%��&����#�!�������������������+��2��3#�+�-1����������&6�����������%� ��2��3#�+�-1�#����#�#-�;*�+�������+��)��&����"*����+$�7��#% 0���#������������ Morimoto Y. (2006)(63) -+����� ���������2��3#�+�-1 ���0��*+:����$�7�� ��������������%��$����� ��� �����* ����X�(11) -+�%����R���&�"�#������ ���������2��3#�+�-1 ���0��*�.)+�+���"*�����3��� &����"*���#�:��*� ����� +���*��3�������� +)&�"��R�����0��* �"%�#%-+)&�"����2��3#�+�-1 $������#�����$����� ���0��* ������ ������������� ���������2��3#�+�-1 ���0��*�.)+�+���"*�����3��� &����"*���#�:��*���R������#���)-)&���0������*����27 ���)��� -+�%�#������ ��������-��#�� ������2��3#�+�-1���� + ���*��3��� �]-���R�������2���$����� ���0��*���#��%��&����+���0���#��%�� � �"%�����#%-+����-��#�� ����)&�"����2��3#�+�-1 � ����������0��*
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
����� 3 ����� �����������
���������� ��� ����������������������� �������� 1. ������������ ����� ��
2. ���"�������#$���#�%�$�&���������
2.1 ����'�(��� ���)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*��� ��/��0�1��%��*
2.2 ���������"��%�$�&���(���� 2.2.1 ��������,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������" 2.2.2 ������" ���������������� ��.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* 2.2.3 ������" ��"���)��*.��������#$��"������ '��*�+,�,�.�" �������" 2.2.4 �������'�����*"����-��&��/��-�-1
3. ��5������� 3.1 ��(�����)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*������6�*.�(�)��*�+,-� -��"�*������#��������,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������" " �������.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"*.%�"*.�( " ��"���)��*.�����'��*�+,�,�.�"�������" ,��%�����%����) �� 3 �� � 3.2 ������(�*���."����������&��/��-�-1���(�-��"�)����* ���*��/����� ���� 5� �� � ���* "%���"*���' �%" -,'�� ���� �" �&� �� .��&$ � (reverse transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR) 3.3 ������(�*���."����������&��/��-�-1 ���(�-,1����������5� ��"�%��*�-��% (Western blot analysis)
4. ������(�*������ )0$�������(�������� ��1��
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
20
��������������������� ��� ����� ��%�$�&����������� ��� (1�(��-�����)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*��+P�������1Q��%�$����R����#$�����1S�+P������#��'��(��������+P� ,��+P�� �(������ ��'��5�"T�'�����# ���#$�1��%��* .�(����-���������������1Q�� ,���������)��*�+,-�-��"�*������#����&� ����#����-U��+P� " ������������)��* �+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*(��������������+P�-����V������� (Middle third)
�������� ������������ !� ��������� ��� "�# ��$�� %��&'()�������&*�� �����+�# %��&'()�������&*�� �,��-.������& ����������)��*�+,-�-��"�*������#�� ����5���� �#� ����+P�����+�"�+�-+�+��* )�����* (Phosphate buffer saline :PBS) ����U �� � ��� �0��&����� �����&� ����#��-�������+P�.�(��&� ����#������1S�&� ���/�U " ������������)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*����5���� �#� �&����� ��������# ���#$���������+P�-����V�������������+P��'#$��������$����# ���#$����#��.�(��# ���#$���1������+P� ��# ���#$�%�$���(R����� ��������� ���)��*���� 60 ��������� ���������� ���)��*&�������/�����/� (Dulbecco Modified Eaglebs Medium : DMEM) %�$����"��1�(��-��� ��1�� �#� )��������� ���������( 10 (10% Fetal calf serum,FCS) �������� (L-Glutamine) �'���)���� (Penicillin) "���1,���)�� (Streptomysin) ��� ��������-%�$����V�T��� 37 ��h��)��)��" .�(��1����V�i�)���*-��������)�*�����( 5 ����)��*�����&� ���# ������ -������ �� ��� ��1��$���������� �� ��)��*���k��/������ �� �������������)��*(%��,�����R �� (Subculture) �)��*%�$���k��/������ ����"� ����� ���)��*��� ������" �� 1:3 (�� ���)��* 1 �� 3 ����)��*% ����� ������ ���)��*��� 1 ��) ,���&���/��)�*%��1)��-����%��� (Trypsin-EDTA) �)��*%�$�&������%������ ��� (�1S��)��*�� �%�$ 3-8
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
21
��� ����������� !���#����
1. ��� �����'�)").��+%���'��& *��"��&'()�)�+�� ���������� �&�"��-��"�%5�n��,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������" (Invivogen®, San
Diego, USA) ,������������������� (stock solution) %�$ 1 ��������� ������������� ��1��h���&# � (distilled water) .�(��/-���%�$��V�T��� -20 ��h��)��)��" ��� �(������&������%����
2. ��� ������������*������� ��$��+����� ���+�� ���& +����)����%� ��
)���+���& ����'�(��� ���&# �(%����5�������-��������� ���V5����� .�(�V((64) )0$�����5����� �'�(��� ��.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* (ATCC 43718) ���������� ���&# � ����%��1,��)�� (tryptone soya broth : TSB) (Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England) %�$��"��"������"�* �����( 1 (yeast extract 1%) %�$��V�T��� 37 ��h��)��)��" ,����� ��������- (Candle jar)
����������� ���&# ��1��� ���������#�."�%�$���������#$�."� 660 ��,����� ����� ���������#�."��% ��- 0.6 R0� 0.7 ��� ������������ ���&# ��1����$���������#$������$�����h���*����%�$�(�-������/� 10,000g �1S����� 15 ��%� %�$��V�T��� 4 ��h��)��)��" �'#$�.��" ������&# ������" ������������� ���&# � �������� ���&# �%�$��/-���(R������1��������.� �����%�$����'������� 0.2 ��,������ �'#$��������" ������&# �%�$��������#���� ��������� �������� ���&# �%�$����� (1�(��-����"����$���.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* .�(� ��1(������ � " ���������������� ��.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* ��/-" ���������������� ��.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* %�$����� ���%�$��V�T��� -80 ��h��)��)��" ��� �(������&������%����
3. ��� ������������ %��&+���������� ����*��"��&'()�)�+�� ���������� " ��"���)��*.��������#$��"������'��*�+,�,�.�" �������" "��'�5�* ATCC 33277
(����-�����������(�*,��%��.'%�* ���� &�"��T* ��"��1��kk�������"���&����%��& ��1�� T����&�"�����%��.�(&������ �V(%��.'%�h�"��*�����%���������) R��������&� )0$���� �������"��,��� � �#� .-�%���������-������ ������������ ���&# ��&�����*-��% (Schaedler broth) %�$��V�T��� 37 ��h��)��)��" ������-%�$�� �����)��� ��� ������������ ���&# ����� ���1��� ���������#�."� ������� ��% ��- 1 %�$���������#$� 600 ��,����� ����������� ���&# ��1����$���������#$������$�����h���*���� �'#$�.��" ������&# ������" ������������� ���&# � ,��
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
22
" ������&# �(���(������ %�$�������%���� ��� ������������ ���&# ���� .���&(����" ������&# �����+�"�+�-+�+��*)�����* .�������1����$���������#$������$�����h���*���� ��� ���� +�"�+�-+�+��*)�����*��� .���%�����&(��������+�"�+�-+�+��*)�����*����� � ��� �����+�"�+�-+�+��*)�����* 1����V 300 ��,������ ����1� ����#$��"����'#$�%������)��*.�� ��� �0�����1�������&# �.-�%������'#$����"�-���.������)��* .�������1����$���������#$������$�����h���*���� �'#$��1S���������h6�)��*%�$���#���� ���" �����%�$�1S���������"���&� ,���������������,1�������.-�%����� (Protein assay) " �����%�$��/-���(R������1��������.� ����� ��/-" ��"�����'��*�+,�,�.�" �������"%�$����� ���%�$��V�T��� -20 ��h��)��)��" ��� �(������&������%����
4. ��� ����� �! �,�����-1 '"� ���& (HMGB1 primer ) ��&��/��-�-1 �'�����* R��"�����(�*,��,��1��*��� (OPERON) (A Qiagen company)
���������-�'�����* ,���&���"�����/�) 1.6--� (clustalx 1.6b) ��������'�����*��� �(�� �� 18 R0� 25 �-"
HMGB1; forward-CTCTTCTGCTCTGAGTATCGC reverse-CAACTGAAGATGAAAAAACTACC
����������� .?�"�@��� ����� �,����� (MTT assay) �����%�"�-�����1S�'�6�����,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������".�(" ��"���)��*.�����'��*�+,�,�.�" �������" %��,����5���/�%�%���.1������5���� Mossman T. (1983) (65) ����5�������� �)��*R��R ����������� ���)��*.-- 96 ���� .�(��(����������,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������" %�$����������� �% ��- 0, 1, 5,10, 50 .�( 100 ��,�����/��������� .�(" ��"���)��*.�����'��*�+,�,�.�" �������"%�$����������� �% ��- 0, 0.1, 0.5, 1 .�( 5 ��,�����/��������� ,����(�����1S����� 24 &$�,�� ��� ������������ ���)��*%�$����)��������� ���������( 2.5 (2.5% FCS-DMEM) ��� ��������� ���)��*(R���1��$���1S�&����� ��)��� (serum free-DMEM) .�(������/�%�%�%�$��������������% ��- 5 ��������� ���������� ��#$���-���� 30 ��%� ����������� ���)��*��� .�����������%��)�+���)�* (dimethyl sulfoxide, DMSO) 100 ��,����������.� �(������������ ���)��* ��� �0�����1� ��� ���������#�."�%�$���������#$�."� 550 ��,�����
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
23
����������� R ���)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ����������� ��.-- 6 ���� %�$���������.� � 200,000 �)��*/���� ���������� ���)��*&�������/�����/� %�$����)��������� ���������( 10 (10% fetal calf serum,FCS) 1� ������)��*���0�%�$����� ���1S����� 1 �#� �����#���� %��& �,��-.������&��� "�# ��$����� !�$����)��.������& .- ��1S� 3 ��� � ���.�
1. ��(�����)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$��)��������� ���������( 2.5 (2.5% fetal calf serum-DMEM) ������,',1��.)������* ���'��*�+,�,�.�" �������"%�$����������� 25 .�( 50 ��,������ ���������� ,������� ���-����1S��)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��* �+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*� ���-� ��1��h���&# �
2. ��(�����)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$�� ��)��� (serum free } DMEM) ����" ���������������� �� .���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* ������" �� " �������.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* /�������� ���)��* �% ��- 1:10, 1:5 ,������� ���-����1S��)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$1��h��)���� ���-�������� ���&# �����%��1,��)��
3. ��(�����)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$1��h��)��� ����" ��"���)��*.��������#$��"������'��*�+,�,�.�" �������"%�$����������� 0.25 .�( 0.5 ��,������ ���������� ,������� ���-����1S��)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$1��h��)���� ���-� ��1��h���&# � .���0�����1��������."����������&��/��-�-1 ���(�-��"�)����* ���*��/�����#$�
��� ���1S����� 24 &$�,�� .�(��������."����������&��/��-�-1 ���(�-,1������#$���� ���1S����� 48 &$�,�� ,��%�����%����) �� 2 �� �
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
24
����� ���#�&���+�����*�� �! �,�����-1 ��#�� �� %� ���& ���& �,� ������� �� ���&������&���" ��-)"�� �� �� !� ��+��!��� (reverse transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR)
1. ���������& �,� � (total RNA extraction) ����������� ���)��*���.�(�������� PBS .������%� � ���*��/������)��*�'�(��� ��(R��������,���&����)�� (Trizol, Gibco, USA) �����5����.�(���,��-��6%������� ��� ����,��� � �#� �" ���)�� 1����V 1 ���������/���� %� ���� 5 ��%� �������,�+��*�1����V 200 ��,������ ��� ���� �����'��"���.��U 15 ����%� .���%� ���� 3 ��%� ��� �����1����$���������#$������$�����h���*����%�$�(�-������/� 10,000 ��-� ���%� �1S����� 15 ��%� %�$��V�T��� 4 ��h��)��)��" %����������������"%�$��� & �-�"��)0$��1S�& �%�$�����*��/���1���� ��� �������,) ,'�'���� 1����V 500 ��,������ ����1����$���������#$������$�����h���*����%�$�(�-������/� 10,000 ��-� ���%� �1S����� 10 ��%� %�$��V�T��� 4 ��h��)��)��" .����%" ����������"���������#�.� �(���%�$�������'��"��� ��� ��������� ��%���� ����������������( 75 1����V 1 ��������� ���(%�$���������-�U .�������1����$���������#$������$�����h���*����%�$�(�-������/� 7,500 ��-� ���%� �1S����� 5 ��%� %�$��V�T��� 4 ��h��)��)��" ��� ��%��������"���.�����$������'��"���%� �������.���1�(��V 10 ��%� .����(����(���%�$��� �������)0$��1S����*��/�������� ��%�$1��h����/��)�*���*��/���" (RNase-free water) 1����V 15 ��,������ .�������1�� �%�$� ��� �� (water bath) %�$��V�T��� 55 ��h��)��)��" �1S����� 10 ��%� ���*��/���%�$���(��/-���%�$ ��V�T��� -20 ��h��)��)��"
2. ������ ���#�&���"�� ��+���� �,� ��+��& (First strand cDNA synthesis)
���"�����(�*����/������.--%��,���&�&��"��������*"��� (RevertAidTM first strand cDNA synthesis kit) (Fermentas, Life sciences, USA) ,���&�1����V���*��/��� 1 ��,����� .�( ,���,� (Oligo (dt) 18) ��1����V 0.5 ��,�����/��,������ 1�-1����V��������� 12 ��,������ ,���&����'�������* (DPEC-water) ����1�� �%�$� ��� ��%�$��V�T��� 70 ��h��)��)��" �1S����� 5 ��%� ��� �����1������-�� ��.�/��1S����� 5 ��%� �V(� �����-+�+��*%�$& ���'�$�1�������� (5x reaction buffer) 1����V 4 ��,������ �������-� ���/��)�*��,-��������" (ribonuclease inhibitor) 1����V 1 ��,������ .�( �����)���,-������,��%�* ���+�"�+" (deoxyribonucleotide triphosphate: dNTPs) 1����V 2 ��,������ �"����������.�(����11P�� (mix and quick spin) .�������1�-%�$��V�T��� 37 ��h��)��)��" �1S����� 5 ��%� ��� �%�����������/��)�*������*"%���"*���'�%" (RevertAidTM M-MuLV reverse transcriptase) 1����V 1
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
25
��,������ �"����������.�(1P������� � ��� �����1�-%�$��V�T��� 42 ��h��)��)��" ��� 1 &$�,�� ���(% �1��������"�-��V* .�������1��/-���%�$ -20 ��h��)��)��" � ��%�$(%���1�&����
3. ��� "���*���������� �,� �)� !��������)"�� �� �� !���+��!������� �������"�%����& (Polymerase Chain reaction: PCR)
���."�������'�)����*(�&���/��)�*.%�����/���,'�������" (Taq DNA polymerase) ,���&�1����V������'�)����*% ���� 25 ��,������ )0$�1�(��-���� ����/���"����-�&��1S����.-- 1 ��,����� (1 µg of cDNA template) �����)���,-������,��%�* ���+�"�+" % � 4 &��� �#� ����%�'� (dATP) ��)�%�'� (dCTP) ���%�'� (dGTP) .�( ��%�%�'� (dTTP) �� ���( 2.5 �����,����* (2.5 mM of each dNTPs) )0$��&�"��������/���"����� ������� ����" ��1�(��-�#$�U ���.� � ����$� -+�+��* (10x PCR buffer) .�����)���������* (MgCl2 concentration between 1-5 mM) ��/��)�*.%�����/���,'�������" (0.6 U of Taq DNA polymerase) ,���,� ������,��%�*�'�����* )0$����.� .�1����& (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ,GAPDH) .�( ��&��/��-�-1 �'�����*
HMGB1; forward-CTCTTCTGCTCTGAGTATCGC reverse-CAACTGAAGATGAAAAAACTACC
GAPDH; forward; 5b-TGAAGGTCGGAGTCAACGGAT-3b reverse 5b-TCACACCCATGACGAACATGG-3b.
���%�����������#$��'�)����*� �(� �"T��(1�����������$����"����- .�1����&.�( ��&��/��-�-1 ���%�$��V�T��� 95 ��h��)��)��" �1S����� 5 ��%� 1��������"�����(�*����/���(�����0 ���#$�%�������������1��$��.1����V�T��������������� V ��V�T��� 3 �(�- �&���V�T��� 94 ��h��)��)��" �1S����� 15 ����%� �'#$�%������������.��"���������/������.--�1S�����/���"�����$�� (denaturation) ��V�T��� 53 ��h��)��)��" �1S����� 1 ��%� �'#$����-�(�� ��"�� �'�����*�-����/������.--%�$�1S�"�����$�� (annealing) ��V�T��� 72 ��h��)��)��" �1S����� 1 ��%� "����-���"�����(�*����/���"����� .�(��-"��%���%������ �1�������'�*����* (final extension) ,���&���V�T��� 72 ��h��)��)��" �1S����� 10 ��%� ��� �����������������TV�*'�)����*,����5� ����/�,��,+��)�" (electrophoresis) �����(��,�"�� %�$�����������������(��,�"�����( 1.6 (1.6 % agarose gel) .�(������1�������� ��/%5������,-����* (ethidium bromide) %�$����������� 0.5 ��������� ���������� 1�(��V 10 ��%� ������1������/%5������,-����*" �������������� ����$� R ��T�'���������+��*� -����#$���������
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
26
."��������,���/� (ULTRA LUM, Electonic U.V. Transilluminator) ���������(�� �� ����/���%�$"��.�(����/�����-���(�����������(�*����,1�.��� (sionimage) �'#$�����������������T�'
����� ���#�&���+�����*�� �! �,����� -1 ��#��).���������� �� ���&����� (Western blot analysis)
��#$���-����������%�$�)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*��� ��/��0�1��%��*����-�����(������"T��(������� �)��*(R��%�����.�� (cell lysate) ���$�������������� ���)��*%� �.�����������+�"�+�-+�+��*)�����* .����" ,)�����,����)��)��+� (sodium dodecyl sulphate, SDS) ����������������( 1 (1% SDS) )0$�(�1%�����"�����,1�����#����������,���� ������-�����1��� �&�,)�����,����)��)��+�����������������( 1 1����V 100 ��,������ %�����������'�(��� ���)��*.� �(�������%$����� .�����/-" ����������"�" ����'��"������� 1.5 ��,������ ��� ������������"" ����0$��1��1����V,1���� ,����5����.-��+��� (Bradford method) %�$� ���������#�."�%�$ 595 ��,����� 1�-"���(����)��*.�������1����V,1����%�$�% �����.� �(��� �%���� ���,1�����1.�������-����������,��,+��"�" (SDS-polyacrylamide gel electrophoresis) %�$�����������������(���������*�����( 10 1�-��(."�++��������(�-%�$����("� 1�(��V 20 �����.��.1�* �����,1����R��.��.���(R��R ����-�.� �'�������+ (poly) vinylidene difluoride immunoblot membrane (PVDF) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). ��� �.& .� ���-�/���� �,)��&$� (blocking solution, 5% skim milk in TBS-T) �1S����� 1 &$�,��.���-��%����.����-���� ���&��/��-�-1 (HMGB1 antibodies ,Monoclonal Anti-HMG-1 Clone HAP46.5, Sigma, USA) ������" �� 1:1000 �1S����� 1 �#� ��� �����.� ����� washing solution 5 �� � �� ��( 10 ��%� � ���-��%� �����.����-���%����T��� (secondary antibody) %�$� ��-����)�*�1��*���)���" (ECL Anti-Mouse IgG, Horseradish Peroxidase-Linked Species-Specific whole Antibody (from sheep) (Amersham Bioscience, UK)) ������" �� 1:50,000 �1S����� 1 &$�,�� ��� �0�- �.� �����)�.��'�" (ECL plus reagent) �����5�������������� .�(���-"kk�V�����&��/��-�-1 ����.� �+��*����)*���* (standard HyperfilmTM ECL, Amersham Bioscience, UK)
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
27
�� ���#�&*���Y� �������� ."������������.--�������&��'��V��
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
����� 4
���� ���
���������������� ��������������� !�����"������"�#���� �� � �� �� � �$������ ���%����� (MTT assay)
���������� �������������������������������� ������������������ �� ���!��"# 25 �& 50 �������"�/����)� ��* �������������"*�����+,��&�-&(11) *!�����1)���� �2�������#������3���+������������������������������� ���������)!�����*��4��1����� ��5!�������� �� ������#�6������� �� ��������� �#�!���!����������3���+)!��� (�"�������7����&�# 3)
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
cont 1 5 10 50 100
LPS P.g.
OD
55
0 n
m
7����&�# 3 ������!�����9������#�&�"#������3���+������������������� ������������ ��������������9)!��� ��� ����������-��%�����-1 0��1�������!�����" ��"��%��� �1�1������2����3���124$��!��"�#������2"����5�3� �1�!��"�#������2"�����%��6��� ���2"��4��"�$���������� !�����"������"�#���� �� � �� �� �
����������#�!� ����������������������������� ������������������ �� � 25 �& 50 �������"�/����)� �����:��&)6 �������#�#��)����;����; ����������
µg/ml สาํ
นกัหอ
สมดุก
ลาง ม
หาวทิ
ยาลยั
ศรนีค
รนิทร
วโิรฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
µg/ml µg/ml
���5�1���#�-1 ������A ���!��6!���#�6� �" ����&�"#���������� ����1���&�&�"#���)�� �" ��� *"��#�!������������5�1���#�-1 �����������A �*!��5"�������������� �� ��� ����������������������������� ���������������A ���� 25 ��3� 50 �������"�/����)� (�"�������7����&�# 4)
�����2������&)6 �����1�*A�����"�)���6+*�� �*����������������������������� ������������������ �� � 25 �& 50 �������"�/����)� ��!�#�!��������������������A ����5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� �������*#�"#�6!���#�6� �)!�&�"# �5�1���#�-1 ���)���" ��������-������A ���!��6!���#�6�*!��5"���� (�"�������7����&�# 5)
4A
4B
4C 4D
0
50
100
150
200
250
cont 25 50
P.g. LPS
rela
tive d
ensity t
o G
AP
DH
0
10000
20000
30000
40000
50000
cont 25 50
P.g . LPS
r
ela
tive d
ensi
ty
7����&�# 4 �����������5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� (������� �2���� 20 �# �&��������5��3�)"���#�6�) (4A) �&�&�"#���)�� (4B) ������&)6 �������#�#��)� ���;���� �*����������������������������� ��������� �&���������� ����� ������ ����:#9�)7"-E��������(4C) �&������ ����:#���)�� (4D) (���������9 � �*�������scionImage)
Control 25 50 µg/ml P.g. LPS
Control 25 50 µg/ml P.g. LPS
390 bp GAPDH
30 kDa HMGB1 680 bp HMGB1
29
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
Control 25 50 µg/ml P.g. LPS
Control 25 50 µg/ml P.g. LPS
390 bp GAPDH
30 kDa HMGB1
680 bp HMGB1
µg/ml µg/ml
5A
5B
5C
0
50
100
150
cont 25 50
P.g. LPS
rela
tive d
ensity t
o G
AP
DH
5D
0
10000
20000
30000
40000
50000
cont 25 50
P.g. LPS
r
ela
tive
de
nsi
ty
7����&�# 5 �����������5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� (������� �2���� 24 �# �&��������5��3�)"���#�6�) (5A) �&�&�"#���)�� (5B) ������&)6 �������#� #��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*����������������������������� ��������� �&���������� ����������� ����:#9�)7"-E�������� (5C) �&������ ����:# ���)�� (5D) (���������9� �*������� ScionImage)
���������������� �����<������!��" 2������"�#���� �� � �� �� � �$������ ���%����� (MTT assay)
���������� ����!����"�����)��������������� ��������� ��������� �� ���!��"# 0.25 �& 0.5 �������"�/����)� ��* �������������"*��_������*��&�-&(66) *!�����1)���� �2�������#������3���+���!����"�����)���������������
30
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
µg/ml
��������� )!�����*��4��1����� ��5!�������� �� ������#�6������� �� ��������� �#�!���!����������3���+)!��� (�"�������7����&�# 6)
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
cont 0.1 0.5 1 5
Sonicated extract of P.g .
OD
55
0 n
m
7����&�# 6 ������!�����9������#�&�"#������3���+���!����"�����)��� ������������ ��������� �����9)!���
��� ����������-��%�����-1 0��1�������!�����" ��"��%��� �1�1������2����3���124$��!��"�#������2"����5�3� �1�!��"�#������2"�����%��6��� ���2"��4��"�$���<������!��" 2�$����3�������������"�#���� �� � �� �� �
��������� ���&�"#���������� ����1�� ������&)6 �������#�#��)����;���� �*�!����"�����)�� �*�������*��������������� ������������������ �� � 0.25 �������"�/����)� ������������!�)�)!������6!���#�6� �)!���6!������&)6 �� �*������ �� � 0.5 �������"�/����)��������������������A ���!��6!���#�6��&�6!������&)6 �� �*������ �� � 0.25 �������"�/����)��1�� * (�"�������7����&�# 7A,8A) �!��������1�*A�����"�)���6+*��" ��#�!�������������!�)�)!������6!���#�6�����"� (�"�������7����&�# 7C,8A)
���&�"#���)�� �#�!��!����"�����)�� �*�������*��������������� �����������!�����:��&)6 �������#�#��)����;����&����1�*A�����"�)���6+*��; �������������5�1���#�-1 ���������A ���������*#���*#�"#�6!���#�6��)!*!���� �)!�"#�#�����������5�1���#�-1 ���)��������1�� *���6!������&)6 �����1�*A�����"�)���6+*� (�"�������7����&�# 7B, 7D, 8B)
31
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
HPDL
7D
Control 0.25 Control 0.5 µg/ml Sonicated extract of P.g.
30 kDa HMGB1
7B
HGF
7C 7A
7����&�# 7 �����������5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� (������� �2���� 20 �# �&��������5��3�)"���#�6�) (7A,7C) �&�&�"#���)�� (7B,7D) ������&)6 ���� ���#�#��)����;����&������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*�!����"���� �)�� �*�������*��������������� ���������
Control 0.25 0.5 µg/ml Sonicated extract of P.g.
Control 0.25 0.5 µg/ml Sonicated extract of P.g.
680 bp HMGB1
Control 0.25 0.5 µg/ml Sonicated extract of P.g.
390 bp GAPDH
32
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
µg/ml
µg/ml
8A
0
50
100
150
cont 0.25 0.5
Sonicated extract of P.g.
rela
tiv
e d
en
sit
y t
o G
AP
DH
HGF
HPDL
8B
0
10000
20000
30000
40000
50000
cont 0.25 0.5
Sonicated extract of P.g.
re
lative
de
nsity
HGF
HPDL
7����&�# 8 ������ ����������� ����:#9�)7"-E�����������5�1���#�-1 (8A) (������� �2���� 20 �# �&��������5��3�)"���#�6�) �&������ ����:#���)���5 �1���#�-1 (8B) (���������9� �*������� scionimage) ������&)6 �������#� #��)����;����&������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*�!����"�����)� � �*�������*��������������� ���������
33
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
��� ����������-��%�����-1 0��1�������!�����" ��"��%��� �1�1������2����3���124$��!��"�#������2"����5�3� �1�!��"�#������2"�����%��6��� ���2"��4��"�$���<������ ��� �2 ���2��" ��2 �����! ������ ���" ���"
������#������3���+���!��*����������)��#��)�� ��)����"*������� ������� �� �5 �!��1��������������"*��_������*��&�-&(66) �A��")���!������2����5 �����_A�+� �� ")���!���!��*����������)��#��)�� ��)����"*��������������/�;���� *���� ��!��"# 1:10, 1:5 ��!�#��3���+)!���
����������#�!����&�"#���������� ����1�� �!��*����������)��#��)��
��)����"*��������������������" �")���!�� 1:10 �& 1:5 ��!�����:��&)6 �������#� #��)����;����; �������������5�1���#�-1 ���������A ���������*#���*#�"#�6!���#�6��)!*!���� �)!�"#����������������1�� *��*���9"�)��")���!������5 �������&)6 � (�"�������7����&�# 9A,10A) �!����������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*��" � �#�!��6!������&)6 �� �*")���!�� 1:10 ������������!�)�)!������6!���#�6�����"� �!�� �6!������&)6 �� �*")���!��1:5 �������������������A ���!��6!���#�6��&�6!������&)6 �� �*")���!�� 1:10 (�"�������7����&�# 9C,10A)
���&�"#���)�� �#�!��6!������&)6 �������#�#��)����;���� �*")���!�� 1:10 ������������!�)�)!������6!���#�6�����"��)!�6!������ �"#�����&)6 ����")���!�� 1:5 �������������������A ���!��6!���#�6��&�6!������&)6 �� �*")���!�� 1:10 (�"�������7����&�# 9B,10B) �!����������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*��" ��" �")���!�� 1:10 �& 1:5 ���&�"#�5�1���#�-1 ���)��������A ���!��6!���#�6����*��1�� * (�"�������7����&�# 9D,10B)
34
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
HGF
390 bp GAPDH
Control 1:10 1:5 culture supernatant of A.a.
680 bp HMGB1
Control 1:10 1:5 culture supernatant of A.a.
30 kDa HMGB1
Control 1:10 1:5 culture supernatant of A.a.
Control 1:10 1:5 culture supernatant of A.a.
HPDL
9A
9C
9B
9D
7����&�# 9 �����������5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� (������� �2���� 24 �# �&��������5��3�)"���#�6�) (9A,9C) �&�&�"#���)�� (9B,9D) ������&)6 ���� ���#�#��)����;����&������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*�!��*��� �������)��#��)�� ��)����"*�������������������
35
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
10A
0
50
100
150
200
cont 1:10 1:5
A.a. Supernatant
rela
tiv
e d
en
sit
y t
o
GA
PD
HHGF
HPDL
10B
0
10000
20000
30000
40000
cont 1:10 1:5
A.a. Supernatant
rela
tive
de
nsity
HGF
HPDL
7����&�# 10 ������ ����������� ����:#9�)7"-E�����������5�1���#�-1 (10A) (������� �2���� 24 �# �&��������5��3�)"���#�6�) �&������ ����:#���)���5 �1���#�-1 (10B) (���������9� �*������� scionimage) ������&)6 �������#�#��)� ���;����&������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*�!��*��� �������)��#��)�� ��)����"*�������������������
36
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
����� 5 ���� ����������
����������� ������������������������������������� ��! � "�#�"#$������ %" &� ! ���'������������� ������ ��"#'��� ���())�"�� "�"� �(67) .��/ � /�������"��� �)0�����"� �())�"� ��$��12���0�� �'���� � " ��#� ���())�"����"�� �%�&0 ��� (Genetic risk factors) /�$�())�"����"�� ��� ����/#����� (Environment risk factor) ������! ����� ��! � " �$�2 ��� B(/�$�����"���� ��"#%���#�"#$������/�$��/����� � ����� .�� (1 %��$ �� 11) ��"����� ������������� �������! ��D (10) ��� /�� ��� �/������ /������"F��������/��� /�$%���.B����/� )��)�# ��� ��"%���.B����/� )��)�# ��� � ��"#'��� �� �� ������������� ���/���������� (chronic periodontitis) ��#/�� ��� �/������ /������"F��������/��� ���/�������"������# ��! ��D �� �� ������������� ���/���0 � (aggressive periodontitis) (68)
1 %��$ �� 11 /���%" &� ! ���'������������� ���/�$�())�"���� ��"#'���(67) ���� : Page RC and Kornman KS The pathogenesis of human periodontitis. Periodontol 2000.1997;14:9-11.
Environmental & Acquired Risk Factors
Microbial
Plaque
Host
Response
C.T & Bone
Metabolism
Clinical
Signs
Ag
LPS
PMNs
Ab
Cytokine
Prostanoid
MMPs
LPS
Genetic Risk Factors
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
38
�())0��������"����� �#� ����������� �����#��D�/��#������ ) ������'���$��12���0�� �'���� � "��/�������" ������������())�"������# ��0/��'��/�������"��� �� # F\�� ������'���$��12���0�� �'���� � "���.�����0�������������������� ������# ��0/��� '\� �]������ ������12���0�� �'���� � "� � �.��! ���� �����F���������� � ����������" #� .F�.�� � ) )$�! � "����/�� ����/��#"��������! � "�F���'���� � "��� /�$ � \̂ _ �������.������ �F���.B����� ��'������� /�$�F���.B����� ��'����̀"\������������) ����F����������� ��! ��D���� ��"#'��� ��%" &� ! ���'������������� ��� F\���� ������#��" �F��������������� � ��"#'���� �$�# ���� �/�$���1 %'���#�"#$"\������� (14) �#�����"����#"F���/F�/�$��#"��� � �$�2 ��� B('\�� ���� F\���F������� ��)$��������"�� ������� �����/�$�())�"������# ��0/��'�������/�$"������F��������������$��12���0�� � (18,19) ��"�� ������.F�.����#"
�����̀�)���-1 ������ �����\��#� /���B����� �����/� �������2�)� �#� ������� ���������"2���#����"� (1) /���� �� �#� � � �b������� � 1 "� �F���.����F����� "��� ��"������������ � 1 "� /��#�����̀�)���-1 )$�! �� ������.F�.�� ��"�����̀�)���-1 b2 )��#� ���.F�.������������ � ���'� ��� #� .F�.��������c� �$�# �'�� ��� ��� (2) �#����������̀�)���-1��� "��� � �b �$0����� �� ������'��� �.F�.����������� �� �� ��� ���/�$����� ��! ��D�� �� ��������� ��"#'��� �� ��� ����� "��� ��� ���.''���� ��� �1 #$�������� �$/������(7-9) ��"�����̀�)���-1� � �b �$0� ������ ��� ���/�$����� ��]D �# ����"� " (injury signal) ���F���/�$�����"���� �c���/���� � � 4 (6) �#�)�"�������)\���) \̂ _ ��� �'�������̀�)���-1�����������F\�������� ������ ̀)������������ ��"#'��� �� ��� ������ �
�"� �.� ̀ � ��� �'�������̀�)���-1 ����������� ��"��)! ���"2� �� � \̂ _ �����.�� � ��� "� #� � � �b%� �/����� '�������̀�)���-1 ��F���.B����� ��'���F��������� .��/ � �F���.B����� ��'����̀"\������� �%����$� �B( /�$����� (11) �#�������F����0��#����� ̀�� �� "� ������"# �#� %� �/����� '�������̀�)���-1 ��#����"�'�������2��f#"����������� ���/�$�2��f#"���.���������������� ��� /���2��f#"����������������� �����"��%� �/����� '�������̀�)���-1 �.F�%� �F\� (cytoplasm) ��#" �#����� Morimoto Y. (2008)(63) "��%� �/����� '�����������̀�)���-1 ��! ����������� (gingival crevicular fluid) '���2��f#"����������� ���/�.��%���! ����������� '���2��f#"���.���������������� ���/�$� � \̂ _ ���� ��'�� �_i�/�$�]$(11) "��.�� \̂ _ �/����� '�������̀�)���-1 ��F���.B����� ��'����̀"\�������1 "���� � �$0���#"
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
39
.��%����/F�� ��.���'�����������.� �����.��%�#� �� �/����� ����%���'\�'�������̀�)���-1 ��$�������F�)��� � ����̀��'���F���.B����� ��'����̀"\�������'���0_"������ �$0���#".��%����/F�� .���'�����������.� /�.��%� ��%���'\�'�����������̀�)���-1 � \̂ _ ������� � ��2�#�)�")\���) \̂ _ ��"�� ��"! .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ��� � �$0��F���.B����� ��'����̀"\��������0_"�/�$�F���.B����� ��'������� ) �� �#�)�" %�#� .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ��� � � �b �$0�����F���.B����� ��'������� /����� �����̀�)���-1����� ]����2�'\�������$��� ����F�)��� � ����̀��/�$������������"� ���1 #$���.��.����� � �$0� /������ �$0��F�����̀"\��������0_"� ���.��%�/����� ����%���'\�'�������̀�)���-1��$�������F�)��� � ����̀�� /�%� �/����� ����%���'\�'�����������̀�)���-1 F\�������.��/ � �) � \̂ _ ���� ��"��.���� �/���� /�� )�����) .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ���/�$���������.������# �/ � �� �����/�$� ���##��" (69,70) ��".��%����/F� � ��.���'��%���.B����/� )��)�# �����)$.��%�� �� ����F\��.��/ � j���� (heptose) ��� .j��� F���� ����/�F�� (β-hydroxydecanoic acid) /�$%�.����.����� F��� ��� (2-keto-3-deoxyoctonate) F\����#"� �"\� ���%��/F�� ��.��� �#�����.��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ����� ��.'�� (fatty acid) ��������� ��� (branched) /�$���# �" #� #� /�$"���� � \̂ _ %�#� �� �/����� "����������#�� 8 ��F���.B����� ��'������� ��� �$0���#" .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ���/�.��%� �/����� ����� �$0���#".��%����/F�� ��.���'������.�(71) �����)\����.�.��#� .��%����/F�� ��.���) /�������"����������# �/ � � �)\����# �� � �b� � �$0��F���.B����� ��.��� � � /�$� ) �����������.�.��%��������� ������������� ��� .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ���� )$����# �$0����� �����"� ��%" &� ! ���'������������� ���� #�
��#�����.������� �$0��F�����̀"\��������0_"���#".��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ��� %��%�"� �/����� ����%���'\�'�����������̀�)���-1 /� ���.��%� �/����� ����%���'\���$�������F�)��� � ����̀�� � )������ ) #� .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ������� �$0� �/����� ����%���'\�'�������̀�)���-1 ��$�������1 "���� ������� $�� (post-translational level) �������� �� � \̂ _ �1 #$ �B������$/�` �F�" (Friedreichns ataxia) F\��������%�&0 ���� �0���$/�` �F�" (ataxia) ��"%��# ����� ���� gene ����#��0� ���� �����B� � F� (frataxin protein) ��") � \̂ _ ��� �� #%�#� " �����#"�%�������B� � F� ��� �������%�"���� (recombinant
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
40
human erythropoietin (rhu-EPO)) ��� � �b �$0��F���.B����� ������� �/����� ����%���'\�'������B� � F� /�.��%� �/����� ����%���'\�'��B� � F���$�������F�)��� � ����̀��(72) ��� �
) �� �/����� ���/ � � �'���F���.B����� ��'������� /�$�F���.B��� �� ��'����̀"\��������0_"���� )�����) �F����������������# �/ � � �)\��������� �/����� / � � ���#" ��� "� b\��# �/ � �'�� �/����� '���F���.B��� �� ��'������� /�$�F���.B����� ��'����̀"\������� %�#� �F���������� �� �/����� ������%��� (osteopontin) ������/��F� (osteocalcin) ��.F�������� (bone sialoprotein) /�$���� .��B��B �� (alkaline phosphatase) / � � �(73) ��"�F���.B����� ��'����̀"\��������� �/����� ���� .��B��B ������� ]����2� �� ����� ���� "��������� F�'�� �$�2 (bone-like matrix proteins) /�$� � �b��� ������"���/'`� (mineralized nodules) .��(74) �#�����"���� �/����� '���#������#�F���.��/ � �#��� F��� 14 (CD14 receptor) /�$ �#������-.��� (Toll-like receptor) / � � ���#" ��"�F���.B��� �� ��'������� �� �/����� �#���F��� 14 /�$F��� 14 � ����̀����$�������2� ��#�F���.B����� ��'����̀"\�������%��� �/����� '�������#���F��� 14 /�$F��� 14 � ����̀����$����! /�%��� �/����� �#������-.���2 (Toll-like receptor 2) ����� ]����2� #� �F���.B����� ��'������� (75) F\�� �)��'��.��%����/F�� ��.��� ����#�F���%�#� .��%����/F�� ��.���)$� �̂"�����#���F��� 14 �#������-.��� /�$ .��%����/F�� ��.���� "�������� (LPS-binding protein) (76) �"� �.� ̀ � .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ���� � �b�%��� �/����� �����̀�)���-1 ��$�������.�������F���.B����� ��'������� /�$�F���.B ����� ��'����̀"\������� F\��)$/���b\� ������'���F�������������())�"������# ��0/��'����������� F\��� )/���b\���� �'�������̀�)���-1��������! ������ ���������# ��0/��� '\�.�� /� �. ������'���F����������̀�)���-1 �#�������� �'�������̀�)���-1�������������"������� \̂ _ ��.�
� � \̂ _ ��"��.��! ��#� ���F���/ ��#"�������"�'��%���.B����/� )��)�# ���/�$��#��"'��� � �����"�/�� ��� �/������ /������"F��������/��� � ��� �$0��F���.B����� ��'������� /�$�F���.B����� ��'����̀"\������� �����) ��#� ���F���/ ��#"�������"�'��%���.B����/� )��)�# ���/�$��#��"'��� � �����"�/�� ��� �/������ /������"F��������/��� ���())�"������# ��0/��'��������"2��� "���F\��� )� ) /�������" ������������� )���� ����/�������" �������������� � �())�" ��������� ��.��) ��#��") /����/�F����/������"F��������/��� ��� ��#���t� F� .F��t� F� ��̀.F��"��"
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
41
�� "�������������������"�� � �F��� ��#�())�" ��������� ��.��) ��#� ���F���/ '��%���.B����/�)��)�# ������%�#� ���# �� ��"#'��� �� ��! � "'���#�"#$������/�$ �$�2 ��� B(.��/ � .����%��/F�� .��� Bu�����" j�/� �2�� /�$����/���) F\���())�" ��������� ��)$����# �$0��F���� �c����"2�����#]����� ��� ��������F���'���$��12���0�� ������F���'���� � "��� ���.F� /� ���/B) /�$�F���.B����� �� ���� ��������.F�.��� �! � "�#�"#$������ �� .��
/�� � \̂ _ �������.��%� ������"/����������)'�� �/����� '�������̀�)���-1 ������$�������F�)��� � ����̀��/�$�$������� F\��� )������ ) ��#� ���F���/ ��#"�������"�'��%���.B����/� )��)�# ���/�$��#��"'��� � �����"�/�� ��� �/������ /������"F��������/��� � )$���())�" ������������� 0�� #� 1 ������������ �/����� '�������̀�)���-1 �� #��� ���())�" ������������� 0�� ��"� �� � �b �$0������ �/����� '�������̀�)���-1 ����2�'\�F\��� )���.�.��#� ���.��%����/F�� ��.��� �']$���"# � ̀)$���())�" ������������� 0��� ����\�������� "��� F\��������� �"��"��� �/����� '�������̀�)���-1 �����"�� F\��� ))$���%# ��̀.F�������� ������������ �� ��! � " �����̀�)���-1 �����"�� /�$ ����.��.������# �$0�������� �����0�&�v�%�"����������\������ ���� � ) ������ �! � \̂ _ �����.��)\�.��.��/����� �$0�� ���� ��\���������)��.� F\�����������"����"� �� ����� �����0�&�v�%�"����������\������ ���� � ) �����F\�� � \̂ _ �����.��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ��� �2)$������������) #� /� ̀�� � \̂ _ '��^����%"�/�$�]$(66) ���.��! ��#� ���F���/ ��#"�������"�'��%���.B����/� )��)�# ���/�$��#��"'��� � �����"�/�� ��� �/������ /������"F��������/��� � �$0��F��� .B����� ��'������� /�$�F���.B����� ��'����̀"\�������������"# � ) �� ������%�#� ��#��") /�� ��� �/������ /������"F��������/���� � �b �$0��F�����̀"\������������ �/����� �%���'\�'��"�% ��-2 ��$�����F�F�)���� ����̀��/�$�$������� /���#� ���F���/ %���.B����/�)��)�# �����%� �/����� '��% ��-2 ���$������� F\��������� �'� � �'����#��") /�� ��� �/������ /������"F��������/���/�$��#� ���F���/ '��%���.B����/� )��)�# ���) � \̂ _ ��� �� # � )���.�.��#� ��#� ���F���/ '��%���.B����/� )��)�# ��� ���())�" ������������� 0�� ��"� ����/����� � ��! � ����"��"������� #� �())�" ������������� 0����������� � �$0� �! �������%&�'�� � �$0���"�#��� � ���^� ����� #� �0���#��0�
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
42
) �� � \̂ _ ���������! ���.��'���2�'���� � \̂ _ b\���� �'�������̀�)���-1 ������������� ��� F\��� �#� )$����$�"����.��� �� � \̂ _ � ��"# �� �. '�� �����̀�)���-1 ��%" &� ! ���'������������� ��� �����
1 "���1 #$'�� �#�)� "�� /���#� � �����0�&�v .� �%����/F�� .���'�� %���.B����/� )��)�# ������ ������ � �b �$0��F���.B����� ��'������� /�$'�� ��̀"\��������0_"� ����� �/����� ����%���'\�'�������̀�)���-1
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
บรรณานุกรม
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
����������
1. Goodwin GH, Sanders C, Johns EW. A new group of chromatin-associated
proteins with a high content of acidic and basic amino acids. Eur J Biochem
1973; 38: 14-9.
2. Agresti A, Bianchi ME. HMGB proteins and gene expression. Curr Op Genet
Develop 2003; 13: 17008.
3. Wang H, Bloom M, Zhang JM, Vishnubhakat M, Ombrellino J, Che A, et al.
HMG-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science 1999; 285:
248-51.
4. Wang H, Vishnubhakat JM, Bloom O et al. Proinflammatory cytokines (tumor
necrosis factor and interleukin 1) stimulate release of high mobility group
protein-1 by pituicytes. Surgery 1999; 126: 389-92.
5. Rendon-Mitchell B, Ochani M, Li J et al. IFN-gamma induces high mobility group
box1 protein release partly through a TNF-dependent mechanism.
J Immunol 2003; 170: 3890-7.
6. Yang H , Wang H, Czura CJ , Tracey KJ. The cytokine activity of HMGB1. J of
Leuko Bio 2005; 78: 1-8.
7. Jiang W, Pisetsky DS. Mechanisms of Disease: the role of high-mobility group
protein 1 in the pathogenesis of inflammatory arthritis. Nat Clin Pract
Rheumatol. 2007; 3:52-8.
8. Andersson U, Erlandsson-Harris H. HMGB1 is a potent trigger of arthritis.
J Intern Med. 2004; 255:344-50.
9. Yang H, Ochani M, Li J, Qiang X, Tanovic M, Harris HE, Susarla SM,
Ulloa L,Wang H, DiRaimo R, Czura CJ, Roth J, Warren HS, Fink MP,
Fenton MJ, Andersson U, Tracey KJ. Reversing established sepsis with
antagonists of endogenous high-mobility group box 1. Proc Natl Acad Sci
2004; 101: 296-301.
10. Haffajee AD , Socransky SS. Microbial etiological agents of destructive
periodontal disease. Periodontal 2000. 1994; 5:78-111.
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
45
11. Nantasenee K, Laosrisin N,Dhanesuan N. Effect of LPS on HMGB1expression in
Human Periodontal Ligament Fibroblasts. Thesis, M.S (Periodontology)
2006.
12. Yamazaki K, Ikarashi F, Aoyagi T, Takahashi K, Hara K, Seymour GJ. Direct and
indirect effects of Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide on
interleukin-8 production by human gingival fibroblasts. Oral Microbiol
Immunol 1992; 7:218-224.
13. Yamaji Y, Kuboto T, Sasaguri K, Sato S, Suzuki Y, Kumada H et al. Inflammatory
cytokine gene expression in human periodontal ligament fibroblasts
stimulated with bacterial lipopolysaccharide. Infection and Immunity 1995;
3576-89.
14. Kuru L, Parkar MH, Griffiths GS, Newman HN, Olsen I. Flow cytometry analysis of
gingival and periodontal ligament cells. J Dent Res 1998; 77: 555-64.
15. Nishida E, Hara Y, Kaneko T, Ikeda Y, Ukai T, Kato I. Bone resorption and local
interleukin-1alpha and interleukin-1beta synthesis induced by
Actinobacillus actinomycetemcomitans and Porphyromonas gingivalis
lipopolysaccharide J Periodontal Res. 2001; 36: 1-8.
16. Helderman WH. Microbial etiology of periodontal disease. J Clin Periodontal
1981;8:2610280.
17. Kesavalu L, Chandrasekar B, Ebersole JL. In vivo induction of proinflammatory
cytokines in mouse tissue by Porphyromonas gingivalis and Actinobacillus
actinomycetemcomitans. Oral Microbiol Immunol. 2002; 17:177-80.
18. Socransky SS,Cugini MA ,Smith C,Kent RL. Microbial complexs in subgingival
plaque. J Clin Periodontal 1998; 25:134-44.
19. Genco RJ. Host responses in periodontal disease: current concepts.
J Periodontol 1992; 63:338-55.
20. Pekovic DD, Fillery ED. Identification of bacteria in immunological mechanisms
of human periodontal disease. J Periodont Res 1984; 77:324.
21. Christersson LA,Fransson CL,Dunford RG,Zambon JJ. Subgingivalis distribution
of periodontal pathogenic microorganisms in adult periodontitis.
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
46
J Periodontol 1992; 63:418-25.
22. Sastrowijoto SH, Hillemnas P,van Steenbergen TJM ,Abraham-Ipijn L,de Graaff
J.Periodontal condition and microbiology of healthy and diseased
periodontal pockets in type 1 diabetes mellitus patients. J Clin Periodontal
1989; 16:316.
23. Paul JE,Cristopher WC. Microorganisms as risk indicators for periodontal
disease. . Periodontol 2000. 2003; 32:24-35.
24. Laine ML,Appelmelk BJ,van Winkelhoff AJ. Novel polysaccharide capsular
serotypes in Porphyromonase gingivalis. J Periodont Res. 1996; 31:278-
284.
25. Zhao S, Shi J,Xiao M. Effect of capsules on attachment of human periodontal
ligament fibroblast to root surface. Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi
1996; 31:19-21.
26. Stanley CH, Lakshmyya K, Stephen W, Caroline AG. Virulence factors of
Porphyromonase gingivalis. Periodont 2000. 1999; 20:168.
27. Yamazaki K, Ikarashi F, Aoyagi T, Takahashi K, Hara K, Seymour GJ. Direct and
indirect effects of Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide on
interleukin-8 production by human gingival fibroblasts. Oral Microbiol
Immunol 1992; 7:218-224.
28. Yamaji Y, Kuboto T, Sasaguri K, Sato S, Suzuki Y, Kumada H et al. Inflammatory
cytokine gene expression in human periodontal ligament fibroblasts
stimulated with bacterial lipopolysaccharide. Infection and Immunity 1995;
3576-89.
29. Kent LW, Rahemtulla F, Michalek SM. Interleukin (IL)-1 and Porphyromonas
gingivalis lipopolysaccharide stimulation of IL-6 production by fibroblast
derived from healthy or periodontally diseased human gingival tissue. J
Periodontol 1999; 70:274-282.
30. Sharma A, Sojar HT, Lee JY, Genco RJ. Expression of a functional
Porphyromonas gingivalis fimbrillin polypeptide in Escherichia coli:
purification, physicochemical and immunochemical characterization, and
binding characteristics. Infect Immun. 1993; 61:3570-3.
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
47
31. Lee JY.Sojar HT, Bedi GS, Genco RJ. Porphyromonas (Bacteroides) gingivalis
fimbrillin: size, amino-terminal sequence, and antigenic heterogeneity. Infect
Immun. 1991; 59:383-9.
32. Nakagawa I, Amano A, Kuboniwa M, Nakamura T, Kawabata S,Hamada S.
Functional differences among FimA variants of Porphyromonas gingivalis
and their effects on adhesion to and invasion of human epithelial cells.
Infect Immun. 2002; 70:277-85.
33. Ishikawa I, Nakashima K, Koseki T,Nagasawa T,Watanabe H, Arakawa S,
Nitta H,Nishihara T. Induction of the immune response to periodontopathic
bacteria and its role in the pathogenesis of periodontitis. Periodontol 2000.
1997; 14:79-111.
34. Du L, Pellen-Mussi P, Chandad F, Mouton C, Bonnaure-Mallet M Conservation of
fimbriae and the hemagglutinating adhesin HA-Ag2 among Porphyromonas
gingivalis strains and other anaerobic bacteria studied by epitope mapping
analysis. Clin Diagn Lab Immunol. 1997; 4:711-4.
35. Lamonde L, Mouton C. Alteration of erythrocyte cell shape by hemagglutinating
bacteria. J Dent Res 1988; 67:331.
36. Grenier D, Mayrand D. Proteinases In: Shah HN, Mayrand D, Genco RJ, ed.
Biology of the species Porphyromonas gingivalis. Boca Raton, FL: CRC
Press, 1993; 227-243.
37. Holt SC, Bramanti TE. Factors in virulence expression and their role in
periodontal disease pathogenesis. Crit Rev Oral Biol Med. 1991; 2:177-281.
38. Kobayashi T, Kaneko S, Tahara T, Hayakawa M, Abiko Y, Yoshie H. Antibody
responses to Porphyromonas gingivalis hemagglutinin A and outer
membrane protein in chronic periodontitis. J Periodontol. 2006; 77:364-9.
39. Rogers JE, Li F, Coatney DD, Rossa C, Bronson P, Krieder JM, Giannobile WV,
Kirkwood KL. Actinobacillus actinomycetemcomitans lipopolysaccharide-
mediated experimental bone loss model for aggressive periodontitis. .
J Periodontol. 2007; 78: 550-8.
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
48
40. Tanner AC,Haffer C,Bratthall GT,Visconti RA ,Socransky SS.A study of the
bacteria associated with advancing periodontitis in man. J Clin Periodontol.
1979 ;6 :278-307.
41. Fives-Taylor MP, Meyer HD, Mintz PK, Brissette C. Virulence factors of
Actinobacillus actinomycetemcomitans. Periodontol 2000. 1999; 20:152.
42. Lawson DA, Meyer TF. Biochemical characterization of Porphyromonas
(Bacteroides) gingivalis collagenase. Infect Immun. 1992; 60:1524-9.
43. Helgeland K, Nordby O. Cell cycle-specific growth inhibitory effect on human
gingival fibroblasts of a toxin isolated from the culture medium of
Actinobacillus actinomycetemcomitans. J Periodontal Res. 1993; 28:161-5.
44. Patel MD, Henderson B, Galgut P, Olsen I. Mechanism of the antiproliferative
action of Actinobacillus actinomycetemcomitans surface-associated
material. J Dent Res 1994; 73:793.
45. Berthold P,Forti D,Kieba IR,Rosenbloom J,Taichman NS,Lally ET Electron
immunocytochemical localization of Actinobacillus actinomycetemcomitans
leukotoxin. Oral Microbiol Immunol. 1992; 7:24-7.
46. Loesche WJ, Syed SA, Stoll J. Trypsin-like activity in subgingival plaque. A
diagnostic marker for spirochetes and periodontal disease? J Periodontol
1987; 58:266-273.
47. Wang PL, Azuma Y, Shinohara M, Ohura K, Effect of Actinobacillus
actinomycetemcomitans protease on the proliferation of gingival epithelial
cells. Oral Dis 2001; 7:233-237.
48. Gregory RL, Kim DE, Kindle JC, Hobbs LC, Lloyd DR. Immunoglobulin-
degrading enzymes in localized juvenile periodontitis. J Periodontal Res
1992; 27:176-183.
49. Saglie FR, Simon K, Merrill J, Koeffler HP. Lipopolysaccharide from
Actinobacillus actinomycetemcomitans stimulates macrophage to produce
interleukin-1 and tumor necrosis factor mRNA and protein . Oral Microbiol
Immunol 1990;5:256-262
50. Shenker BJ, Kushner ME, Tsai CC. Inhibition of fibroblast proliferation by
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
49
Actinobacillus actinomycetemcomitans. Infect Immun 1982; 38:986-992.
51. Bustin M. Revised nomenclature for high mobility group (HMG) chromosomal
proteins. Trends Biochem Sci 2001; 26: 152-3
52. Bustin M., Lehn DA, Landsman D. Structural features of the HMG chromosomal
proteins and their genes. Biochim.Biophys.Acta 1990; 1049: 2310243.
53. Chen G,Ward MF,Sama AE ,Wang H. Extracellular HMGB1 as a Proinflammatory
Cytokine. Journal of Interferon & Cytokine Research 2004; 24: 329 -333.
54. Erlandsson HH ,Andresson U. Mini-review : The nuclear protein HMGB1 as a
proinflammatory mediator. Eur J Immunol 2004; 34: 1503-12.
55. Degryse B, Virgilio M. The nuclear protein HMGB1, a new kind of chemokine?
FEBS Letters 2003; 553: 11-17.
56. Lutz W, Stetkiewicz J. High mobility group box 1 protein as a late-acting
mediator of acute lung inflammation. Int J Occup Med Environ Health.
2004;17: 245-54.
57. Andersson U, Tracey KJ. HMGB1 in sepsis. Scand J Infect Dis 2003; 35: 577-84.
58. Kokkola R, Andersson A, Mullins G, Ostberg T, Treutiger CJ, Arnold B,
Nawroth P, Andersson U, Harris RA, Harris HE. RAGE is the major receptor
for the proinflammatory activity of HMGB1 in rodent macrophages. Scand J
Immunol. 2005 ;61:1-9.
59. Inoue K, Kawahara K, Biswas KK, Ando K, Mitsudo K , Masakiyo N, Maruyama I.
HMGB1 expression by activated vascular smooth muscle cells in advanced
human atherosclerosis plaques. Cardiovascular Pathology 2007; 16: 336-
143.
60. Scaffidi P, Misteli T, Bianchi ME. Release of chromatin protein HMGB1 by
necrotic cells triggers inflammation. Nature. 2002;418:191-5.
61. Dumitriu IE, Baruah P, Valentinis B, Voll RE, Herrmann M, Nawroth PP, Arnold B,
Bianchi ME, Manfredi AA,Rovere-Querini P. Release of high mobility group
box 1 by dendritic cells controls T cell activation via the receptor for
advanced glycation end products. J Immunol. 2005 Jun 15;174(12):7506-
15.
62. El Gazzar M. HMGB1 modulates inflammatory responses in LPS-activated
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
50
macrophages. Inflamm Res. 2007;56:162-167.
63. Morimoto Y, Kawahara K, Maruyama I and Izumi Y. Expression of high mobility
group box1 (HMGB1) in gingival epithelial cells. Eur perio 2006.
64. Tiranathanagul S, Pattamapun K, Yongchaitrakul T, Pavasant P. MMP-2
activation by Actinobacillus actinomycetcmcomitans supernatant in human
PLD cells was corresponded with reduction of TIMP-2. Oral Dis
2004;10:383-388.
65. Mossman T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival;
application to proliferation and cytotoxicity assay. J Immunol Methods
1983;65:55-63.
66. Angsupokai S , Laosrisin N and Tiranathanagul S. Expression of PAR-2 in
Human Periodontal Ligament Cells Activated by Periodontopathic Bacteria.
Thesis, M.S (Periodontology) 2007.
67. Page RC, Kornman KS The pathogenesis of human periodontitis. P eriodontol
2000.1997;14:9-11.
68. Slots, J., and M. A. Listgarten. 1988. Bacteroides gingivalis, Bacteroides
intermedius and Actinobacillus actinomycetemcomitans in human
periodontal disease. J. Clin. Periodontol. 15:85093.
69. Nair, B. C., W. R. Mayberry, R. Dziak, P. P. Chen, M. J. Levine, and E.
Hausmann.. Biological effects of a purified lipopolysaccharide from
Bacteroides gingivalis. J. Periodontal Res. 198318:4(-49.
70. Koga T , Nishihara T , Fujiawara T, Nisizawa T, Okahashi N, Noguchi T and
Hamada S. Biochemical and Immunobiological Properties of
Lipopolysaccharide (LPS) from Bacteroides gingivalis and Comparison with
LPS from Escherichia coli. Infect Immun. 1985;47: 638-647.
71. Sveen K. The capacity of lipopolysaccharides from Bacteriodes, Fusobacterium
and Veillonella to produce skin inflammation and the local and generalized
Schwartzman reaction in rabbits. J Periodontal Res. 1997;12:340-350.
72. Acquaviva F, Castaldo I, Filla A, Giacchetti M, Marmolino D, Monticelli A, Pinelli
M, Saccà F and Cocozza S. Recombinant Human Erythropoietin Increases
Frataxin Protein Expression Without Increasing mRNA Expression. 2008;7:
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
51
1473-4222.
73. Ivanovski S, Li H, Haase HR, Bartold PM. Expression of bone associated
macromolecules by gingival and periodontal ligament fibroblasts.
J Periodontal Res. 2001;36:131-41.
74. Park JC, Kim YB, Kim HJ, Jang HS, Kim HS, Kim BO and Han KY. Isolation
and Characterization of Cultured Human Periodontal Ligament Fibroblast-
Specific cDNAs Biochemical and Biophysical Research Communications
2001;282:114501153.
75. Hatakeyama J ,Tamai R, Sugiyama A, Akashi S, Sugawara S and Takada H.
Contrasting responses of human gingival and periodontal ligament
fibroblasts to bacterial cell- surface components trough the CD14/Toll- like
receptor system. Oral Microbiol Immunol 2003;18:14-23
76. Wang PL, Azuma Y, Shinohara M, and Ohura K Toll-like Receptor 4-Mediated
Signal Pathway Induced by Porphyromonas gingivalis Lipopolysaccharide
in Human Gingival Fibroblasts Biochemical and Biophysical Research
Communications 2000;273:116101167.
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
ประวัติยอผูวิจัย
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity
53
���������� �����
���� ������ � ����� ������ ��� ����� ����� 29 ����� 2523 � ���!���� "��#�����!$�%#� � ���!��$& ��""'�� 832/112 �����+��!, 18 ���-� +�$�$& �"��. 29
/0���������� �0�#1�$0��� ����2�#���� 10320 �4�/#� �#�1��!��������""'�� ��"��$5 � ���!��4������""'�� 6�����������������75/�8���������8��795 �:8����/2�$;����5 �#����$���$;�!���������-�< ��8������;=7�
2.;. 2542 ��@$�;=7�������$ "�-����!$���A��5����$���$ "��#�����!$�%#�
2.;. 2547 ����/2�$;����'�:C�� "��:8����/�2$;����5 �#����$���$��!$�%#�
2.;. 2551 ���$�;�����#�'�:C�� ��0���������������$� "��#����$���$;�!���������-�<
สาํนกั
หอสม
ดุกลา
ง มหา
วทิยา
ลยัศร
นีครนิ
ทรวโิร
ฒ
Cen
tral L
ibrary
Srina
khari
nwiro
t Univ
ersity