ª n k d u l q z u l q d ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/per(m.s.)/rungtiwa_p.pdf · ˝ #...

66
-1 2552

Upload: others

Post on 21-Apr-2020

6 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

���������������� ����-1 ������������������������������ !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���

"�#..��#/�0� ��

�&,�$#*� "1�"2�

����,��%34#�*#$ ��% ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6 /�(�"7��,*���!(������5!�'� �� ��%��8��"�#..�*#$ �5���� ���%34#� ���*#��"�#$%��*#$ �

���- 2552

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 2: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

���������������� ����-1 ������������������������������ !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���

"�#..��#/�0� ��

�&,�$#*� "1�"2�

����,��%34#�*#$ ��% ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6 /�(�"7��,*���!(������5!�'� �� ��%��8��"�#..�*#$ �5���� ���%34#� ���*#��"�#$%��*#$ �

���- 2552 �#�#$0#;"7��� ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 3: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

���������������� ����-1 ������������������������������ !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���

�$-%� ,� ��

�&,�$#*� "1�"2�

����,��%34#�*#$ ��% ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6 /�(�"7��,*���!(������5!�'� �� ��%��8��"�#..�*#$ �5���� ���%34#� ���*#��"�#$%��*#$ �

���- 2552

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 4: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

�&,�$#*� "1�"2�(2552) ���������������� ����-1��������������������������� ��� !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%��� "�#..��#/�0� *$. .("�#$%��*#$ �). ��&�$/?: �%34#�*#$ ��% ��*#$ ��% 5���-�#�$�*# ��6. -3���� ���-*�-& : ���5�������� �$%���/$ � ��. 3��-�5%��#; ��,�5���#� ����� �$%���/$ ��.#� ��.�#��� 0�5*�

���� ����-1 "7��#*-�� ���"����$�(�%�*,�"7������-��$�(��%(���� �-,��)���)��*,�

� � ���-� ��� #��� (� A �� ,/� ��$��$�B�- %.��� �-$� ( �� ( * )� �� %����� %� ����� ��- � !(� �����* #� % � ,����)� /� ���������������� � � �� �-1 �� !+� � (�����& )������������������������������� !�"�#$%��� �&' ��)* ���/�"����--���-������-��

� ��� ������ / �(�5 !�'���������������� � � �� �-1$ %+������ %� ������� ��� �� �������"�� �� ����� ����������� ����� ��������� �� !�"� #$ %�� � � &' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���

������������������� ��+ ������������������������������� !�"�#$%��� �&' ����� � � �& )� � � � �$% +� � � � � � #� �� +� )* � ,* � � � � �+� � ,� � � -" � #$ %� � � 3 � ,� � � � )� �, �����#�&$0#;���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#� �,*���%���������)* -��(��� � ��/�� ��� � � � ��� � #� � #* �� #� ���� ,*��� ������� � �+ � ��-�� # �� #��- ���� ��-�#�� % � #$ �- #�$��� ����% +�$B������*����������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"�����)* *#0�����$�-/����������*#0�*�$#������$�� �B��%�

������ �� �� /����������������� ���� -1 /#( !+�$%+ ������%� ������� ��������������%��"���������������������������� 3�$�( ���������������������� !�"�#$%��� /����/#( !+������%��"����$,��%+� �(�����&)��)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#� ��3�$�( �( �� ���&) � ���� $%+ � ����) * �, *��� ������� ��+ � ��-��# ��# ��- ���� ��-�# �� % �# $ �- # �$��� ����, *���% � ���� �����/��� �� � � � ��� �# � �# * ��# � ��%�� ,/�����������$�(/#( !+�� ,���%��������� ����-1 $%+������%� ������� �������� ������%��"����

����� D� ��)�D�*������* #� % � �+ ����* ,������ #� &$0 #;���/�"����--���-��� /�������� ��� �#��#*��#�$,��%+�$�(�� ��E����&)������������������������������� !� "�#$%��� �&' � ��) �����������$�(/#( !+������� ����-1

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 5: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

HMGB1 Expression in Human Gingival and PDL Fibroblast Activated by Periodontopathic Bacteria.

AN ABSTRACT BY

RUNGTIWA PUNPA

Presented in Partial Fulfillment of the Requirements for the Master of Science Degree in Periodontology

at Srinakharinwirot University March 2009

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 6: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

Rungtiwa Punpa. (2009). HMGB1 Expression in Human Gingival and PDL Fibroblast Activated by Periodontopathic Bacteria. Master thesis, M.S. (Periodontology). Bangkok: Graduate School, Srinakharinwirot University. Advisor Committee: Assoc. Prof. Dr. Narongsak Laosrisin, Dr. Nirada Dhanesuan .

High mobility group box1 (HMGB1) protein is nuclear protein which is recognized as late inflammatory cytokine but plays important roles in many inflammatory diseases. Our previous study showed highly expression of HMGB1 in both human gingival and PDL fibroblast after activated by E. coli vs lipopolysaccharide (LPS). Objectives: To investigate the expression of HMGB1 in both human gingival and PDL fibroblasts after the activation of periodontopathic bacteria in mRNA and protein levels. Materials and Methods: Human gingival and PDL fibroblasts were cultured and activated by purified LPS of Porphyromonas gingivalis (Pg.) or culture supernatant of Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa.) or sonicated extract of Pg . The expression of HMGB1 ,mRNA and protein levels, were determined by RT-PCR and Western blot respectively. Results: Both HMGB1 mRNA and protein expression were upregulated in human gingival fibroblast when activated by LPS of Pg, while only HMGB1 protein level was upregulated in PDL fibroblast. While limited change of HMGB1 mRNA and protein level in both cells were found when activated by culture supernatant of Aa. or sonicated extract of Pg. Conclusions : The results showed that only the purified LPS of Pg. can activate the expression of HMGB1 in gingival and PDL fibroblasts.

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 7: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

"�#..��#/�0� ��(��

���������������� ����-1 ������������������������������ !�"�#$%��� �&' � �(���)�%��������&)��)* ��+��,���-"�#$%���

�� �&,�$#*� "1�"2�

��)�%���& %�#����%34#�*#$ ��% ��)�%�"7��,*���!(������5!�'��� ��%��8��

"�#..�*#$ �5����� ���%34#� ���*#��"�#$%��*#$ � �� ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6

................................................................-3����%34#�*#$ ��%

(���5�������� � ��.� �� �%��#*%6��&�) *%�$�(.......���� ���- /.5. 2552

-3���� ���-*�-& "�#..��#/�0� -3���� ������"��"�,� .........................................................."��0�� .........................................................."��0�� (���5�������� � $/. 3��-�5%��#; ��,�5���#�) (���5�������� � $/.. $#/�/� *�5��&��#$0#;)

........................................................��� ��� ...w....................................................��� ���(����� �$/..�#��� 0�5*�) (���5�������� �$/.3��-�5%��#; ��,�5���#�) ..........................................................��� ��� (����� �$/..�#��� 0�5*�) ..........................................................��� ���

(x8)�,* 5�������� � $/..��-��%��� -�&�$� �)

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 8: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

�����2��34���� "�#..��#/�0�y�%���+�B����� �8�3���)�)* -*� �,* �������-B�����B�� ,���� #(����-3���� ���� $,�� x8)*#�% �������/��-&3 ���5�������� � $%���/$ � ��.3��-�5%��#; ��,�5���#� "��0��-*�-& "�#..��#/�0� �������� �$%���/$ ��.#� ��. �#��� 0�5*� ��� ���-*�-& "�#..��#/�0� $�(��&3���)-B�"�!�'� ����B���*$�� )� 8����)�-#�����,��A $�( �"��� ����,����$B�*#�% ��-�%+���+�)* ������ � �������/��-&3���5�������� � $%���/$ ��.#� $#/�/� *�5��&��#$0#; ���x8)�,* 5�������� �$%���/$ ��.#� ��-��%��� -�&�$� �$�(��&3��,* "7���� ������-)��-��������"��"�,�"�#..��#/�0� ��������)-B�����B����)��������,��A�����*#�% �* $%+���)-*� ��&3���*���)�"�#..��#/�0���) �-*� � �8�3� #(�!+� �������/��-&3����� �$%���/$ ��.#� ��.�#�#�%�'3� ���30���&�, ����� � ��.�*�/� 5���&D�/ $�(��&3�����B������+��z{�*%��&����&"����,��A�����$B�*#�% �������� � $%���/$ � ��� � �� D� �B���%��,*���%��������/�������� ��� �#��#*��#� �� /%�0� ATCC33277 ���-&3$%���/$ ��.#���#'}� �%�$��� � ���$%���/$ ��.#�5�#�$#/ � �%�5&�D�- $�(��+��z{�*%��&����&"��3��,��A�����$B�*#�% ������-&3�)���)�$�(�)��"~#�%�#��� D�-*#����'}*#$ � -3�$%���/$ 5����� ��*#$ ��% 5���-�#�$�*#��6 $&�$,��$�(��)����,* ���������)-B�����B�"7�� ,���� $)� $�(�&���+x8)*#�% �-�,�������/��-&3 �#�� ���� x8)"7�$�(�%� #(� $�(��)�����%���&����-� ��)�B��%������B�������5!�'�

�&,�$#*� "1�"2�

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 9: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

����5

����6 7�8� 1 �����.............................................................................................................................1 D8 #��%�.......................................................................................................................1 -*� &,�� � �����*#�% ............................................................................................3 -*� �B�-%.�����*#�% ...............................................................................................3 ��������*#�% .....................................................................................................4 ������*-#������*#�% ............................................................................................. 4 � �#}�������*#�% ...................................................................................................6

2 �<���=�����������6���6��>8<.....................................................................................7

��-"�#$%����%���.........................................................................................................7 /�������� ��� �#��#*��#��%���-"�#$%����%��� .............................................................8 ��-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$����%���-"�#$%����%���............................11 ���� ����-1...............................................................................................................14 �$��$�����-�������� ����-1................................................................................15

3 �������������������........................................................................................................19

����B������&, �%*� ,��.wwwwwwwwwwwwwwwwwwww...wwwww20 �����)��-��(�� ��$�(��)�����*#�% .................................................................................20 ���$����-*� "7�/#'�)* $-�#- MTT assaywwwwwwwww..wwwwww.22 *#0����*#�% wwwwwwwww.wwwwwwwwwwwwwww...wwwwww..23 *#-�����)� 8�wwwwww.wwwwwwwwwwwwwwww...wwwwww...27

4 ����������...................................................................................................................28 ���$����-*� "7�/#'�������)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#� wwwwwwwwwwwwwwwwwwwwww...................................................28

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 10: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

����5 (�E<)

����6 7�8� 4 (�E<)..........................................................................................................................28 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(� ����&)���������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' �

�)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*�#�w.ww..wwwwwwww28 ���$����-*� "7�/#'�������)* �,*���%���������)* -��(��� ���/������� � ��� �#��#*��#�wwwwwwwwwwwww.................................................30 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(� ����&)���������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' � �)* �,*���%���������)* -��(��� ���/�������� ��� �#��#*��#�.....wwwww31 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(�����&)� ��������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' ��)* �,*� �� �����-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$���www wwwwwww..34

5 <H�������=�������IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII37

�D#"�� x�wwwwwwwwwwwwwwwwww..wwwwwwwwwwww37 �$��&"wwwwwwwwwwwwwwwwwwww..wwwwwwwwwww...42 ���3��&�� wwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwww..ww43 "��*%�# ,�x8)*#�% wwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwww..ww52

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 11: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

��5J�����

���� 7�8�

1 ����"1��% $�( �-*� �&����$�(x�#��� /�������� ��� �#��#*��#�..w....................wwwww.9 2 ����"1��% �,���-����-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$���wwwwwwwww12 3 �%�'3������� ���-� ��#��"����wwwwwwwwwwwwwwwwwwww..w...14 4 �$��$������ ����-1�,����������+� �(��,��Awwwwwwwwwwwwwwwww..17

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 12: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

��5J�H�K����<� H�K����<� 7�8�

1 �����-����)�������� ����w.....................................................................................15 2 �������������%(����� ����-1 wwwwwwwwwwwwwww.wwwwwwww.16 3 �����$,�����x����$�������%�-*� "7�/#'�����/�"����--���-� �� /�������� ���#��#*��#�$�( �x��,�����w.wwwwwwwwwwww.wwwwww...28

4 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(�����&)������������������������)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#�������������)�����-*� ) ���E�x�#�D%34�/����������-*� ) ���E��"����wwwwwwwwwwwwww.wwww.wwwwwwwwww.w29

5 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"���� �(�����&)� �������������������� !�"�#$%��� �&' ��)* ���/�"����--���-���/�������� ��� �#��#*��#� ������������)�����-*� ) ���E�x�#�D%34�/����������-*� ) ��

�E��"����wwwwww.wwwwwwwwwwwwwwwww...wwwwwww..30 6 �����$,�����x����$�������%�-*� "7�/#'���,*���%����������/�������� ��� �#��#*��#� $�( �x��,�����wwwwwwwwwwwwwwwwwwwww.wwwww31 7 ���������������� ����-1 �����%� ������� ��������������%��"����

�(�����&)���������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' � �)* �,*���%��������-��(��� ���/�������� ��� �#��#*��#�.wwwwwwwww...32 8 �����)�����-*� ) ���E�x�#�D%34�/������������� ����-1 ���-*� ) �� �E��"�������� ����-1 �(�����&)����������������������������������������� ����� !�"�#$%��� �&' ��)* �,*���%���������)* -��(��� ���/�������� ��� �#��#*��#�wwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwww..ww....33

9 ���������������� ����-1 �����%� ������� �������� ������%��"���� �(� ����&)���������������������������������������������� !�"�#$%��� �&' ��)* �,*��� �����-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$����$���wwwwww..ww.35 10 �����)�����-*� ) �E�x�#�D%34�/������������� ����-1���-*� ) ���E�

�"�������� ����-1 �(�����&)����������������������������������������� ����� !�"�#$%��� �&' ��)* �,*��� �����-��#��#��-���� ��-�#�� % �#$ �- #�$���wwwwww.wwwwwwwwwwwwwww...wwwwwwwww..36

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 13: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

��5J�H�K����<� (�E<)

H�K����<� 7�8�

11 ����/ �0#�B��#�����-"�#$%����%������"1��% $�(��( *)��wwwwwwwwwww.37

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 14: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

����� 1 ����

�� ���� �����������-1 ( High mobility group box 1 , HMGB1) � !"# $%�"&"'(�)�*+,*-."/��' $0�'1 30 45�67).8 #-$9:$.'9 $0*��(.8; ������������*<= (HMG boxes) <@69� !":A8"�B�&�9 (����"�� (DNA binding domains) 7)0 :A8" )';5�6� !"*$( (acidic tail) 7%A�(J������������-1 +,*-."/�� !":A8" $0*��K"@69&�9"J8�-)�;:(1) �����������-1 �A8;*'$5L'K".'5�6K)';�;A'9&�9"J8�-)�;:7)0���5�'5%A�*'$7:(9��*&�9(����"�� �B"M(.7*A 5$'":-$J �B6" (transcription) *'$+�(7�� (replication) 7)0 8�((�)�� $�-���J�"�B6" (V(D)J recombination) P"*'$Q@*R'$0;0%A��'/�8A'�����������-1 M�AM(.�L'*B(�;,AK$S����5�'5�T/'0U';P"�<))= 7%A/����5�'5U';"�*�<))=(.8;(2)

�����������-1 :'�'$+/�M(.P"�"SW��;S6�%A'9X 7)0:'�'$++,*K)B69��*�'*�<))=M(.K)';�"J( ��A" �<))=#�#"M<%= (monocyte) 7�*#-$7Y� (macrophage) �<))=�Z["B9K)�(�)S�( (endothelial cell) �<))=�("M($%J* (dendritic cell) 7)0�<))=*).'��"SW��$�;� (smooth muscles cell) 5�6+,**$0%Z." ��*'$Q@*R'/�8A'�<))=#�#"M<%=7)07�*#-$7Y� �0:'�'$+K)B69 �����������-1 ��S6�+,**$0%Z."#(;:'$/JRU';P"&�97�-5��$�; (exogenous bacterial endotoxin) ��A" M)#/# )�7<--'M$(= (lipopolysaccharide: LPS) � !"%." K$S� ��S6�+,**$0%Z."#(;M<#%M-"=�B*�:� (proinflammatory cytokine) ��A" 5,���$=�"-#-$<J:7Y-�%�$= (tumor necrosis factor: TNF) � !"%."(3-5) #(;*'$K)B69�����������-1 &@W"*B��8)'7)0 $J�'15�6*$0%Z." "�*�'*"BW";B9:'�'$+K)B69�'*�<))=5�6+,*5L')'; (damage cell) K$S��*J(*'$%'; (necrotic cell) 7%AM�AK)B69�'**'$&�B(%B8��9&�9�<))= (apoptotic cell)

*'$K)B69&�9�����������-1 �0��[)%A�*'$*$0%Z."*$0�8"*'$�B*�:�K)';(.'" #(;:'�'$+*$0%Z."*'$�/J6� $J�'15,���$=�"-#-$<J:7Y-�%�$=P"�<))=���(�)S�(&'8�"J(#�#""J8�-)�;$=5�6�)�W;9P"K.�9 eJ�B%J*'$ (primary blood mononuclear culture) 7)0*'$�/J6��BW"&�9#��)*Z)5�6P�.P"*'$;@(�*'0 (adhesion molecule) $8�5BW9;B9*$0%Z."*'$K)B69M<#%M-"=5�6*A�PK.�*J(*'$�B*�:�M(.7*A 5,���$=�"-#-$<J:7Y-�%�$= 7)0 �J"�5�$=)J8-J"-8 (interleukin-8: IL-8) P"�<))= �Z["B9K)�(�)S�((.8;(6) �����������-1 ;B9���5�'5%A�*'$�*J(#$-%A'9 X 5�6�*�6;8&.�9*B�*'$�B*�:�M�A8A'�0� !"*'$�B*�:�7���T�;�/)B"K$S�7���$SW�$B9 ��A" #$-M&&.��B*�:� (arthritis)(7,8) #(;/�8A' �������

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 15: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

2

����-1 ��*'$�/J6�$0(B�P"�;S6��Z&.�%A�5�6�B*�:� (inflammatory synovial tissue) 7)0 &�9�K)85�6K)B69�'*�;S6��Z&.�%A� (synovial fluid) �'*[,. k8;#$-M&&.��B*�:� $8�M +@9:U'80�S6" X M(.7*A :U'80%J(��SW�P"*$07:�)S�( (sepsis)(9) #(;�����������-1 +,*�B(8A'� !"M<#%M-"=5�6K)B69��*�'-A�"&.'9�.'*8A'M<#%M-"=�"J(�S6" X (late mediator) P"*$0�8"*'$&�9*'$�B*�:� 7)0 m��Z�B"M(.��-8'�/;';'�P"*'$;B�;BW9�����������-1P"[,. k8;P"K.�9TZ*�TJ"�/S6�)(�B%$'*'$�:�;��8J%&�9[,. k8;)9 7%A�;A'9M$*�%'�;B9/�8A'��*'$Q@*R'5�67:(9+@9�5�'5&�9�����������-1 *B�#$-P"�A�9 '*�;,A".�;�'*

#$- $J5B"%=�B*�:� (periodontitis) � !"#$-%J(��SW�5�6��*'$�B*�:�7���$SW�$B9 #(;/�8A'��*'$5L')';&�9�"SW��;S6��*�6;8/B" (connective tissue) 7)0*$0(,*��.'Ym" (alveolar bone) *'$�*J(#$- $J5B"%=�B*�:�"BW"��-8'�:B�/B"n=*B���SW�*A�#$-5�6:L'-Bo(10) -S� 7�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= (Aggregatibacter actinomycetemcomitans; Aa) /�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: (Porphyromonas gingivalis; Pg) 75"�"��$))' Y�$=<B;�n�;<J: (Tannerella forsythensis; Tf) /;'nJ*L'�"J(&�9#$- $J5B"%=�B*�:� (pathogenesis of periodontitis) &@W"�;,A*B�-8'�:�(Z)$0K8A'9 m��B;%A'9 X 5BW9 m��B;5'9(.'"�"J(&�97�-5��$�;*A�#$-7)0 m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�; (virulent factors) "BW" X $A8�*B� m��B;5'9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*'; #(;*$0�8"*'$&�9*'$�*J(/;'nJ:U'/&�9#$- $J5B"%=�B*�:�:A8"PKoA7).8� !"[)�'�'**'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*';%A�7�-5��$�;*A�#$-K$S�%A� m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�; <@69�K"�6;8"L'PK.�*J(*'$5L')';&�9�"SW��;S6�%'��'M(. �'*5�6M(.*)A'8�'&.'9%."7).88A'�����������-1 ��*'$7:(9��*P"�<))=K)';�"J( 7)0���5�'5%A�#$-5�6�*J(*'$�B*�:� �;A'9M$*�%'�5�6[A'"�';B9��*'$Q@*R'+@9*'$7:(9��*&�9 �����������-1 P"�<))=K$S��"SW��;S6��A�9 '*".�; ��*'$Q@*R'&�9 *"JRp= "B"5�:"�;=7)0-10(11) M(.Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=&�9�"ZR;=5BW9P"$0(B��'$=���"��7)0$0(B�# $%�"U';P"�<))= $8�5BW9;B9Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1P"�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=&�9�"ZR;=P":U'805�6��*'$*$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9��SW���#-M) (Escherichia coli; E coli. ) (.8; -10[,.8J�B;�@9:"P�Q@*R'%A�;�(+@9*'$7:(9��*&�9 �����������-1&�9�<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=��S6�+,**$0%Z."(.8;:A8"&�9��SW�*A�#$- $J5B"%= <@69[)&�9*'$7:(9��*&�9������� ����-1 P"�<))=�K)A'"BW"�0�A8;�nJ�';+@9*)M**'$�*J(/;'nJ:U'/&�9#$- $J5B"%=$8�M +@9*'$P�. $0#;�"=�'**'$� )�6;"7 )9$0(B�&�9*'$7:(9��*&�9#��)*Z)�"J("�WP"*'$� !"�-$S6�9K�';5�6�A9��W+@9:U'80&�9*'$� !"#$-%A�M M(.

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 16: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

3

���������������� ��� *'$8J�B;-$BW9"�W��-8'��ZA9K�';�/S6�Q@*R'+@9*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"�<))= MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=��S6�M(.$B�*'$*$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: (lipopolysaccharide of Pg.) :A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: (Sonicated extract of Pg.) 7)0:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= ( Aa. culture supernatant) �������������� ��� #$- $J5B"%=� !"#$-%J(��SW��"J(K"@69<@69*A�PK.�*J(/;'nJ:U'/%A��8B;80 $J5B"%=P"$, 7��&�9*'$�B*�:�7���$SW�$B9�B"� !"[)�'�'**'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*';5L'PK.�*J(�'*'$7:(95'9-)J"J*M(. #$- $J5B"%=�0�*J(/;'nJ:U'/*B��K9S�* ���";@( $J5B"%= 7)0*$0(,*��.'Ym" 7)0"L'M :,A*'$:,o�:�;Ym"P"5�6:Z( m��B;5�6:L'-Bo5�65L'PK.�*J(#$- $J5B"%= -S� 7�-5��$�;*A�#$- M(.7*A /�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: 7)07�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= $8�5BW9 m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�;(B9*)A'8(.8; �;A'9M$*�%'�*'$5L')';�8B;80 $J5B"%=;B9�*�6;8&.�9*B�-8'�:�(Z)$0K8A'9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*';7)07�-5��$�;*A�#$- #(;��S6���*'$$Z*$'"&�97�-5��$�;<@69:A9[)PK.��*'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*';%A�7�-5��$�; 5L'PK.��*'$[)J%M<#%M-"=7)0K)B69:'$�B*�:�%A'9X ��*�'�'*�<))=&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*'; ��A" #�#"M<"= 7�*#-$7Y� � !"%." "�*�'*"BW"�<))=&�9$A'9*';5�6�;,A�$J�815�6�*J(*'$�B*�:� ��A" �<))=:$.'9�:."P;K$S�MY#�$�)':%= (fibroblast) ;B9:'�'$++,*�K"�6;8"L'PK.K)B69:'$M<#%M-"=�'**'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"��A"*B" <@69:'$M<#%M-"=�K)A'"�W:A9[)*$05�%A��<))=� s'K�'; 5L'PK.�*J(*'$�B*�:� 7)0*'$5L')';�8B;80 $J5B"%=%'��'M(. �����������-1 �B(� !"#-$�'%J"# $%�"<@69�0�;,AU';P""J8�-)�;:7%A*�:'�'$+/�P"M<#% /)':<@�M(.P"�'9�<))= P"*'$Q@*R'$0;0%A��'/�8A'�����������-1 M�AM(.�L'*B(�;,AK$S����5�'5�T/'0P"�<))=(1) ;B9/�8A'�����������-1 :'�'$++,*&B���*"�*�<))=#(;�<))=�'9 $0�U5<@695L'K".'5�6� !"�K�S�"M<#%M-"= #(;� !"M<#%M-�=5�6+,*K)B69��*�'�A89K)B9��S6��5�;�*B�M<#%M-"=5�6�"J(�S6"X �<))=K)';�"J(:'�'$+K)B69�����������-1 ��*�'"�*�<))= ��A" #�#"M<"= 7�*#-$7Y� �<))=�Z["B9K)�(�)S�( �<))=�("M($=%J* 7)0�<))=*).'��"SW��$�;� $8�5BW9;B9:'�'$+K)B69�'*�<))=5�6+,*5L')';K$S��*J(*'$%'; ��*'$Q@*R'&�9 *"JRp= "B"5�:"�;= /.Q.2549(11) /�8A'P":U'80 *%J��*'$7:(9��*&�9�����������-1 �;,AP"$0(B�K"@69�;,A7).8 P"�<))=MY#�$ �)':%=&�9���";@( $J5B"%=&�9�"ZR;=P":U'80 *%J5�6�)�W;9#(;M�AM(.$B�*'$*$0%Z."P(X5BW9P"$0(B�

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 17: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

4

�'$=���"��7)0$0(B�# $%�"U';P"�<))= 7%AM�A/�8A'��# $%�"�����������-1K)B69��*�'P"�'K'$�)�W;9�<))= "�*�'*"BW";B9Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=&�9�"ZR;=P":U'805�6+,**$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9��SW���#-M) /�8A'��*'$7:(9��*5�6�/J6�&@W"&�9�����������-1 P"$0(B���:�<"���$= �'$=���"�� �T/'0:U'805�6�)�W;9P"�'K'$�)�W;9�<))=5�6��<�$B6�� !":A8" $0*��(.8;�5A'"BW" 7%A;B9-9M�A/�*'$�/J6�&@W"&�9# $%�" �����������-1 5BW9P"7)0"�*�<))=��A"�(�;8*B�U'805�6M�AM(.��*'$*$0%Z."P(X �'*[)*'$8J�B;(B9*)A'8 �@95L'PK.-10[,.8J�B;:"P�5�6�05L'*'$Q@*R'�/J6��%J�+@9�5�'5&�9��SW�*A�#$- $J5B"%=�B*�:�5�6��%A�*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"�"SW��;S6� $J5B"%=5BW9:�9�"J( ������������ ��� *'$8J�B;-$BW9"�W� !"*'$Q@*R'U';P"K.�9 eJ�B%J*'$�)�W;9�<))=�/S6�Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1 P"$0(B��'$=���"��7)0$0(B�# $%�"P"�<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))= MY #�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=5�6�/'0�)�W;97)0+,**$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: :A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: 7)0:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= � $�;��5�;�*B��<))= MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=5�6�/'0�)�W;9#(;M�A+,**$0%Z."P(X � �� �!�"�#!$

− Periodontitis : #$- $J5B"%=�B*�:�

− High mobility group box 1 : �����������-1

− Human periodontal ligament fibroblast : �<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=

− Human gingival fibroblast : �<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*�"ZR;=

− Periodontopathic bacteria : ��SW�*A�#$- $J5B"%= ����%��� &'������ ��� �"S6�9�'*#$- $J5B"%=�B*�:�� !"#$-%J(��SW��$SW�$B9<@69:A9[)5L'PK.��*'$5L')';�8B;80 $J5B"%= *'$�*J(#$- $J5B"%=�B*�:�"BW"%.�9�'QB; m��B;K)';�;A'9$A8�*B" m��B;5�6:L'-Bo-S���SW�*A�

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 18: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

5

#$- /�$=MY#$#�7":�J9�J8')J: 7)0 7�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":=� !"7�-5��$�;7*$�)�5�6M�A%.�9P�.��*<J��"P"*'$��$Jo�%J�#% <@69��-8'�:B�/B"n=*B�*'$�*J(#$- $J5B"%=�B*�:� 5L'PK.��*'$5L')';�8B;80 $J5B"%=�;A'9$8(�$�87)0$Z"7$9 ��S6���*'$$Z*$'"&�97�-5��$�;(B9*)A'8 5BW9%B8��SW���97)0 m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�; 5L'PK.��*'$%��:"�9&�9$0��U,�J-Z.�*B"&�9$A'9*'; :A9[)PK.�<))=U,�J-Z.�*B" (immune cell) K)B69:'$�B*�:�%A'9 X #(;"�*�'*�<))=U,�J-Z.�*B"7).8/�8A'�<))=&�9$A'9*';��9*����5�'5�;A'9�'*P"*'$�*J(/;'nJ:U'/&�9#$- $J5B"%=��A"*B" /�8A'�<))=&�9$A'9*'; ��A" �<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0 ���";@( $J5B"%= � !"%." :'�'$++,**$0%Z."7)0��*'$7:(9��*7)0K)B69:'$�B*�:���A"*B"(12,13) <@69�<))=5BW9 2 �"J("�W � !"�<))=P"�"SW��;S6��*�6;8/B"&�9$A'9*';5�6�;,A�$J�815�6M(.$B�*'$$Z*$'"�'*7�-5��$�;*A�#$- $J5B"%=7)0 m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�;#(;%$9 �<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;="BW"M�A�/�;97%A�A8;-9:U'/���";@( $J5B"%=�5A'"BW" ;B9�A8;<A��7<� (repair) $B�� )�6;" (remodel) 7)0*'$:$.'9PK�A (regeneration) &�9*$0(,*��.'Ym"7)0�-)S��$'*Ym"M(.(14) �����������-1 /�� !"#-$�'%J"# $%�"5�6/�P""J8�-)�;:7)0;B9/�8A'�����������-1:'�'$++,*&B���*"�*�<))=#(;�<))=�'9 $0�U5 <@69����������� -1 ��-Z1:��B%J � !"M<#%M-"=5�65L'K".'5�6P"�A89�8)'K)B9 "�*�'*"BW"�����������-1 ;B9:'�'$+*$0%Z."PK.�*J(*'$K)B69&�9:'$M<#%M-�=5�6��[)%A�*'$�*J(*'$�B*�:�7)0���5�'5:L'-Bo%A�*'$�*J(#$-5�6�*�6;8&.�9*B�*'$�B*�:�K)';#$-(6)

(B9"BW" [,.8J�B;�@9:"P�5�6�05L'*'$Q@*R'*'$7:(9��*&�9�����������-1P"�<))=MY#�$ �)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=��S6�M(.$B�*'$*$0%Z."(.8; m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�;&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J:7)07�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= <@69M(.7*A M)#/# )�7<--'M$-=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: :A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: 7)0:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= <@69/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J:7)07�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= �� m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�9��SW��;,AK)';�"J( 5�6�A8;PK.��SW���-8'�:'�'$+P"*'$$Z*$'"�8B;80 $J5B"%=7)0:A9[)PK.)B*R10&�9$�;#$-��-8'�$Z"7$9&@W"

M)#/#/)�7<--'$=M$(=� !":A8"["B9�<))=�BW""�*&�9��SW�7�-5��$�;�"J(7*$�)� �'**'$Q@*R' M)#/#/)�7<--'$=M$(=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: :'�'$+�K"�6;8"L'PK.�<))=$A'9*'; ��A" �<))=MY#�$�)':%= K)B69M<#%M-"=M(. ��A" �J"�5�$=)J8-J" 1 ��%.'7)0 5,���$=�"-#-$<J: 7Y-�%�$= (15) :A9[)PK.�*J(*'$5L')';�"SW��;S6� $J5B"%=7)0*'$)0)';&�9*$0(,*

:A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J:7)0:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= *��� m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�9��SW��;,A

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 19: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

6

K)';�"J(��A"*B" #(;/� m��B;*A�#$-5�6:*B(M(.�'*:A8")�;�'*7�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":= ��A" )J8#-5�*<J" M<#%5�*<J" ���"M<�=;A�;:)';# $%�"5�6��SW� )( )A�;��*"�*�<))= :L'K$B�/�$=MY#$#�7":�J9�J8')J:"BW"/�8A' m��B;*A�#$-5�6:*B(M(.�'*:A8":*B(�<))=7%*&�9/�$=MY#$#�7":�J9�J8')J:5�6/�8A'��-8'��*�6;8&.�9*B�*'$5L')';&�9�8B;80 $J5B"%=7)0*$0(,*��.'Ym"M(.7*A M)# #/)�7<--'M$(= Yu���$�; v�7�**),%J"J" 7)0# $%�"7�"%J��"

[,.8J�B;�@9�)�9�K�"8A' m��B;5�6��-8'�$Z"7$9&�97�-5��$�;5BW9:�9�"J((B9*)A'8:'�'$+*$0%Z."PK.�<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=7:(9��*�����������-1P" $J�'15�6:,9&@W"��S6��5�;�*B�:U'805�6M�AM(.$B�*'$*$0%Z." *'$5�6�<))= MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=:'�'$+K)B69������� ����-1P" $J�'15�6:,9&@W""BW" �'�5L'PK.5$'�+@9�5�'5&�9�����������-1 %A�/;'nJ*L'�"J(7)0*'$(L'�"J"M &�9#$- $J5B"%=�B*�:� �/S6�� !"7"85'9P"*'$$B*R'#$- $J5B"%=%A�M ���� (�'���� ���

5BW9�<))=MY#�$�)':%=&�9�K9S�*7)0�<))=MY#�$�)':%=&�9���";@( $J5B"%=�"ZR;=�0/�*'$7:(9��*&�9�����������-15�6:,9&@W"��S6�M(.$B�*'$*$0%Z."(.8;M)#/# )�7<--'M$-=&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: K$S� :A8":*B(�<))=7%*(.8;-)S6"�:�;9&�9/�$=MY#$#�7": �J9�J8')J: K$S�:A8")�;&�9�'K'$�)�W;97�-*$J�*%J7�-�%�$= 7�-%J#"�B;<J�5�#-�J75":=

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 20: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

����� 2 ���� ����������������������

���������� ��� ������������������������������������������� ��!�����"�#$����

"%��&�� 1. )��&����"*����+ 2. -��*�.)�)#��� ���������+)��&����"*����+ 3. ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����*�+)��&����"*����+ 4. ��2��3#�+�-1 5. +�+���0)"���*�����2��3#�+�-1

��������������� )��&����"*����+�&6�)��"� �27 ����#��������+��7 ��� #�����!���������7 ���7��������-�

������ ���+��.8� �!��&��%�����9�������������������+.8������9����.8�������: -��;��!���� ���)��&����"*����+ (pathogenesis of periodontitis) �&6�� �"�����#����#0+0�����������������+&8�$�����%������!��9 ���$":$�����)��&����"*����+ �7� �+��������%�)�� (periodontopathic bacteria) ����%����+:�������*������#���%+�"�.8�(16) 0����+��������%�)���$�%��� �&6�"�����#"������!��$���� ��� !��������)��&����"*����+� ����"�����������# �+��������%�)��&����"*����+����!��9�&6��+�������2�� ���#�+����#%"���������0�����������9�"�+)" (gram-negative anaerobic bacteria) (10) �2%� ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* -��*�.)�)#��� ����������� ����������� .��*0��;��0�� �&6�"�� �+��������%�)���$�%��� #��#�&8����#����#�:����"%��Q �2%� ��)-)&���0����*�� *�����3��0#*"%��Q 0��������0�#�����&�������&����"*���":������R�#��:�#������%����� #���������������"%�#�#��#��+%�2� S�����#�#-�;*��$�%��-��;��!���� ���)��&����"*����+�+&8������++R�#��:�#������%����� (host immune response) ���+�������������� -��;��R�-���)�� &����"*����+�%���$9%�����&6���#������"�+���������++R�#��:�#������%�����"%��+��������%�)�����&8����#����#�:��������+������� ) ����"�+���������++R�#��:�#��� �#����!��$���� ������"���$�������0)"���* �2%� )-��"����� �� (prostaglandin) �������*������ ���#��*���)��0���.��"��*(17) ���0��*�����++R�#��:�#������%����� �2%� )#)��0�*

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 21: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

8

�#�)���. �&6�"�� ������ � �0��*����%�����������%+����X������ �������+ �2%� �0��*�����������$�7��.)+�+���"* (fibroblast) ����#��SS���$������!��$�$�������0)"���*�����"�+���������++R�#��:�#���2%��� 0�������0)"���*�$�%��� ��%�������+"%��0��*�&Y�$#�� �!��$���� �������+ ����!���������&����"* ��#S������!������� ���+��.8�"�##�� �(18,19)

����� ���! � ��������������������������

-��*�.)�)#��� �������� �&6��+�������2�� ���#�+����#%"���������0�����������9�"�+)"���#����#�#-�;*�+)��&����"*����+ 0���#���������-+�%�#����#�!��9�����������+������ -��;��R�-���)��&����"*) ��!��$�)��#����#�:��������!��&��%����!���������7 ���7��&����"*������ ���+��.8� ��#��S"��-+�27 �-��*�.)�)#��� �������������&\������&6�)��&����"*����+(20) ) ��]-��+����X���#���� !�����)��(21) -+#����"� �27 �-��*�.)�)#��� ������������� ��#7�����&\��#����:�-��#�� � �����-+���#�#-�;*��$�%��-��*�.)�)#��� ���������+)��&����"*����+�����&\������&6�)�������++ �2%� )���+�$���(22) -��*�.)�)#��� �������� #�&8����#����#�:����$���2�� ("���� 1) ���2%���$��27 �#����#��#��S������:������7 ���7��&����"*����%����$����X�������)��#����#�:������ �(23) &8����#����#�:�����$�%�� � � ���%

��"#� (Capsule) ��&0�����-��*�.)�)#��� �������� �&6�����$������� (dense and amorphous capsule) 0���S7�� ��%��&6����"�������!��92�� $����0������%+�-7 �����0��*����27 �2�� �� ) �&����+�& ���)-���0����*�� *�^����)�)-���#��* (polysaccharide heteropolymer) ���#����#$��S�� 15 ��)��#"� ��&0���� �$:�#���%��+Q��7��+:���R����� ���������������+��&0��� ���������������$*)-���0����*�� * �� ���"��� ) ��27 ����-�;:*���"��-+ �� ���"���� �-+�%�#����#��#��S������:����������%��7 ���7��� ����(24) ������ ���&0�����!�$��������#7���&6������&Y�����!�$�+�27 ��-7��&Y��������!��������++R�#��:�#������%����� ��#���������-+�%� ��&0����� -��*�.)�)#��� �������� � ��������� ���������3��� &����"*�+-7 �������.8�(25)

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 22: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

9

"���� 1 �� �&8����#����#�:����������") �-��*�.)�)#��� ��������(26) Tissue destruction Host invasion Collagenase Trypsin-like protease Gelatinase Aminopeptidase Phospholipase A Alkaline phosphatase Acid phosphatase Chondroitin sulfatase Hyaluronidase Keratinase Heparinase Nuclease Epitheliotoxin Fibroblast growth inhibitors Endotoxicity LPS-induced bone resorption Volatile sulfur compounds Short-chain acid end products Indole Ammonia H2S

Degradation of plasma protease inhibitors Degradation of iron transport proteins Inhibition of polymorpho- Nuclear leukocytes Chemotaxis inhibitors Decrease phagocytosis Lysis and intracellular killing Resistance to Cs killing Cs-3/Cs-5 degradation Immunoglobin protease Fibrinolysin Superoxide dismutase NADH oxidase Free-radical formation

�������� "�������-� .�/� ������ (Lipopolysaccharide; LPS) ��)-)&���0����*�� *�&6��%������0��*2 ��������27 ��+�������2�� ���#�+�&6�&8�

���#����#�:��������+��������%�)��&����"*$���2�� )#���:������)-)&���0����*�� *&����+ ��� 3 �%�� �7� ��&u �� (Lipid A) ���*)-���0����*�� * (core polysaccharide) ��� )����"��� (O antigen) �#7���+��������%�)��&����"*���9�"�+)"���%�����&����"* (periodontal pocket) �+��������&�%����)-)&���0����*�� * 0�����)-)&���0����*�� *�&6����"������#����#�!��9�����������+���"�+���������++R�#��:�#����)��&����"*����+ ��)-)&���0�

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 23: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

10

���*�� *���-��*�.)�)#��� �������� ��#��S�$������!��$��0��*�%����� �2%� �0��*����������� $����0)"���*� � �2%� �������*������ 1 �+"��, �������*������ 6 ������#��*���)��0���.��"��* �%����$���� ����!������7 ���7��&����"*����������������� ��(27,28) ��#� ������":���$��0��*������������������ ������&\��)��&����"*����+$����������*������ 6 0���#�&��#�X�����%�������� ������&\�����#��R�-�$�7��&�"�(29)

;!����� (Frimbriae) .u#�+����&6�)��������������%+����X-7 �����0��*���-��*�.)�)#��� �������� �&6��%������7������&��-7 �����0��* ) �.u#�+���2%��������� ��������27 ��+-7 ���������7 ���7���$�7��(30) .u#�+������-��*�.)�)#�������������#��S�+%�� ��&6� 5 2�� (31) -��*�.)�)#��� �������� ���-�;:*���-+.u#�+����&6�2�� ��� 2 �#����#��#��S������:�����0��*��7��+:���� �#����%����-�;:*���-+#�.u#�+���2�� �7��(32) ������ �����.u#�+�����#��:X�#+"����":���$�#����"�+���������++R�#��:�#������%�����(33) ?� !�#����� (hemagglutinin)

^��#����"���� �&6���:%#���)&�"��������%+����X��7��$:�#�0��*2 �������-��*�.)�)#��� �������� 0��� �%��&6�)#���:�����2����������"� (adhesin molecules) �2%�� ����+.u#�+��� �&6����"�������2��!�$�+"����+���-�;:*���-��*�.)�)#��� ���������2%���(34) ^��#����"����#����#��#��S�����+�+�#3 ��7� � � (erythrocyte) ��7�����+�����0��*����#3 ��7� � �#�"�++�����0��*�����#��S+�+^��#����"�������-��*�.)�)#��� �������� ) �#���������-+�%�^��#����"�������-��*�.)�)#��� �������� ���-�;:* ATCC 33277 ��#��S�!��$���� ���+��:%#���#����"�"��������#3 ��7� � �(35) �� �^��#����"�������-��*�.)�)#��� �������� ���&6�&8����#����#�:��������%�����#�$��27 ���#��S���%+����X�"��$�7��� �

��C��"!��D������������!���"�E�����"��� (Extracellular proteolytic enzyme)

-��*�.)�)#��� �������� ��#��S���"��3��0#*)&�"���� (proteinase) � �$���2�� 0�����3��0#*�$�%��� S7��%��&6���3��0#*���#����#!��-�����-��*�.)�)#����������� ��3��0#*�� ��#��S�%������)&�"������%�����������":�����"�+���������++R�#��:�#������%����� ��3��0#* �$�%��� � ���% ���&0��-(trypsin-) �����-(thiol-) �����0�)���"��)&�"���� (caseinolytic proteinase) ���#���3��0#*�&&"�� � 2 2�� � ���% ���0��)-�-��� �&+"� �� ��#�)��&+"�� � (glycylpropyldipeptidylaminopeptidase) ��� ���0��)-�-���&+"�� �(glycylpropylpeptidase) 0�����3��0#*�$�%��� �#�+�+���!��9����!��$�)��&����"*#�����:����#���� � ��#S���!��$�-��*�.)�)#��� �������� ����+�������2�� �7���-�%����������&��%��7 ���7��

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 24: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

11

&����"*� ������ �(36,37) ) �-+�%�)&�"�������-��*�.)�)#����������� ��#��S���� ����0��*� ��0��* (whole cell) ���� �������� �0��* (cell extracts) ���� �������!��$��0��*�"�) ��2���7������� (cell sonicates) ���� �����7��+:���R���������������27 ����"���#�

������ ������� (Protein antigens) (38)

�&6�)&�"�����-+�����7��$:�#�0��*�%��������-��*�.)�)#����������� 0�����#��S���":���$��%�������������"�+� ����#� �����#��S"��-+� ���0��#������&\��)��&����"*����+ ������� ������� ������!��"���!��!� ��������������������

��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* ���X���&�%���&6���%� 2�� ���#�+����#%�2����0�����������9�"�+)" #����#�#-�;*�+)��&����"*����+�:���� (aggressive periodontitis) (39) ) �-+��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* S�������� 40-100 ������&\������&6�)��&����"*����+�:����(40) &8����#����#�:���������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* �2%� ���)����0�� (leukotoxin) )-��#��*).���������*���)��0"* ��)#���0�����^�+�"���.��"��* (polymorphonuclear leukocyte chemotaxis-inhibiting factor) ��#).�0"*0&�-��0���.��"��* (lymphocyte-suppressing factor) �����)-)&���0����� * 0���2%���$��27 ���#��S���9�"�+)"��� !���2���"���%� ���2%��&�� 2%���!��$��27 ���#��S$�+$������&Y��������%������ � ("���� 2) ��������"�� (Bacteriocin) �&6�)&�"��������") ��+��� �������#�w�;�x ������+� ��+��� ����2�� �7��� � ) � �+�����)�0�������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* ���"�� �#� ������%� ���"�)��+ 0���� (actinobacillin) #�+�+�������� ����������9�"�+)"�����"�&)"����� �0������� (Streptococcus sanquis) ������"�)��+0��� ���)�0� (Actinobacillus viscosus) ) ��!��$���7��$:�#�0��* (cell membrane) #�����&������&���:X�#+"�����$�����%����������0��*�!��$����)#���:���3�Q $�7���������#�&��:������%R������0��*��#��S0�#������%R�����0��*� �#���� ��%����$� ���3��� (DNA) ���*��3��� (RNA) ���)#���:���������������+������9�"�+)"����+�������� �S���!����

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 25: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

12

"���� 2 �� �&8��%�)�������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* (41)

Factors that promote colonization and persistence in the oral cavity - Adhesions - Invasins - Bacteriocins - Antibiotic resistance Factors that interfere with the hostNs defenses - Leukotoxin - Chemotactic inhibitors - Immunosuppressive proteins - Fc-binding protein Factors that destroy host tissue - Cytotoxins - Collagenase - Bone resorption agents - Stimulators of inflammatory mediators Factors that inhibit host repair of tissue - Inhibitors of fibroblast proliferation - Inhibitors of bone formation

��������� (collagenase) ���&����+������%R������0��*�����7 ���7��"%��Q�%���$9%�#���������&6��%��&����+ �#7�������� )��&����"*#��-+�%�&��#�X����������������#�!���������� �������������S���!����� ������������+�������+�������������%+����X��7 ���7�������� -��;��R�-&�%��������������#�����#���) �"��������!�����������������%����7 ���7��&����"*� �!��$���� )��&����"* �"%��&8:+��� �&6������#�+�������%����$":�!��9����������������S���!����� �#����������0��*����7 ���7��+����X���#��������+ � ���% )-��#��*).���������*�0��* ����.)+�+���"* "�+����"%��27 �$�7����$������27 ��!��$�&�%��������������#� (42) �"����"�� (cytotoxin)

#����������������+ ^��-���+�* �0)"���0�� (heat-labile cytotoxin) ������") � ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* �&6��0)"���0�� ���#����#!��-�� ����&6�&8����#����#�:����2�� $�������#���"%��.)+�+��� � ���% �0)"���0�� ���&�%�����#������$������27 � #�� !�$��)#���:� 50 ��)� ��"� 0�����#��S�+� �������" ���3�������.)+�

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 26: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

13

+���"* (43) ������� ��-+�%�#��0)"���0��������%+�����0��*#�� !�$��)#���:� 8 ��)� ��"� -+�%���#��S�+� �����-��#!��������.)+�+���"*� �(44)

�������"�� (Leukotoxin) ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* ���")&�"�����"��� � !�$��)#���:�

116 ��)� ��"� (116 kDa immunomodulating protein antigen) ����� ���%+����X��7��$:�#�0��*2 ����(45) ���������%� ���)����0�� 0����&6�-��*-.��*##���)&�"�� (pore-forming protein) 0�����#��S�!�������)��.u��* )-��#��*).���������* ���)��0"* ����0��*����++R�#��:�#���7��Q � ���% ���0��* ) �����!��$���7��$:�#�0��*��� �����9�������#�# :�����������%����������0��*����!��$��0��*"�� (necrosis) ������: ���������)����0����#��S�!�����0��*����++R�#��:�#��� ��&6����$��%������#%��#��S��+�:#���"�+���������++R�#��:�#������%����� �!��$�#����&�%����3��0#*$���2�� �%����$�#��������+����!��&��%����!���������7 ���7�� ��� ���)����0������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* 0�)���-*+���#��S�$������!��$���� "���++� "���� ���0��*)&��#�*��)��0"* (promyelocytic cell) ���

��C��"!��D������������!���"�E�����"��� (Extracellular proteolytic enzyme)

��3��0#*�%������)&�"�������������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* �2%� ���&0��-���* )&�"�)����*"�� ��3��0#* (trypsin-like proteolytic enzyme) 0���-+�%�#����#�#-�;*�+�R������������������)��&����"*����+(46) �����-+�%���3��0#*����:%#�� ��#��S� �"������-��#!��������0��*��7��+:�������$�7��������-����� �� (47) ��#� ���#���������%������ ���� (IgG) ����� (IgA) �����3# (IgM) (48)

�������� "�������-� ��)-)&���0����*�� * �&6�&8��%�)������!��9#������%��$���� ����!�����0��*���

��7 ���7��&����"* ������������ )��&����"*����+ ��)-)&���0����*�� *�����������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* ��#��S���":���0��*�%�����) ��]-����%������ �7� )#)��0"* ����#�)���. �$�#�������"�0)"���*����������+ �2%� �������*����������� ���#��*���)��0���.��"��* �!��$���� �������+������ �������������� ��(49)

�P������������Q�����E#!��R�!�� (Immunosuppressive factors) ��������"��+��"��* ���"�)�#�0���#)�#�����* �#�&8����#����#�:����$�����%��

�����#��S�+� �$�7��+����������&Y��������%����� 0���� ���% �������27 ���#��S���"��3��0#*�����#��S�+� ��������� ���3��� ���*��3��� ���)&�"�������0��* (50)

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 27: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

14

��T��C!����-1 (HMGB1) ����������� ��T��C!����-1

��2��3#�+�-1 (High molecular group box protein : HMGB1) �&6�)&�"��������%�����������0������-+#�&��#�X 30 &} �&6��#�2������:%#��2��3#�)&�"�� (high-mobility group protein super family) 0���&����+ ��� ��2��3#�+� (HMGB) ��2��3#���3� (HMGN) �����2��3#��� (HMGA) �"%����:%#�#�2��"%��������%���!� +����!�$������ (functional sequence motif) �%���!� +����!�$�����������2��3#�+� ������%� ��2��3#�+3��0* (HMG boxes) �%���!� +����!�$�����������2��3#���3� ������%� �%��+���������)�)0# (nucleosomal binding domain) �%���!� +����!�$�����������2��3#��� ������%� ����^:� (AT-hook)

"���� 3 ���X������2��3#�)��#�"��)&�"�� (Revised nomenclature for the HMG chromosomal proteins)(51)

HMG proteins

HMG motif protein

Functional motif Root symbol New name

(canonical HMGs) Old name (canonical HMGs)

HMG-box proteins NBD proteins ATH proteins

HMG-box NBD ATH

HMGB HMGN HMGA

HMGB1,2,�n HMGN1,2,�n HMGA1,2,�n

HMG-1/HMG-2 HMG-14/HMG-17 HMG-I/HMG-Y/HMG-C

ATH; AT-hook, HMG; high mobility group, NBD; nucleosome binding domain

)�������������2��3#�+� (HMGBs) &����+ ��� 3 �%�� (domains) � ���% ��2��3#�

+��0* (HMG boxes) 0����&6��%��+��� ���3��� (DNA binding domains) ����%��&�������&6��� (acidic tail) 0�����2��3#�+3��0* �+%��&6� ��2��3#�+��0*�� (HMG box A) �����2��3#� +��0*+� (HMG box B)(52) (R�-&����+ 1)

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 28: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

15

R�-&����+ 1 �� �)�������������2��3#�+� (HMGBs) (6)

���#� :Yang H.,et al.(2005) The cytokine activity of HMGB1. J of Leuko Bio;78:1-8.

�����2��3#�+�-1 ��#�:��*-++�)��)#)0# 13q12 ��2��3#�+�-1 ��#��S+�+ ���3���

(DNA binding domains) ���#�+�+��"%������ ������� ���3��� �!�$������2%�����R�-������)�)0# (nucleosomes) �����+�:#�� ���������� (gene transcription) (6,53)

������"�����������T��C!����-1 ��2��3#�+�-1 �%���$9%-+�&6�)��#�"��)&�"������������� ������ ���-+���0)"-���0�#��+���0��* ��2��3#�+�-1 ����#��S���7�����$�%���������������0)"-���0�#��2%������0��* (cell cycle) ��������������"%�#� -+�%���2��3#�+�-1 �#%� �!�� ���%$�7�#�+�+���]-�����0��* ��-+�%���2��3#�+�-1��#��SS���+�������0��*) ��0��*+��&���R�0���#��:X�#+"��&6��0)"���*(54-55) ) ���2��3#�+�-1 ��#��S���":���$���� ���$�������0)"���*���#���"%��������+���#�+�+���!��9"%������� )����������������+�������+$���)�� �2%� �R���"� �27 ����������7� (sepsis)(9) �R������#����$�����&� �]��+-��(acute lung injury)(56) )�����������+ (arthritis)(7,8) ) ���2��3#�+�-1 �&6��0)"���*���$������#��%������2����%��0)"���*2�� �7�� Q (late acting cytokine) �����+���������������+(57) ) �����������-+��2��3#�+�-1 R��$�����":���#�)���.�&6����� 8-12 2��)#� ��2��3#�+�-1�%��X9���%�����"��+�9X���7� "��+�9X���!�$�+�� ���0*�����2�����)-� �0* (receptor for advanced glycation end product :RAGE) ���"��+)��-���* (toll-like receptor 2,4 :TLR2,4)(54,58)

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 29: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

16

R�-&����+ 2 �� ��������$�����2��3#�+�-1 (Pathways of HMGB1 secretion) ���#� :Yang H.,et al.(2005) The cytokine activity of HMGB1. J of Leuko Bio;78:1-8.

�0��*$���2�� ��#��S$�����2��3#�+�-1 ���#�����0��* (R�-&����+ 2) �2%� )#)�

�0�* �#�)���. �0��*+:���$�� ��7� �0��*� �� �*"������0��*����#��7 �����+ �&6�"�� ��#� �����#��S$������0��*���S���!����$�7���� ���"��(59-61) ) �-+�%��0��*��#��S$�����2��3#�+�-1 ��R������S�����":�� (actively) ����0��*$���) �"�� (passively) ����������-+#�$�����2��3#�+�-1 �� )#)��0�*����#�)���.���S�����":��) ����-��R��������+������� (exogenous bacterial endotoxin :LPS) $�7��0)"���*����+ (proinflammatory cytokine :TNF,IL-1,IFN) ��� $���) �"�����0��*���S���!����$�7���� ���"��(6) ) ���2��3#�+�-1��#��S���":�����"�+�����������+����%��%���X9�����#����$�� (injury signal) "%��0��*R�#��:�#��������%���������� �

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 30: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

17

"���� 4 +�+�������2��3#�+�-1"%��0��*�����7 ���7��"%��Q(6) Cells HMGB1 Effects Macrophages/monocytes Endothelial cells Neutrophils Epithelial cells Dendritic cells Smooth muscle cells

1) Increase TNF mRNA and protein release; increase

IL-1α,β, IL-1RA, IL-6, IL-8, MIP-1α and β release.

2) Release after LPS stimulation. Induces expression of adhesion molecules (ICAM-1, VCAM-1) and RAGE; induces cytokine release (TNF and IL-8) and expression of MCP-1, tPA, and PAI-1. Increase TNF, IL-1β and IL-8 gene expression. Increase enterocyte permeability. 1) Increase TNF, IL-1α, IL-6, IL-8, and IL-12

release. 2) Increase CD40, CD54, CD58, CD80, and CD83

expression. Cause cell migration and cytoskeleton reorganization.

Inflammation Increase neutrophil adhesion, inflammation, regulation of fibronolysis Inflammation Increase bacterial translocation Dendritic cell maturation Chemotaxis

Tissue Effects

Brain Lung Intestine Joints Heart Others

Induces fever, anorexia, taste aversion, and weight loss; induces brain cytokine expression (TNF, IL-1, and IL-6). Cause acute lung injury, increased pulmonary levels of TNF, IL-1β and MIP-2, lung edema, and neutrophil accumulation. Cause intestinal barrier of dysfunction and bacterial translocation. Induces arthritis and inflammation Arrhythmia Bactericidal activity

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 31: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

18

#�����������2��3#�+�-1 ���$���) ��0��*�����++R�#��:�#����#� ��0��*����%������7��Q �2%� ����������� El Gazzar M. (2006) (62) � ���������"�+�����������+�����2��3#�+�-1 ) ����":���#�)���. �����)-)&���0������* -+#����$�����2��3#�+�-1 ���%����������$����� ���0��* ������ 8 2��)#����$���#������: ������ 48 2��)#� Wang H ����X� (1999) (3) ��������$�����2��3#�+�-1 �#7�����":���#�)���. �����)-)&���0������* �������*������-1 (IL-1) ������#��*���)��0���.��"��* -+#����$�����2��3#�+�-1 ���%����������$����� ���0��* (culture supernatant) ������ 8 2��)#����$���#������: ������ 18 2��)#� ������ �����������$�����2��3#�+�-1 ��0���# (serum) -+#����$�����2��3#�+�-1 $�������":�������� 8-32 2��)#� ���0��*2%��&����#�!�������������������+��2��3#�+�-1����������&6�����������%� ��2��3#�+�-1�#����#�#-�;*�+�������+��)��&����"*����+$�7��#% 0���#������������ Morimoto Y. (2006)(63) -+����� ���������2��3#�+�-1 ���0��*+:����$�7�� ��������������%��$����� ��� �����* ����X�(11) -+�%����R���&�"�#������ ���������2��3#�+�-1 ���0��*�.)+�+���"*�����3��� &����"*���#�:��*� ����� +���*��3�������� +)&�"��R�����0��* �"%�#%-+)&�"����2��3#�+�-1 $������#�����$����� ���0��* ������ ������������� ���������2��3#�+�-1 ���0��*�.)+�+���"*�����3��� &����"*���#�:��*���R������#���)-)&���0������*����27 ���)��� -+�%�#������ ��������-��#�� ������2��3#�+�-1���� + ���*��3��� �]-���R�������2���$����� ���0��*���#��%��&����+���0���#��%�� � �"%�����#%-+����-��#�� ����)&�"����2��3#�+�-1 � ����������0��*

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 32: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

����� 3 ����� �����������

���������� ��� ����������������������� �������� 1. ������������ ����� ��

2. ���"�������#$���#�%�$�&���������

2.1 ����'�(��� ���)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*��� ��/��0�1��%��*

2.2 ���������"��%�$�&���(���� 2.2.1 ��������,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������" 2.2.2 ������" ���������������� ��.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* 2.2.3 ������" ��"���)��*.��������#$��"������ '��*�+,�,�.�" �������" 2.2.4 �������'�����*"����-��&��/��-�-1

3. ��5������� 3.1 ��(�����)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*������6�*.�(�)��*�+,-� -��"�*������#��������,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������" " �������.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"*.%�"*.�( " ��"���)��*.�����'��*�+,�,�.�"�������" ,��%�����%����) �� 3 �� � 3.2 ������(�*���."����������&��/��-�-1���(�-��"�)����* ���*��/����� ���� 5� �� � ���* "%���"*���' �%" -,'�� ���� �" �&� �� .��&$ � (reverse transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR) 3.3 ������(�*���."����������&��/��-�-1 ���(�-,1����������5� ��"�%��*�-��% (Western blot analysis)

4. ������(�*������ )0$�������(�������� ��1��

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 33: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

20

��������������������� ��� ����� ��%�$�&����������� ��� (1�(��-�����)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*��+P�������1Q��%�$����R����#$�����1S�+P������#��'��(��������+P� ,��+P�� �(������ ��'��5�"T�'�����# ���#$�1��%��* .�(����-���������������1Q�� ,���������)��*�+,-�-��"�*������#����&� ����#����-U��+P� " ������������)��* �+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*(��������������+P�-����V������� (Middle third)

�������� ������������ !� ��������� ��� "�# ��$�� %��&'()�������&*�� �����+�# %��&'()�������&*�� �,��-.������& ����������)��*�+,-�-��"�*������#�� ����5���� �#� ����+P�����+�"�+�-+�+��* )�����* (Phosphate buffer saline :PBS) ����U �� � ��� �0��&����� �����&� ����#��-�������+P�.�(��&� ����#������1S�&� ���/�U " ������������)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*����5���� �#� �&����� ��������# ���#$���������+P�-����V�������������+P��'#$��������$����# ���#$����#��.�(��# ���#$���1������+P� ��# ���#$�%�$���(R����� ��������� ���)��*���� 60 ��������� ���������� ���)��*&�������/�����/� (Dulbecco Modified Eaglebs Medium : DMEM) %�$����"��1�(��-��� ��1�� �#� )��������� ���������( 10 (10% Fetal calf serum,FCS) �������� (L-Glutamine) �'���)���� (Penicillin) "���1,���)�� (Streptomysin) ��� ��������-%�$����V�T��� 37 ��h��)��)��" .�(��1����V�i�)���*-��������)�*�����( 5 ����)��*�����&� ���# ������ -������ �� ��� ��1��$���������� �� ��)��*���k��/������ �� �������������)��*(%��,�����R �� (Subculture) �)��*%�$���k��/������ ����"� ����� ���)��*��� ������" �� 1:3 (�� ���)��* 1 �� 3 ����)��*% ����� ������ ���)��*��� 1 ��) ,���&���/��)�*%��1)��-����%��� (Trypsin-EDTA) �)��*%�$�&������%������ ��� (�1S��)��*�� �%�$ 3-8

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 34: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

21

��� ����������� !���#����

1. ��� �����'�)").��+%���'��& *��"��&'()�)�+�� ���������� �&�"��-��"�%5�n��,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������" (Invivogen®, San

Diego, USA) ,������������������� (stock solution) %�$ 1 ��������� ������������� ��1��h���&# � (distilled water) .�(��/-���%�$��V�T��� -20 ��h��)��)��" ��� �(������&������%����

2. ��� ������������*������� ��$��+����� ���+�� ���& +����)����%� ��

)���+���& ����'�(��� ���&# �(%����5�������-��������� ���V5����� .�(�V((64) )0$�����5����� �'�(��� ��.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* (ATCC 43718) ���������� ���&# � ����%��1,��)�� (tryptone soya broth : TSB) (Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England) %�$��"��"������"�* �����( 1 (yeast extract 1%) %�$��V�T��� 37 ��h��)��)��" ,����� ��������- (Candle jar)

����������� ���&# ��1��� ���������#�."�%�$���������#$�."� 660 ��,����� ����� ���������#�."��% ��- 0.6 R0� 0.7 ��� ������������ ���&# ��1����$���������#$������$�����h���*����%�$�(�-������/� 10,000g �1S����� 15 ��%� %�$��V�T��� 4 ��h��)��)��" �'#$�.��" ������&# ������" ������������� ���&# � �������� ���&# �%�$��/-���(R������1��������.� �����%�$����'������� 0.2 ��,������ �'#$��������" ������&# �%�$��������#���� ��������� �������� ���&# �%�$����� (1�(��-����"����$���.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* .�(� ��1(������ � " ���������������� ��.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* ��/-" ���������������� ��.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* %�$����� ���%�$��V�T��� -80 ��h��)��)��" ��� �(������&������%����

3. ��� ������������ %��&+���������� ����*��"��&'()�)�+�� ���������� " ��"���)��*.��������#$��"������'��*�+,�,�.�" �������" "��'�5�* ATCC 33277

(����-�����������(�*,��%��.'%�* ���� &�"��T* ��"��1��kk�������"���&����%��& ��1�� T����&�"�����%��.�(&������ �V(%��.'%�h�"��*�����%���������) R��������&� )0$���� �������"��,��� � �#� .-�%���������-������ ������������ ���&# ��&�����*-��% (Schaedler broth) %�$��V�T��� 37 ��h��)��)��" ������-%�$�� �����)��� ��� ������������ ���&# ����� ���1��� ���������#�."� ������� ��% ��- 1 %�$���������#$� 600 ��,����� ����������� ���&# ��1����$���������#$������$�����h���*���� �'#$�.��" ������&# ������" ������������� ���&# � ,��

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 35: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

22

" ������&# �(���(������ %�$�������%���� ��� ������������ ���&# ���� .���&(����" ������&# �����+�"�+�-+�+��*)�����* .�������1����$���������#$������$�����h���*���� ��� ���� +�"�+�-+�+��*)�����*��� .���%�����&(��������+�"�+�-+�+��*)�����*����� � ��� �����+�"�+�-+�+��*)�����* 1����V 300 ��,������ ����1� ����#$��"����'#$�%������)��*.�� ��� �0�����1�������&# �.-�%������'#$����"�-���.������)��* .�������1����$���������#$������$�����h���*���� �'#$��1S���������h6�)��*%�$���#���� ���" �����%�$�1S���������"���&� ,���������������,1�������.-�%����� (Protein assay) " �����%�$��/-���(R������1��������.� ����� ��/-" ��"�����'��*�+,�,�.�" �������"%�$����� ���%�$��V�T��� -20 ��h��)��)��" ��� �(������&������%����

4. ��� ����� �! �,�����-1 '"� ���& (HMGB1 primer ) ��&��/��-�-1 �'�����* R��"�����(�*,��,��1��*��� (OPERON) (A Qiagen company)

���������-�'�����* ,���&���"�����/�) 1.6--� (clustalx 1.6b) ��������'�����*��� �(�� �� 18 R0� 25 �-"

HMGB1; forward-CTCTTCTGCTCTGAGTATCGC reverse-CAACTGAAGATGAAAAAACTACC

����������� .?�"�@��� ����� �,����� (MTT assay) �����%�"�-�����1S�'�6�����,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������".�(" ��"���)��*.�����'��*�+,�,�.�" �������" %��,����5���/�%�%���.1������5���� Mossman T. (1983) (65) ����5�������� �)��*R��R ����������� ���)��*.-- 96 ���� .�(��(����������,',1��.)������*���'��*�+,�,�.�" �������" %�$����������� �% ��- 0, 1, 5,10, 50 .�( 100 ��,�����/��������� .�(" ��"���)��*.�����'��*�+,�,�.�" �������"%�$����������� �% ��- 0, 0.1, 0.5, 1 .�( 5 ��,�����/��������� ,����(�����1S����� 24 &$�,�� ��� ������������ ���)��*%�$����)��������� ���������( 2.5 (2.5% FCS-DMEM) ��� ��������� ���)��*(R���1��$���1S�&����� ��)��� (serum free-DMEM) .�(������/�%�%�%�$��������������% ��- 5 ��������� ���������� ��#$���-���� 30 ��%� ����������� ���)��*��� .�����������%��)�+���)�* (dimethyl sulfoxide, DMSO) 100 ��,����������.� �(������������ ���)��* ��� �0�����1� ��� ���������#�."�%�$���������#$�."� 550 ��,�����

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 36: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

23

����������� R ���)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ����������� ��.-- 6 ���� %�$���������.� � 200,000 �)��*/���� ���������� ���)��*&�������/�����/� %�$����)��������� ���������( 10 (10% fetal calf serum,FCS) 1� ������)��*���0�%�$����� ���1S����� 1 �#� �����#���� %��& �,��-.������&��� "�# ��$����� !�$����)��.������& .- ��1S� 3 ��� � ���.�

1. ��(�����)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$��)��������� ���������( 2.5 (2.5% fetal calf serum-DMEM) ������,',1��.)������* ���'��*�+,�,�.�" �������"%�$����������� 25 .�( 50 ��,������ ���������� ,������� ���-����1S��)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��* �+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*� ���-� ��1��h���&# �

2. ��(�����)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$�� ��)��� (serum free } DMEM) ����" ���������������� �� .���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* ������" �� " �������.���������.-�����* .����,���)��%�,���.%�"* /�������� ���)��* �% ��- 1:10, 1:5 ,������� ���-����1S��)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$1��h��)���� ���-�������� ���&# �����%��1,��)��

3. ��(�����)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$1��h��)��� ����" ��"���)��*.��������#$��"������'��*�+,�,�.�" �������"%�$����������� 0.25 .�( 0.5 ��,������ ���������� ,������� ���-����1S��)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*�����/��0�1��%��*%�$��� ������������ ���)��*%�$1��h��)���� ���-� ��1��h���&# � .���0�����1��������."����������&��/��-�-1 ���(�-��"�)����* ���*��/�����#$�

��� ���1S����� 24 &$�,�� .�(��������."����������&��/��-�-1 ���(�-,1������#$���� ���1S����� 48 &$�,�� ,��%�����%����) �� 2 �� �

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 37: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

24

����� ���#�&���+�����*�� �! �,�����-1 ��#�� �� %� ���& ���& �,� ������� �� ���&������&���" ��-)"�� �� �� !� ��+��!��� (reverse transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR)

1. ���������& �,� � (total RNA extraction) ����������� ���)��*���.�(�������� PBS .������%� � ���*��/������)��*�'�(��� ��(R��������,���&����)�� (Trizol, Gibco, USA) �����5����.�(���,��-��6%������� ��� ����,��� � �#� �" ���)�� 1����V 1 ���������/���� %� ���� 5 ��%� �������,�+��*�1����V 200 ��,������ ��� ���� �����'��"���.��U 15 ����%� .���%� ���� 3 ��%� ��� �����1����$���������#$������$�����h���*����%�$�(�-������/� 10,000 ��-� ���%� �1S����� 15 ��%� %�$��V�T��� 4 ��h��)��)��" %����������������"%�$��� & �-�"��)0$��1S�& �%�$�����*��/���1���� ��� �������,) ,'�'���� 1����V 500 ��,������ ����1����$���������#$������$�����h���*����%�$�(�-������/� 10,000 ��-� ���%� �1S����� 10 ��%� %�$��V�T��� 4 ��h��)��)��" .����%" ����������"���������#�.� �(���%�$�������'��"��� ��� ��������� ��%���� ����������������( 75 1����V 1 ��������� ���(%�$���������-�U .�������1����$���������#$������$�����h���*����%�$�(�-������/� 7,500 ��-� ���%� �1S����� 5 ��%� %�$��V�T��� 4 ��h��)��)��" ��� ��%��������"���.�����$������'��"���%� �������.���1�(��V 10 ��%� .����(����(���%�$��� �������)0$��1S����*��/�������� ��%�$1��h����/��)�*���*��/���" (RNase-free water) 1����V 15 ��,������ .�������1�� �%�$� ��� �� (water bath) %�$��V�T��� 55 ��h��)��)��" �1S����� 10 ��%� ���*��/���%�$���(��/-���%�$ ��V�T��� -20 ��h��)��)��"

2. ������ ���#�&���"�� ��+���� �,� ��+��& (First strand cDNA synthesis)

���"�����(�*����/������.--%��,���&�&��"��������*"��� (RevertAidTM first strand cDNA synthesis kit) (Fermentas, Life sciences, USA) ,���&�1����V���*��/��� 1 ��,����� .�( ,���,� (Oligo (dt) 18) ��1����V 0.5 ��,�����/��,������ 1�-1����V��������� 12 ��,������ ,���&����'�������* (DPEC-water) ����1�� �%�$� ��� ��%�$��V�T��� 70 ��h��)��)��" �1S����� 5 ��%� ��� �����1������-�� ��.�/��1S����� 5 ��%� �V(� �����-+�+��*%�$& ���'�$�1�������� (5x reaction buffer) 1����V 4 ��,������ �������-� ���/��)�*��,-��������" (ribonuclease inhibitor) 1����V 1 ��,������ .�( �����)���,-������,��%�* ���+�"�+" (deoxyribonucleotide triphosphate: dNTPs) 1����V 2 ��,������ �"����������.�(����11P�� (mix and quick spin) .�������1�-%�$��V�T��� 37 ��h��)��)��" �1S����� 5 ��%� ��� �%�����������/��)�*������*"%���"*���'�%" (RevertAidTM M-MuLV reverse transcriptase) 1����V 1

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 38: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

25

��,������ �"����������.�(1P������� � ��� �����1�-%�$��V�T��� 42 ��h��)��)��" ��� 1 &$�,�� ���(% �1��������"�-��V* .�������1��/-���%�$ -20 ��h��)��)��" � ��%�$(%���1�&����

3. ��� "���*���������� �,� �)� !��������)"�� �� �� !���+��!������� �������"�%����& (Polymerase Chain reaction: PCR)

���."�������'�)����*(�&���/��)�*.%�����/���,'�������" (Taq DNA polymerase) ,���&�1����V������'�)����*% ���� 25 ��,������ )0$�1�(��-���� ����/���"����-�&��1S����.-- 1 ��,����� (1 µg of cDNA template) �����)���,-������,��%�* ���+�"�+" % � 4 &��� �#� ����%�'� (dATP) ��)�%�'� (dCTP) ���%�'� (dGTP) .�( ��%�%�'� (dTTP) �� ���( 2.5 �����,����* (2.5 mM of each dNTPs) )0$��&�"��������/���"����� ������� ����" ��1�(��-�#$�U ���.� � ����$� -+�+��* (10x PCR buffer) .�����)���������* (MgCl2 concentration between 1-5 mM) ��/��)�*.%�����/���,'�������" (0.6 U of Taq DNA polymerase) ,���,� ������,��%�*�'�����* )0$����.� .�1����& (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ,GAPDH) .�( ��&��/��-�-1 �'�����*

HMGB1; forward-CTCTTCTGCTCTGAGTATCGC reverse-CAACTGAAGATGAAAAAACTACC

GAPDH; forward; 5b-TGAAGGTCGGAGTCAACGGAT-3b reverse 5b-TCACACCCATGACGAACATGG-3b.

���%�����������#$��'�)����*� �(� �"T��(1�����������$����"����- .�1����&.�( ��&��/��-�-1 ���%�$��V�T��� 95 ��h��)��)��" �1S����� 5 ��%� 1��������"�����(�*����/���(�����0 ���#$�%�������������1��$��.1����V�T��������������� V ��V�T��� 3 �(�- �&���V�T��� 94 ��h��)��)��" �1S����� 15 ����%� �'#$�%������������.��"���������/������.--�1S�����/���"�����$�� (denaturation) ��V�T��� 53 ��h��)��)��" �1S����� 1 ��%� �'#$����-�(�� ��"�� �'�����*�-����/������.--%�$�1S�"�����$�� (annealing) ��V�T��� 72 ��h��)��)��" �1S����� 1 ��%� "����-���"�����(�*����/���"����� .�(��-"��%���%������ �1�������'�*����* (final extension) ,���&���V�T��� 72 ��h��)��)��" �1S����� 10 ��%� ��� �����������������TV�*'�)����*,����5� ����/�,��,+��)�" (electrophoresis) �����(��,�"�� %�$�����������������(��,�"�����( 1.6 (1.6 % agarose gel) .�(������1�������� ��/%5������,-����* (ethidium bromide) %�$����������� 0.5 ��������� ���������� 1�(��V 10 ��%� ������1������/%5������,-����*" �������������� ����$� R ��T�'���������+��*� -����#$���������

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 39: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

26

."��������,���/� (ULTRA LUM, Electonic U.V. Transilluminator) ���������(�� �� ����/���%�$"��.�(����/�����-���(�����������(�*����,1�.��� (sionimage) �'#$�����������������T�'

����� ���#�&���+�����*�� �! �,����� -1 ��#��).���������� �� ���&����� (Western blot analysis)

��#$���-����������%�$�)��*�+,-�-��"�*������#��.�(�)��*�+,-�-��"�*��� ��/��0�1��%��*����-�����(������"T��(������� �)��*(R��%�����.�� (cell lysate) ���$�������������� ���)��*%� �.�����������+�"�+�-+�+��*)�����* .����" ,)�����,����)��)��+� (sodium dodecyl sulphate, SDS) ����������������( 1 (1% SDS) )0$�(�1%�����"�����,1�����#����������,���� ������-�����1��� �&�,)�����,����)��)��+�����������������( 1 1����V 100 ��,������ %�����������'�(��� ���)��*.� �(�������%$����� .�����/-" ����������"�" ����'��"������� 1.5 ��,������ ��� ������������"" ����0$��1��1����V,1���� ,����5����.-��+��� (Bradford method) %�$� ���������#�."�%�$ 595 ��,����� 1�-"���(����)��*.�������1����V,1����%�$�% �����.� �(��� �%���� ���,1�����1.�������-����������,��,+��"�" (SDS-polyacrylamide gel electrophoresis) %�$�����������������(���������*�����( 10 1�-��(."�++��������(�-%�$����("� 1�(��V 20 �����.��.1�* �����,1����R��.��.���(R��R ����-�.� �'�������+ (poly) vinylidene difluoride immunoblot membrane (PVDF) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). ��� �.& .� ���-�/���� �,)��&$� (blocking solution, 5% skim milk in TBS-T) �1S����� 1 &$�,��.���-��%����.����-���� ���&��/��-�-1 (HMGB1 antibodies ,Monoclonal Anti-HMG-1 Clone HAP46.5, Sigma, USA) ������" �� 1:1000 �1S����� 1 �#� ��� �����.� ����� washing solution 5 �� � �� ��( 10 ��%� � ���-��%� �����.����-���%����T��� (secondary antibody) %�$� ��-����)�*�1��*���)���" (ECL Anti-Mouse IgG, Horseradish Peroxidase-Linked Species-Specific whole Antibody (from sheep) (Amersham Bioscience, UK)) ������" �� 1:50,000 �1S����� 1 &$�,�� ��� �0�- �.� �����)�.��'�" (ECL plus reagent) �����5�������������� .�(���-"kk�V�����&��/��-�-1 ����.� �+��*����)*���* (standard HyperfilmTM ECL, Amersham Bioscience, UK)

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 40: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

27

�� ���#�&*���Y� �������� ."������������.--�������&��'��V��

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 41: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

����� 4

���� ���

���������������� ��������������� !�����"������"�#���� �� � �� �� � �$������ ���%����� (MTT assay)

���������� �������������������������������� ������������������ �� ���!��"# 25 �& 50 �������"�/����)� ��* �������������"*�����+,��&�-&(11) *!�����1)���� �2�������#������3���+������������������������������� ���������)!�����*��4��1����� ��5!�������� �� ������#�6������� �� ��������� �#�!���!����������3���+)!��� (�"�������7����&�# 3)

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

cont 1 5 10 50 100

LPS P.g.

OD

55

0 n

m

7����&�# 3 ������!�����9������#�&�"#������3���+������������������� ������������ ��������������9)!��� ��� ����������-��%�����-1 0��1�������!�����" ��"��%��� �1�1������2����3���124$��!��"�#������2"����5�3� �1�!��"�#������2"�����%��6��� ���2"��4��"�$���������� !�����"������"�#���� �� � �� �� �

����������#�!� ����������������������������� ������������������ �� � 25 �& 50 �������"�/����)� �����:��&)6 �������#�#��)����;����; ����������

µg/ml สาํ

นกัหอ

สมดุก

ลาง ม

หาวทิ

ยาลยั

ศรนีค

รนิทร

วโิรฒ

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 42: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

µg/ml µg/ml

���5�1���#�-1 ������A ���!��6!���#�6� �" ����&�"#���������� ����1���&�&�"#���)�� �" ��� *"��#�!������������5�1���#�-1 �����������A �*!��5"�������������� �� ��� ����������������������������� ���������������A ���� 25 ��3� 50 �������"�/����)� (�"�������7����&�# 4)

�����2������&)6 �����1�*A�����"�)���6+*�� �*����������������������������� ������������������ �� � 25 �& 50 �������"�/����)� ��!�#�!��������������������A ����5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� �������*#�"#�6!���#�6� �)!�&�"# �5�1���#�-1 ���)���" ��������-������A ���!��6!���#�6�*!��5"���� (�"�������7����&�# 5)

4A

4B

4C 4D

0

50

100

150

200

250

cont 25 50

P.g. LPS

rela

tive d

ensity t

o G

AP

DH

0

10000

20000

30000

40000

50000

cont 25 50

P.g . LPS

r

ela

tive d

ensi

ty

7����&�# 4 �����������5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� (������� �2���� 20 �# �&��������5��3�)"���#�6�) (4A) �&�&�"#���)�� (4B) ������&)6 �������#�#��)� ���;���� �*����������������������������� ��������� �&���������� ����� ������ ����:#9�)7"-E��������(4C) �&������ ����:#���)�� (4D) (���������9 � �*�������scionImage)

Control 25 50 µg/ml P.g. LPS

Control 25 50 µg/ml P.g. LPS

390 bp GAPDH

30 kDa HMGB1 680 bp HMGB1

29

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 43: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

Control 25 50 µg/ml P.g. LPS

Control 25 50 µg/ml P.g. LPS

390 bp GAPDH

30 kDa HMGB1

680 bp HMGB1

µg/ml µg/ml

5A

5B

5C

0

50

100

150

cont 25 50

P.g. LPS

rela

tive d

ensity t

o G

AP

DH

5D

0

10000

20000

30000

40000

50000

cont 25 50

P.g. LPS

r

ela

tive

de

nsi

ty

7����&�# 5 �����������5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� (������� �2���� 24 �# �&��������5��3�)"���#�6�) (5A) �&�&�"#���)�� (5B) ������&)6 �������#� #��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*����������������������������� ��������� �&���������� ����������� ����:#9�)7"-E�������� (5C) �&������ ����:# ���)�� (5D) (���������9� �*������� ScionImage)

���������������� �����<������!��" 2������"�#���� �� � �� �� � �$������ ���%����� (MTT assay)

���������� ����!����"�����)��������������� ��������� ��������� �� ���!��"# 0.25 �& 0.5 �������"�/����)� ��* �������������"*��_������*��&�-&(66) *!�����1)���� �2�������#������3���+���!����"�����)���������������

30

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 44: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

µg/ml

��������� )!�����*��4��1����� ��5!�������� �� ������#�6������� �� ��������� �#�!���!����������3���+)!��� (�"�������7����&�# 6)

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

cont 0.1 0.5 1 5

Sonicated extract of P.g .

OD

55

0 n

m

7����&�# 6 ������!�����9������#�&�"#������3���+���!����"�����)��� ������������ ��������� �����9)!���

��� ����������-��%�����-1 0��1�������!�����" ��"��%��� �1�1������2����3���124$��!��"�#������2"����5�3� �1�!��"�#������2"�����%��6��� ���2"��4��"�$���<������!��" 2�$����3�������������"�#���� �� � �� �� �

��������� ���&�"#���������� ����1�� ������&)6 �������#�#��)����;���� �*�!����"�����)�� �*�������*��������������� ������������������ �� � 0.25 �������"�/����)� ������������!�)�)!������6!���#�6� �)!���6!������&)6 �� �*������ �� � 0.5 �������"�/����)��������������������A ���!��6!���#�6��&�6!������&)6 �� �*������ �� � 0.25 �������"�/����)��1�� * (�"�������7����&�# 7A,8A) �!��������1�*A�����"�)���6+*��" ��#�!�������������!�)�)!������6!���#�6�����"� (�"�������7����&�# 7C,8A)

���&�"#���)�� �#�!��!����"�����)�� �*�������*��������������� �����������!�����:��&)6 �������#�#��)����;����&����1�*A�����"�)���6+*��; �������������5�1���#�-1 ���������A ���������*#���*#�"#�6!���#�6��)!*!���� �)!�"#�#�����������5�1���#�-1 ���)��������1�� *���6!������&)6 �����1�*A�����"�)���6+*� (�"�������7����&�# 7B, 7D, 8B)

31

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 45: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

HPDL

7D

Control 0.25 Control 0.5 µg/ml Sonicated extract of P.g.

30 kDa HMGB1

7B

HGF

7C 7A

7����&�# 7 �����������5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� (������� �2���� 20 �# �&��������5��3�)"���#�6�) (7A,7C) �&�&�"#���)�� (7B,7D) ������&)6 ���� ���#�#��)����;����&������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*�!����"���� �)�� �*�������*��������������� ���������

Control 0.25 0.5 µg/ml Sonicated extract of P.g.

Control 0.25 0.5 µg/ml Sonicated extract of P.g.

680 bp HMGB1

Control 0.25 0.5 µg/ml Sonicated extract of P.g.

390 bp GAPDH

32

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 46: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

µg/ml

µg/ml

8A

0

50

100

150

cont 0.25 0.5

Sonicated extract of P.g.

rela

tiv

e d

en

sit

y t

o G

AP

DH

HGF

HPDL

8B

0

10000

20000

30000

40000

50000

cont 0.25 0.5

Sonicated extract of P.g.

re

lative

de

nsity

HGF

HPDL

7����&�# 8 ������ ����������� ����:#9�)7"-E�����������5�1���#�-1 (8A) (������� �2���� 20 �# �&��������5��3�)"���#�6�) �&������ ����:#���)���5 �1���#�-1 (8B) (���������9� �*������� scionimage) ������&)6 �������#� #��)����;����&������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*�!����"�����)� � �*�������*��������������� ���������

33

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 47: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

��� ����������-��%�����-1 0��1�������!�����" ��"��%��� �1�1������2����3���124$��!��"�#������2"����5�3� �1�!��"�#������2"�����%��6��� ���2"��4��"�$���<������ ��� �2 ���2��" ��2 �����! ������ ���" ���"

������#������3���+���!��*����������)��#��)�� ��)����"*������� ������� �� �5 �!��1��������������"*��_������*��&�-&(66) �A��")���!������2����5 �����_A�+� �� ")���!���!��*����������)��#��)�� ��)����"*��������������/�;���� *���� ��!��"# 1:10, 1:5 ��!�#��3���+)!���

����������#�!����&�"#���������� ����1�� �!��*����������)��#��)��

��)����"*��������������������" �")���!�� 1:10 �& 1:5 ��!�����:��&)6 �������#� #��)����;����; �������������5�1���#�-1 ���������A ���������*#���*#�"#�6!���#�6��)!*!���� �)!�"#����������������1�� *��*���9"�)��")���!������5 �������&)6 � (�"�������7����&�# 9A,10A) �!����������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*��" � �#�!��6!������&)6 �� �*")���!�� 1:10 ������������!�)�)!������6!���#�6�����"� �!�� �6!������&)6 �� �*")���!��1:5 �������������������A ���!��6!���#�6��&�6!������&)6 �� �*")���!�� 1:10 (�"�������7����&�# 9C,10A)

���&�"#���)�� �#�!��6!������&)6 �������#�#��)����;���� �*")���!�� 1:10 ������������!�)�)!������6!���#�6�����"��)!�6!������ �"#�����&)6 ����")���!�� 1:5 �������������������A ���!��6!���#�6��&�6!������&)6 �� �*")���!�� 1:10 (�"�������7����&�# 9B,10B) �!����������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*��" ��" �")���!�� 1:10 �& 1:5 ���&�"#�5�1���#�-1 ���)��������A ���!��6!���#�6����*��1�� * (�"�������7����&�# 9D,10B)

34

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 48: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

HGF

390 bp GAPDH

Control 1:10 1:5 culture supernatant of A.a.

680 bp HMGB1

Control 1:10 1:5 culture supernatant of A.a.

30 kDa HMGB1

Control 1:10 1:5 culture supernatant of A.a.

Control 1:10 1:5 culture supernatant of A.a.

HPDL

9A

9C

9B

9D

7����&�# 9 �����������5�1���#�-1 ���&�"#���������� ����1�� (������� �2���� 24 �# �&��������5��3�)"���#�6�) (9A,9C) �&�&�"#���)�� (9B,9D) ������&)6 ���� ���#�#��)����;����&������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*�!��*��� �������)��#��)�� ��)����"*�������������������

35

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 49: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

10A

0

50

100

150

200

cont 1:10 1:5

A.a. Supernatant

rela

tiv

e d

en

sit

y t

o

GA

PD

HHGF

HPDL

10B

0

10000

20000

30000

40000

cont 1:10 1:5

A.a. Supernatant

rela

tive

de

nsity

HGF

HPDL

7����&�# 10 ������ ����������� ����:#9�)7"-E�����������5�1���#�-1 (10A) (������� �2���� 24 �# �&��������5��3�)"���#�6�) �&������ ����:#���)���5 �1���#�-1 (10B) (���������9� �*������� scionimage) ������&)6 �������#�#��)� ���;����&������#�#��)����1�*A�����"�)���6+*�� �*�!��*��� �������)��#��)�� ��)����"*�������������������

36

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 50: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

����� 5 ���� ����������

����������� ������������������������������������� ��! � "�#�"#$������ %" &� ! ���'������������� ������ ��"#'��� ���())�"�� "�"� �(67) .��/ � /�������"��� �)0�����"� �())�"� ��$��12���0�� �'���� � " ��#� ���())�"����"�� �%�&0 ��� (Genetic risk factors) /�$�())�"����"�� ��� ����/#����� (Environment risk factor) ������! ����� ��! � " �$�2 ��� B(/�$�����"���� ��"#%���#�"#$������/�$��/����� � ����� .�� (1 %��$ �� 11) ��"����� ������������� �������! ��D (10) ��� /�� ��� �/������ /������"F��������/��� /�$%���.B����/� )��)�# ��� ��"%���.B����/� )��)�# ��� � ��"#'��� �� �� ������������� ���/���������� (chronic periodontitis) ��#/�� ��� �/������ /������"F��������/��� ���/�������"������# ��! ��D �� �� ������������� ���/���0 � (aggressive periodontitis) (68)

1 %��$ �� 11 /���%" &� ! ���'������������� ���/�$�())�"���� ��"#'���(67) ���� : Page RC and Kornman KS The pathogenesis of human periodontitis. Periodontol 2000.1997;14:9-11.

Environmental & Acquired Risk Factors

Microbial

Plaque

Host

Response

C.T & Bone

Metabolism

Clinical

Signs

Ag

LPS

PMNs

Ab

Cytokine

Prostanoid

MMPs

LPS

Genetic Risk Factors

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 51: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

38

�())0��������"����� �#� ����������� �����#��D�/��#������ ) ������'���$��12���0�� �'���� � "��/�������" ������������())�"������# ��0/��'��/�������"��� �� # F\�� ������'���$��12���0�� �'���� � "���.�����0�������������������� ������# ��0/��� '\� �]������ ������12���0�� �'���� � "� � �.��! ���� �����F���������� � ����������" #� .F�.�� � ) )$�! � "����/�� ����/��#"��������! � "�F���'���� � "��� /�$ � \̂ _ �������.������ �F���.B����� ��'������� /�$�F���.B����� ��'����̀"\������������) ����F����������� ��! ��D���� ��"#'��� ��%" &� ! ���'������������� ��� F\���� ������#��" �F��������������� � ��"#'���� �$�# ���� �/�$���1 %'���#�"#$"\������� (14) �#�����"����#"F���/F�/�$��#"��� � �$�2 ��� B('\�� ���� F\���F������� ��)$��������"�� ������� �����/�$�())�"������# ��0/��'�������/�$"������F��������������$��12���0�� � (18,19) ��"�� ������.F�.����#"

�����̀�)���-1 ������ �����\��#� /���B����� �����/� �������2�)� �#� ������� ���������"2���#����"� (1) /���� �� �#� � � �b������� � 1 "� �F���.����F����� "��� ��"������������ � 1 "� /��#�����̀�)���-1 )$�! �� ������.F�.�� ��"�����̀�)���-1 b2 )��#� ���.F�.������������ � ���'� ��� #� .F�.��������c� �$�# �'�� ��� ��� (2) �#����������̀�)���-1��� "��� � �b �$0����� �� ������'��� �.F�.����������� �� �� ��� ���/�$����� ��! ��D�� �� ��������� ��"#'��� �� ��� ����� "��� ��� ���.''���� ��� �1 #$�������� �$/������(7-9) ��"�����̀�)���-1� � �b �$0� ������ ��� ���/�$����� ��]D �# ����"� " (injury signal) ���F���/�$�����"���� �c���/���� � � 4 (6) �#�)�"�������)\���) \̂ _ ��� �'�������̀�)���-1�����������F\�������� ������ ̀)������������ ��"#'��� �� ��� ������ �

�"� �.� ̀ � ��� �'�������̀�)���-1 ����������� ��"��)! ���"2� �� � \̂ _ �����.�� � ��� "� #� � � �b%� �/����� '�������̀�)���-1 ��F���.B����� ��'���F��������� .��/ � �F���.B����� ��'����̀"\������� �%����$� �B( /�$����� (11) �#�������F����0��#����� ̀�� �� "� ������"# �#� %� �/����� '�������̀�)���-1 ��#����"�'�������2��f#"����������� ���/�$�2��f#"���.���������������� ��� /���2��f#"����������������� �����"��%� �/����� '�������̀�)���-1 �.F�%� �F\� (cytoplasm) ��#" �#����� Morimoto Y. (2008)(63) "��%� �/����� '�����������̀�)���-1 ��! ����������� (gingival crevicular fluid) '���2��f#"����������� ���/�.��%���! ����������� '���2��f#"���.���������������� ���/�$� � \̂ _ ���� ��'�� �_i�/�$�]$(11) "��.�� \̂ _ �/����� '�������̀�)���-1 ��F���.B����� ��'����̀"\�������1 "���� � �$0���#"

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 52: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

39

.��%����/F�� ��.���'�����������.� �����.��%�#� �� �/����� ����%���'\�'�������̀�)���-1 ��$�������F�)��� � ����̀��'���F���.B����� ��'����̀"\�������'���0_"������ �$0���#".��%����/F�� .���'�����������.� /�.��%� ��%���'\�'�����������̀�)���-1 � \̂ _ ������� � ��2�#�)�")\���) \̂ _ ��"�� ��"! .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ��� � �$0��F���.B����� ��'����̀"\��������0_"�/�$�F���.B����� ��'������� ) �� �#�)�" %�#� .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ��� � � �b �$0�����F���.B����� ��'������� /����� �����̀�)���-1����� ]����2�'\�������$��� ����F�)��� � ����̀��/�$������������"� ���1 #$���.��.����� � �$0� /������ �$0��F�����̀"\��������0_"� ���.��%�/����� ����%���'\�'�������̀�)���-1��$�������F�)��� � ����̀�� /�%� �/����� ����%���'\�'�����������̀�)���-1 F\�������.��/ � �) � \̂ _ ���� ��"��.���� �/���� /�� )�����) .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ���/�$���������.������# �/ � �� �����/�$� ���##��" (69,70) ��".��%����/F� � ��.���'��%���.B����/� )��)�# �����)$.��%�� �� ����F\��.��/ � j���� (heptose) ��� .j��� F���� ����/�F�� (β-hydroxydecanoic acid) /�$%�.����.����� F��� ��� (2-keto-3-deoxyoctonate) F\����#"� �"\� ���%��/F�� ��.��� �#�����.��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ����� ��.'�� (fatty acid) ��������� ��� (branched) /�$���# �" #� #� /�$"���� � \̂ _ %�#� �� �/����� "����������#�� 8 ��F���.B����� ��'������� ��� �$0���#" .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ���/�.��%� �/����� ����� �$0���#".��%����/F�� ��.���'������.�(71) �����)\����.�.��#� .��%����/F�� ��.���) /�������"����������# �/ � � �)\����# �� � �b� � �$0��F���.B����� ��.��� � � /�$� ) �����������.�.��%��������� ������������� ��� .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ���� )$����# �$0����� �����"� ��%" &� ! ���'������������� ���� #�

��#�����.������� �$0��F�����̀"\��������0_"���#".��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ��� %��%�"� �/����� ����%���'\�'�����������̀�)���-1 /� ���.��%� �/����� ����%���'\���$�������F�)��� � ����̀�� � )������ ) #� .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ������� �$0� �/����� ����%���'\�'�������̀�)���-1 ��$�������1 "���� ������� $�� (post-translational level) �������� �� � \̂ _ �1 #$ �B������$/�` �F�" (Friedreichns ataxia) F\��������%�&0 ���� �0���$/�` �F�" (ataxia) ��"%��# ����� ���� gene ����#��0� ���� �����B� � F� (frataxin protein) ��") � \̂ _ ��� �� #%�#� " �����#"�%�������B� � F� ��� �������%�"���� (recombinant

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 53: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

40

human erythropoietin (rhu-EPO)) ��� � �b �$0��F���.B����� ������� �/����� ����%���'\�'������B� � F� /�.��%� �/����� ����%���'\�'��B� � F���$�������F�)��� � ����̀��(72) ��� �

) �� �/����� ���/ � � �'���F���.B����� ��'������� /�$�F���.B��� �� ��'����̀"\��������0_"���� )�����) �F����������������# �/ � � �)\��������� �/����� / � � ���#" ��� "� b\��# �/ � �'�� �/����� '���F���.B��� �� ��'������� /�$�F���.B����� ��'����̀"\������� %�#� �F���������� �� �/����� ������%��� (osteopontin) ������/��F� (osteocalcin) ��.F�������� (bone sialoprotein) /�$���� .��B��B �� (alkaline phosphatase) / � � �(73) ��"�F���.B����� ��'����̀"\��������� �/����� ���� .��B��B ������� ]����2� �� ����� ���� "��������� F�'�� �$�2 (bone-like matrix proteins) /�$� � �b��� ������"���/'`� (mineralized nodules) .��(74) �#�����"���� �/����� '���#������#�F���.��/ � �#��� F��� 14 (CD14 receptor) /�$ �#������-.��� (Toll-like receptor) / � � ���#" ��"�F���.B��� �� ��'������� �� �/����� �#���F��� 14 /�$F��� 14 � ����̀����$�������2� ��#�F���.B����� ��'����̀"\�������%��� �/����� '�������#���F��� 14 /�$F��� 14 � ����̀����$����! /�%��� �/����� �#������-.���2 (Toll-like receptor 2) ����� ]����2� #� �F���.B����� ��'������� (75) F\�� �)��'��.��%����/F�� ��.��� ����#�F���%�#� .��%����/F�� ��.���)$� �̂"�����#���F��� 14 �#������-.��� /�$ .��%����/F�� ��.���� "�������� (LPS-binding protein) (76) �"� �.� ̀ � .��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ���� � �b�%��� �/����� �����̀�)���-1 ��$�������.�������F���.B����� ��'������� /�$�F���.B ����� ��'����̀"\������� F\��)$/���b\� ������'���F�������������())�"������# ��0/��'����������� F\��� )/���b\���� �'�������̀�)���-1��������! ������ ���������# ��0/��� '\�.�� /� �. ������'���F����������̀�)���-1 �#�������� �'�������̀�)���-1�������������"������� \̂ _ ��.�

� � \̂ _ ��"��.��! ��#� ���F���/ ��#"�������"�'��%���.B����/� )��)�# ���/�$��#��"'��� � �����"�/�� ��� �/������ /������"F��������/��� � ��� �$0��F���.B����� ��'������� /�$�F���.B����� ��'����̀"\������� �����) ��#� ���F���/ ��#"�������"�'��%���.B����/� )��)�# ���/�$��#��"'��� � �����"�/�� ��� �/������ /������"F��������/��� ���())�"������# ��0/��'��������"2��� "���F\��� )� ) /�������" ������������� )���� ����/�������" �������������� � �())�" ��������� ��.��) ��#��") /����/�F����/������"F��������/��� ��� ��#���t� F� .F��t� F� ��̀.F��"��"

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 54: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

41

�� "�������������������"�� � �F��� ��#�())�" ��������� ��.��) ��#� ���F���/ '��%���.B����/�)��)�# ������%�#� ���# �� ��"#'��� �� ��! � "'���#�"#$������/�$ �$�2 ��� B(.��/ � .����%��/F�� .��� Bu�����" j�/� �2�� /�$����/���) F\���())�" ��������� ��)$����# �$0��F���� �c����"2�����#]����� ��� ��������F���'���$��12���0�� ������F���'���� � "��� ���.F� /� ���/B) /�$�F���.B����� �� ���� ��������.F�.��� �! � "�#�"#$������ �� .��

/�� � \̂ _ �������.��%� ������"/����������)'�� �/����� '�������̀�)���-1 ������$�������F�)��� � ����̀��/�$�$������� F\��� )������ ) ��#� ���F���/ ��#"�������"�'��%���.B����/� )��)�# ���/�$��#��"'��� � �����"�/�� ��� �/������ /������"F��������/��� � )$���())�" ������������� 0�� #� 1 ������������ �/����� '�������̀�)���-1 �� #��� ���())�" ������������� 0�� ��"� �� � �b �$0������ �/����� '�������̀�)���-1 ����2�'\�F\��� )���.�.��#� ���.��%����/F�� ��.��� �']$���"# � ̀)$���())�" ������������� 0��� ����\�������� "��� F\��������� �"��"��� �/����� '�������̀�)���-1 �����"�� F\��� ))$���%# ��̀.F�������� ������������ �� ��! � " �����̀�)���-1 �����"�� /�$ ����.��.������# �$0�������� �����0�&�v�%�"����������\������ ���� � ) ������ �! � \̂ _ �����.��)\�.��.��/����� �$0�� ���� ��\���������)��.� F\�����������"����"� �� ����� �����0�&�v�%�"����������\������ ���� � ) �����F\�� � \̂ _ �����.��%����/F�� ��.���'��%���.B����/� )��)�# ��� �2)$������������) #� /� ̀�� � \̂ _ '��^����%"�/�$�]$(66) ���.��! ��#� ���F���/ ��#"�������"�'��%���.B����/� )��)�# ���/�$��#��"'��� � �����"�/�� ��� �/������ /������"F��������/��� � �$0��F��� .B����� ��'������� /�$�F���.B����� ��'����̀"\�������������"# � ) �� ������%�#� ��#��") /�� ��� �/������ /������"F��������/���� � �b �$0��F�����̀"\������������ �/����� �%���'\�'��"�% ��-2 ��$�����F�F�)���� ����̀��/�$�$������� /���#� ���F���/ %���.B����/�)��)�# �����%� �/����� '��% ��-2 ���$������� F\��������� �'� � �'����#��") /�� ��� �/������ /������"F��������/���/�$��#� ���F���/ '��%���.B����/� )��)�# ���) � \̂ _ ��� �� # � )���.�.��#� ��#� ���F���/ '��%���.B����/� )��)�# ��� ���())�" ������������� 0�� ��"� ����/����� � ��! � ����"��"������� #� �())�" ������������� 0����������� � �$0� �! �������%&�'�� � �$0���"�#��� � ���^� ����� #� �0���#��0�

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 55: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

42

) �� � \̂ _ ���������! ���.��'���2�'���� � \̂ _ b\���� �'�������̀�)���-1 ������������� ��� F\��� �#� )$����$�"����.��� �� � \̂ _ � ��"# �� �. '�� �����̀�)���-1 ��%" &� ! ���'������������� ��� �����

1 "���1 #$'�� �#�)� "�� /���#� � �����0�&�v .� �%����/F�� .���'�� %���.B����/� )��)�# ������ ������ � �b �$0��F���.B����� ��'������� /�$'�� ��̀"\��������0_"� ����� �/����� ����%���'\�'�������̀�)���-1

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 56: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

บรรณานุกรม

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 57: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

����������

1. Goodwin GH, Sanders C, Johns EW. A new group of chromatin-associated

proteins with a high content of acidic and basic amino acids. Eur J Biochem

1973; 38: 14-9.

2. Agresti A, Bianchi ME. HMGB proteins and gene expression. Curr Op Genet

Develop 2003; 13: 17008.

3. Wang H, Bloom M, Zhang JM, Vishnubhakat M, Ombrellino J, Che A, et al.

HMG-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science 1999; 285:

248-51.

4. Wang H, Vishnubhakat JM, Bloom O et al. Proinflammatory cytokines (tumor

necrosis factor and interleukin 1) stimulate release of high mobility group

protein-1 by pituicytes. Surgery 1999; 126: 389-92.

5. Rendon-Mitchell B, Ochani M, Li J et al. IFN-gamma induces high mobility group

box1 protein release partly through a TNF-dependent mechanism.

J Immunol 2003; 170: 3890-7.

6. Yang H , Wang H, Czura CJ , Tracey KJ. The cytokine activity of HMGB1. J of

Leuko Bio 2005; 78: 1-8.

7. Jiang W, Pisetsky DS. Mechanisms of Disease: the role of high-mobility group

protein 1 in the pathogenesis of inflammatory arthritis. Nat Clin Pract

Rheumatol. 2007; 3:52-8.

8. Andersson U, Erlandsson-Harris H. HMGB1 is a potent trigger of arthritis.

J Intern Med. 2004; 255:344-50.

9. Yang H, Ochani M, Li J, Qiang X, Tanovic M, Harris HE, Susarla SM,

Ulloa L,Wang H, DiRaimo R, Czura CJ, Roth J, Warren HS, Fink MP,

Fenton MJ, Andersson U, Tracey KJ. Reversing established sepsis with

antagonists of endogenous high-mobility group box 1. Proc Natl Acad Sci

2004; 101: 296-301.

10. Haffajee AD , Socransky SS. Microbial etiological agents of destructive

periodontal disease. Periodontal 2000. 1994; 5:78-111.

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 58: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

45

11. Nantasenee K, Laosrisin N,Dhanesuan N. Effect of LPS on HMGB1expression in

Human Periodontal Ligament Fibroblasts. Thesis, M.S (Periodontology)

2006.

12. Yamazaki K, Ikarashi F, Aoyagi T, Takahashi K, Hara K, Seymour GJ. Direct and

indirect effects of Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide on

interleukin-8 production by human gingival fibroblasts. Oral Microbiol

Immunol 1992; 7:218-224.

13. Yamaji Y, Kuboto T, Sasaguri K, Sato S, Suzuki Y, Kumada H et al. Inflammatory

cytokine gene expression in human periodontal ligament fibroblasts

stimulated with bacterial lipopolysaccharide. Infection and Immunity 1995;

3576-89.

14. Kuru L, Parkar MH, Griffiths GS, Newman HN, Olsen I. Flow cytometry analysis of

gingival and periodontal ligament cells. J Dent Res 1998; 77: 555-64.

15. Nishida E, Hara Y, Kaneko T, Ikeda Y, Ukai T, Kato I. Bone resorption and local

interleukin-1alpha and interleukin-1beta synthesis induced by

Actinobacillus actinomycetemcomitans and Porphyromonas gingivalis

lipopolysaccharide J Periodontal Res. 2001; 36: 1-8.

16. Helderman WH. Microbial etiology of periodontal disease. J Clin Periodontal

1981;8:2610280.

17. Kesavalu L, Chandrasekar B, Ebersole JL. In vivo induction of proinflammatory

cytokines in mouse tissue by Porphyromonas gingivalis and Actinobacillus

actinomycetemcomitans. Oral Microbiol Immunol. 2002; 17:177-80.

18. Socransky SS,Cugini MA ,Smith C,Kent RL. Microbial complexs in subgingival

plaque. J Clin Periodontal 1998; 25:134-44.

19. Genco RJ. Host responses in periodontal disease: current concepts.

J Periodontol 1992; 63:338-55.

20. Pekovic DD, Fillery ED. Identification of bacteria in immunological mechanisms

of human periodontal disease. J Periodont Res 1984; 77:324.

21. Christersson LA,Fransson CL,Dunford RG,Zambon JJ. Subgingivalis distribution

of periodontal pathogenic microorganisms in adult periodontitis.

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 59: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

46

J Periodontol 1992; 63:418-25.

22. Sastrowijoto SH, Hillemnas P,van Steenbergen TJM ,Abraham-Ipijn L,de Graaff

J.Periodontal condition and microbiology of healthy and diseased

periodontal pockets in type 1 diabetes mellitus patients. J Clin Periodontal

1989; 16:316.

23. Paul JE,Cristopher WC. Microorganisms as risk indicators for periodontal

disease. . Periodontol 2000. 2003; 32:24-35.

24. Laine ML,Appelmelk BJ,van Winkelhoff AJ. Novel polysaccharide capsular

serotypes in Porphyromonase gingivalis. J Periodont Res. 1996; 31:278-

284.

25. Zhao S, Shi J,Xiao M. Effect of capsules on attachment of human periodontal

ligament fibroblast to root surface. Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi

1996; 31:19-21.

26. Stanley CH, Lakshmyya K, Stephen W, Caroline AG. Virulence factors of

Porphyromonase gingivalis. Periodont 2000. 1999; 20:168.

27. Yamazaki K, Ikarashi F, Aoyagi T, Takahashi K, Hara K, Seymour GJ. Direct and

indirect effects of Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide on

interleukin-8 production by human gingival fibroblasts. Oral Microbiol

Immunol 1992; 7:218-224.

28. Yamaji Y, Kuboto T, Sasaguri K, Sato S, Suzuki Y, Kumada H et al. Inflammatory

cytokine gene expression in human periodontal ligament fibroblasts

stimulated with bacterial lipopolysaccharide. Infection and Immunity 1995;

3576-89.

29. Kent LW, Rahemtulla F, Michalek SM. Interleukin (IL)-1 and Porphyromonas

gingivalis lipopolysaccharide stimulation of IL-6 production by fibroblast

derived from healthy or periodontally diseased human gingival tissue. J

Periodontol 1999; 70:274-282.

30. Sharma A, Sojar HT, Lee JY, Genco RJ. Expression of a functional

Porphyromonas gingivalis fimbrillin polypeptide in Escherichia coli:

purification, physicochemical and immunochemical characterization, and

binding characteristics. Infect Immun. 1993; 61:3570-3.

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 60: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

47

31. Lee JY.Sojar HT, Bedi GS, Genco RJ. Porphyromonas (Bacteroides) gingivalis

fimbrillin: size, amino-terminal sequence, and antigenic heterogeneity. Infect

Immun. 1991; 59:383-9.

32. Nakagawa I, Amano A, Kuboniwa M, Nakamura T, Kawabata S,Hamada S.

Functional differences among FimA variants of Porphyromonas gingivalis

and their effects on adhesion to and invasion of human epithelial cells.

Infect Immun. 2002; 70:277-85.

33. Ishikawa I, Nakashima K, Koseki T,Nagasawa T,Watanabe H, Arakawa S,

Nitta H,Nishihara T. Induction of the immune response to periodontopathic

bacteria and its role in the pathogenesis of periodontitis. Periodontol 2000.

1997; 14:79-111.

34. Du L, Pellen-Mussi P, Chandad F, Mouton C, Bonnaure-Mallet M Conservation of

fimbriae and the hemagglutinating adhesin HA-Ag2 among Porphyromonas

gingivalis strains and other anaerobic bacteria studied by epitope mapping

analysis. Clin Diagn Lab Immunol. 1997; 4:711-4.

35. Lamonde L, Mouton C. Alteration of erythrocyte cell shape by hemagglutinating

bacteria. J Dent Res 1988; 67:331.

36. Grenier D, Mayrand D. Proteinases In: Shah HN, Mayrand D, Genco RJ, ed.

Biology of the species Porphyromonas gingivalis. Boca Raton, FL: CRC

Press, 1993; 227-243.

37. Holt SC, Bramanti TE. Factors in virulence expression and their role in

periodontal disease pathogenesis. Crit Rev Oral Biol Med. 1991; 2:177-281.

38. Kobayashi T, Kaneko S, Tahara T, Hayakawa M, Abiko Y, Yoshie H. Antibody

responses to Porphyromonas gingivalis hemagglutinin A and outer

membrane protein in chronic periodontitis. J Periodontol. 2006; 77:364-9.

39. Rogers JE, Li F, Coatney DD, Rossa C, Bronson P, Krieder JM, Giannobile WV,

Kirkwood KL. Actinobacillus actinomycetemcomitans lipopolysaccharide-

mediated experimental bone loss model for aggressive periodontitis. .

J Periodontol. 2007; 78: 550-8.

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 61: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

48

40. Tanner AC,Haffer C,Bratthall GT,Visconti RA ,Socransky SS.A study of the

bacteria associated with advancing periodontitis in man. J Clin Periodontol.

1979 ;6 :278-307.

41. Fives-Taylor MP, Meyer HD, Mintz PK, Brissette C. Virulence factors of

Actinobacillus actinomycetemcomitans. Periodontol 2000. 1999; 20:152.

42. Lawson DA, Meyer TF. Biochemical characterization of Porphyromonas

(Bacteroides) gingivalis collagenase. Infect Immun. 1992; 60:1524-9.

43. Helgeland K, Nordby O. Cell cycle-specific growth inhibitory effect on human

gingival fibroblasts of a toxin isolated from the culture medium of

Actinobacillus actinomycetemcomitans. J Periodontal Res. 1993; 28:161-5.

44. Patel MD, Henderson B, Galgut P, Olsen I. Mechanism of the antiproliferative

action of Actinobacillus actinomycetemcomitans surface-associated

material. J Dent Res 1994; 73:793.

45. Berthold P,Forti D,Kieba IR,Rosenbloom J,Taichman NS,Lally ET Electron

immunocytochemical localization of Actinobacillus actinomycetemcomitans

leukotoxin. Oral Microbiol Immunol. 1992; 7:24-7.

46. Loesche WJ, Syed SA, Stoll J. Trypsin-like activity in subgingival plaque. A

diagnostic marker for spirochetes and periodontal disease? J Periodontol

1987; 58:266-273.

47. Wang PL, Azuma Y, Shinohara M, Ohura K, Effect of Actinobacillus

actinomycetemcomitans protease on the proliferation of gingival epithelial

cells. Oral Dis 2001; 7:233-237.

48. Gregory RL, Kim DE, Kindle JC, Hobbs LC, Lloyd DR. Immunoglobulin-

degrading enzymes in localized juvenile periodontitis. J Periodontal Res

1992; 27:176-183.

49. Saglie FR, Simon K, Merrill J, Koeffler HP. Lipopolysaccharide from

Actinobacillus actinomycetemcomitans stimulates macrophage to produce

interleukin-1 and tumor necrosis factor mRNA and protein . Oral Microbiol

Immunol 1990;5:256-262

50. Shenker BJ, Kushner ME, Tsai CC. Inhibition of fibroblast proliferation by

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 62: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

49

Actinobacillus actinomycetemcomitans. Infect Immun 1982; 38:986-992.

51. Bustin M. Revised nomenclature for high mobility group (HMG) chromosomal

proteins. Trends Biochem Sci 2001; 26: 152-3

52. Bustin M., Lehn DA, Landsman D. Structural features of the HMG chromosomal

proteins and their genes. Biochim.Biophys.Acta 1990; 1049: 2310243.

53. Chen G,Ward MF,Sama AE ,Wang H. Extracellular HMGB1 as a Proinflammatory

Cytokine. Journal of Interferon & Cytokine Research 2004; 24: 329 -333.

54. Erlandsson HH ,Andresson U. Mini-review : The nuclear protein HMGB1 as a

proinflammatory mediator. Eur J Immunol 2004; 34: 1503-12.

55. Degryse B, Virgilio M. The nuclear protein HMGB1, a new kind of chemokine?

FEBS Letters 2003; 553: 11-17.

56. Lutz W, Stetkiewicz J. High mobility group box 1 protein as a late-acting

mediator of acute lung inflammation. Int J Occup Med Environ Health.

2004;17: 245-54.

57. Andersson U, Tracey KJ. HMGB1 in sepsis. Scand J Infect Dis 2003; 35: 577-84.

58. Kokkola R, Andersson A, Mullins G, Ostberg T, Treutiger CJ, Arnold B,

Nawroth P, Andersson U, Harris RA, Harris HE. RAGE is the major receptor

for the proinflammatory activity of HMGB1 in rodent macrophages. Scand J

Immunol. 2005 ;61:1-9.

59. Inoue K, Kawahara K, Biswas KK, Ando K, Mitsudo K , Masakiyo N, Maruyama I.

HMGB1 expression by activated vascular smooth muscle cells in advanced

human atherosclerosis plaques. Cardiovascular Pathology 2007; 16: 336-

143.

60. Scaffidi P, Misteli T, Bianchi ME. Release of chromatin protein HMGB1 by

necrotic cells triggers inflammation. Nature. 2002;418:191-5.

61. Dumitriu IE, Baruah P, Valentinis B, Voll RE, Herrmann M, Nawroth PP, Arnold B,

Bianchi ME, Manfredi AA,Rovere-Querini P. Release of high mobility group

box 1 by dendritic cells controls T cell activation via the receptor for

advanced glycation end products. J Immunol. 2005 Jun 15;174(12):7506-

15.

62. El Gazzar M. HMGB1 modulates inflammatory responses in LPS-activated

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 63: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

50

macrophages. Inflamm Res. 2007;56:162-167.

63. Morimoto Y, Kawahara K, Maruyama I and Izumi Y. Expression of high mobility

group box1 (HMGB1) in gingival epithelial cells. Eur perio 2006.

64. Tiranathanagul S, Pattamapun K, Yongchaitrakul T, Pavasant P. MMP-2

activation by Actinobacillus actinomycetcmcomitans supernatant in human

PLD cells was corresponded with reduction of TIMP-2. Oral Dis

2004;10:383-388.

65. Mossman T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival;

application to proliferation and cytotoxicity assay. J Immunol Methods

1983;65:55-63.

66. Angsupokai S , Laosrisin N and Tiranathanagul S. Expression of PAR-2 in

Human Periodontal Ligament Cells Activated by Periodontopathic Bacteria.

Thesis, M.S (Periodontology) 2007.

67. Page RC, Kornman KS The pathogenesis of human periodontitis. P eriodontol

2000.1997;14:9-11.

68. Slots, J., and M. A. Listgarten. 1988. Bacteroides gingivalis, Bacteroides

intermedius and Actinobacillus actinomycetemcomitans in human

periodontal disease. J. Clin. Periodontol. 15:85093.

69. Nair, B. C., W. R. Mayberry, R. Dziak, P. P. Chen, M. J. Levine, and E.

Hausmann.. Biological effects of a purified lipopolysaccharide from

Bacteroides gingivalis. J. Periodontal Res. 198318:4(-49.

70. Koga T , Nishihara T , Fujiawara T, Nisizawa T, Okahashi N, Noguchi T and

Hamada S. Biochemical and Immunobiological Properties of

Lipopolysaccharide (LPS) from Bacteroides gingivalis and Comparison with

LPS from Escherichia coli. Infect Immun. 1985;47: 638-647.

71. Sveen K. The capacity of lipopolysaccharides from Bacteriodes, Fusobacterium

and Veillonella to produce skin inflammation and the local and generalized

Schwartzman reaction in rabbits. J Periodontal Res. 1997;12:340-350.

72. Acquaviva F, Castaldo I, Filla A, Giacchetti M, Marmolino D, Monticelli A, Pinelli

M, Saccà F and Cocozza S. Recombinant Human Erythropoietin Increases

Frataxin Protein Expression Without Increasing mRNA Expression. 2008;7:

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 64: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

51

1473-4222.

73. Ivanovski S, Li H, Haase HR, Bartold PM. Expression of bone associated

macromolecules by gingival and periodontal ligament fibroblasts.

J Periodontal Res. 2001;36:131-41.

74. Park JC, Kim YB, Kim HJ, Jang HS, Kim HS, Kim BO and Han KY. Isolation

and Characterization of Cultured Human Periodontal Ligament Fibroblast-

Specific cDNAs Biochemical and Biophysical Research Communications

2001;282:114501153.

75. Hatakeyama J ,Tamai R, Sugiyama A, Akashi S, Sugawara S and Takada H.

Contrasting responses of human gingival and periodontal ligament

fibroblasts to bacterial cell- surface components trough the CD14/Toll- like

receptor system. Oral Microbiol Immunol 2003;18:14-23

76. Wang PL, Azuma Y, Shinohara M, and Ohura K Toll-like Receptor 4-Mediated

Signal Pathway Induced by Porphyromonas gingivalis Lipopolysaccharide

in Human Gingival Fibroblasts Biochemical and Biophysical Research

Communications 2000;273:116101167.

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 65: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

ประวัติยอผูวิจัย

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity

Page 66: ª N K D U L Q Z U L Q D ε ´thesis.swu.ac.th/swuthesis/Per(M.S.)/Rungtiwa_P.pdf · ˝ # ˙"˝ 4 $ $ -1˝, ˘ ˜ ˚+ ˚(˝ ,A ε ´ ® ° ¤ » ¨ µ ¤ ® µª · ¥ µ¨ ´¥

53

���������� �����

���� ������ � ����� ������ ��� ����� ����� 29 ����� 2523 � ���!���� "��#�����!$�%#� � ���!��$& ��""'�� 832/112 �����+��!, 18 ���-� +�$�$& �"��. 29

/0���������� �0�#1�$0��� ����2�#���� 10320 �4�/#� �#�1��!��������""'�� ��"��$5 � ���!��4������""'�� 6�����������������75/�8���������8��795 �:8����/2�$;����5 �#����$���$;�!���������-�< ��8������;=7�

2.;. 2542 ��@$�;=7�������$ "�-����!$���A��5����$���$ "��#�����!$�%#�

2.;. 2547 ����/2�$;����'�:C�� "��:8����/�2$;����5 �#����$���$��!$�%#�

2.;. 2551 ���$�;�����#�'�:C�� ��0���������������$� "��#����$���$;�!���������-�<

สาํนกั

หอสม

ดุกลา

ง มหา

วทิยา

ลยัศร

นีครนิ

ทรวโิร

Cen

tral L

ibrary

Srina

khari

nwiro

t Univ

ersity