8/14/2019 Guia de interpretacinListeria

1/8

Gua de

Interpretacin

Este gua le familiarizar con los resultados de las placas 3M Petrifilm para control ambiental de Listeria.

Para mayor informacin, por favor contacte con su proveedor de productos 3M Microbiologa.

Petrifilm

Placa para control ambiental de Listeria

Las placas Petrifilm para control ambiental de Listeria (EL) consisten en un medio de cultivo listo para usar

que contiene agentes selectivos, nutrientes, un agente gelificante soluble en agua fra y un indicador

cromognico que facilita la deteccin de colonias de Listeria. Las placas Petrifilm El han sido diseadas para

anlisis ambiental y constituyen una ayuda para el control de la eficiencia de las operaciones de limpieza y

desinfeccin en las plantas. La presencia de microorganismos tipoListeria tales comoListeria innocua aporta

evidencia de que las condiciones ambientales son propicias para la ocurrencia deListeria monocytogenes. La

placa Petrifilm EL detecta la mayora de las especies deListeria presentes en el ambiente tales comoListeria

monocytogenes, Listeria innocua yListeria welshimeri.(*)

Las condiciones de limpieza o sanitizacin pueden daar los microorganismos. Se emplea agua de peptona

tamponada (BPW) como caldo de reparacin en combinacin con las placas Petrifilm al objeto de revivificar

colonias daadas o estresadas deListeria sin alterar el recuento. Este proceso se considera una fase de

reparacin y no de enriquecimiento.

1

2

* Para informacin adicional acerca de la prevalencia de las especies de Listeria, por favor, contactar con 3M Microbiologa.L. ivanovii, L. grayi/murrayi y L. seeligericrecen en esta placa pero no forman colonias tpicas.

Interpretacin Cuantitativa: Colonias deListeria en

esta placa:

8/14/2019 Guia de interpretacinListeria

2/8

3M Petrifilm Placa para control ambiental de Listeria

3a. Antes de las 30 horas de incubacin, si hay colonias

presentes pero no son de color rojo-violeta intenso(por ejemplo, gris o rosa suave como se muestra en 3a),continuar en este caso la incubacin hasta 30 horas.Las colonias que no hayan virado al rojo-violeta intensodespus del perodo de incubacin mximo de 30 h (lascolonias permanecen de color gris o rosa suave como semuestra en 3a), no deben de interpretarse comoListeria.

Interpretacin Cuantitativa: Colonias deListeria enesta placa:

8/14/2019 Guia de interpretacinListeria

3/8

3M Petrifilm Placa para control ambiental de Listeria

Interpretacin Cuantitativa: Colonias de Listeriaestimadas en esta placa: 600 est. Cuando aparece un grannmero de colonias deListeria, estimar el resultadocalculando la media del recuento de dos o ms cuadrculasrepresentativas. Determinar la media por cuadrcula ymultiplicar por 42. La superficie de inculo de la placa esde 42 cm2 aproximadamente.

Interpretacin Semi-Cuantitativa: El nivel deListeriadebe de registrarse en forma de niveles o categoras estable-cidos para la zona de muestreo y requerimientos de la planta.Por ejemplo, bajo, medio, alto o aceptable, no-aceptable.

Interpretacin Cualitativa: Listeria detectada

Interpretacin Cuantitativa: El resultado es un

incontable para Listeria (10000 ufc en esta imagen

aproximadamente).

Interpretacin Semi-Cuantitativa: El nivel deListeria

debe de registrarse en forma de niveles o categoras estable-

cidos para la zona de muestreo y requerimientos de la planta.

Por ejemplo, bajo, medio, alto o aceptable, no-aceptable.

Interpretacin Cualitativa: Listeria detectada

5. Cuando las colonias estn presentes en gran cantidad, laplaca Petrifilm EL puede mostrar muchas coloniaspequeas difciles de distinguir o un color de tono rosa-marrn en toda la placa.

4

5

6. El color de fondo puede variar debido a la presencia de

polvo, partculas y otros sedimentos de la muestraambiental, del tipo de sistema usado en la toma de lamuestra o incluso del tipo de agua de peptonatamponada empleado. Interpretar o contar comoListeria las colonias rojo-violeta intensas.

Interpretacin Cuantitativa: Colonias deListeria en

esta placa: 11 Hacer referencia a la seccin Muestreo

Cuantitativo de esta gua para el clculo del recuento de

Listeria por muestra ambiental.

Interpretacin Semi-Cuantitativa: El nivel deListeria

debe de registrarse en forma de niveles o categoras estableci-

dos para la zona de muestreo y requerimientos de la planta.

Por ejemplo, bajo, medio, alto o aceptable, no-aceptable.

Qualitative Interpretation: Listeria detectada

4. Puesto que la placa Petrifilm EL puede ser interpretadade tres maneras no se recomienda ningn rango derecuento en concreto. Interpretar el resultado (qualitativoo semi-cuantitativo) o estimar el recuento (cuantitativo)de la manera que se indica a continuacin:

6

8/14/2019 Guia de interpretacinListeria

4/8

3

Usar 10 ml de humedecedor. El agente

humedecedor puede ser agua estril,agua de peptona tamponada o caldoneutralizante tal como caldo letheen(sobre todo si existieran restos de

agentes de limpieza).

Tomar las muestras ambientalesusando un hisopo swab o equivalente,esponjas o cualquier otro dispositivopreviamente humedecido.

Mezclar y homogeneizar la muestramediante stomacher o vortex durante 1minuto aprox. Mantener la muestra atemp. amb. (20-30C) durante 1 h.,mximo 1,5 h. Mezclar nuevamente acontinuacin. Esta etapa es necesariapara la reparacin de las Listeriadaadas.

Conservar las bolsas cerradas a 8C.

Usar antes de la fecha de caducidadimpresa en la bolsa o embalaje. Enzonas de humedad alta en dondepueden producirse condensaciones,acondicionar las bolsas hasta alcanzar latemperatura ambiente antes de abrirlas.

Cerrar las bolsas ya abiertas que seestn utilizando, doblando el bordeabierto y aplicando cinta adhesiva

como muestra el dibujo.

No refrigerar las bolsas abiertas paraevitar exposiciones a la humedad.Mantener las bolsas abiertas a temp.

ambiente en lugar fresco y seco ydurante no ms de 1 mes desde laapertura. Evitar la exposicin de lasbolsas abiertas a temp. o humedadesambientales elevadas (>25C, >50%H.R.).

Colocar la placa Petrifilm EL sobre unasuperficie plana y nivelada. Levantar lapelcula superior.

Pipetear con la Pipeta Electrnica 3Mo equivalente unos 3 ml de la muestraen el centro de la pelcula inferior.Pipetear en posicin perpendicular a laplaca Petrifilm EL.

Petrifilm

3M PetrifilmPlaca para control ambiental de Listeria

Petrifilm

Petrifilm

Almacenamiento

Preparacin de la muestra

Inoculacin

1 2 3

4 5 6

7 8 9Dejar caer la pelcula superior sobre lamuestra.

Para detalles acerca de Advertencias, Precuaciones, Garantas, Responsabilidadesde 3M, Almacenamiento, Eliminacin de Residuos, e Instrucciones de Empleo, verfolleto del producto.

Aadir 2 ml (hisopo) o 5 ml (esponja)de agua de peptona tamponada estril(caldo de reparacin) a la muestra encondiciones aspticas. Mantenerel agua de peptona tamponada a20-30C.

3

No emplear ningn tipo de caldo deenriquecimiento para Listeria con estaplaca.

Instrucciones

de uso

8/14/2019 Guia de interpretacinListeria

5/8

8/14/2019 Guia de interpretacinListeria

6/8

3M Petrifilm Placa para control ambiental de Listeria

El muestreo cuantitativo de ambientes es consistente con las siguientes referencias: Standard Methods for the Examination of Dairy Products, Section 3.7D, American Public Health Association,

Washington D.C., 1992

Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, Section 3.512 and 3.521, American Public

Health Association, Washington D.C., 2001.

En el caso de que el mtodo de muestreo elegido con la Placa Petrifilm para control ambiental de

Listeria sea el mtodo cuantitativo, hacer referencia al folleto de producto, y calcular las unidadesformadoras de colonias (ufc) por rea, tal y como se indica a continuacin. Tomar en consideracin

los siguientes aspectos:

La consistencia es la clave para obtener informacin til acerca del programa de muestreo

ambiental establecido. Utilizar un procedimiento consistente cada vez que se tomen muestras.

Utilizar siempre el mismo sistema, dispositivo y accesorios para las tomas de muestra.

Definir de manera coherente el rea de muestreo en funcin de legislacin, estndares internos o

ubicacin de la zona a muestrear. Por ejemplo, muestrear un rea ms grande en lneas de

producto terminado puesto que el nmero de bacterias que pueden aparecer ser

presumiblemente bajo.

Puede encontrarse ms informacin sobre muestreo ambiental en las referencias que se citan a

continuacin y tambin en el folleto Placas 3M Petrifilm Control ambiental y de superficies.

PARA DETERMINAR la cantidad de Listeria por rea muestreada, registrar:

1) Tamao del rea muestreada

2) Volumen del lquido de hidratacin en el mtodo de muestreo

3) Volumen de agua de peptona tamponada adicionada

4) Volumen inoculado

5) Nmero de colonias contadas

APLICAR la siguiente ecuacin u hoja de clculo para determinar las ufc/rea muestreada. Ver

ejemplos en pginas siguientes. Ver Folleto de Producto e Instrucciones de Uso para detalles

completos del mtodo.

Puede determinarse el resultado por muestra, por ejemplo ufc/drenaje

A. Total ml de agua de peptona tamponada + solucin de hidratacin _____________________

B. Total ml inoculados _____________________

C. Dividir A por B _____________________

D. Nmero de colonias contadas _____________________(si el nmero de colonias es 0, insertar "

8/14/2019 Guia de interpretacinListeria

7/8

Ejemplo: Mtodo de contacto con hisopo swab

Usar un hisopo swab

(o equivalente) humedecido

con 1 ml de lquido de

hidratacin, muestrear el rea

(ver lnea A). En este caso elarea muestreada es de 50 cm2

(ver lnea F). Retornar el swab al

dispositivo estril del hisopo.

Aadir 2 ml de agua de peptona

tamponada (ver lnea A).

3

Inocular 3 ml en la placa

Petrifilm para control

ambiental de Listeria

despus de la fase de

reparacin (ver lnea B).

Contar las colonias despus

de la incubacin. Para este

ejemplo, se asume un

recuento de 50 colonias

(ver lnea D)

Interpretacin Cuantitativa

1 2 3 4

A. Total ml de agua de peptona tamponada + fluido de hidratacin _____________________

B. Total ml inoculados _____________________

C. Dividir A por B _____________________

D. Nmero de colonias contadas _____________________

E. Multiplicar C por D _____________________

F. Area muestreada _____________________

G. Dividir E por F _____________________

A

B

C

D

E

F

G

1 + 2 = 3

3

1

50

50

50 cm2

1 CFU/cm

2

Ejemplo: Mtodo de contacto con esponja

Usar una esponja humedecida

en 10 ml de lquido de

hidratacin y muestrear el rea

(ver lnea A). Para este ejemplo

el rea es de 1 pie cuadrado

(50 cm2). (Ver lnea F).

Retornar la esponja al

recipiente estril y aadir 5 ml

de agua de peptona

tamponada

(ver lnea A).

3

Inocular 3 ml en la placa

Petrifilm para control

ambiental de Listeria

despus de la fase de

reparacin (ver lnea B).

Contar las colonias despus

de la incubacin. Para este

ejemplo, se asume un

recuento de 10 colonias

(ver lnea D)

1 2 3 4

A. Total ml de agua de peptona tamponada + fluido de hidratacin _____________________

B. Total ml inoculados _____________________

C. Dividir A por B _____________________

D. Nmero de colonias contadas _____________________

E. Multiplicar C por D _____________________

F. Area muestreada _____________________

G. Dividir E por F _____________________

A

B

C

D

E

F

G

10 + 5 = 15

3

5

10

50

50 cm2

1 CFU/cm2

3M Petrifilm Placa para control ambiental de Listeria

8/14/2019 Guia de interpretacinListeria

8/8

Petrifilm y 3M son marcas registradas de 3M co.

3M Health Care Limited 2005

Comentarios Adicionales

Para mayor informacin de producto, visitar nuestra direccin web:

www.3M.com/microbiology.

3M Petrifilm Placa para control ambiental de Listeria

Departamento de Microbiologa3M Espaa, S.A.

Juan Ignacio Luca de Tena, 19-2528027 MadridSPAINTel.: +34 913216246Fax.: +34 913216328

Sello del distribuidor

Fecha Versin

Octubre 2005 1.0

Referencia del documento

EuropeLaboratoires 3M Sant

Boulevard de lOise95029 Cergy Pontoise CedexFranceTel: +33 (0) 1 30 31 85 71Fax: +33 (0) 1 30 31 85 78