manual de trabajos practicos parasitologia medica

8/9/2019 Manual de Trabajos Practicos Parasitologia Medica

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UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTALUNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTALUNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTALUNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL“FRANCISCO DE MIRANDA”“FRANCISCO DE MIRANDA”“FRANCISCO DE MIRANDA”“FRANCISCO DE MIRANDA”

AREA CIENCIAS DE LA SALUDAREA CIENCIAS DE LA SALUDAREA CIENCIAS DE LA SALUDAREA CIENCIAS DE LA SALUDPROGRAMA DE MEDICINAPROGRAMA DE MEDICINAPROGRAMA DE MEDICINAPROGRAMA DE MEDICINA

U.C.U.C.U.C.U.C. MICROBIOLOGIA IMICROBIOLOGIA IMICROBIOLOGIA IMICROBIOLOGIA I

MANUAL DE TRABAJOS PRACTICOS DEMANUAL DE TRABAJOS PRACTICOS DEMANUAL DE TRABAJOS PRACTICOS DEMANUAL DE TRABAJOS PRACTICOS DEPARASITOLOGIAPARASITOLOGIAPARASITOLOGIAPARASITOLOGIA MÉDICAMÉDICAMÉDICAMÉDICA

REALIZADO POR: LIC. YOTSABETH SAUL GARCIAREALIZADO POR: LIC. YOTSABETH SAUL GARCIAREALIZADO POR: LIC. YOTSABETH SAUL GARCIAREALIZADO POR: LIC. YOTSABETH SAUL GARCIA

SANTA ANA DE CORO – 2009


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INDICEINDICEINDICEINDICE

UNIDAD I:UNIDAD I:UNIDAD I:UNIDAD I: Generalidades……Generalidades……Generalidades……Generalidades………………….…………….…………….…………….……………………………….……………………………….……………………………….……………………………….

Normas de Bioseguridad…………………………………………………….Normas de Bioseguridad…………………………………………………….Normas de Bioseguridad…………………………………………………….Normas de Bioseguridad…………………………………………………….

Microscopio Óptico…………………………………………………………Microscopio Óptico…………………………………………………………Microscopio Óptico…………………………………………………………Microscopio Óptico…………………………………………………………

UNIDAD II: Protozoarios …….……………………………………………..UNIDAD II: Protozoarios …….……………………………………………..UNIDAD II: Protozoarios …….……………………………………………..UNIDAD II: Protozoarios …….……………………………………………..

PrPrPrPrááááctica Nº1: Protozoarios Intestinales yctica Nº1: Protozoarios Intestinales yctica Nº1: Protozoarios Intestinales yctica Nº1: Protozoarios Intestinales y Genitales…………………………Genitales…………………………Genitales…………………………Genitales…………………………

PráPráPráPráctica Nº2:ctica Nº2:ctica Nº2:ctica Nº2: Leishmania Leishmania Leishmania Leishmania , sus vectores y las Leishmani, sus vectores y las Leishmani, sus vectores y las Leishmani, sus vectores y las Leishmaniooooisis……………….isis……………….isis……………….isis……………….

PráPráPráPráctica Nº3:ctica Nº3:ctica Nº3:ctica Nº3: Trypanosoma Trypanosoma Trypanosoma Trypanosoma , sus vectores y las Tripanosomosis Americana, sus vectores y las Tripanosomosis Americana, sus vectores y las Tripanosomosis Americana, sus vectores y las Tripanosomosis Americana

y Rangeliana ………………………………………………………………... y Rangeliana ………………………………………………………………... y Rangeliana ………………………………………………………………... y Rangeliana ………………………………………………………………...

PráPráPráPráctica Nº4:ctica Nº4:ctica Nº4:ctica Nº4: Plasmodium Plasmodium Plasmodium Plasmodium , SUS VECTORES Y LAS MALARIAS, SUS VECTORES Y LAS MALARIAS, SUS VECTORES Y LAS MALARIAS, SUS VECTORES Y LAS MALARIAS HUMANAS..HUMANAS..HUMANAS..HUMANAS..

Práctica Nº 5:Práctica Nº 5:Práctica Nº 5:Práctica Nº 5: Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii, , , , y toxoplasmosis y otras coccidiosis emergentes y toxoplasmosis y otras coccidiosis emergentes y toxoplasmosis y otras coccidiosis emergentes y toxoplasmosis y otras coccidiosis emergentesen inmunosuprimidos. (Criptosporidiasis, Ciclosporiasis, Isosporiasis)en inmunosuprimidos. (Criptosporidiasis, Ciclosporiasis, Isosporiasis)en inmunosuprimidos. (Criptosporidiasis, Ciclosporiasis, Isosporiasis)en inmunosuprimidos. (Criptosporidiasis, Ciclosporiasis, Isosporiasis)…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

UNIDAD III: Helmintos …………………………………………………….UNIDAD III: Helmintos …………………………………………………….UNIDAD III: Helmintos …………………………………………………….UNIDAD III: Helmintos …………………………………………………….

Práctica Nº6:Práctica Nº6:Práctica Nº6:Práctica Nº6: Geohelmintos y Geohelmintiasis …………………………….Geohelmintos y Geohelmintiasis …………………………….Geohelmintos y Geohelmintiasis …………………………….Geohelmintos y Geohelmintiasis …………………………….

Práctica Nº 7: Biohelmintos y Biohelmintiasis …………………………….Práctica Nº 7: Biohelmintos y Biohelmintiasis …………………………….Práctica Nº 7: Biohelmintos y Biohelmintiasis …………………………….Práctica Nº 7: Biohelmintos y Biohelmintiasis …………………………….

BIBLIOGRAFIA……………………………………………………………….BIBLIOGRAFIA……………………………………………………………….BIBLIOGRAFIA……………………………………………………………….BIBLIOGRAFIA……………………………………………………………….

…………….…………….…………….……………. 3333

…………….…………….…………….……………. 4444

…………….…………….…………….……………. 6666

…………….. 10…………….. 10…………….. 10…………….. 10

…...……….. 11…...……….. 11…...……….. 11…...……….. 11

……………. 21……………. 21……………. 21……………. 21

…………… 29…………… 29…………… 29…………… 29

…………… 35…………… 35…………… 35…………… 35

……………. 41……………. 41……………. 41……………. 41

……………. 47……………. 47……………. 47……………. 47

……………. 48……………. 48……………. 48……………. 48……………. 59……………. 59……………. 59……………. 59

………………69………………69………………69………………69

Realizado or: Lic Yotsabeth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicina UNEFM. 2009 Realizado or: Lic Yotsabeth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicina UNEFM. 2009 Realizado or: Lic Yotsabeth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicina UNEFM. 2009 Realizado or: Lic Yotsabeth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicina UNEFM. 2009


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UNIDAD IUNIDAD IUNIDAD IUNIDAD IGENERALIDADESGENERALIDADESGENERALIDADESGENERALIDADES

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Normas de BioseNormas de BioseNormas de BioseNormas de Biose

ININININTRODUCCIÓTRODUCCIÓTRODUCCIÓTRODUCCIÓTodas las personas que trabajan

que contengan agentes infeccioconscientes de los peligrasociados a su manipulación;estar entrenadas en las práctrequeridas para manejar esbiológicos de una manera segur

Es por ello que antes dlas actividades prácticas, todainvolucradas (estudiantes, persprofesores) tenemos la obligaccuáles son las normas de seguriel laboratorio, de manera tal, q

realice con un riesgo mínimotanto para las personas que lopara el medio ambiente los de

El objetivo general deofrecerle al estudiante unarealice sus actividades prLaboratorio de Microbiologíaadecuada y segura.

BIOSEGURIDADBIOSEGURIDADBIOSEGURIDADBIOSEGURIDAD

La seguridad biológica

es la aplicación del conocitécnicas y de los equipos nprevenir la exposición del persolaboratorio y del medio ambipotencialmente infecciosos o Bi

• Agentes Biopeligrosos:Son todos aquellos agentesmateriales que son potencialmpara los seres humanos, losplantas. Entre ellos podemosvirus, hongos, parásitos

protozoarios), productosalergenos, priones, etc.

• Riesgo Microbiológico:En el Laboratorio de Microbiolfuentes principales de peligrosde ellos lo representa el prmuestras provenientes de unsegundo lugar el manejomicroorganismos, los cuales pconcentraciones muy elevadasa provocar una infecciónmanipulados con precaución.El Riesgo Microbiológico se enccada vez que realicemos una ac

Microbiología IMicrobiología IMicrobiología IMicrobiología I

Realizado por: Lic YotsabRealizado or: Lic YotsabRealizado or: Lic YotsabRealizado por: Lic Yotsab

uridad en el Laboratorio de Mic uridad en el Laboratorio de Mic uridad en el Laboratorio de Mic uridad en el Laboratorio de Mic

con materiales

sos deben estars potencialesademás, debenicas y técnicastos materialesa.

comenzar cons las personasonal técnico yión de conocerdad a seguir enue el trabajo se

de exposición,ejecutan comoás seres vivos.

esta lectura, esuía para quecticas en ele una manera

o bioseguridad,

iento, de lasecesarios paranal, del área deente a agentespeligrosos.

biológicos yente peligrososanimales y lasitar: bacterias,(helmintos y

recombinantes,

gía existen dosbiológicos, unocesamiento depaciente, y ene cultivos deeden alcanzarpueden llegarsi no son

uentra presentetividad práctica

en el Laboratorio de Microla cual debemos llevar

precaución, además de tentrabajo en el que seamos ca

evitar los peligros involactividades, para así podaccidentes.

• Infecciones Adquiridas en elSe dice que ocurre una coLaboratorio Microbiológimicroorganismo, capaz deentra al cuerpo de unconcentración suficiente y a

determinada, siendo capadefensas del individuo.Una Infección Adquirida(IAL) es aquella que resrealizada en el Laboratoriotanto por el operador comopersona que pudo quedaresultado de la manideterminado agente infeccio

• Vías de InfecciónLos microorganismos pu

organismo a través de: la bopiel (intacta o lesionada), lalas IAL, la ruta de entrada nla misma que cuando ladquiere en forma natural.

Las vías de contaminaciónlaboratorio se dan a través d

o La bocaComer, beber y fumar en elRealizar transferencias conningún tipo de protección.Transferencia indirecta detravés de los dedos o utens(lápices, bolígrafos, etc.).

o La pielInoculación accidentalhipodérmica u otros instrude vidrio.Cortaduras o rasguños.

o Los ojosSalpicaduras de materiales i

Transferencia indirecta detravés de los dedos contami

NorNorNorNor

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obiología obiología obiología obiología

iología, razón poras a cabo con

er un ambiente depaces de reconocerucrados con estaser evitar posibles

Laboratorio:taminación en uno, cuando unausar enfermedad,

individuo en unatravés de una ruta

z de vencer las

en el Laboratoriolta de una tareade Microbiología,por cualquier otra

r expuesta, comoulación de un

so.

den ingresar al

a, los pulmones, laconjuntiva, etc. Enes necesariamente

a enfermedad se

ás frecuentes en ele:

laboratorio.pipetas sin utilizar

microorganismos ailios contaminados

con una agujaentos punzantes o

fecciosos.

microorganismos aados.

as de Bioseguridadas de Bioseguridadas de Bioseguridadas de Bioseguridad

a UNEFM. 2009 a UNEFM. 2009 a UNEFM. 2009 a UNEFM. 2009


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El microscopio es un inóptica, que permite disting

que por su pequeñez semenos invisibles al ojo desnude los mismos una imageninvertida. Consta de dosmecánica y otra óptica.

La parte mecánica está consti

- El tubo:El tubo:El tubo:El tubo: soporta la parte óplongitud variable según el faparte superior se encuentra

la inferior el revólver coobjetivos.

- La columna o brazo:La columna o brazo:La columna o brazo:La columna o brazo: se unsuperior con el tubo y en lapie; sirve de soporte a la platornillos macrométrico y micuales permiten el despltubo.

- La platina:La platina:La platina:La platina: destinada a

preparaciones, es plana yorificio central que permiterayos luminosos, poseeaseguran la inmovilidpreparaciones y un carro ptornillos para desplazarlaslateral y antero-posterior, clogra visualizar toda la prep - El pie:El pie:El pie:El pie: tiene forma variableda estabilidad al microscopio

La parte óptica está formada

- Fuente de luz:Fuente de luz:Fuente de luz:Fuente de luz: puede ser ucon dos caras: una planapara la iluminación con luconvexa para luz artificial.dirigir los rayos luminososóptico. En los microscopincorporada, el sistema de iencuentra en el mismo.

- El condensador:El condensador:El condensador:El condensador: se encueexactamente en el eje



MICROSCOPIO OPTICOMICROSCOPIO OPTICOMICROSCOPIO OPTICOMICROSCOPIO OPTICO

trumento deir los objetos

hacen más odo, aportandoagrandada epartes: una

tuida por:

tica, tiene unaricante, en su

el ocular y en

la serie de

n en su parteinferior con eltina. Posee losrométrico, loszamiento del

soportar las

presenta unel paso de lospinzas que

d de lasovisto de dosen dirección

on lo cual seración.

y por su pese.

por:

espejo móvilue se utilizasolar y otra

Su función eshacia el eje

ios con luzluminación se

ntra colocadoóptico del

microscopio; su finalidaluz en un punto sobre la

a ser colocado el objeto.por un diafragma-iriscantidad y el ánguloluminosos y por un sisteun aparato enfocador, qpiñón y una cremallerbajar y subir el condensa

- Objetivos:Objetivos:Objetivos:Objetivos: es elaumentador del microscoformar la imagen del obj

en el inferior del tubo elleva adaptados 2-3 ó 4permite el cambio de un girar el revólver. Camarcado con su aunumérica y foco equivalepoder de amplificaciónindicado por un númeroo de :1, por ejemplo: 10indica que tal objetidiámetros.

Hay dos tipos de objetivson aquellos construidossin la interposición de otlente frontal del objetivmás usados son de 10X,inmersión son los quesumergidos en un mediocalculados, este medioaceite, agua o glicerina y97X y 100X.

- Ocular:Ocular:Ocular:Ocular: constituye el saumentador del microscolocados en la parte susu función es aumentarpor el objetivo. Pu(monocular) o doble (binusados son de 8X y 10X.El aumento o magnificacestá dado por el productocasionados por el objeEjemplo: Ocular= 10Xproporciona un aumento(Fig. Nº 1)

MicMicMicMic

th Saúl García. U.C.: Microbiología. Programa Medicith Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicith Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicith Saúl García. U.C.: Microbiología. Programa Medici

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es condensar laplatina, donde va

. Está constituidoara controlar la

de los rayosa de lentes. Poseee consiste en un, que permitenor por voluntad.

rimer elementopio, su función eseto; se encuentra

un revólver queobjetivos, lo que

o a otro con sóloa objetivo estáento, abertura

nte. El aumento os diámetros, estáseguido de una XX ó 10:1, lo queo aumenta 10

s: los secos, quepara ser usadosro medio entre la

y el objeto, los0Z y 45X. los de

se usan siemprepara el cual están generalmente es:su aumento es de

egundo elementoopio, son lenteserior del tubo yla imagen dadade ser únicoocular) y los más

ión de la imagende los aumentos

tivo y el ocular.Objetivo= 40X,

de 400X.

oscopio pticooscopio pticooscopio pticooscopio ptico



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Fig.Fig.Fig.Fig.

Disponible en: htt


º1: Partes del Microscopioº1: Partes del Microscopioº1: Partes del Microscopioº1: Partes del Microscopio ÓÓÓÓptptptpticicicic

://es.wikipedia.org/wiki/Desarrollo_del_

eth Saúl García. U.C.: Microbiología. Programa Medicieth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicieth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicieth Saúl García. U.C.: Microbiología. Programa Medici

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icroscopio pticoicroscopio Ópticoicroscopio Ópticoicroscopio ptico

icroscopio



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USO DEL MICROSCUSO DEL MICROSCUSO DEL MICROSCUSO DEL MICROSCPara examinar correcpreparación debemos estudiestructura general en pridespués los muchos y finos d

está compuesta, para lo cualvarios aumentos, ya que miees el aumento, mayor escampo que se observa, perdetalles de las diferentesviceversa.

Procedimiento:Procedimiento:Procedimiento:Procedimiento:1- Ajustar la iluminación deforma que éste quede bien illo cual se coloca el objetiaumento, se abre todo el dise sube totalmente el conden2- Montar la preparación sofijarla de tal modo que elpreparación coincida cocentral de la platina por dorayos luminosos.3- Observar lateralmente ymacrométrico, bajar el tuboobjetivo de menor aumentcerca de la preparación.4- Observar por ellentamente el tubo conmacrométrico hasta quepreparación y aclarar la imicrométrico. Si una vezimagen, la iluminación esésta puede disminuirsediafragma-iris del condensasu margen sea igual al taposterior del objetivo. Consecos, el condensador debediafragma no muy abierto.

Al encontrar una parte demerezca mayor análisis dcambiará para un aumentosiguiente manera:- Centrar en el campo la pestudiar, ya que al cambiarcampo se reduce y se corre eel objeto quede fuera del mis- Girar el revólver hasta quemayor aumento seleccionad

posición indicada.


Realizado or: Lic YotsabRealizado or: Lic YotsabRealizado or: Lic YotsabRealizado or: Lic Yotsab

OPIO OPIO OPIO OPIOtamente lar su forma y

er término yetalles de que

se requiere detras más bajol tamaño del

menores losestructuras y

l campo de talminado, para

vo de menorfragma-iris yador.bre la platina,centro de la

el orificionde pasan los

on el tornillohasta que elquede muy

cular, subirel tornillo

aparezca laagen con elobtenida la

muy intensa,cerrando el

dor hasta queaño del lentelos objetivos

star bajo y el

l campo quedetalles, se

mayor de la

rte que deseael objetivo elriesgo de queo.

el objetivo dequede en la

- Enfocar la prepamicrométrico si no se hacon el macrométrico sprocediendo de la mismel enfoque con menor au

En la medida que seaumentos, la cantidad desiendo mayor por lo quediafragma-iris y el conde Cuando se desea utilizinmersión se procede así:- Abrir el diafragma-irisel condensador.- Colocar una gota depreparación.- Colocar el objetivo de ien su posición efectiva,óptico.- Bajar cuidadosamentedel tornillo macrométrivisual lateral externo, haentre en contacto con ellámina.- Observar a través delcon mucho cuidadomicrométrico hasta quebien la preparación.Para lograr mayoresprocederá al cambio de15X o 20X, en lugar de 8

CUIDADO DEL MICUIDADO DEL MICUIDADO DEL MICUIDADO DEL MI1. Cuando no se utilizauna funda de tela quedevolverlo a su estuche.2. Cualquier suciedadderrame sobre el m

limpiarse de inmediato.3. La parte mecánica desilicón para protegerengranajes de la platintornillo macro y micraceitarse periódicamentemovilidad.4. El aceite de inmersiónobjetivo inmediatamentepara ello lo mejor es qseco especial para lentes

gasa o un paño suave qluego limpiarlo con el mi

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ación con elmovido el tubo, y

éste se movió,forma que paraento.

incrementan losluz requerida vaebe corregirse elsador.

r el objetivo de

subir al máximo

aceite sobre la

nmersión (100X)siguiendo el eje

l tubo por medioco, bajo controlta que el objetivoceite sin tocar la

ocular y enfocarcon el tornillosea posible ver

aumentos sel ocular, usando

o 10X.

ROSCOPIO ROSCOPIO ROSCOPIO ROSCOPIOebe cubrirse cono deje pelusa, o

líquido que seicroscopio debe

be limpiarse conla pintura; los, condensador yométrico, debenpara mantener su

ebe limpiarse delespués de usado,itarlo con papelo sustituirlo por

e no deje pelusa;mo material pero

icroscopio Ópticoicroscopio Ópticoicroscopio Ópticoicroscopio Óptico



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humedecido ligeramente coúltimo, secarlo con el misespecial.5. Los oculares se limpianpolvo cuidadosamente co

especial para lentes, gasa o p

ACTIVIDAD:ACTIVIDAD:ACTIVIDAD:ACTIVIDAD:En el dibujo anexo, identifiq



n xilol y poro papel seco

ara quitar elpapel seco

ño suave.

6. El microscopio, pardeberá sujetarse por laapoyarlo en la palma de l7. Cualquier desperfecorregido por personal es

e cada una de las partes indicadas.

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ser trasladado,arte del brazo ymano.

cto deberá serpecializado.

Microscopio pticoMicroscopio pticoMicroscopio pticoMicroscopio ptico



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UNIDADUNIDADUNIDADUNIDAD IIIIIIII

PROTOZOARIOSPROTOZOARIOSPROTOZOARIOSPROTOZOARIOS



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PRACTICANº1: PRPRACTICANº1: PRPRACTICANº1: PRPRACTICANº1: PR

MORFOLOGIA Y ESTRUCTUMORFOLOGIA Y ESTRUCTUMORFOLOGIA Y ESTRUCTUMORFOLOGIA Y ESTRUCTUPARASITAS DEL HOPARASITAS DEL HOPARASITAS DEL HOPARASITAS DEL HO

ComplejoComplejoComplejoComplejo Entamoeba histolyEntamoeba histolyEntamoeba histol yEntamoeba histoly

La especie E. histolytica escapacidad de invadir tejidenfermedad, mientras quedispar no es patógena.microscópico de las materpermite diferenciar estas dosE. histolytica posee lasnucleares del género Enta cariosoma compacto, peque

distribuida por la partemembrana nuclear (Fig Nº2histolytica se reconocecariosoma en el centro decromatina en gránulos de ta y regularmente dispuestos.Trofozoito:Trofozoito:Trofozoito:Trofozoito: o forma vegetativ40 micras de diámetro; cuaemite un seudópodo amptransparente que se proyectherniario hacia el exterior de

fácilmente diferenciablecitoplasma que es grseudópodo es unidireccionpartir del ectoplasma y metrofozoito se desplaza ejercsobre el resto de la célula. Ese encuentran vacuolaeritrocitos y rara vez otfagocitados.Los trofozoitos patógenos,contienen eritrocitos fag

presentan morfología similacuando se usa microscopreporte clínico es E. histolaun habiendo hematíes fagoposible la diferenciaciónmétodos inmunológicos.

Quiste:Quiste:Quiste:Quiste: organismo redondea10 a 20 micras de diámetruna membrana quísticaformación, sin inclusiones

pero ocasionalmentecromatoides y vacuolas de gl


TOZOARIOS INTESTINALES Y GTOZOARIOS INTESTINALES Y GTOZOARIOS INTESTINALES Y GTOZOARIOS INTESTINALES Y G

A DE AMIBASA DE AMIBASA DE AMIBASA DE AMIBASBRE: BRE: BRE: BRE:

ica/E. dispar ica/E. dispar ica/E. dispar ica/E. dispar: :: :

la que tiene las y producirla especie E.

El examenias fecales noespecies.característicasoeba que son:o y cromatina

interna de la. La especie E.or tener el

l núcleo y laaño uniforme

a mide de 20 ado está móvil,

lio, hialino ycomo un sacola célula, muy

el resto delnuloso. Estel, se forma adiante éste, eliendo tracción

el citoplasmas digestivas,ros elementos

generalmentecitados pero

; por lo tanto,ía de luz, eltica/E. dispar ,itados. Sólo esa través de

o u ovoide de, inmóvil, conen vía de

itoplasmáticas,

on cuerposcógeno.

DIBUJODIBUJODIBUJODIBUJO

DIBUJDIBUJDIBUJDIBUJ


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NITALES NITALES NITALES NITALES

OOOO

na UNEFM. 2009 a UNEFM. 2009 na UNEFM. 2009 a UNEFM. 2009


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Corte histológico de pCorte histológico de pCorte histológico de pCorte histológico de pcon trofozoitos decon trofozoitos decon trofozoitos decon trofozoitos dehistolytica.histolytica.histolytica.histolytica. : Se obserparcial de la paredtrofozoitos de forma renúcleo compacto, rodeaclaro de lisis separadosmucosa sana


MICROBIOLOGIA IMICROBIOLOGIA IMICROBIOLOGIA IMICROBIOLOGIA I


red intestinalred intestinalred intestinalred intestinalEntamoebaEntamoebaEntamoebaEntamoeba

a destrucciónintestinal y

dondeada conos de un halopor zonas de

Entamoeba coli Entamoeba coli Entamoeba coli Entamoeba coli

Trofozoito:Trofozoito:Trofozoito:Trofozoito: Enpermanentes presentmide 20 a 50 mimembrana fina, citosin diferencia entre enúcleo esférico romembrana tapizada i gránulos de cromirregularmente dicariosoma es grande y


Práctica Nº1: PROTOZOARIOS IPráctica Nº1: PROTOZOARIOS IPráctica Nº1: PROTOZOARIOS IPráctica Nº1: PROTOZOARIOS I

eth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo í eth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo í eth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo í eth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicia. Pro rama Medicia. Pro rama Medicia. Pro rama Medici

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coloracionesforma variada;

ras; se observaplasma granularto y endoplasma,eado por unanternamente portina gruesos estribuidos, suexcéntrico.

TESTINALES Y GENI TESTINALES Y GENI TESTINALES Y GENI TESTINALES Y GENITALES.TALES.TALES.TALES.



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Quiste:Quiste:Quiste:Quiste: En coloracionepresenta forma esférica,30 micras, se observa pde 1 a 8 núcleos co

características que eltrofozoito. Los quistpresentan cuerposfilamentosos con extrem


MORFOLOGIA Y ESTRMORFOLOGIA Y ESTRMORFOLOGIA Y ESTRMORFOLOGIA Y ESTRGiardia lamblia (in Giardia lamblia (in Giardia lamblia (in Giardia lamblia (in

Trofozoito:Trofozoito:Trofozoito:Trofozoito: Es piriforme,extremo anterior redposterior afilado; mide 1de largo. En la extre

presenta dos discos sucada lado de la línea meovalados con cariosoma

dos axonemas que rlongitudinal del cuerpo,atravesados en el cecuerpos parabasales en fLos cuatro pares de flcolorean con tinciones es


Realizado or: Lic Yo Realizado or: Lic Yo Realizado or: Lic Yo Realizado or: Lic Yotsabtsabtsabtsab

permanentesmide de 10 ared quística y

n las mismas

núcleo de sus inmaduroscromatoides

s astillados.

UCTURA DEUCTURA DEUCTURA DEUCTURA DEtestinalis) testinalis) testinalis) testinalis)

simétrico, conndeado y el0 a 20 micrasidad anterior

torios, uno aia, dos núcleosrande, central

ecorren el ejelos cuales sontro por dos

orma de coma.agelos sólo sepeciales.


Quiste:Quiste:Quiste:Quiste: Es ovalado gruesa, lisa que sueldel citoplasma, midelargo por 6 a 10contiene de 2 acariosoma grande yaxonemas, cuerposflagelos.


Práctica Nº1: PROTOZOARIOS INTPráctica Nº1: PROTOZOARIOS INTPráctica Nº1: PROTOZOARIOS INTPráctica Nº1: PROTOZOARIOS INT


13

OOOO

con membranae verse separada

a 14 micras deicras de ancho,4 núcleos conentral, restos deparabasales y

OOOO

STINALES Y GENI STINALES Y GENI STINALES Y GENI STINALES Y GENITALES.TALES.TALES.TALES.



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intestino, como sucede cuando se efectúanrectoscopias o se hace tacto rectal, estematerial es adecuado para el estudioparasitológico. Son muestras inadecuadaslas que se han mantenido por más de un día

a temperatura ambiente; las que se obtienendespués de un estudio radiográfico del tubodigestivo, en el cual se usa bario; y las quepresentan abundante cantidad de algunassustancias que se han ingerido con finesterapéuticos, como aceite, algunosantidiarreicos con bismuto, etc.

Uso de laxantes:Uso de laxantes:Uso de laxantes:Uso de laxantes: únicamente estánindicados en casos de constipación. Nodeben utilizarse de rutina, pues en las heceslíquidas llevan a una mayor dilución de loshuevos y quistes, lo que dificulta suhallazgo.

Número de muestras:Número de muestras:Número de muestras:Número de muestras: debe estudiarse másde una muestra fecal, cuando en el primerestudio no se obtiene el resultado queclínicamente se presume o cuando sesospecha una parasitosis intestinal yexámenes previos de laboratorio han sidonegativos. En amibiasis y giardiosis crónicaes aconsejable hacer dos o tres exámenesirregulares en días diferentes, debido a laeliminación irregular de quistes.

Conservación y envío de muestras fecales:Conservación y envío de muestras fecales:Conservación y envío de muestras fecales:Conservación y envío de muestras fecales:las muestras deben ser llevadas allaboratorio la más pronto posible despuésde obtenidas, pues los trofozoitos pierden,en pocas horas, las característicasmorfológicas. La putrefacción, pormultiplicación bacteriana, puede hacer quela muestra sea inadecuada después de

tiempo prolongado. Las muestras con másde un día de obtenida, favorecen laincubación de algunos huevos dehelmintos, lo cual dificulta sureconocimiento. Si es indispensableconservar la muestra para envío o examenposterior, se recomiendan varios métodos:a) Refrigeración:Refrigeración:Refrigeración:Refrigeración: este es el método más

sencillo y práctico, cuando la conservacióndebe hacerse por algunas horas o por undía. El frasco se debe colocar en el

refrigerador a 4 ºC, pero no en elcongelador.

b) Preparaciones selladas:Preparaciones selladas:Preparaciones selladas:Preparaciones selladas: puedenhacerse con vaselina o barniz de uñas,aplicados en los bordes del cubre-objeto. Seobtienen preparaciones semi-permanentescon el método de la doble laminilla, que

consiste en cubrir la muestra con unalaminilla pequeña sobre la cual se aplicabálsamo y una laminilla de mayor tamaño.c) Formol:Formol:Formol:Formol: se mezcla una cantidadaproximada de 3 g de materias fecales porcada 10 ml de formol diluido al 5 ó 10%.Este mantiene la muestra sindescomposición, disminuye el mal olor yfija los parásitos para estudio posterior.Con este método se conservan bien loshuevos de helmintos y los quistes deprotozoos.

1.1.1.1. EXAMEN COPROLOGICOEXAMEN COPROLOGICOEXAMEN COPROLOGICOEXAMEN COPROLOGICODIRECTO:DIRECTO:DIRECTO:DIRECTO:

a) Examen macroscópico:a) Examen macroscópico:a) Examen macroscópico:a) Examen macroscópico: es importantedeterminar la consistencia de las heces

y clasificarlas en líquidas, blandas oduras. El color normalmente y con dietamixta, la deposición es de color pardo omarrón más o menos oscuro en eladulto.Con dieta láctea y en los lactantes es

amarillo canario. Con dieta cárnea se hacemarrón oscuro. Una alimentación rica enverduras (espinacas especialmente) tiñe lasheces de un color verdoso, mientras que sipreponderan las patatas y el pan, las hecesse aclaran hacia un marrón amarillento. En general, las heces duras de los estreñidosson más oscuras que normalmente, y lasdeposiciones diarreicas suelen ser másclaras, aunque en esto último haynumerosas excepciones.Las heces de color Blanco-grisáceo, de colorceniza, son las heces en la acolia de las

ictericias obstructivas.Amarillentas, con diferentes matices, son lasheces en las "diarreas de fermentación".De color verde, por la biliverdina, aparecenotras veces las deposiciones por paso rápido global en las diarreas duodenales ("diarrea yeyunal" de Nothnagel).Rojizas, irregularmente, son lasdeposiciones que contienen sangre notransformada, de origen bajo (hemorroides,tumores de colon distal, etc.). La hematinapuede dar un color pardo-rojizo a las heces.De color pardo suelen ser las diarreas

gastrógenos. Pardo oscuras son las heces deputrefacción que aparecen en distintos

MICROBIOLOGIA I Práctica Nº1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENIMICROBIOLOGIA I Práctica Nº1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENIMICROBIOLOGIA I Práctica Nº1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENIMICROBIOLOGIA I Práctica Nº1: PROTOZOARIOS INTESTINALES Y GENITALES.TALES.TALES.TALES.



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procesos (colitis, cáncer, uredebidas a pleiocromia poren la ictericia hemolítica.Negruzcas y pastosas, son theces en las "melenas" -de aes decir, en las hemorra

altas.No hace falta recurrir al labola sangre inalterada es reconvista embadurnando la depde origen bajo: hemorroitampoco en los casos de heabundantes con heces negras La sangre en heces puedecáncer de esófago, vari(cirrosis hepática), ulcuscarcinoma gástrico,intestinales (tifoidea, tuberulcerosa), infarto

invaginación intestinal, cápoliposis, hemorroides.Debe observarse si existerestos alimenticios o helmint b) Examen microscópib) Examen microscópib) Examen microscópib) Examen microscópico:co:co:co:objetos se coloca separadade solución salina al 0.85%(Fig Nº3). Se cubren con p22x22 mm y se observa alobjetivo de 10X y luego

cantidad de materia fecal semodo que se pueda leerpreparación; evitar prepa gruesas o muy delgadas.móviles se observan en soluhacer la preparación se usaplicador que se descarta yen la gota con Lugol.El Lugol hace resaltar alguncomo núcleos de protozoacoloración café a los huAdemás de las formas parasiobservar elementos de orianimal que son importantesque pueden semejar parásito



ia, etc.), o lasxceso de bilis,

ípicamente lasí su nombre-,ias digestivas

ratorio cuandoocible a simplesición (sangredes, etc.), niorragias altas

.roceder de unes esofágicasastroduodenal,

ulceracionesculosis, colitis

mesentérico,

cer de colon,

moco, sangre,s.

en un porta- ente una gota

otra de Lugolrta-objetos deicroscopio concon 40X. La

controla de taltravés de laraciones muyLos parásitos

ción salina. Ala un palillo oo introducirlo

as estructuras,ios y da unaevos y larvas.arias, se debenen vegetal oe reconocer, o(Fig. Nº4).

Leucocitos:Leucocitos:Leucocitos:Leucocitos: estas células generalmente se encuenmoco y se observanenfermedades intespolimorfonucleares p

shigelosis; salmonelosis,tifoidea, colitis invasiva pulcerativa; en esta últimeosinófilos en menormononucleares oencuentran en mayor protifoidea. Algunos mactrofozoitos de amibas poseudópodos; se identifi granulosos y por ccaracterísticas de movilinuclear, que tienen las am

Eritrocitos:Eritrocitos:Eritrocitos:Eritrocitos: se observahemorragias del colon,fisuras sangrantes, etc.abundancia en el síndrom

Restos alimenticios de oRestos alimenticios de oRestos alimenticios de oRestos alimenticios de oalmidones son frecuentecomo gránulos de foirregulares. Son fácilmeporque en las preparactoman color rojo o azul grado de digestión que hno digeridos son de ccélulas y fibras vegetocasiones, formando retícpanal y a veces en formrestos vegetales debenformas parásitarias y aunno tienen importancia, pusíndromes de malabsorcidiarreas.

Restos alimenticios de orRestos alimenticios de orRestos alimenticios de orRestos alimenticios de orprincipalmente grasas y fLas primeras se present gotas de diferente tamañamarillas y las segundasamarillosos con estrías tra

Flora bacteriana:Flora bacteriana:Flora bacteriana:Flora bacteriana: siempremanera normal. A vaumentada, lo que no ti

por lo cual no debe reporbacilos cortos, delgados,

Práctica Nº1: PROTOZOARIOS IPráctica Nº1: PROTOZOARIOS INPráctica Nº1: PROTOZOARIOS IPráctica Nº1: PROTOZOARIOS IN


16

n materia fecal,ran asociadas a

en diferentesinales. Losedominan en

excepto fiebrer E. coli y colitisexisten también

proporción. Losmacrófagos se

porción en fiebrerófagos semejan

tener pequeñosan porque sonarecer de lasad y morfologíaibas.

cuando hayhemorroides yAparecen con

disentérico.

igen vegetal:igen vegetal:igen vegetal:igen vegetal: loss y se observanrma y tamañote identificados,

iones con Lugolvioleta, según elayan sufrido; loslor violeta. Las

les se ven, enulos en forma de

de espiral. Estosdiferenciarse deue muchas veceseden aparecer enn o asociarse a

igen animal:igen animal:igen animal:igen animal: sonibras musculares.n en forma de

o, trasparentes oomo rectángulossversales.

está presente deces está muy

ene importancia,

arse. Abundantescon movimiento




17/69

rápido en forma de tiracorresponder a Campyloba de diarrea en cuyo caso se rcoloración especial.

Levaduras:Levaduras:Levaduras:Levaduras: pueden obcondiciones normales, penotoriamente cuando existde la flora bacteriana, espeterapia con antibióticos.algunas veces con gemacitamaño aproximado de 2 acuando estas blastoconidiasseudomicelios, se debenpresencia de hongos.CéluCéluCéluCélulas de descamaciónlas de descamaciónlas de descamaciónlas de descamaciónpueden ver al examen cotienen significado especial.



uzón, puedenter , productorquiere de una

servarse enro aumentandesequilibrio

ialmente en laSon ovaladas,nes y de un4 micras. Sólo

se asocian aeportar como

cristales:cristales:cristales:cristales: serológico y no



17

ESTINALES Y GENI ESTINALES Y GENI ESTINALES Y GENI ESTINALES Y GENITALES.TALES.TALES.TALES.



18/69


19/69

10%, debe usarse el sulfatdensidad de 1.200.

b) Técnica de Willisb) Técnica de Willisb) Técnica de Willisb) Técnica de Willis----MolloMolloMolloMollosalurada de cloruro de sodisalurada de cloruro de sodisalurada de cloruro de sodisalurada de cloruro de sodi

técnica no requiere centrífprincipalmente, para huevosque flotan fácilmente; peropara los otros parásitos iprotozoarios. Se utilizafrecuencia en parasitologíala facilidad de realizarse eprocedimiento es como sigue- Se disuelve sal de cocina e

hasta que haya saturaciódebe tener, como mínimo,de 1.200.

- Se mezcla aproximadammaterias fecales con 10-20saturada.

- Se traslada la mezcla a uncaja de petri, que se llenahasta el borde, de modomenisco.

- Se coloca una laminilla sodurante 10 o 15 minutossobrenadante con asa o pip

- La laminilla o el materialcoloca en el porta-observarlo directamente o

c) Técnica simplificada de foc) Técnica simplificada de foc) Técnica simplificada de foc) Técnica simplificada de foprocedimiento mas utconcentrar quistes de protolarvas de helmintos. Elsiguiente:- Tome en un tubo partsolución salina isotónica yaproximadamente 10 ml.

- Agregue más o menos 1 g y mezcle bien.- Filtre por gasa doble.- Agregue 3 ml de éter, tapedestape cuidadosamente.- Centrifugue 2 minutos a 2.- Decante las tres primerrestos de materia fecal y el fo(Fig. Nº5).- Con un palillo afloje de ltubo el anillo con restos de

cuidadosamente decantesuperiores.



de zinc con

con solucióncon solucióncon solucióncon solución(NaCl) :(NaCl) :(NaCl) :(NaCl) : esta

ga y es útil,de uncinarias,también sirve

ncluyendo loscon mucha

eterinaria, porel campo. El

:agua caliente,

n; la soluciónuna densidad

ente 1 g dede la solución

ubo, probeta oon la soluciónque forme un

bre el meniscoo se toma el

ta capilar.recolectado, sebjetos, paraon Lugol.

rmol rmol rmol rmol----éter:éter:éter:éter: es elilizado paraoos, huevos yétodo es el

es iguales deormol al 10%

e materia fecal

, agite fuerte y

00 rpm.s capas (éter,rmol salino).

as paredes delaterias fecales

las tres capas

- Mezcle el sedimentocantidad de líquido quparedes del tubo y hagafresco y con Lugol, para v

Práctica Nº1: PROTOZOARIOS IPráctica Nº1: PROTOZOARIOS IPráctica Nº1: PROTOZOARIOS IPráctica Nº1: PROTOZOARIOS I

th Saúl García. U.C.: Microbiología. Programa Medicith Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicith Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicith Saúl García. U.C.: Microbiología. Programa Medici

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con la pequeñae baja por laspreparaciones enr al microscopio.




20/69

MORFOLOGIA Y ESTRUMORFOLOGIA Y ESTRUMORFOLOGIA Y ESTRUMORFOLOGIA Y ESTRUTrichomona vagi Trichomona vagi Trichomona vagi Trichomona vagi

Trofozoito:Trofozoito:Trofozoito:Trofozoito: Es piriforme u ov

30 micras de largo, presecitoplasma, y núcleo antealargado con gránulos de crdifusos, axostilo que seextremo anterior al posrebasa, se observan canteriores y un flagelo rforma la membrana ondulanextremo posterior.



CTURA DETURA DECTURA DETURA DEnalis.alis.nalis.alis.

ide, mide 10 a

ta membrana,ior grande ymatina finos yextiende del

terior el cualatro flagelosecurrente quete y no llega al


TECNICAS DE DIATECNICAS DE DIATECNICAS DE DIATECNICAS DE DIAPARASITOLOPARASITOLOPARASITOLOPARASITOLO

Las muestras a utilizarvaginales y uretrales. Pa

muestra en las mujeres despéculo estéril y seco (paciente debe evitar todantes de realizarse la tomen los hombres la mismismo paciente haciendpene para obtener la secrobtenida se coloca entre lcon solución salina al 0,8necesario buscando T.movimientos típicos.

Se pueden utilizar coloratales como rojo neutro y/o

MUESTRA DE ORINAMUESTRA DE ORINAMUESTRA DE ORINAMUESTRA DE ORINArecomendada es la primea que existe mayor

trofozoitos.Se debe recolectar en unseco, tapar y llevarlolaboratorio.Procedimiento: la oricompletamente y se pasanun tubo de centrífuga. Lude 10 a 15 minutos adescarta el sobrenadantesedimento a una lámincual será observada bajo eobjetivo de 40X, buscandoTrichomonas vaginalis Trichomonas vaginalis Trichomonas vaginalis Trichomonas vaginalis co

giratorios característicos.Cuando la movilidad delcomienza a disminuir, esla membrana ondulante.



20

NOSTICONOSTICONOSTICONOSTICOGICOGICOGICOGICOson secrecionesa la toma de la

be emplearse uno lubricado), lalavado vaginal,de la muestra y

a se la toma else presión en eleción La muestramina y laminilla,% en caso de ser

aginalis con sus

ntes de contrastetinta china.

:::: La muestrara de la mañanaoncentración de

envase limpio yrápidamente al

a se mezclade 10 a 15 ml en go, se centrifuga1000 r.p.m. Se y se transfiere el

portaobjetos, lal microscopio conlos trofozoitos desus movimientos

microorganismoposible observar

ESTINALES Y GENI ESTINALES Y GENI ESTINALES Y GENI ESTINALES Y GENITALES.TALES.TALES.TALES.



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Práctica Nº 2:Práctica Nº 2:Práctica Nº 2:Práctica Nº 2: Leish Leish Leish Leish

Los agentes etiológicos, paráLeishmania, son protopertenecen a la familia Tr

(clase Mastigophora , ordenal igual que los tripanhospedadores vertebrados epero difieren de ellos porqevolutivo sólo aparecen for y promastigotas.Se presenta bajo dos formas(Fig Nº 6) una aflageladamastigotaamastigotaamastigotaamastigota, encontrada enhombre y de los animalesusceptibles a la inoculación

una forma flagelada o prompromprompromobserva en el tubo digestivector y en los medios artificLos amastigotas son formintracelulares, aparecienmicroscopía óptica dentro dsistema fagocítico monoorganismos ovoides ddimensiones µm por 1,dependiendo de la especie. Ssiguientes elementos cemembrana celular, citdiferentes organelos un nkinetoplasto. El núcleo gehalla adosado al margenhacia uno de los polos.El kinetoplasto es una recontiene el 20%, aproxiADN total del parásito, pmitocondria, formada porcuerpo parabasal y el blprimero es mas grande ypuntiforme. Tiene forma bbastoncito corto próximoveces sumamente aplicado aLa forma flagelada o promde estudiar en materiallaboratorio, son formasalargadas o fusiformes de 11,5 a 3,5 µm de ancho, conanterior más gruesa de donflagelo de unas 15 a 25 µmextremidad posterior afiladaes abundantemente granular.


ania,ania,ania,ania, SUS VECTORES Y LAS LEISUS VECTORES Y LAS LEISUS VECTORES Y LAS LEISUS VECTORES Y LAS LEI

itos del génerozoarios que

panosomatidae

Kinetoplastida) somas poseeninvertebrados,e en su cicloas amastigotas

undamentales:denominada

los tejidos dels vertebrados,del parásito y

astigotaastigotaastigotaastigota que seo del insectoales de cultivo.s parasitarias

do a lalas células deluclear comoe pequeñas

a 2,5 µmdistinguen los

lulares: unaplasma conúcleo y unneralmente see la célula o

fibrosa, queadamente delresente en sula unión del

efaroplasto; elel segundo esciliforme o del núcleo y a

éste.stigota es fácile cultivo de

parasitariasa 25 µm por

na extremidade sale un solo

de largo y una. El citoplasma.




21

MANIO MANIO MANIO MANIOSISSISSISSIS



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Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECT

eth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía.eth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía.eth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía.eth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama MediciPro rama MediciPro rama MediciPro rama Medici

22

RES Y LAS LEISHMANIOS RES Y LAS LEISHMANIOS RES Y LAS LEISHMANIOS RES Y LAS LEISHMANIOSISISISIS

na UNEFM. 2009 na UNEFM. 2009 na UNEFM. 2009 na UNEFM. 2009


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M TODOS DE DIAGNMÉTODOS DE DIAGNMÉTODOS DE DIAGNM TODOS DE DIAGNPARASITOLOGIPARASITOLOGIPARASITOLOGIPARASITOLOGI

1. MÉTODOS1. MÉTODOS1. MÉTODOS1. MÉTODOS DIRECTODIRECTODIRECTODIRECTOSSSS::::

1.1. Raspado:1.1. Raspado:1.1. Raspado:1.1. Raspado: En las lesiiniciales sin contaminaciónLeishmaniasis cutánea (Lobtener una buena muest granular, con células del tepoca sangre y en dondemuestra con facilidad los a y extracelulares.El método clásico consisteincisión en el reborde de llesión papular o nodular, pael tejido y obtener histiocitoparasitados. La abundancindica que la muestra noenmascara o dificulta el diagSe considera que la muestrcentro de la úlcera, es pocohacer un buen diagnóstico.1.2. Impronta:1.2. Impronta:1.2. Impronta:1.2. Impronta: Otroespecialmente útil para recoaséptico para los cultivos,del borde de la lesión, es unapunción con jeringa y agueste método se inyecta 0.1solución salina amortiguadel borde y rotando la agujpara macerar el tejido idesprender las células que l(Fig Nº 7). Con el materiacualquiera de los procedimicultivos o se extiende en upara hacer uno o dos extcentímetro de diámetro, qestar seco, se colorea con Gi

otro colorante para células sSe deben tomar 2 ó 3 prepaciente y en cada muestrminimo de 100 campos c100X.

Para el diagnóstico parLeishmaniasis Viceral (LV),elección se trata de punciónmédula ósea. Con el probtenido se hacen extendid

formas amastigotes dentro dsistema retículo- endotelial



OSTICOOSTICOOSTICOOSTICOOOOO

ones cutáneasbacteriana de), es posiblea de aspecto

jido, con muyla coloraciónastigotes intra

en hacer unaúlcera, en la

a luego rasparo macrófagos

ia de sangrees ideal y seóstico.

a obtenida deleficiente para

procedimiento,lectar materialrevia limpiezaaspiración pora delgada. Enó 0.2 ml deentrando por

a varias vecesternamente yego se aspiran

l obtenido porntos, se hacenn portaobjetosndidos de une después demsa, Wright u

nguíneas.araciones porexaminar un

n objetivo de

sitológico dela muestra deesplénica y de

imer materials para buscar

las células del(segmentados,

macrófagos); la presenckinetoplasto, es lamorfológica que distingude LeishmaniaLeishmaniaLeishmaniaLeishmania de otroshongos de localización

Histplasma sp).En las biopsias de estos óobservar nidos de parásitEn sangre periférica esamastigotes.

Coloración deColoración deColoración deColoración deProcedimiento:- Colocar la preparaciónhorizontal, con el extendi- Fijar el extendido con al1-2 minutos.- Botar el fijador y dejar sposición vertical.- colocar la lámina en poscubrir con la solucipreparando una gota de cBuffer (aproximadamentelámina).- Dejar actuar por 30 ó 45- Botar el colorante sobra- Lavar con agua.- Dejar secar al aire en pen estufa a 37ºC.- Observar la prepmicroscopio óptico coinmersión.

2. M TODOS INDIRECTOM TODOS INDIRECTOM TODOS INDIRECTOM TODOS INDIRECTO

2.1. Cultivo:2.1. Cultivo:2.1. Cultivo:2.1. Cultivo: son adecrecimiento y multiplicaLos más usados son: el

MacNeal y Nicole (NNN)de Hígado y Triptosa (LIT)

Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTOPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTOPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTOPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTO


23

ia de núcleo ycaracterística

e los amastigotesprotozoarios u

intracelular (Ej.

ganos se puedenos intracelulares.

raro encontrar

iemsa: iemsa: iemsa: iemsa:

seca en posicióno hacia arriba.ohol metílico por

ecar la lámina en

ición horizontal yn de Giemsa,lorante y 1 ml de3 ml por cada

minutos.te.

osición vertical o

ración en eln objetivo de

S:S:S:S:

uados para elión del parásito.

edio de Novoy,

y el de Infusión, que son bifásico

ES Y LAS LEISHMANIOS ES Y LAS LEISHMANIOS ES Y LAS LEISHMANIOS ES Y LAS LEISHMANIOSISISISIS



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y líquido respectivamente.superficial tienen poco valofácil obtener material enasepsia, además cuando noexamen directo, los cultiv

son muy útiles en ciertos casvisceral, los más usados sonmédula ósea (mielocultivo)(hemocultivo). Estos cultivperiódicamente por unas 6 s

2.2. Inoc2.2. Inoc2.2. Inoc2.2. Inoculación deulación deulación deulación deExperimentales:Experimentales:Experimentales:Experimentales: es de mayoleishmaniasis viceral. El aniel hámster (género Cricetus)las formas superficiales sinoculación cutánea, en elplanta de las patas (Fig. Nº8)la vía intraperitoneal es lmétodo es demorado, puesde los animales puede prvarios meses, sobre todo ensuperficiales. Los materialestriturados de piel en el ccutáneas (o mucosa enferósea en la leishmaniasis visce

Tanto los cultivos, como laanimales sensibles, carecenvalor práctico, pues noempleados como métodos de

2.3.2.3.2.3.2.3. ---- XenoXenoXenoXenodiagnóstico:diagnóstico:diagnóstico:diagnóstico: consvectores naturalesmantenidos en colonias enlibres de infección. Con elloslos pacientes sospechoshospedadores vertebrados; s

ingerida existen formasLeishmania , se obtiene su



En la forma, ya que no esondiciones deay parásitos als difícilmente

os. En la formael cultivo de la y de la sangreos se revisanmanas.

AnimalesAnimalesAnimalesAnimalesutilidad en laal utilizado es

. En el caso dee prefiere laocico, cola y

. En la visceral,utilizada. El

la observaciónolongarse porlas leishmaniasnoculados son:so de formasa) y médula

ral.

inoculación ende verdaderopueden ser

rutina.

iste en utilizar(flebotominos)l laboratorio yse hace picar as u otros

i en la sangre

arasitarias demultiplicación

dentro del tubo digestivoEste método equivaleleishmania en el intestinoprefieren ninfas, que haysemanas de ayuno y

alimentarse, para favorecbuena cantidad de sangingiere entre 0.05 y 0.3evolutivo de la ninfa. Sede 10 a 12 ninfas dentrouna boca libre, cubiertutilizan 4 de estas cajas santebrazos o extremidavertebrados.

A través de la gasa, los inpicadura y chupan sanminutos aproximadamenten cuenta que la sdiferente en las distinflebotominos, por lo cuutilizar el transmisor natque en el caso de Venezuelongipalpis .Para aumentar la sensibilse repite en la misma persdías, por 3 a 6 veces.

Se prefiere emplear elartificial, utilizando sangren bolsas de látex, a travévectores pueden ingerirla.Después de 15 a 45 díassangre, los vectores sebuscar tripomastigotes o econtenido intestinal. Glectura del xenodiagnósti30,60 y 90 díasalimentación. Para la

contenido del tubo digesmasaje abdominal a la ni

Práctica Nº2: LEISHMANIA, SU Práctica Nº2: LEISHMANIA, SU Práctica Nº2: LEISHMANIA, SU Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORS VECTORS VECTORS VECTOR


24

del flebotomino.un cultivo de

e los vectores. Sen tenido algunas

estén ávidas de

r la ingestión dere. Cada insectol, según el estadoolocan alrededorde una caja, cona con gasa; sebre la piel de loses de los otros

ectos efectúan la gre durante 20e. Se debe tenersceptibilidad estas especies del se recomiendaral de la región,

la es el Lutzomyia

idad del método,ona cada 10 ó 14

xenodiagnósticovenosa citratadade las cuales los

de la succión deexaminan paraimastigotes en el

eneralmente, laco se hace a losespués de laobtención del

tivo, se hace unfa, sin presionar,

S Y LAS LEISHMANIOSISS Y LAS LEISHMANIOSISS Y LAS LEISHMANIOSISS Y LAS LEISHMANIOSIS



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o se provoca una de eccióverticalmente, utilizando uapriete la parte media. Tmacerarse el intestino de loel objeto de obtener mayo

material para estudio. Lasbuscan microscópicamente ycoloraciones para diferencitripanosomatídeos. Se pueaumentar el número deanimales vertebrados suscratónes o ratas, por incontenido intestinal o del manimales inoculados se exase hacen estudios histopxenodiagnósticos.

TECNICAS DE DIGANTECNICAS DE DIGANTECNICAS DE DIGANTECNICAS DE DIGANINMUNOL GICO Y MINMUNOL GICO Y MINMUNOL GICO Y MINMUNOL GICO Y M

1.1.1.1.1.1.1.1. INMUNOLOGICO:INMUNOLOGICO:INMUNOLOGICO:INMUNOLOGICO:

1.1. I1.1. I1.1. I1.1. Intradermorreacción dntradermorreacción dntradermorreacción dntradermorreacción des un método indirecto parde la leismaniosis y correreacción de hipersensibConsiste en la aplicación dcompuesto pos suspensión dprocedentes de cultivos, elnombre de Leishmanina.fenolizados se aplican intradpaciente en la cara internaentre 48 y 72 horas se hacpositiva si se palpa un nódude 5 mm o más, semejante alla tuberculina.Es una prueba de valor diútil en los casos no recienteslas leishmaniasis cutánea

mucosa, precisamente cuande parásitos en las lesionesreacción positiva, en un pacicutánea o mucosa activa y senfermedad, procedente dees suficiente para consideraleishmaniasis y procederespecífico, sin embrago, estasola, no es indicativo dedefinitivo. Pero, la reaccipositiva después de la curac

cree que durante toda la vidpor eso su valor disminuy



n al colocarlana pinza quembién puedevectores, con

r cantidad de

eishmanias sedeben hacersearlos de otrosde tratar de

parásitos enptibles, como

oculación delcerado. En losina la sangre,tológicos y/o

OSTICOOSTICOOSTICOOSTICOLECULAR LECULAR LECULAR LECULAR

e Montenegro:e Montenegro:e Montenegro:e Montenegro:el diagnóstico

sponde a unailidad tardía.e un antígenopromastigotes

cual recibe elstos parásitosrmicamente alel antebrazo yla lectura. Es

lo inflamatorioobservado con

gnóstico, muyde infección de

o cutánea-

do el hallazgoo es fácil. Unaente con lesiónspechosa de laona endémicael caso comol tratamientoprueba por sin diagnósticon permaneceón clínica y se

a del paciente,en casos sin

lesiones. Por otro lado, se10% de positividintradermorreacción deindividuos de zonasantecedentes de habe

enfermedad, en cuyo casuna cuidadosa evaluación

1.2. M1.2. M1.2. M1.2. Métodos serológicos:étodos serológicos:étodos serológicos:étodos serológicos:diferentes técnicas pserológico de las leishmade inmunofluorescencia i

más empleada, pero tambcomo la pruebashemaglutinación indirectdirecta, diferentes pruebasincluyendo variantesredioinmunoensayo, etdetectan anticuerpos circson muy bajos. La intiene poco valor en el dformas cutáneas de leimayor importancia en

mucocutánea. Los títulos1: 1024, pero existeentre las infeccionesespecies de Leishmania que también es un Kin Tripanosomatido . En algactivas no se logra detectuso de las pruebascomplementar elespecialmente cuando hmucosas, para evaluar laen las recaídas y encrónicas.

Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTOREPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTOREPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTOREPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORE


25

ha reportado unad de laMontenegro enendémicas sin

padecido la

estaría indicadadel paciente.

se han utilizadora el estudioniosis. La pruebadirecta (IFI) es la

én se hacen otrasde ELISA, la, la aglutinaciónde precipitación,e electroforesis,. Aunque selantes, los títulosunofluorescenciaiagnóstico de lashmaniosis, tienela leishmaniosis

arían entre 1:16eacción cruzadae las distintason Tripanosoma ,toplastida y un,unas infeccionesr anticuerpos. Elserológicas es

diagnóstico,ay metástasis ainfección latente,

las infecciones

S Y LAS LEISHMANIOS S Y LAS LEISHMANIOS S Y LAS LEISHMANIOS S Y LAS LEISHMANIOSISISISIS



26/69

26

1.3. In1.3. In1.3. In1.3. Inmunofluorescencia indirecta y lamunofluorescencia indirecta y lamunofluorescencia indirecta y lamunofluorescencia indirecta y laprueba de ELISAprueba de ELISAprueba de ELISAprueba de ELISA : detectan la presencia deanticuerpos circulantes. También se hanutilizado otras reacciones como la fijaciónde complemento y la aglutinación directa.

Todos estos procedimientos ayudan,especialmente en los casos iniciales. Existehipergammaglobulinemia la cual sedemuestra por electroforesis de proteínas;las gammaglobulinas están elevadas condisminución de la albúmina.

1.4. Fo1.4. Fo1.4. Fo1.4. Formol gelificación:rmol gelificación:rmol gelificación:rmol gelificación: es una pruebainespecífica pero con utilidad para eldiagnóstico de leishmaniasis vicerales.Consiste en la opacificación y coagulacióndel suero, cuando se le añade 1 a 2 goras deformol comercial (40%). Se acepta que lainversión en la relaciónalbúmina/globulina y, según algunosautores la aparición de globulinasanómalas, sean las causas de una reacciónpositiva. Se toma el tiempo hasta laaparición de opacidad y coagulación. Sólose da valor a las alteraciones ocurridasdurante la primera hora. La prueba esinespecífica, pues varias enfermedadespueden ocasionar las alteraciones proteicasen el suero. En lo que respecta a Kalazar,difícilmente es negativa después de 3 mesesde enfermedad y una reacción intensa antesde 10 minutos, es muy probable que seapor dicha enfermedad.Criterio de valorización:- =negativa, suero no alterado.+=dudosa, coagulación sin ipacificación++=positiva, coagulación y opacificacióndiscreta.+++=positivo fuerte, coagulación con

opacificación acentuada no total.

1.4. Reacción de fijación de complemento1.4. Reacción de fijación de complemento1.4. Reacción de fijación de complemento1.4. Reacción de fijación de complemento(RFC):(RFC):(RFC):(RFC): esta reacción puede hacerse conantígeno homólogo (L. chagasi de cultivo) oantígeno heterólogo de bacilos ácido-alcohol resistentes (M. tuberculosis y M.butiricum ), los cuales se han demostradomás útiles. Es altamente sesible (más del90%) y en Kalazar se hace positiva a las 3 ó4 semanas de comenzada la infección. Por

otro lado, tiene valor como criterio decuración, ya que se hace negativa cuando la

enfermedad cede. Tiene comoinconveniente la inespecificidad, pudiendoser positiva (cuando se usa antígenoheterólogo), en TBC, lepra, Chagas crónico y leishmaniasis tegumentaria a títulos bajos.

2. Diagnóstico Molecular:2. Diagnóstico Molecular:2. Diagnóstico Molecular:2. Diagnóstico Molecular:2.1. PCR:2.1. PCR:2.1. PCR:2.1. PCR: utilizando los métodos de labiología molecular es posible aplicar lareacción en cadena de la polimerasa (PCR PCR PCR PCR)para amplificar segmentos específicos deADN de los parásitos e identificar supresencia en una muestra. Esta técnica tiene

gran valor en tejidos en donde no ha sidoposible detectar parásitos, especialmente enlesiones de mucosas y para comprobar lainfección en los flebotominos.

Si se practica una biopsia, el tejido puedeexaminarse histológicamente, lo cual va apermitir el estudio anatomopatológico.Recientemente han sido usadas técnicassofisticadas para detección de amastigotas“in situ” , utilizando anticuerposmonoclonales para evidenciar losamastigotes, mediante pruebasinmunocitoquímicas. Además, se hautilizado la amplificación del kDNAmediante la reacción en Cadena de laPolimerasa (PCR), no solo para eldiagnóstico sino también con finestaxonómicos, caracterizando los parásitosen los tejidos.

MICROBIOLOGIA IMICROBIOLOGIA IMICROBIOLOGIA IMICROBIOLOGIA I Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSISPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSISPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSISPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSIS



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MORFOLOG A Y ESTRUMORFOLOGÍA Y ESTRUMORFOLOGÍA Y ESTRUMORFOLOG A Y ESTRUFLEBOTOMINFLEBOTOMINFLEBOTOMINFLEBOTOMIN((((Lutzomyia Lutzomyia Lutzomyia Lutzomyia sp sp p sp sp p

Los flebotominos son insect

(antenas largas) que seprimordialmente por presenthábitos hematofágicos y qdando pequeños saltos, y devista morfológico por sepequeño (1-4 mm), con antepilosas, erectas hacia arribaposeen un radio con 5 rabucales son largas y sadaptadas a la hematofagia,por las hembras, las cu

espermatecas; sus palposformados por 5 segmentos.puede mencionar dentrobiológicos más resaltantes deLeishmania, que soholometábolos, con un tipocompleto en que los estadiosdiferentes a los adultos.

El ciclo vital comprende hu4 estadios larvales de hábito

se alimentan de materia orsésiles, alimentándose losazúcares de las plantas, nhembras además de sangrenutrientes, cuya actividad generalmente en horas cnocturnas. Es interesanteexisten especies flebotomiautógenas e inclusive parten



CTURA DETURA DECTURA DETURA DESSSS....))))

s nematóceros

caracterizanar las hembrasue se muevende el punto de

de tamañonas largas, alas y hacia atrás yas. Sus piezas

e encuentranproceso hecholes tienen 2

axilares estánAsí mismo, se

de los rasgoslos vectores den insectosde desarrollo

inmaduros son

evos aguzados,terrestres que

ánica y púpasmachos de

ecesitando laséstos últimospicadora es

epusculares yencionar, quenas que son géticas.

Fig. Nº12:Fig. Nº12:Fig. Nº12:Fig. Nº12: Lutzomyia sp.Lutzomyia sp.Lutzomyia sp.Lutzomyia sp.1:genitália (x400).2:bomeyaculadores(x400). 3: palp(3ºsegmento) (x400). 5: an(x400). 6: ala (x100). MCruz, Rio de Janeiro, Vol

jul./set. 1987

Adulto MachoAdulto MachoAdulto MachoAdulto Macho dededede LLLL

Fig. Nº13:Fig. Nº13:Fig. Nº13:Fig. Nº13: Lutzomyia sp.Lutzomyia sp.Lutzomyia sp.Lutzomyia sp. – –– – HHHH

cibário (x400). 8: palpo(3ºsegmento) (x400). 10: an(x400).11:espermateca(x40(x600). 13: ala (x100). MCruz, Rio de Janeiro, Vol

jul./set. 1987

Adulto Macho deAdulto Macho deAdulto Macho deAdulto Macho de LLLL

Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORESPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORESPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORESPráctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORES


27

Holótipo machoHolótipo machoHolótipo machoHolótipo macho–

ba y ductos(x400). 4: antena

ena (5º segmento)m. Inst. Oswaldo

82(3): 395-398

tzomyia sp.tzomyia sp.tzomyia sp.tzomyia sp.

lótipo hembralótipo hembralótipo hembralótipo hembra – –– – 7:

(x400). 9: antenatena (5º segmento)). 12: espermatecaem. Inst. Oswaldo

82(3): 395-398

tzomyia sp.tzomyia sp.tzomyia sp.tzomyia sp.

Y LAS LEISHMANIOS Y LAS LEISHMANIOS Y LAS LEISHMANIOS Y LAS LEISHMANIOSISISISIS



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28

TECNICAS DE CAPTURA DETECNICAS DE CAPTURA DETECNICAS DE CAPTURA DETECNICAS DE CAPTURA DEFLEBOTOMINOSFLEBOTOMINOSFLEBOTOMINOSFLEBOTOMINOS

Se realizan capturas diurnas y nocturnas deflebotominos adultos en refugios naturales

(huecos de árboles, rocas, madrigueras deanimales, etc), en domicilios humanos y susalrededores (peridomicilio), abarcando,asimismo, áreas de cultivo.Se emplean diferentes métodos de captura:trampa lumínica de Shannon, papelaceitado, aspiración directa, cebo humano,trampa lumínica CDC (CommunicableDisease Center) y la trampa de Disney.

- La trampa lumínica de Shannon empleauna estructura rectangular (1,40cm x1,40cm x 1,10cm) construida de telablanca de sábana, la cual se puedesuspender con cuerdas a árboles. En elinterior de la misma, se coloca una lámparade luz fluorescente con baterías internassobre dos soportes. Los insectos atraídos, yasea a los colectores o hacia la fuentelumínica, se posan sobre la sábana y sesuccionan con aspiradores de boca.

- Para el empleo del método de cebohumano, las hembras flebotominas atraídassobre los colectores se aspiran con loscapturadores de vidrio.

- El método de aspiración directa consisteen realizar capturas manuales; los insectosse capturan con capturadores o aspiradoresde boca, construidos a partir de tubosrígidos de vidrio o plástico y un tubo de goma o látex flexible. Los insectos secolectan en huecos de árboles, cuevas de

animales, paredes de viviendas, gallineros,etc.

- Las trampas adhesivas denominadas papelaceitado (sticky paper) , se preparan conhojas de papel bond (28 x 22 cm) que seimpregnan con aceite de ricino, las cualesse sujetan mediante tachuelas en los sitiosdonde se sospecha existen flebotominos (Ej:huecos de árboles, refugios de anamales,paredes de viviendas humanas, gallineros).

Al cabo de 1-2 días, los papeles aceitados seretiran, y se colocan cuidadosamente en

carpetas ad hoc para su transporte allaboratorio.

- La trampa CDC está compuesta por untubo acrílico, en cuyo interior se encuentra

centrado un motor pequeño de 6 voltiospara hacer girar una hélice pequeña deplástico acoplada en su parte inferior. Porla parte de arriba del motor, se encuentraacoplado un pequeño bombillo. Elfuncionamiento tanto del motor y delbombillo, se hace mediante batería de 6voltios. En la región superior de la trampase coloca un techo acrílico, que sirve deprotección contra la lluvia y para reflejar laluz del foco; y en la parte inferior de la CDC, se acopla una malla de tul paracaprurar los fleborominos, los cualesfueron atraídos por la luz y se succionaronpor el flujo de aire generado por la hélice.

- Para la trampa de Disney, se colocanpequeños roedores (Ej: ratones albinos,hámsteres) como cebos atrayentes dentro deuna jaula pequeña (16,5cm x 18 cm x 18cm), la cual se coloca sobre una bandejametálica (47cm x 47cm) y se sujetaronmediante cable o alambre a un árbol. Sobrela superficie de la bandeja se exparcióaceite de ricino, de manera tal de atraparlos flebotominos que eran atraídos hacia losroedores. Al igual que con la técnica delpapel aceitado, al cabo de 1-2 días lasbandejas deben ser transportadas allaboratorio.

Los flebotominos capturados con lastécnicas de papel aceitado y de Disney,deben ser retirados cuidadosamente con

agujas entomológicas.Aquellos insectos capturados con lasrestantes técnicas, se transportan allaboratorio en cavas de anime con altahumedad, sacrificándose con vapores decloroformo.

En cuanto al montaje, todos los insectos seclarifican en solución de Nesbitt atemperatura ambiente durante 24 horas ydeben ser montados sobre láminas

portaobjetos en líquido de Berlese.

MICROBIOLOGIA I Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSMICROBIOLOGIA I Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSMICROBIOLOGIA I Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSMICROBIOLOGIA I Práctica Nº2: LEISHMANIA, SUS VECTORES Y LAS LEISHMANIOSISISISIS



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PRACTICA Nº3:PRACTICA Nº3:PRACTICA Nº3:PRACTICA Nº3: Tryp Tryp Tryp Tryp

Tripomastigote Sanguícola dTripomastigote Sanguícola dTripomastigote Sanguícola dTripomastigote Sanguícola dcruzi:cruzi:cruzi:cruzi: Esta forma flagelada

encuentra en sangre perifério animales infectadosvertebrados). Es alargado,tamaño alrededor de 20 micPosee un núcleo grande cecentral, y a lo largo de su cumembrana ondulante borflagelo, que se inicia en elcual es post-nuclear y gruparásito por el extremo ante y 15).


Realizado or: Lic YotsabeRealizado or: Lic YotsabeRealizado or: Lic YotsabeRealizado or: Lic Yotsabe

nosoma nosoma nosoma nosoma , SUS VECTORES Y LAS TRIPA, SUS VECTORES Y LAS TRIPA, SUS VECTORES Y LAS TRIPA, SUS VECTORES Y LAS TRIPAMERICANA Y RANGELIANA.MERICANA Y RANGELIANA.MERICANA Y RANGELIANA.MERICANA Y RANGELIANA.

Trypanosoma Trypanosoma Trypanosoma Trypanosoma

de T. cruzi se

a de humanos(hospedadoresusiforme y suas de longitud.ca de la parteerpo tiene unaeada por uninetoplasto, el

eso y sale delior (Fig. Nº 14

Nidos de AmastigotesNidos de AmastigotesNidos de AmastigotesNidos de Amastigotestripomastigote sanguícol

vertebrado, tiene predimacrófagos, célulasretículoendotelial, tejido cestriado, muscular lfrecuentemente por tejidode estas células el tripomase transforma en amastcaracteriza por ser redonkinetoplasto ante-nuaproximadamente de 1.diámetro. No poseen fl

amastigotas se aglomeracélulas formando nidos tien su morfología, a las fodel género Leishmania (Fi


Dentro de su ciclo celulinfectan al chupar la sanhuéspedes vertebrados cosanguícolas provenientperiférica. Estas ftransformaciones a lodigestivo del ve

experimentales han perevolución en tres fases: fo

th Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicith Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicinth Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicith Saúl arcía. U.C.: Microbiolo ía. Pro rama Medicin

29

OSOMOSISOSOMOSISOSOMOSISOSOMOSIS

tisulares:tisulares:tisulares:tisulares: El, en el huésped

lección por losdel sistema

rdíaco, musculariso y menosnervioso. Dentrotigote sanguícola

gote, el cual seeado u oval, conlear. Midena 4 micras de

agelo libre. Los

n dentro de lassulares, similaresrmas amastigotas. Nº 16).

r, los vectores sere del hombre o

n tripomastigotess de sangre

ormas sufrenlargo del tubotor. estudios

itido dividir sumas redondeadas



30/69

en el estómago,esferomastigotes; epimastiintestino medio, que sintensamente por divisiótripomastigotes metacíclico

para el huésped vertebrado.

TECNICAS DE DIAGNTECNICAS DE DIAGNTECNICAS DE DIAGNTECNICAS DE DIAGNPARASITOLOGIPARASITOLOGIPARASITOLOGIPARASITOLOGI

El diagnóstico diferencial dede chagas varía de acuerclínica en que se encuentre e

METODOS PARASITOLOGIMETODOS PARASITOLOGICMETODOS PARASITOLOGIMETODOS PARASITOLOGICEstos procedimientos son deperíodos de parasitemia, cofase aguda de la infeccresultados negativos no son e 1. Examen en fresco:1. Examen en fresco:1. Examen en fresco:1. Examen en fresco: tievisualizar el tripomastigoteuna gota de sangre enlaminilla. En la fase agencontrar el parásito hasta eProcedimiento:- Colocar una gota de sangde una lámina portaobjetos.- Cubrir con una laminilla c- Observar en el microscopseca de mayor aumento.Esta técnica permite evidencde parásitos vivos provistospero no proporciona detalleque garanticen la identifespecie observada.

2. Extendido coloreado:2. Extendido coloreado:2. Extendido coloreado:2. Extendido coloreado:preferentemente para

morfológico del parásito, pedel parásito por esta técnicacuando se encuentra en nTiene la ventaja de que hayde las estructuras parasitdesventaja es que debe exacampos microscópicos paraparásito.Preparación de un extendido:1- Colocar una gota pequcerca del extremo de un

limpio y desgrasado.

Práctica Nº3:Práctica Nº3:Práctica Nº3:Práctica Nº3: Trypanosoma Trypanosoma Trypanosoma Trypanosoma , S, S, S, S


denominadasotes en el

multiplicann binaria ys, infectantes

OSTICOOSTICOOSTICOOSTICOOOOO

la enfermedado a la formal paciente.

OS DIRECTOS:OS DIRECTOS:OS DIRECTOS:OS DIRECTOS:utilidad en loso sucede en la

ión, pero losxcluyentes.

e por objetosanguícola enre lámina yda se puedeun 90%.

e en el centro

breobjetos.o con objetivo

ar la presenciade movilidad,

s morfológicosicación de la

se utilizanel estudio

o la detecciónsólo es posiblemero elevado.oca distorsiónrias, pero lainarse muchosevidenciar al

:ña de sangre

portaobjetos,

2- Tomar otro portaobjedispersor y apoyarlo sobrprimer portaobjetos, con30 grados por delante dedeslizarlo hacia la gota

extienda por el borde.3- Deslizar el portaobjetoel extremo opuesto paraextienda y forme una pelí4- Dejar secar y aplicarGiemsa.5- Observar en el microsde inmersión (100X).

- Gota gruesa:Gota gruesa:Gota gruesa:Gota gruesa: tiene la ve

la probabilidad de detevolutivas de los parásitossu morfología.Procedimiento:1- Colocar una gota gpequeñas de sangre sobrlimpio y desgrasado.2- Con el ángulo de otrextiende la sangre deformando un círculo de 1de desfibrinar la muestra.

3- Dejar secar por 12 hor- Colocar el portaobjetospara su hemólisis.4- Dejar secar.5- Colorear con Giemsalcohol metílico.6- Lavar con agua cuidad7- Dejar secar al aire o en8- Observar en el microsde inmersión.

US VECTORES Y LAS TRIPANOSOMOSIS AMERICANUS VECTORES Y LAS TRIPANOSOMOSIS AMERICANUS VECTORES Y LAS TRIPANOSOMOSIS AMERICANUS VECTORES Y LAS TRIPANOSOMOSIS AMERICAN


30

tos que sirve dela superficie del

na inclinación dela gota de sangre,para que éste se

s dispersor haciaque la sangre seula delgada.la coloración de

opio con objetivo

taja de aumentar

ctar las formas, pero distorsiona

ande o 3 gotasun portaobjetos

o portaobjetos seanera uniforme,

.5 cms, con el fin

s.n agua destilada

a sin fijar con

samente.estufa a 37ºC.opio con objetivo

Y RANGELIANA. Y RANGELIANA. Y RANGELIANA. Y RANGELIANA.

na UNEFM. 2009 na UNEFM. 2009 na UNEFM. 2009 na UNEFM. 2009


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METODOS PARMETODOS PARMETODOS PARMETODOS PARINDIRECTOSINDIRECTOSINDIRECTOSINDIRECTOS:::: Estos métodobjeto multiplicar la cantiden el laboratorio, a partirmuestras del pacientevertebrados) y son más semétodos directos; sin embinconveniente de que losdemoran varias semanas.más frecuencia en la fase cróla parasitemia es mas baja.

1. Inoculaciones e1. Inoculaciones e1. Inoculaciones e1. Inoculaciones eexperimentales:experimentales:experimentales:experimentales: los animdeben proceder de coloniasinfecciones naturales por triprincipales animales de eutilizados en el laboratorio sratas. A éstos se le inyectasangre venosa citratada dcélulas blancas después dedel material procedenxenodiagnósticos, bien sea elas deyecciones o el mavectores. La inoculación sintraperitoneal, subcutáneaconjuntiva. Después de 3 ael estudio de la parasitcontinúa hasta la sexta semla inoculación inicial. La btripomastigotes sanguícolasmisma manera descrita par

en fresco coloreados. Estdiagnóstico no es de gran srecurre a él cuando se quilas especies de tripanosomaslas deyecciones de losimportancia mayor del métoestudio de virulencia deTrypanosoma.

2. - Xenodiagnóstico:Xenodiagnóstico:Xenodiagnóstico:Xenodiagnóstico: consivectores naturales

m

manual de trabajos practicos parasitologia medica

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