Investigación BásicaDía 21

Dra. Rosario López Pedrera

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ABSTRACT NUMBER: 856Integrated mRNA and microRNA Transcriptomes of Monocytes from Antiphospholipid Syndrome Patients IdentifiesMolecular Networks Related to Their Atherothrombotic Status. Modulatory Effects of In Vivo UbiquinolSupplementationCarlos Perez-Sanchez1, Laura Pérez Sánchez2, Alejandra Maria Patiño-Trives3, María Luque Tevar3, Luca Scudeler4, Alejandro Ibáñez-Costa3, Patricia Ruiz-Limon5, Yolanda Jiménez-Gómez1, Ivan Arias de la Rosa6, Maria Carmen Abalos-Aguilera6, Pedro Segui7, Nuria Barbarroja1, Jose Manuel Villalba8, Eduardo Collantes Estevez3, Maria Jose Cuadrado9, Maria Ángeles Aguirre Zamorano1 and Chary Lopez-Pedrera3,1Rheumatology service, IMIBIC/Reina Sofia Hospital/University of Cordoba, Cordoba, Spain, 4Università degli Studi di Torino, Turin, Italy, , 8Departamento de Biologia Celular, Fisiologia e Inmunología, University of Córdoba, Cordoba, Spain, 9Clinica Universidad de Navarra, Madrid, Spain

OBJETIVOS1. Caracterizar el transcriptoma y el miRNoma de monocitos de pacientes APS como células clave en la patología

aterorotrombótica

2. Evaluar el papel de los anticuerpos antifosfolípido en la regulación de estos procesos

3. Investigar el efecto beneficioso del tratamiento adyuvante con Ubiquinol (Qred) sobre el perfil trombótico de estos pacientes

CIENCIA BÁSICA

D1

METODOLOGIA D1

CIENCIA BÁSICA

1. El análisis del transcriptoma en monocitos de pacientes APS ha permitido la identificación de genes ymiRNAs asociados a la patogénesis de la enfermedad y modulados, al menos parcialmente, poranticuerpos antifosfolípido.

2. Redes específicas que integran varios microRNAs y genes controlan los procesos moleculares asociados a lapatología cardiovascular presente en estos pacientes y son susceptibles de modificación por efecto deltratamiento adyuvante con Qred.

CONCLUSIONES D1

CIENCIA BÁSICA

CIENCIA BÁSICA

ABSTRACT NUMBER: 851Integrin Mac-1 Potentiates Neutrophil Adhesion and NET Release in Antiphospholipid SyndromeGautam Sule1, William J. Kelley1, Srilakshmi Yalavarthi1, Alison Banka1, Andrew Vreede2, Omolola Eniola-Adefeso1 and JasonS. Knight3, 1University of Michigan, Ann Arbor, MI, 2Rheumatology, Department of Internal Medicine, University of Michigan, Ann Arbor, MI, 3., University of Michigan, Ann Arbor, MI

OBJETIVOS

1. Analizar la capacidad de adherencia de los neutrófilos de pacientes APS a células endoteliales en un circuito de flujo artificial.

2. Delinear posibles dianas terapéuticas mediante la identificación de las moléculas implicadas en la inducción de dicha adhesión.

Mac-1 es una integrina beta-2 heterodimérica expresadaprincipalmente por células de linaje mieloide.

D1

CIENCIA BÁSICA

Conclusiones

1. Los neutrófilos de pacientes con APS tienen un potencial de adhesión al endotelio incrementado, dependiente de la activación de Mac-1.

2. Dicho potencial podría facilitar su interacción y activación, y así como la producción de NETs en estos pacientes, promoviendo de este modo el desarrollo de eventos trombóticos.

CONCLUSIONES D1

ABSTRACT NUMBER: 846CD14 Deficiency DampensOsteoclastogenesis and Alters BoneRemodeling in a Murine Model of OsteoarthritisCheng Zhou1,2, Vu Nguyen2,3, RyanSmalley2, Nisha Sambamurthy1,2, George R. Dodge2,4 and Carla Scanzello1,2, 1Division of Rheumatology, University of Pennsylvania Perelman School of Medicine, Philadelphia, PA, 2Translational Musculoskeletal Research Center, CMC VeteransAffairs Medical Center, Philadelphia, PA, 3University of Pennsylvania Perelman Schoolof Medicine, Philadelphia, PA, 4Department of Orthopaedic Surgery, University of Pennsylvania Perelman School of Medicine, Philadelphia, PA

Osteoartritis = Inflamación crónica + infiltración macrófagos en articulación

El complejo CD14/TLR activa la inflamación y diferenciación a

osteoclastos

ObjetivoEstudio del papel del CD14 en la remodelación ósea tras un daño

articular en un modelo murino de OA con daño post-traumático en rodilla.

CIENCIA BÁSICAD1

D1

Raton WT

Raton CD14-/-

DMM(DesestabilizaciónMenisco medial)

Simulacro de

operación

No cirugía

Análisis histopatológico de cartílago y hueso (OARSI) tras 6 y 19 semanas de la cirugía:

• ANÁLISIS DENSIDAD MINERAL OSEA• ANALISIS GROSOR TRABECULAR

Purificación médula ósea de tibias y fibulas, aislamiento de células no adherentes en cultivo e inducción de diferenciación

osteoclástica (M-CSF/RANKL)• ANALISIS TRAP+ -tartrate-resistant acid phosphatase-• ANALISIS expresión Receptor calcitonina y catepsina K

METODOLOGIA D1

CIENCIA BÁSICA

CIENCIA BÁSICA

CONCLUSIONES

• La deficiencia en monocitos CD14 protege al ratón de cambios en el hueso subcondral tras daño en la articulación, y reduce la capacidad de los precursores de diferenciarse en osteoclastos.

• Es posible que el defecto en la osteoclastogénesis en esta cepa (CD14-/CD14-) esté relacionado con la capacidad de remodelado del hueso subcondral relacionada con la edad y el daño en la articulación.

D1

D1

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ABSTRACT NUMBER: 841TNFR2 Inactivation Reduces Psoriatic Inflammation in Mice Via Down-Regulating Dendritic Cell Expansion and Inhibiting IL-23/IL-17 PathwaysUnnikrishnan M Chandrasekharan1, Jennifer Harvey2, Vandana Rai3, Chad Braley4, MacKenzie Lee3, Jason Hsieh3, Ritika Jaini5, Anthony Fernandez6, Paul DiCorleto7 and M. Elaine Husni8,1Department of Cellular and Molecular Medicine, Cleveland Clinic, Cleveland, OH, 2Department of Cellular and Molecular, Cleveland Clinic, Cleveland, OH, 3Cellular and Molecular Medicine, Cleveland Clinic, Cleveland, OH, 4Department of Genomic Medicine Institute, Cleveland Clinic, Cleveland, OH, 5Cleveland Clinic, Cleveland, OH, 6Dermatology and Pathology, Cleveland Clinic, Cleveland, OH, 7Division of Research and Sponsored Programs, Kent State, kent, OH, 8Orthopedic and Rheumatologic Institute, Cleveland Clinic, Cleveland, OH

ObjetivoIdentificar el papel de los receptores 1 y 2 del TNF

en el desarrollo de psoriasis, mediante el uso de un modelo de raton con psoriasis inducida por

imiquimod (IMQ)

Anti-TNF: InfliximabAdalimumabGolimumabEtanercept

Efectos adversos mediadosPor TNF-R1• Infecciones oportunistas• Reactivación TBC• Linfomas

CIENCIA BÁSICA

IMQ – 4 mg/dia (cuatro dias)

WT TNFR1-KO TNFR2-KO

PASI (Psoriasis Area and Severity Index)• Eritema, grosor epidermico y area afectada-

• Perfil genético de biopsias de piel (qPCR)

• Inmunohistoquímica• Expansión de células inmunes en

nódulos linfáticos (FACS)

METODOLOGIA D1

CIENCIA BÁSICA

CIENCIA BÁSICA

CONCLUSIONES

• La inflamación en ratones con Artritis Psoriásica inducida es dependiente de la actividad del receptor TNFR2, responsable de la inducción de la expansión de células TH17 y, de este modo, de la producción de las citoquinas proinflamatorias IL-23 e IL-17

• La inhibición selectiva de TNFR2, reteniendo la actividad TNFR1, puede bloquear la Psoriasis y la Artritis Psoriásica, dado que ambas comparten rutas inflamatorias comunes.

• Dicha inhibición permitiría obtener una alta efectividad de la terapia anti-TNF, evitando el desarrollo de efectos secundarios graves para el paciente

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ABSTRACT NUMBER: 932Fibroblasts Senescence Is Observed in Rheumatoid and Osteoarthritic Synovial Tissues and Triggers a Pro-InflammatoryProgram Ex VivoManuel J Del Rey1, Alvaro Valin2, Alicia Usategui3, Sandra Ergueta3, Vanessa Miranda3, Jesús Fernández-Felipe3, Juan D.Cañete4, Francisco J Blanco5, Gabriel Criado3 and Jose L. Pablos6,7, 1Grupo de Enfermedades Inflamatorias y Autoinmunes, Servicio deReumatología,, Instituto de Investigación Hospital 12 de Octubre (i+12), Madrid, Spain, 2Grupo de Enfermedades Inflamatorias y Autoimmunes, Servicio deReumatología, Instituto de Investigación Hospital 12 de Octubre (i+12), Madrid, Spain, 3Grupo de Enfermedades Inflamatorias y Autoinmunes, Servicio deReumatología, Instituto de Investigación Hospital 12 de Octubre (i+12), Madrid, Spain, 4Rheumatology Department Hospital Clinic and IDIBAPS, Barcelona,Spain, Barcelona, Spain, 5Rheumatology Division (INIBIC-CHUAC), Osteoarticular and Aging Research Lab, Proteomics Unit, La Coruna, Spain, 6Servicio deReumatología, Rheumatology Department, Hospital 12 de Octubre, Spain, Madrid, Spain, 7Grupo de Enfermedades Inflamatorias y Autoinmunes, Institutode Investigación Hospital 12 de Octubre (i+12), Madrid, Spain

OBJETIVOSAnalizar la senescencia celular en fibroblastos

sinoviales y su influencia potencial en la patogénesis de la Artritis Reumatoide y la

Osteoartritis.

CIENCIA BÁSICAD1

TEJIDOS SINOVIALES DE PACIENTES AR, OA Y NO-INFLAMATORIOS:• Análisis inmunohistoquímico y mediante inmunofluorescencia de

marcadores asociados a la senescencia (p16INK4) y Nanog.• Cuantificación de fibroblastos sinoviales senescentes en cultivos (SA-𝛃𝛃-gal)

MODELO DE SENESCENCIA INDUCIDO POR ESTRÉS1. Tratamiento fibroblastos sinoviales senescentes (SF) con H2O2 o

TNF𝛂𝛂 durante 24h2. Cultivo SF durante 14d

3. Análisis marcadores de senescencia4. Nueva estimulación 24h con TNF𝛂𝛂5. Análisis en SF de expresión génica y proteica y de mediadores

inflamatorios y de senescencia (IL-6, IL-8, MMP-3, MCP-1, p16 y p21) en sobrenadantes de cultivo

METODOLOGIA D1

CIENCIA BÁSICA

CIENCIA BÁSICA

CONCLUSIONES

• El tejido sinovial en pacientes con Artritis Reumatoide y Osteoartritis contiene un alto porcentaje de Fibroblastos Sinoviales senescentes

• La senescencia inducida por estrés en fibroblastos sinoviales incrementa la producción de mediadores proinflamatorios y favorece la sensibilidad a la activación por TNFa

• La senescencia en los fibroblastos sinoviales está asociada a la activación de un fenotipo proinflamatorio que contribuye a la patogénesis de la artritis crónica

.

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CIENCIA BÁSICA

ABSTRACT NUMBER: 85Antibodies to Citrullinated Protein Antigens (ACPAs) Induce Adipose Tissue Dysfunction Contributing to the Cardiovascular Disease Risk in Rheumatoid Arthritis. Modulation By Biological DmardsNuria Barbarroja1, Ivan Arias de la Rosa2, Miriam Ruiz-Ponce3, Maria Dolores de la Rosa-Garrido3, Patricia Ruiz-Limon4, Yolanda Jiménez-Gómez1, Carlos Perez-Sanchez1, Maria Carmen Abalos-Aguilera2, Rocio Guzman-Ruiz5, Maria del Mar Malagon6, Francisco Jose Tinahones7, Eduardo Collantes-Estévez1, Chary Lopez-Pedrera3 and Alejandro Escudero-Contreras2, 1Rheumatology service, IMIBIC/Reina Sofia Hospital/University of Cordoba, Cordoba, Spain, 2Rheumatology Service, IMIBIC/Reina SofiaHospital/University of Cordoba, Cordoba, Spain, 3IMIBIC/Reina Sofia Hospital/University of Cordoba, Cordoba, Spain, 4Research Group of Endocrine Diseases, Research Laboratory. Biomedical Research Institute of Malaga (IBIMA).Virgen de la Victoria Universitary Hospital, Malaga, Spain.

OBJETIVOS1. Analizar la relación entre los ACPAs y los niveles de adipocitoquinas y la aterosclerosis en pacientes con AR2. Analizar los efectos de los ACPAs en la función del tejido adiposo, la polarización de macrófagos y la acumulación de

lípidos3. Evaluar los efectos del TCZ o el IFX sobre las alteraciones metabólicas inducidas por ACPAs sobre el tejido adiposo.

D1

CIENCIA BÁSICA

ESTUDIO EN HUMANOS:75 pacientes AR / 40 DSAnálisis niveles séricos de adipocitoquinas, inflamación, resistencia a la insulina y medida CIMT (arteriosclerosis precoz)

ESTUDIOS IN VITRO:Fibroblastos 3T3-L1 se trataron con IgGs-ACPAs o IgG-NHS purificados del suero de pacientes AR o DS, solos o en combinación con IFX o TCZ durante diferentes estadíos de diferenciación adipocitaria.

ESTUDIOS EX VIVO:Muestras de tejido adiposo subcutáneo obtenidas de pacientes obesos mediante cirugía bariátrica, se trataron ex vivo con IgGs-ACPAs o IgG-NHS solos o combinados con IFX o TCZ

Análisis de moléculas implicadas en adipogénesis, inflamación, resistencia a insulina y acumulación lipídica.

PACIENTES Y METODOS D1

ACPA

s

RA p

atie

nts

• Los pacientes AR muestran niveles séricos elevados de adipocitoquinas y marcadores inflamatorios y un porcentaje significativo muestra insulino-resistencia.

• Dichas alteraciones se asocian a los títulos de ACPAs y a un riesgo aterogénico elevado.

• Los ACPAS inducen en fibroblastos 3T3-L1 alteración de la diferenciación adipocitaria.

• El tratamiento combinado con IFX y TCZ restaura ambos procesos.

• El tratamiento de tejido adiposo de explantes con ACPAsincrementa la inflamación e inhibe la expresión de genes implicados en acumulación lipídica, adipogénesis y señalización de la insulina.

• Los FAMES biológicos revirtieron estas alteraciones metabólicas

ESTUDIO EN HUMANOS:

ESTUDIOS IN VITRO:

ESTUDIOS EX VIVO:

RESULTADOS Y CONCLUSIONES D1

CIENCIA BÁSICA

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ABSTRACT NUMBER: 766Neutrophil Extracellular Traps Are a Source of Extracellular High Mobility Group Box-1: Association with Clinical and Histopathological Features in Patients with Lupus NephritisLaura Patricia Whittall1, Diana Gómez-Martín1, Jiram Torres-Ruíz2, Alejandro Zentella Dehesa1, Miguel Tapia-Rodríguez1 and Jorge Alcocer-Varela1,1Department of Immunology and Rheumatology, Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición Salvador Zubirán, Mexico City, Mexico, 2Department of Immunology and Rheumatology, Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición, Salvador Zubirán, Mexico City, Mexico

OBJETIVOAnalizar la expresión de HMGB1 en NETs de pacientes con nefritis lúpica y su asociación con las características clínicas e

histopatológicas de la enfermedad

High Mobility Group Box-1 (HMGB1)

Alarmina, inductora de síntesis de citoquinas inflamatoriasmediante su interacción con receptores celulares (i.e. TLRs)

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CIENCIA BÁSICA

CIENCIA BÁSICA

• COHORTES: PACIENTES LES CON NEFRITIS LÚPICA CONFIRMADA POR BIOPSIA vs PACIENTES LES CON ENFERMEDAD ACTIVA (SLEDAI > 6) SIN EVIDENCIA DE NEFRITIS LUPICA

• ANALISIS DE NETOSIS Y EXPRESION DE HMGB1 EN NEUTROFILOS

• NIVELES DE HMGB1 EN SUERO

• ASOCIACION CON LA FISIOPATOLOGÍA DE LA ENFERMEDAD LUPICA

PACIENTES Y METODOS D1

CIENCIA BÁSICA

CONCLUSIONES

• Las NETs son una fuente significativa de HMGB1 extracelular en pacientes con nefritis lúpica• La correlación positiva entre HMGB1 de NETs y los hallazgos histopatológicos de la nefritis lúpica activa

proliferativa sugiere un papel de esta alarmina en la fisiopatología del daño renal en pacientes LES.

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