validatierapport rapport de validation...de nieuwe template en procedure p180 ... - stomacheren en...
TRANSCRIPT
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION
Analysemethode
Méthode d’analyse
Detectie van Salmonella spp. in monsters afkomstig van de
primaire productie
LAB 24 I-MET-034 (ISO 6579 Amendment 1: Annex D)
Techniek
Technique
Aanrijking – detectie - isolatie
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
Swabs , omgevingsstalen uit kippenhokken (stof, overschoentjes, faeces)
Datum laatste aanpassing /
Date du dernière adaption
20/06/2012
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
Overzicht van de prestatiekenmerken :
detectielimiet = 10 cfu/swabs of /25 g of /overschoentjes
De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180
De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn voor de betreffende matrices/parameters:
Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten.
Behalen van een detectielimiet van 10 cfu /swabs of /25 g of /overschoentjes
Historiek validatiedossier:
Versie Herziening
door / datum
Reden Wijzigingen
1 EH/ 06-12 Aanpassing dossier 2006 , 2008 naar
de nieuwe template en procedure
P180
Samenvoegen dossier en
aanvullen met extra
gegevens en foto’s
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 1/13
VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION
Analysemethode
Méthode d’analyse
Detectie van Salmonella spp. in monsters afkomstig van de primaire productie
I-MET-034 (ISO 6579 Amendment 1: Annex D)
Techniek
Technique
Aanrijking – detectie - isolatie
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
Swabs, omgevingsstalen uit kippenhokken (stof, overschoentjes, faeces)
Type validatie
Type de validation
Verificatie
Verantwoordelijke (Naam
en functie)
Responsable
(Nom et fonction)
Elly Harnie
Sectieverantwoordelijke biologische analyses
Opgesteld door
Rédaction par
Naam – Nom: Elly Harnie
Functie - Fonction:
Sectieverantwoordelijke biologische
analyses
Datum - Date: 20-06-2012
Handtekeningen - Signatures: get.
Medewerkers
(Naam en functie)
Collaborateurs
(Nom et fonction)
Analisten microbiologie:
K. De Greif, L. Stas, S. Vanbiesbrouck, A. Van Beversluys, C. De Schepper, M. De Mits, C.
Focquet, H. Van Remoortel, S. De Cocker
Periode van validatie
Période de validation
Start - Début:
Einde - Fin:
De validatie werd uitgevoerd in 2006 en 2008; dit document is een samenvatting van
de validatietesten en een aanvulling van het dossier als gevolg van de nieuwe
rapport-template.
Het labo was al geaccrediteerd voor de ISO 6579.
Methode goedgekeurd en
geschikt bevonden door
Méthode approuvée et jugé
convenable pour la routine
par
Naam – Nom: Ronny Martens
Functie - Fonction: QAM
Datum - Date: 20-06-2012
Handtekeningen - Signatures: get.
Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure
LAB 00 P 180.
Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB
P 00 180.
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 2/13
Samenvatting validatiegegevens – Résumé des données de validation
1. Validatieparameters / matrices
Matrices :
2006: swabs en lymfeklieren (varkens)
2008: verdere aanvulling met omgevingsstalen uit kippenhokken (stof, overschoentjes,
faeces)
Opvolging aan de hand van besmette stalen, ringtesten
Volgende parameters werden bepaald :
- Detectielimiet
Criteria:
- Detectielimiet bekomen van ongeveer 10 cfu
2. Overzicht testen
Gebruikte referenties : BCR of referentiemonster V.W.A..
2.1 Testen uitgevoerd in 2006 : lymfeklieren en swabs afkomstig van varkenskarkassen
In 2004 werd de methode Salmonella MSRV opgestart voor de analyse van monsters genomen in
kippenhokken. Er werd opleiding gevolgd bij Y. Ghafir (Ulg). Ook werd een bezoek gebracht aan het ARSIA
in Ciney bezocht waar Salmonella MSRV in routine wordt uitgevoerd. Dankzij ringanalyses georganiseerd
door het CODA zijn de analisten vertrouwd geraakt met de methode.
De methode werd nooit geïmplementeerd.
Vanaf 16 oktober 2006 wordt de methode opnieuw opgestart voor de analyse van swabs en lymfeklieren.
Op 24/08/06 werd uitleg gegeven door A. Vandenbrande (Ulg) in verband met de methode en de
monstervoorbereiding van lymfeklieren.
De MSRV methode verschilt enkel in het gebruik van het MSRV medium van de klassieke methode,
gebruikt in het labo. Daarom werd slechts een beperkte validatie uitgevoerd .
In een eerste stap werden twee proeven uitgevoerd op swabs die in het labo voor handen waren (= make-up
watjes). In een tweede stap werd een proef uitgevoerd op swabs die in de praktijk zullen gebruikt worden (=
sponsjes).
Lymfeklieren waren niet voor handen voor het valideren van de methode
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 3/13
2.1.1 Proef 1
Werkwijze
- Verdunnen van het referentiemonster (6i-0506)
o Oplossing 1: 5 x verdunnen 20 cfu / ml
o Oplossing 2: 10 x verdunnen 10 cfu / ml
- 4 steriele swabs in een Stomacherzak brengen
- 1 ml van oplossing 1 toe voegen
- 100 ml gebufferd peptonwater toevoegen.
- De zak in de Stomacher bevestigen en de inhoud schudden.
Analyseren zoals beschreven in het voorlopig werkvoorschrift MET076 (uitgavedatum 29/06/06 = versie van
in 2004) tot en met isolatie op XLD/OSCM.
Dit herhalen voor oplossing 2.
Resultaat
De proef werd door KDG uitgevoerd op 11/07/2006.
Op dit moment werd de MSRV bodem van Merck (poeder) nog gebruikt.
In het monster swabs besmet met oplossing 1 en het monster swabs besmet met oplossing 2 werd
Salmonella teruggevonden op MSRV (halo) en verder bevestigd op XLD en OSCM.
Besluit
De detectielimiet is kleiner dan 10 cfu/swabs.
2.1.2 Proef 2
In een tweede proef werd de kant en klare bodem MSRV van Biokar (Ledtechno) gebruikt (aangeraden door
Ulg op 24/08/06).
Werkwijze
- Verdunnen van het referentiemonster zodat een concentratie van 10 cfu / ml wordt verkregen.
Uitplaten van 1 ml over drie platen OSCM om te tellen (in duplo).
- Eén steriele swab in een steriele Stomacherzak brengen.
- 1 ml verdund referentiemonster toevoegen op het oppervlak van de swab.
- 100 ml gebufferd peptoonwater toevoegen.
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 4/13
- Stomacheren en verder werken zoals beschreven in het voorlopig werkvoorschrift (uitgavedatum
04/10/06).
Per persoon één monster besmetten en analyseren (tot en met het enten op XLD/OSCM).
Resultaten
De proef werd door LS, KDG en SV uitgevoerd op 04/10/06.
Er werden 9 - 10 cfu’s toegevoegd aan de swabs (telling uitgevoerd door SV).
In het monster swabs werd Salmonella teruggevonden op MSRV (halo) en verder bevestigd op XLD en
OSCM door alle analisten.
Besluit
De detectielimiet van de methode is kleiner dan 10 cfu/swabs.
2.1.3 Proef 3
In een derde proef werd de detectielimiet van de methode bepaald op de swabs die zullen gebruikt worden
bij monstername (= 1 bevochtigd sponsje in een steriele zak).
Werkwijze
- Verdunnen van het referentiemonster zodat een concentratie van 10 cfu/ml wordt verkregen.
Uitplaten van 1 ml over drie platen OSCM om te tellen (in duplo).
- Met een steriele pincet de swab uit de Stomacherzak nemen en over een deel van het oppervlak van
een stuk rauw varkensvlees wrijven (= bijbesmetting).
- De swab opnieuw in de Stomacherzak brengen.
- 1 ml van het verdund referentiemonster toevoegen op het oppervlak van de swab in de Stomacherzak
(het blanco monster wordt niet besmet).
- 100 ml gebufferd peptoonwater toevoegen.
- Stomacheren en verder werken zoals beschreven in het voorlopig werkvoorschrift (uitgavedatum
04/10/06).
Per persoon worden twee monsters besmet en geanalyseerd (tot en met het enten op XLD/OSCM). Er wordt
ook een blanco monster geanalyseerd (= 1 persoon).
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 5/13
Resultaten
De proef werd door LS, KDG en SV uitgevoerd op 10/10/06.
Er werden 9 cfu toegevoegd aan de swabs (telling uitgevoerd door KDG).
In alle monsters swabs werd Salmonella teruggevonden op MSRV (halo) en verder bevestigd op XLD en
OSCM door alle analisten. Het blanco monster was negatief.
Besluit
De detectielimiet van de methode is kleiner dan 10 cfu/swabs.
In de loop van 2006 werd overgeschakeld op een tweede versie van de bodem OSCM (verbeterde vorm).
Hiervoor werden een vijftigtal stalen uitgeplaat op OSCM en OSCM II door verschillende personen. De
resultaten kwamen overeen.
2.2 Testen uitgevoerd in 2008 : stalen genomen in kippenhokken (stof, overschoentjes, faeces)
Aanvullingen dossier 2006 naar aanleiding van een uitbreiding van de scope. Omdat de methode al gekend
was, was dit een beperkte validatie.
Omdat er geen teststalen ter beschikking waren werden voedingstalen geanalyseerd met de klassieke ISO
methode en met de MSRV methode. Dezelfde resultaten werden bekomen (zie onderstaande tabel).
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 6/13
Analist Datum Monsternummer Resultaat MSRV Resultaat ISO
LS 02/12/08 08490087 + +
08490126 - -
MDM 03/12/08
08490728 - -
08490460 - -
08490539 - -
08490544 - -
AVB 03/12/08 08490544 - -
08490460 - -
SV 05/12/08
08491338 - -
08491431 - -
08491449 - -
KDG 09/12/08 08491791 - -
08491835 - -
SDC 10/12/08
08500676 - -
08500677 - -
08500750 - -
HVR 12/12/08
08501410 - -
08501412 - -
08501443 - -
08501080 - -
CDS 12/12/08
08501080 - -
08501410 - -
08501412 - -
08501443 - -
Ook werden swabs besmet en geanalyseerd om de detectielimiet opnieuw te bepalen.
De detectielimiet bedroeg 10 cfu/swabs (er werden door 3 personen swabs besmet rond detectielimiet en
geanalyseerd).
Analist Datum Resultaat
HVR 15/12/08 +
CDS 16/12/08 +
MDM 16/12/08 +
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 7/13
2.3 Aanvulling aan de hand van ringtesten en besmette monsters
De resultaten werden aangevuld aan de hand van besmette monsters en proefmonsters.
Tabel overzicht besmette monsters
Datum Matrix Besmettingsniveau Analist Blanco staal Besmet staal
17/11/2009 overschoentjes 10 cfu CF - +
+
27/01/2010 Faeces (25g)
10040479
10 cfu KDG - +
29/01/2010 Faeces (25g)
10041439
10 cfu LS - +
Faeces (25g)
10041495
10 cfu - +
09/11/2011 overschoentjes 10 cfu AVB - +
30/05/2012 Stof (25g) 10 cfu KDG - +
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 8/13
Tabel overzicht proefmonsters
Datum Monsternummer Matrix Analisten Resultaat 1 Resultaat 2
12/10/2009 09411455 Stof Chantal/Stefanie - -
16/10/2009 09421380 Overschoentjes - -
09421381 Stof - -
09421412 Faeces - -
09421413 Stof - -
09421477 Faeces - -
09421478 Stof - -
17/11/2009 09470142 Faeces - -
19/11/2009 09470968 Faeces Chantal/Anja - -
09470969 Stof - -
09471056 Faeces - -
09471069 Faeces - -
09471290 Faeces - -
09471293 Faeces - -
26/11/2009 09480950 Overschoentjes Chantal/Stefanie + +
09481230 Overschoentjes - -
09481315 Overschoentjes - -
27/11/2009 09481530 Overschoentjes Chantal/Liesbeth - -
18/03/2011 11111784 Faeces Stefanie/Liesbeth - -
11111785 Stof - -
11111787 Faeces - -
11111788 Stof + +
11111789 Overschoentjes - -
Er werd deelgenomen aan ringtesten in 2009, 2010, 2011 (CODA; 20 stalen per ringtest); er werden goede
resultaten bekomen.
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 9/13
3. Algemeen besluit
In onderstaande tabel is een samenvatting aanwezig van de besmette stalen; De detectielimiet van de
methode is 10 cfu/swabs , /25 g faeces of overschoentjes = OK.
Er werden 24 voedingsstalen parallel met de ISO methode uitgevoerd en dezelfde resultaten werden
bekomen.
Er werden ook 23 stalen door twee personen geanalyseerd en dezelfde resultaten werden bekomen.
Er werd deelgenomen aan ringtesten in 2009, 2010, 2011 (CODA; 20 stalen per ringtest); er werden goede
resultaten bekomen.
Datum matrix Besmettingsniveau Analist Blanco staal Besmet staal
11/07/2006 swabs 20 cfu/swabs KDG - +
10 cfu/swabs KDG +
04/10/2006 swabs 9-10 cfu/swabs KDG - +
LS +
SV +
10/10/2006 swabs 9 cfu/swabs KDG - +
LS +
SV +
15/12/2008 overschoentjes 10 cfu /
overschoentjes
HVR - +
CDS +
MDM +
17/11/2009 overschoentjes 10 cfu /
overschoentjes
CF - +
+
27/01/2010 Faeces
10040479
10 cfu/25g KDG - +
29/01/2010 Faeces
10041439
10 cfu/25g LS - +
Faeces
10041495
10 cfu/25g - +
09/11/2011 overschoentjes 10 cfu /
overschoentjes
AVB - +
30/05/2012 stof 10 cfu/25g KDG - +
Verdere opvolging van het dossier gebeurt aan de hand van:
- Referenties (elke reeks positieve controle; afwisselende stammen)
- Besmette monsters (tweedelijnscontrole)
- Ringtest (jaarlijks)
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 10/13
4. Foto’s methode
Hieronder volgen verschillende foto’s van de methodiek.
Initiële stap: overbrengen staal in een monsternamezak
Toevoegen gebufferd peptonwater
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 11/13
Na incubatie: enten MSRV
Isolatie positieve stalen op XLD / OSCM (Brilliance Salmonella)
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 12/13
Voorbeeld positieve platen XLD /OSCM (Brilliance Salmonella)
Positieve stalen worden bevestigd aan de hand van een biochemische test
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 13/13
Laatste stap: aflezen biochemische test en doorgeven resultaat