9 native-page法による絶滅危惧植物分類の試み

5
1 はじめに げ、 しい してきた。しかし、 されている れてい が多く、 態学 異が より 大きいため、 にあたる してしまう しい、 いうこ をいつ 感じてい た。そうした に、 、しか 々が以 から てきたミクリ ある、 いうこ されている つけ、こ づいた み、そ を確 きる する。 2 研究の目的 において、 による ちろん、それに 較以 し、さらにそれら を確 したい。こ れが わから いた めに まれて られていく、 多く から っていくこ きるように る。 3 研究の方法 、一 に DNA 較する えられ るが、 えられた えてみれ するこ ある。 ため、DNA 映されている 較する によるこ にした。ここ により、 アイソザイムを し、 較する するこ にした。 タンパク あり、 DNA により まってしまう。ほ アイソザイム れる、 る異 するこ られている。そ アイソ ザイム によって をしているため、 するこ によりアイソザイムを 較するこ きる。 pHによって変わ り、 、アルカリ に帯 る。 において 、帯 によって せるため、泳 する 違いによってアイソザ イムを するこ きる。泳 して ポリアクリルアミド・ゲル(Poly AcrlamideGel いた。 (ElectropHoresis 、一 いられている、 く変 せたタンパク いるSDS PAGE あり、 さえ ある。 しかし がら、こ をタンパク する スポットに対 する か、 しい。 ンパク (Native まま し、活 いて みを する Native PAGE するこ にした。 1いる して 95%エタノールを ませたペ ーパータオル いてから した。また、 多く けるため し、 ・イオン した 、オートクレーブ した。 した 学グレード、あるい された いたが、そ 多く されているSigma Aldorich ある。 による けるた タンパク するため、 する きに ずポリエチレン 袋、また ゴム 袋を した。 ア pHを つため、 よく いられている、以 10 トリス をつくり、 ─   ─ 99 9 Native-PAGE法による絶滅危惧植物分類の試み

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2
3
DNA
95 Sigma-Aldorich pH 10
99
4B29cm 8cm1235g710 31cm2770g10617cm 464g
4B1345cmA 12720g7 A2241cm6540g 101237cm3420g
1013cm 10B
9363 A57cmB 79cm 3.57.0g
464 1223cm2350g
536.5cm7 57.5cm
72.5g
5 4
2 2.31278
10
3
4a 100 46 111745
5 0.40.5m
6
7
10mA 3020mA
37
2 GOT
LAP SKDH ADH LDH MDH
G6PDH6
FDH GDH
4
Rm

1GOT GOT . AC
A 2002
B 2003
101
4 mol/l)M 4 s t a c k i n g buffer(50ml) A 1M HC1 48ml
Trizmabase 36.6g TEMED 0.23ml
Trizmabase 5.98g 100ml C 29.2g
BIS 0.8g 100ml F
Trizmabase 6.0g 28.8g
1000ml pH8.3 G 0.14g 100ml G' 10 g 9ml
1000ml) reservoirbuffer pH4.3 0.2M PHospHate bufferpH 7 .5 )
0.1M Tris-HCI pH8.0 0.2M Tris-HCI pH8.0 0.1M Tris-HCI pH7.0 0.2M L-L-Asparticacid 2M KOH 4.0 L-Ieucyl-B-napHthylamide 1M DL- 2M NaOH 1.0Magnesium chloride 6
0.1BPB) 0.2M Tris-0.2M Maleate,pH3.8 NAD
NADP


5 20
1530μl


10mA 3020mA
37
2 GOT
LAP SKDH ADH LDH MDH
G6PDH6
FDH GDH
4
Rm

1GOT GOT . AC
A 2002
B 2003
101
4 mol/l)M 4 s t a c k i n g buffer(50ml) A 1M HC1 48ml
Trizmabase 36.6g TEMED 0.23ml
Trizmabase 5.98g 100ml C 29.2g
BIS 0.8g 100ml
G' 10 g 9ml
1000ml) reservoirbuffer
pH4.3 0.2M PHospHate bufferpH 7 .5 )
0.1M Tris-HCI pH8.0 0.2M Tris-HCI pH8.0 0.1M Tris-HCI pH7.0 0.2M L-L-Asparticacid 2M KOH 4.0 L-Ieucyl-B-napHthylamide 1M DL- 2M NaOH 1.0Magnesium chloride 6
0.1BPB) 0.2M Tris-0.2M Maleate,pH3.8 NAD
NADP


5 20
1530μl


7GPDHFDHLDH GPDHFDHLDH

8 NativePAGE
5
1
2MDH GDH
3
103
e100GOT GOT GOTGOT
2ADH ADH ADH
E ADH1
fastF
3MDH MDH
4SKDH SKDHF
4F
5GDH GDH 2 GDH1
6LAP
7GPDHFDHLDH GPDHFDHLDH

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2MDH GDH
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2ADH ADH

ADH
E ADH1
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3MDH MDH
4SKDH SKDHF
4F
5GDH GDH 2 GDH1
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