alergeni - // · noack & co je meĎunarodna tehnička marketinška tvrtka, specijalizirana za...

Noack & Co Aktiengesellschaft AUSTRIA BULGARIA CROATIA CZECH REPUBLIC HUNGARY POLAND ROMANIA SERBIA SLOVAKIA SLOVENIA

Alergeni

tehnike testiranja u proizvodnji i laboratoriju

praktična primjena rapid 3D gluten testa

Podravka, 29.09.2011.


NOACK & Co je meĎunarodna tehnička marketinška tvrtka, specijalizirana

za distribuciju i implementaciju inovativnih proizvoda i novih tehnologija na

područjima:

Tko smo mi...

• Agro Food dijagnostika

• Veterinarska dijagnostika

• Analitički instrumenti

• Veterinarski lijekovi

• Aditivi za stočnu hranu


Priča o uspjehu... 1980 osnovan NOACK u Švicarskoj, predstavništva u Austriji

1989 NOACK MaĎarska.

1990 NOACK Poland Sp.z.o.o. i NOACK Croatia (predstavništva)

1991 NOACK Češka, NOACK Slovačka i

NOACK Rumunjska.

1992 NOACK Bugarska.

1998 Otkup - NOACK Austrija - nezavisno

dioničko društvo

2006 NOACK Hrvatska d.o.o.

2008 SAFEED Rusija

2009 NOACK & Co South East d.o.o; Srbija


Struktura tvrtke

NOACK & CO

AG Beč

NOACK PL Varšava

NOACK CZ Prag

NOACK H Budimpešta

NOACK South East

Novi Sad

NOACK BG Sofija

NOACK RO Bukurešt

NOACK HR Zagreb

NOACK SK Bratislava

105 visoko obrazovanih ljudi za Vašu podršku!


NOACK Teritorij

Veliko područje - 253 mil. ljudi -18.219.339 km2


Misija...

Trdicija izvrsnosti

• Široki asortiman proizvoda

• Long term supplier relation = stable supply chain

Usluga – ključ uspjeha

Postavljanje viših standarada

• Povećanje produktivnosti

• Veza kupac - stručnjak

• Povjerljiv odnos sa klijentima

Stručnost – ključ uspjeha


Profil dobavljača

Analytical

Instruments

• 3M (A)

• Advanced Instruments (USA)

• Delta Instruments (NL)

• NIR-Online (D)

• Q-Interline (DK)

• Zeutec (D)

Veterinary

Diagnostics

• BioChek (NL/UK)

• Coris Bioconcept

(B)

• ID VET (F)

• Ingenasa (E)

• LSI (F)

• Prionics (CH)

Animal Health

• Andersen (E)

Animal Feed

• Biochem (D)

• Borregaard LignoTech (N)

• Celtic Sea Minerals (IRL)

• CJ Europe GmbH (ID)

• Danisco Animal Nutrition (DK)

• Dr. Pieper (D)

• Format (D)

• Garant (A)

• Hamlet Protein (DK)

• Kemira (SF)

• Kemira ChemSolutions (NL)

• Likra (A)

• Miavit (D)

• Nutrifeed (NL)

• Nutrion (E)

• Suomen Rehu (SF)

• Tekpro (UK)

• Volac (NL)

Agro-Food

Diagnostics

• Biokar (F)

• 3M (A)

• CDR-Mediared (I)

• Europroxima (NL)

• Immunolab (D)

• Ingenasa (E)

• Lab. Hormonology (B)

• LabRobot (DK)

• Megazyme (IRL)

• Möller & Schmelz (D)

• Neogen Europe (UK)

• Orion (SF)

• Unisensor (B)


Agro-Food Dijagnostika

Koncept • Mikrobiologija

– Klasične podloge (dehidrirane i gotove)

– Dodaci i peptoni

– Alternativne metode

• Kontrola higijene

– Kontaktne pločice za površine i tekućine

– Brisevi na bazi proteina

– Brisevi na bazi ATP-a

• Kemijske analize

– Mikotoksini

– Ostaci lijekova

– GMO

– Vitamini

• Patvorenje hrane

– Identifikacija vrste (meso, mlijeko)

• Alergeni

• Enzimatske analize

– Šećeri, alkohol, kiseline...

• Oprema

– Čitači

– Luminometar

Orion

Diagnostica


Naš dobavljač:

• ELISA dijagnostički testovi za analizu hrane

Mikotoksini

• Agriscreen

• Veratox

• Reveal

Proteini/Alergeni

• Kikiriki, lješnjak, badem, jaja, mlijeko, histamin, soja, gluten

Animalne bjelančevine

• vrste mesa,mesno-koštano brašno u stočnoj hrani

Patogeni Salmonella,E.coli;Listeria

GMO

• Cry9C, CP4

• Imuno-afinitetne kolone (mikotoksini ;GMO )

www.neogen.com


Što je preosjetljivost na hranu

• Sve vrste pretjeranih reakcija organizma na hranu

alergije i intolerancija

• Intolerancija proizlazi iz neprobavljivosti ili

neresorbcije hrane ili neke komponente u hrani

• ne uključuje imunološki sustav

• posljedica su nedostatka enzima ili reakcija na neke

prirodne toksične spojeve u namirnici

• farmakološke reakcije


Što je alergija ?

• nepravilno funkcioniranje imunološkog sustava

• imunološki sustav prepoznaje neki sastojak

hrane kao štetan

• sudjelovanje IgE antitijela (imunoglobulin E)

• oslobaĎanje histamina, prostaglandina

• trenutne ili nekoliko sati nakon dodira sa alergenom

• 6-8 % djece i 2-4 % odraslih


Kako liječiti alergije ?

• Nema lijeka

• Cilj liječenja je izbjegavati odreĎene namirnice

• Primjereno označavanje namirnica

• Kontrola označavanja

• Označavanje je zakonski odreĎeno


Zakonske osnove za označavanje alergena

• ZAKON O HRANI (NN 46/07,NN 55/11)

• PRAVILNIK O HRANI BEZ GLUTENA ( NN 83/2010)

• PRAVILNIK O OZNAČAVANJU ,REKLAMIRANJU I PREZENTIRANJU HRANE

( NN 63/11, NN 79/11)

• HR RASFF


Namirnice koje se moraju označavati kao

alergeni – Big 8 * žitarice koje sadrže gluten (pšenica, raž, ječam, zob, pir, kamut ili

njihovi hibridi te proizvodi od istih…)

* rakovi i proizvodi od rakova

* jaja i proizvodi od jaja

* riba i proizvodi od riba

* kikiriki i proizvodi od kikirikija

* soja i proizvodi od soje

* mlijeko i proizvodi od mlijeka (uključujući i laktozu)

* koštuničavo - orašasto voće - ne odnosi se na kokosov orah ili pine nut

pinjoli orašasti plodovi bora

* celer i proizvodi od celera

* gorušica i proizvodi od gorušice

* sjeme sezama i proizvodi od sjemena sezama

* sumporni dioksid i sulfiti u koncentraciji većoj od 10 mg/kg ili 10 mg/l

izraženi kao SO2.


Novi smjerovi EU-VITAL

• EU-VITAL European Voluntary Incidental Trace alergen Labelling

definira postupke proizvoĎača sukladno prisutnim nivoima alergena

level 1 =white ,labelling not required

level 2 =blue,labelling required “contain traces of...”

level 3=red ,labelling required “contains as ingridients ...”

• Predloženi postupci temelje preporukama Europske i meĎunarodne

grupe znanstvenih experata iz područja utjecaja alergena na zdravlje

• slični koncepti primjenjuju se u Švicarskoj i Japanu , Australija ,

Novi Zeland


Novi smjerovi EU-VITAL

uključuje alergene prema smjernicama 2007/68/EC and 2000/13/EC

Jedinice su izražene kao ukupni protein alergena /ukupna hrana [ppm]

alergen LOAELs(mg total protein)

Milk 0.36-3.6 LOAEL= lowest observed adverse effect level :lowest dose/

Egg 0.13-1.0 concentracion of an allergenic food component,found

Soy 88-522 by clinical trails,that produces an adverse effect on

Fish 1-100 allergenic individuals

Peanut 0.25-10

Tree nuts 0.02-7.5

Sesame analog peanut

Crustances analog peanut www.eu-vital.org

Gluten 20-100


Upravljanje rizikom

• procjenjivanje vjerojatnosti unakrsne kontaminacije u svakom od koraka proizvodnog

procesa (odabir sirovina do prodaje gotovih proizvoda)

uvoĎenje upravljanja alergenima = proširenje postojeće DPP

uposlenici

pakiranje

upravljanje

alergenima

sirovine i

lanac nabave

proizvodni prostori,

oprema i postupci

čišćenje

razvoj novih

proizvoda i

reformulacije


Elementi PKA A. razvoj proizvoda: koncepcija proizvoda , formuliranje, izvor sirovina

B. sirovine: specifikacija ,audit dobavljača ,dostavna vozila ,skladišna

oprema

C. proizvodni proces: posuĎe,ostali alati i oprema ,namjenske linije &

skladišta ,prašina i kontrola zraka

D. planiranje: HACCP plan ,proizvodi bez alergena prvi u proizv.

potpuna sanitacija nakon proizvoda sa alergenima

E. sanitacija: dokumentacija i verifikacija čišćenja

F. testiranje: sirovine,poluproizvodi,povrat,brisevi,ispirna voda ,prve

serije proizvoda ,reklamacije


Kada koristiti testove za alergene A. Za istraživanje tzv. cross-kontaminacije u

industriji:

– zbog neadekvatnog čišćenja

– zbog sirovina koje se koriste u proizvodnji

– zbog postupaka proizvodnje u industriji

B. Za validaciju tzv. plana kontrole alergena, ukoliko takav postoji u industriji (ACP)

C. Za provjeru SSOP-a i dobre proizvoĎačke prakse (GMP-a)


PREPORUČENE KONTROLNE TOČKE ZA VALIDACIJU

STRATEGIJE KONTROLE ALERGENA

a. čišćenje – sve površine koje dolaze u kontakt sa alergenima

– posuĎe za transport

– alati za čišćenje

– alati za uzimanje uzoraka tijekom proizvodnje

– prve serije proizvoda (push-through)

– povrat/lom

– završna ispirna voda

b. sastojci i sirovine – svaki sastojak deriviran iz sirovine koja sadrži aleregne ili je bio u mogućem kontaktu

sa alergenom

– sve prirodne i umjetne arome, začini i aditivi koji mogu sadržavati alergene ili su mogli biti u kontaktu s njima

– svaki prethodno netestirani proizvod kojemu je promijenjena formulacija

c. gotovi i poluproizvodi – prva serija nakon korištenja linije za proizvodnju proizvoda koji sadrže alergene

– proizvodi koje se deklarira sa „može sadržavati“ kako bi se potvrdila opravdanost deklariranja

– odgovor na reklamaciju kupaca

– svi poluproizvodi sa linije nakon proizvodnje proizvoda koji sadrže alergene supstance


Metode detekcije

U proizvodnji

ATP: dobar pokazatelj higijenskog statusa i čistoće

indirektan rezultat – ne potvrĎuje prisustvo proteina (alergena)

ne korelira sa specifičnim testovima (ELISA)

Testovi za detekciju ostataka proteina :u obliku brisa za detekciju

ostataka proteina, uključujući potencijalno alergene proteinske rezidue

(jaje,mlijeko 10-20 µg ,kikiriki 25-50 µg ,gluten, soja,badem 20-40 µg )

ELISA –imunokromatografija Reveal 3 D

mikrojažice Alert


Metode detekcije Analitičke metode

IMUNOLOŠKE METODE

Kvalitativne Kvantitativne

Latreal flow- imunokromatogafija ELISA

Imunobloting

imunoelektroforeza

DNA –bazirane metode

Kvalitativne Kvantitativne

qPCR ( real time polymerase chain reaction )

OSTALE

Biokemijske ( enzimatski testovi )

Mass spectroscopy


Neogen proizvodi za kontrolu alergena

• Alert – Qualitative (screening) S-ELISA assay

Kikiriki Jaja Mlijeko Badem Gluten Soja

• Rapid Reveal 3D – single-step lateral flow immuno-chromatographic assay

Badem Gluten Lješnjak Školjke Kazein Jaja Kikiriki Soja

• Veratox – Quantitative S-ELISA assay

Kikiriki Jaja Mlijeko Lješnjak Badem Gluten Histamin Soja Mustard

• Biokits –Quantitives S-ELISA

Badem Kazein Jaja Gluten Kikiriki Lješnjak Sezam Soja

Orah Školjke


Neogen Alert

•ELISA test, vizualno očitavanje, na osnovi razlike u boji uzorka

i kontrole (5 ppm za badem, jaje, mlijeko, kikiriki;

10 ppm za gliadin)

•procjena pozitivno/negativno nakon 30 minuta

•Jednostavni za uporabu

•Rezultati za 30 min

•Za testiranje sirovina, konačnog

proizvoda i obrisaka

•Sastav kita: ekstrakcijski pufer,

poznata kontrola , reagensi i

materijal potreban za 20 testova


Neogen Alert


Rapid Reveal 3 D

Kontrola na licu mjesta •Visoke specifičnosti & osjetljivosti •Jednostavni za uporabu •Široke primjene : kontrola sirovine,poluproizvoda i konačnog

proizvoda obrisci radnih površina ispirci CIP validacija programa upravljanja alergenima Reveal 3D predstavlja “on-site” i “real-time” kontrolu uspostavljenih planova upravljanja alergenima u proizvodnji od primitka sirovine do isporuke gotovog proizvoda


Veratox • Potpuno kvantitativni rezultati iz

korištenje tzv. sendvič ELISA oblika.

• Potreban je čitač mikro jažica i

multikanalna pipeta.

• Do 90 minuta ukupnog vremena

testiranja.

• Analiza do 38 uzoraka po testu.

• Mogu se testirati sirovine i proizvod u

bilo kojoj fazi u proizvodnji te također

brisevi iz okoliša nakon provedenog

CIP postupka .

Limit / raspon kvantifikacije Kontrole Matriks Detekcija

Vrijeme testiranja

Br. testova u kitu

BADEM VERATOX Quantitative Almond Allergen Test

2,5 - 25 ppm 0, 2.5, 5, 10, 25 ppm

Prehrambeni proizvodi StatFax reader >30 48

JAJA

VERATOX Quantitative Egg Allergen Test

2,5 - 25 ppm 0, 2.5, 5, 10, 25 ppm

Prehrambeni proizvodi kao tjestenina, umaci za salate, mješavine za kolače i sladoledi.

StatFax reader >30 48

GLIADIN VERATOX Quantitative Gliadin Test 5 - 50 ppm 0, 5, 10, 20, 50 ppm

CIP-ispirci, gotovi proizvodi


GLIADIN VERATOX Quantitative Gliadin R5 Test

2.5 - 40 ppm 0, 2.5, 5, 10, 20, 40 ppm

CIP-ispirci, gotovi proizvodi


HISTAMIN VERATOX Quantitative Histamine Test

2,5 - 50 ppm 0, 2.5, 5, 10, 20, 50 ppm

Scombroid species of fish, such as tuna, bluefish, mahi-mahi.


KIKIRIKI

VERATOX Quantitative Peanut Allergen Test

2,5 - 25 ppm 0, 2.5, 5, 10, 25 ppm.

Prehrambeni proizvodi (keksi, krekeri, čokolada, sladoled, žitarice).


LJEŠNJAK

VERATOX Quantitative Hazelnut Allergen Test

2,5 - 25 ppm 0, 2.5, 5, 10, 25 ppm

Prehrambeni proizvodi kao keksi, čokolada, sladoled, žitarica . StatFax reader >30 48

MLIJEKO

VERATOX Total Milk Allergen Quantitative Test

2,5 - 25 ppm 0, 2.5, 5, 10, 25 ppm

Hrana npr. Sokovi, mješavine za kolače, keksi, umaci i sorbet.


SOYA

VERATOX Quantitative Soy Flour Allergen Test

2,5 - 25 ppm 0, 2.5, 5, 10, 25 ppm

Prehrambeni proizvodi kao keksi, krekeri, čokolada, sladoled, žitarice.



Veartox

Gliadin R5 Lješnjak Jaja Milk Mustard

Reproducibility %

• -intraassay <10 3.3 2.8 4.6 3.5

• -interassay <10 3.9 3.6 7.2 4.1

Linearity r2 >0.98 >0.98 >0.98 >0.98 >0.98

Crossreactivity NO NO NO NO canola,reapseed

Stability (month) >6 >6 >8 >6 >6


Veratox


Veartox


Biokit

•Novi proizvodi u Neogen portfoliu za

ispitivanje alergena :

BLG, Kazein ,sesam,školjke, orah

•Direktna S- ELISA

•Vrlo visoke osjetljivosti

•Format 48 i 96 testova (duplikat i

kontrole )

•Trajanje testa sa ekstrakcijom 2-5 h


Praktična primjena 3D gluten testa


Visually

Clean ?

Specific Allergen

Test to Verify

Allergen Clean ?

Manufacture

Food

Yes

IN-PROCESS CLEANING VALIDATION

Possible Control Points:

1. Visual inspection 2. Environmental monitoring of

production equipment

and/or rinse water to verify effective cleaning

3. Testing Final product to

ensure allergen levels below thresholds

No

Yes

Specific

Allergen Test

to Verify

2.

1.

2.

No

Re-Clean

3. Please note: Procedures used for cleaning should always be validated and

re-validated if there are any changes


Rapid Reveal 3 D

• kada nije potrebano utvrditi točnu koncentraciju te je samo potrebno utvrditi da li je alergen prisutan u proizvodu ili nije

• kao metoda za odreĎivanje rizika u proizvodnji.

• kao metoda za potvrdu stanja prije početka proizvodnje, kada je moguća neposredna korektivna aktivnost

• kao dio sanitacijskog SOP-a

• kada su prostor u laboratoriju i oprema

limitirajući faktori

• kada su brzina i jednostavnost provedbe testa odlučujući.


Rapid Reveal 3 D 1. Detkcija 8 najvažnijih alergena u hrani 2. Test format: jednostavan za rukovanje , tri linije detekcije 3. Dizajniran za uporabu na licu mjesta, uroni i testiraj , nema potrebe za nikakvom opremom 4. Sastav kita:ekstrakcijski pufer, test,bris ( sve za 10 uzoraka ) 5. Limiti detekcije :parts per million (µg/g) 6. Uzorci : hrana i obrisci površina 7. Vrijeme testiranja : <10 min. po uzorku uključujudi ekstrakciju


Rapid Reveal 3 D granice detekcije zavisne su od vrste matriksa- za svaki matriks potrebna

validacija

Reveal 3D testovi najučinkovitiji su za testiranje prehrambenih poluproizvoda,

gotovih proizvoda i obrisaka radnih površina

* Granice detekcije Reveal 3-D Tests

Reveal 3-

D 1ppm 5ppm 10ppm 20ppm >50ppm

Gluten Biscuit Baby Formula Dark Chocolate

Kazein Chocolate Cake Margarine Red wine

Lješnjak Milk chocolate Breakfast cereal Dark chocolate

Kikiriki Chocolate coated

roll

Praline crispy bite

bar Chicken Nugget

Badem Dark Chocolate Yoghurt Tomato Sauce

Školjke Vegetable Oil Mayonnaise Minced White Fish

Jaja Margarine /

Dark Chocolate Fish Cakes Ice-cream

Soja Pork Sausage Margarine Ice-cream


Uzorkovanje

• Sirovine, poluproizvodi ,konačni proizvod:

500 g promješati 50 g samljeti odvojiti

• CIP ispirci ( 10 ml) 0.25 ml

• Obrisci radnih površina,opreme:

nakon čišćenja prije proizvodnje

posebni brisevi i ekstrakcijski

pripremiti ekstrakcijsku otopinu(PBS) ili koristiti već pripremljenu otopinu

uzorkovanje unakrsnim potezima 10x10 cm

PBS bufer+uzorak = extrakt

Proper Swabbing

Techniques

Swab area = 4 X 4

16 square inches

4”

Proper Swabbing Technique:

a) Pressure so that there is a slight

bend in the swab shaft.

b) Area: 4 x 4” from corner to corner in

cross hatch pattern.

c) Rotate swab 360° to cover entire tip.


Postupak

• 1.priprema reagensa ( ostaviti na sobnoj temperaturi 30 min)

2.uzimanje uzorka 3.dodatak pufer 4. promiješati 5. testiranje

• 6.očitati nakon 5 min

• No line at O, faint orJ JAKO POZITIVNO –nema linije na O

POZITIVNO –linija iznad T (det.limit)

NEGATIVNO –nema linije na T

linija kontrole C uvijek mora biti vidljiva


Zaključak

• ELISA je trenutno najprimjenjivija metoda u ispitivanju alergena

Jednostavna brza jeftina

• Rapid Reveal test za proizvodnju-detekcija on site analiza

• ELISA Veratox,Biokit -laboratorijska analiza za potvrdu i

potpunu sigurnost konačnog proizvoda


Mi ne prodajemo samo proizvode –

Mi nudimo rješenja!

Hvala na Pažnji!

Gordana Rožić,dr.vet.med.

NOACK d.o.o. Zagreb

Vodovodna 20a

10000 Zagreb www.noackgroup.com

alergeni - // · noack & co je meĎunarodna tehnička marketinška tvrtka, specijalizirana za...

Documents