bacot lengkap fix print

7/17/2019 BACOT Lengkap Fix Print

1/258

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Maksud dan Tujuan Praktikum

1.1.1.Maksud Praktikum

Dilakukan dengan maksud agar praktikan dapat mengetahui dan memahami

cara pembersihan, penyiapan, penggunaan alat dan sterilisasi pada praktikum

mikrobiologi.

1.1.2.Tujuan Praktikum

a. Untuk mengetahui penggunaan, pembersihan, dan penyiapan alat-alat yang

terdapat pada laboratorium mikrobiologi

b. Untuk mengetahui berbagai cara sterilisasi pada laboratorim mikrobiologi

c. Untuk dapat mengelompokkan alat-alat tersebut dalam kelompok alat

sterilisasi, alat perhitungan mikroorganisme, alat instrumen dan alat-alat

penunjang lainnya

1.2. Prinsip Praktikum

Praktikum ini mengenalkan berbagai macam alat-alat, cara pembersihan dan

proses sterilisasi pada laboratorium mikrobiologi. Alat-alat yang digunakan

dikelompokkan sesuai dengan pengelompokkan yaitu alat sterilisasi, alat

perhitungan mikroorganisme, alat gelas dan non gelas, alat instrumen serta alat

penunjang lainnya. Dapat mengetahui cara-cara sterilisasi dan kegunaan alat-alat

agar bebas dari kontaminasi kemudian alat-alat tersebut digambar dan diberi

keterangan.

BAB II

1


2/258

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uraian Umum

Laboratorium merupakan unit fungsional kecil pada Departemen sebagai

adah untuk pengembangan suatu bidang ilmu dan pelaksanaan !ridarma

Perguruan !inggi melalui pengembangan pendidikan, penelitian, dan pembinaan

atau kemampuan atau keahlian sumber daya manusia serta pemberdayaan

masyarakat. "uatu lembaga pendidikan yang berbasis sains tidak dapat maju dan

menjadi pionir dibidangnya bila mengabaikan keberadaan laboratorium di dalam

sisstem pembelajarannya. #eberadaan laboratorium kimia sangatlah penting

didalam di dalam suatu lembaga pendidikan terutama di perguruan tinggi untuk

dapat meujudkan pengembangan dan pemanfaatan ilmu kimia secara

sinambung.

Laboratorium kimia, seperti layaknya tempat bekerja, harus dapat

memberikan kenyamanan, kesehatan, dankeamanan kepada semua orang yang

bekerja didalamnya, termasuk pengelola laboratorium itu sendiri. Untuk itu, perlu

studi kelayakan mengenai perencanaan dalam merancang laboratorium kimia

yang meliputi adanya prosedur dalam pengoperasian baku yang memperhatikan

kesehatan dan keselamatan kerja $#%& di laboratorium. Adanya 'entilasi dan

perlengkapan pelindung yang berfungsi baik, penataan dan pengelolaan bahan

kimia dan peralatan laboratorium serta adanya prosedur pengolahan limbah

laboratorium $ "ugiati, ())*&.

+ikroorganisme merupakan makhluk hidup yang sangat kecil dan sangat

penting dalam memelihara keseimbangan ekologi dan ekosistem di bumi.eberapa mikroorganisme bersifat menguntungkan dan ada pula yang merugikan,

baik terhadap manusia maupun hean. "ebagai contoh, mikroorganisme yang

menguntungkan dapat untuk dimanfaatkan dalam pembuatan makanan yang dapat

dikonsumsi oleh manusia maupun hean. Akan tetapi, tidak sedikit

mikroorganisme yang dapat merugikan manusia karena dapat merugikan

ataumenimbulkan penyakit yang berbahaya bagi tubuh manusia. leh karena itu,

penting sekali untuk mengetahui segala sesuatu mengenai mikroorganisme, baik

(


3/258

jenis, bentuk, sifat, peranan, maupun patogenisitas mikroorganisme untuk

menghindari infeksi yang disebabkan oleh mikroorganisme ataupun untuk

mengobati penyakit yang ditimbulkannya. "elain itu, pengetahuan tentang

mikroorganisme sangat bermanfaat dalam kehidupan kita sehari-hari dalam

rangka menjalani hidup yang bersih dan sehat $adji, ())/&.

"ecara sederhana metode-metode yang seringkali digunakan untuk

menentukan jumlah biomassa mikroorganisme tanah dapat dikelompokkan

menjadi metode-metode langsung dan tidak langsung. +etode langsung dengan

menggunakan mikroskop, diantaranya yakni pengamatan langsung tanah

pearnaan $keadan tanah tidak terganggu& menggunakan teknik irisan tipis,

pearnaan tanah dan pengamatan langsung bisa dengan mikroskop cahaya

maupun dengan mikroskop fluoresen, metode slide kontak, metode rasio-usapan,

Scanning Electron Microscope $"0+&, dan Transmission Electron Microscope

$!0+&. Adapun metode tidak langsung, diantaranya yakni metodeMost Probable

Number$+P& dan juga metode pengkayaan tanah $Djajakirana, ())%&.

+ikrobiologi ialah telaah mengenai organisme hidup yang berukuran

mikroskopis. Dunia mikroorganisme terdiri dari lima kelompok organism yakni

bakteri, proto2oa, 'irus, serta algae, dan cendaan mikroskopis. Dalam bidang

mikrobiologi mempelajari banyak segi mengenai jasad renik $juga dinamakan

microbe atau protista& dimana adanya ciri-cirinya kekerabatan antara sesamanya

seperti juga dengan kelompok organisme lainnya, pengendaliannya, dan

peranannya dalam kesehatan serta kesejahteraan. +ikroorganisme sangat erat

kaitannya dengan kehidupan, beberapa diantaranya bermanfaat dan yang lain

merugikan. anyak diantaranya menjadi penghuni dalam tubuh manusia.

eberapa mikroorganisme menyebabkan penyakit dan yang lain terlibat dalam

kegiatan manusia sehari-hari seperti pembuatan anggur, keju, yogurt, produksi

penisilin, serta proses-proses perlakuan yang berkaitan dengan pembuangan

limbah. +ikrobiologi merupakan ilmu yang masih muda. Dunia jasad renik

barulah ditemukan sekitar %)) tahun yang lalu, dan makna yang sesungguhnya

mengenai mikroorganisme itu barulah dipahami dan dihargai ()) tahun kemudian.

"elama 3) tahun terakhir, mikrobiologi muncul sebagai bidang biologi yang

%


4/258

sangat berarti. #ini mikroorganisme digunakan oleh para peneliti dalam

penelaahan hampir semua gejala biologis yang utama $4adioetomo, ())*&.

"ejak ditemukan mikroskop oleh Antony 'an Leeuenhoek pada tahun 156%,

dapat diketahui ternyata kuman ada di mana-mana, di air, tanah, udara, benda-

benda, bahkan di tubuh setiap orang. #eberadaan kuman-kuman yang tidak kasat

mata tersebut seringkali membuat kita tidak sadar akan bahaya yang dapat

ditimbulkan. "ecara kontinyu kuman-kuman tersebut diteliti atau dipelajari di

laboratoriummikrobiologi."alah satu cara untuk menjaga agar hasil pekerjaan di

laboratorium mikrobiologi tidak terkontaminasi, serta dapat melindungi pemeriksa

adalah dengan cara cuci tangan. 7uci tangan merupakan suatu hal yang sederhana

yang biasa kita lakukan tapi sangat besar manfaatnya. Penelitian yang dilakukan

oleh membuktikan baha cuci tangan dapat menurunkan jumlah kuman di tangan

hingga 869."ecara indi'idu cuci tangan dapat meningkatkan higienitas yang

dapat berpengaruh terhadap kesehatan tubuh $achmaati, ())6&.

"terilisasi atau suci hama yaitu suatu proses membunuh segala bentuk

kehidupan mikroorganisme yang ada dalam contoh, alat-alat atau lingkungan

tertentu. Dalam bidang bakteriologi, kata sterilisasi sering dipakai untuk

menggambarkan langkah yang diambil agar mencapai tujuan meniadakan atau

mebunuh semua bentuk kehidupan mikroorganisme. !eknik sterilisasi pada

dasarnya dapat ditempuh melalui dua cara yakni secara fisis dan secara kimia.

"terilisasi merupakan proses yang menghancurkan semua bentuk kehidupan.

"uatu benda yang steril dipandang dari sudut mikrobiologi artinya bebas dari

mikroorganisme hidup $:abriel, 1//5&.

"terilisasi merupakan suatu proses untuk membebaskan suatu benda dari

semua mikroorganisme, baik bentuk 'egetatif maupun bentuk spora. ;ungsi

sterilisasi di antaranya pada bidang mikrobiologi untuk mencegah

pencemaranorganisme luar, pada bidang bedah untuk mempertahankan keadaan

asepsis, pada pembuatan makanan dan obat-obatan untuk menjamin keamanan

terhadap pencemaran oleh mikroorganisme. "alah satu cara yang digunakan

adalah dengandesinfeksi yaitu proses mematikan semua mikroorganisme patogen

yang dapat menyebabkan infeksi. Di laboratorium mikrobiologi, sterilisasi

3


5/258

merupakan bagian yang sangat penting atau merupakan keharusan, baik pada alat

maupun media.

4al ini penting karena jika alat atau media tidak steril, kita akan sulit

menentukan apakah isolat kuman berasal dari spesimen pasien yang diperiksa atau

kontaminan. ekerja di laboratorium mikrobiologi mengandung risiko yang tidak

kecil. "etiap saat harus selalu berasumsi baha setiap mikroorganisme adalah

potensial patogen dan kita harus berhati-hati agar tidak terinfeksi oleh kuman

yang akan diperiksa.

7uci tangan adalah suatu hal yang sederhana untuk menghilangkan kotoran

dan meminimalisir kuman yang ada di tangan dengan mengguyur air dan dapat

dilakukandengan menambah bahan tertentu. Penelitian inter'ensi yang

berpengaruh 18) tahun yang lalu, "emmeleis meminta dengan tegas agar para

dokter yang melakukan autopsi mencuci tangannya sebelum membantu

persalinan, sehingga mengurangi kematian bayi karenasepsis puerperal

Streptoccocus dari ((9 menjadi %9. Dengan cuci tangan diharapkan akan

mencegah penyebaran kuman patogen melalui tangan. Peran tangan sebagai

sarana transmisi kuman patogen telah disadari sejak tahun 163)-an. Dengan cuci

tangan diharapkan akan mencegah penyebaran kuman patogen melalui tangan.

"ejak itu banyak penelitian yang memastikan baha dokter yang membersihkan

tangannya dari kumansebelum dan sesudah memeriksa pasien dapat mengurangi

angka infeksi di rumah sakit.

7uci tangan dapat mencegah lebih dari 1 juta kematian pertahun akibat

penyakit diare, sedangkan mencuci tangan dengan sabun dapat menurunkan diare

hingga 3*9. Dengan higiene tangan $hand hygiene& yang tepat dapat mencegah

infeksi dan penyebaran resistensi anti mikroba. 4igiene tangan sangat diperlukan

di bidang mikrobiologi maupun di tempat peraatan atau tempat-tempat yang

raan terjadi penyebaran mikroorganismemelalui media tangan kita. Di rumah

sakit, hygiene tangan yang tepat dapat menurunkan atau mencegah terjadinya

infeksi nosokomial. !erdapat dua konsep dasar higiene tangan yang berbeda yaitu

mencuci tangan $hand washing& dan menggosok tangan dengan alkohol $hand

rubbing&. 7uci tangan adalah mencuci tangan dengan menggunakan sabunplain

8


6/258

$tidak mengandung anti mikroba& atau sabun antiseptik $mengandung anti

mikroba&, menggosok-gosok kedua tangan meliputi seluruh permukaan tangan

dan jari-jari selama 1 menit, mencucinya dengan air dan mengeringkannya secara

keseluruhan denganmenggunakan handuk sekali pakai. +eski sama-sama untuk

membersihkan tangan, keampuhannya membunuh bakteri berbeda-beda. "abun

antibakteri memiliki bahan khusus yang dapat mengontrol bakteri di tangan.

#etika mencuci tangan dengan sabun antibakteri, sejumlah kecil bahan antibakteri

turut bekerja. Triclosan ialah 2at antibakteri yang paling sering ditambahkan.

ahan inilah yang mengurangi jumlah bakteri berbahaya hingga beberapa aktu

kemudian.

"ementara itu, efek dari mencuci tangan dengan sabun biasa tidak sehebat

bila memakai sabun antibakteri. "abun biasa memang dapat menghilangkan

bakteri tetapi cuma sebentar. Dalam aktu singkat bakteri akan berkembang lagi

di tangan. "abun pencuci tangan harus memenuhi standar khusus. Pertama, ia

mesti efektif menyingkirkan kotoran. #edua, ia tidak merusak kesehatan kulit

mengingat kulit yang sehat adalah bagian dari sistem kekebalan tubuh. #etiga, ia

harus nyaman untuk dipakai. Dalam hal ini, aromanya pegang peranan.


7/258

a. !abung reaksi

!abung reaksi berfungsi untuk menyimpan biakan jamur atau bakteri dan

pengenceran biakan dalam media cair. Ukuran tabung reaksi bermacam-macam,

mulai dari diameter 1 cm dan panjang 1)cm sampai diameter (,8 cm dan

panjang (8 cm. amun, yang sering digunakan adalah tabung reaksi dengan

diameter 1,8 cm dan panjang (8 cm.

b. 7aan petri

7aan petri berfungsi untuk menumbuhkan biakan pada media agar-agar.

"elain itu, caan petri juga digunakan untuk peremajaan isolat jamur.

c. !abung 0rlenmeyer

!abung 0rlenmeyer digunakan untuk perbanyakan biomassa spora pada saat

peremajaan isolat bakteri atau jamur, serta pembuatan biang atau induk biakan

pada 'olume yang tidak terlalu besar. Ukuran tabung 0rlenmeyer juga

ber'ariasi mulai dari 'olume 8) mL-1) Liter. amun yang sering digunakan

adalah tabung yang ber'olume 1)) mL dan 1))) mL.

d. :elas ukur

:elas ukur berupa tabung berbentuk silinder yang terdapat suatu penanda

ukuran 'olume atau isi yang berfungsi untuk menakar dari 'olume bahan cair.

Ukurannya pun sangat ber'ariasi, mulai itu dari 'olume takaran 8) mL sampai

1 Liter.

e. Alat pencampur

Ukuran alat pencampur atau mixer sangat ber'ariasi, tergantung dari 'olume

bahan yang akan dicampur. amun, yang umum yang digunakan adalah alat

pencampur dengan 'olume 1)-1)) kg, akan dapat berbentuk 'ertikal atau

hori2ontal.

f. Alat pengering

Alat ini berfungsi untuk mengeringkan produk pada suhu sekitar dari %8 -5) 7

dan beraliran udara kering. esar kecilnya alat pengering ini tergantung pada

kebutuhan 'olume bahan yang akan dikeringkan.

*


8/258

g. Alat penggojok

Ukuran alat penggojok ber'ariasi, mulai dari ukuran kecil hingga besar,

tergantung 'olume bahan yang akan digojok. ;ungsi alat ini untuk

menumbuhkan isolat pada media cair dan memberikan kebutuhan oksigen yang

baik bagi isolate. Untuk produksi kapasitas kecil $1))-%))kg&, biasanya

digunakan alat penggojok dengan beban 8-8) kg.

h. ioreaktor

;ungsinya untuk perbanyakan biomassa sel, spora, konidia bakteri atau jamur

dalam kondisi yang terkendali. ioreaktor juga bertujuan untuk keperluan

produksi dalam skala besar dan produk tidak memerlukan kondisi yang terukur

ketat $presisi&. Untuk produksi biomassa jamur, dapat menggunakan boireaktor

yang sederhana, bahkan cukup dengan alat penggojok ukuran besar.

i. Alat pemisah biomassa

Alat ini berfungsi untuk memanen biomassa spora=konidia jamur atau spora

bakteri jika diberbanyak pada medium pertumbuhan cair.

$"uahyono,())/&

j. Autoklaf

Autoklaf adalah suatu bejana yang dapat ditutup, yang diisi dengan uap panas

dengan tekanan tinggi. "uhu di dalamnya dapat mencapai 1187 hingga 1(87

dan tekanan uapnya mencapai ( hingga atm. Alat tersebut merupakan ruang uap

berdinding rangkap yang diisi dengan dengan uap jernih=jenuh bebas udara dan

dipertahankan pada suhu serta tekanan yang ditentukan selama periode aktu

ysng ditentukan selama periode aktu yang dikehendaki. >aktu yang

diperlukan untuk sterilisasi tergantung pada sifat bahan yang disterilkan, tipe

adah dan 'olume bahan dan kondisi yang baik digunakan untuk sterilisasi

adalah pada 18 psi dan temperatur 1(17 selama 18 menit. Agar penggunaan

autoklaf efektif uap air harus dapat menembus setiap alat yang disterilkan. leh

karena itu, autoklaf tidak boleh terlalu penuh, agar uap air yang benar-benar

menembus semua area $Adji, ())*&

"terilisasi atau suci hama yaitu suatu proses membunuh segala bentuk

kehidupan mikroorganisme yang ada dalam sampel=contoh, alat-alat atau

6


9/258

lingkungan tertentu. Dalam bidang bakteriologi, kata sterilisasi sering dipakai

untuk menggambarkan langkah yang diambil agar mencapai tujuan meniadakan

atau membunuh semua bentuk kehidupan mikroorganisme. !eknik sterilisasi pada

dasarnya dapat ditempuh melalui dua cara yaitu secara fisis dan secara kimia.

1. "terilisasi ;isis

a. +etode adiasi

adiasi gelombang elektromagnetik yang banyak digunakan adalah radiasi sinar

ultra'iolet, radiasi sinar gamma atau sinar ? dan sinar matahari. "inar

ultra'iolet yang diserap oleh sel organism yang hidup, khususnya oleh

nukleotida maka electron-elektron dari molekul sel hidp akan mendapat

tambahan energi. !ambahan energy ini kadang-kadang cukup kuat untuk

mengganggu bahkan merusak ikatan intramolekuler, yang menyebabkan

kematian pada sel.

b. +etode Pemanasan dengan uap air dan pengaruh tekanan $auto clave&

enda yang akan disuci hamakan diletakkan di atas lempengan saringan dan

tidak langsung mengenai air di baahnya. Pemanasan dilakukan hingga air

mendidih $diperkirakan pada suhu 1)) 7&, pada tekanan 18


10/258

f. +etode penyaringan $filtration&

+etode ini hanya dipakai untuk sterilisasi larutan gula, cairan lain seperti serum

atau sterilisasi hasil produksi mikroorganisme seperti en2im dan exotoxin dan

untuk memisahkanfitrable'irus dari bakteri dan organisme lain.

(. "terilisasi #imia

Pada sterilisasi kimia la2im digunakan adalah alkohol /59, aseton tab formalin,

sulfur dio@ide dan chlorine. ahan yang akan disuci hamakan dibersihkan terlebih

dahulu kemudian direndam dalam alkohol atau aseton atau tab formalin selama

kurang lebih (3 jam $:abriel,1//5&.

1)


11/258

BAB III

METDE KE!JA

".1 A#at dan Ba$an

%.1.1 Alat

a. Alat "terilisasi

1& Autoclave

(& aminar Air !low

%& Pembakan spiritus

3& 'en

8& "#on sterili#er

b. Alat Perhitungan +ikroorganisme

1& $olony counter

(& Micrometer sekrup

c. Alat :elas

1& Alat :elas "kala

a& 0rlenmeyer

b& :elas kimia

c& :elas ukur

d& Labu ukur

e& Pipet ukur

f& Pipet gondok

g& !ermometer

(& Alat :elas !idak erskala

a& atang pengaduk

b& otol cokelat berpipet

c& otol pengencer

d& otol 'ial

e& 7aan petri

f& $hamber

g& 7orongh& $over glass

i& %riglesky

j& #aca arloji

k& "b&ect glass

l& Pipet tetes

m& !abung durham

n& !abung reaksi

d. Alat ukan :elas

1& otol auades

(& otol semprot alkohol

11


12/258

%& 7aan porselin

3& +ortir dan stemper

8& se bulat5& se lurus

*& Paper disk

6& Pencadang

/& Penjepit tabung

1)& Pinset

11& Plat tetes

1(& Propipet

1%& ak tabung

13& "endok tanduk

18& "ikat tabung

15& "patula1*& "poid

e. Alat


13/258

BAB I'

HASIL PEN(AMATAN

).1. Ta* P&n+amatan

).1.1.A#at,a#at st&ri#isasi

N%. Nama A#at -un+si

1. Autoclave Untuk mensterilkan alat

(. aminar air flow $LA;& Untuk mengkultur bakteri secara aseptis

%. Pembakar spiritus Untuk sterilisasi

3. 'en Untuk mensterilkan alat

8. "#on strerili#er Untuk mensterilkan bakteri

).1.2.A#at p&r$itun+an k%#%ni mikr%%r+anism&

N%. Nama A#at -un+si

1. $olony counter Untuk menghitung koloni bakteri(. +ikrometer sekrup Untuk mengukur dengan skala ),)1 mm

%. "pektrofotometer Untuk mengukur kadar absorbansi suatu

larutan

).1.".A#at (as

a. Alat gelas berskala

N%. Nama a#at -un+si

1. 0rlenmeyer Untuk menghomogenkan larutan dan

pembuatan medium

(. :elas kimia Untuk mengambil dan

1%

Dipahami bentuk, fungsi dan cara kerja alat-alat tersebut

Dikelompokkan alat-alat tersebut ke dalam kelompok alat-alat

penunjang, alat instrument, alat perhitungan mikroorganisme,

dan alat sterilisasi

Digambar alat-alat tersebut dan diberi keterangan


14/258

menghomogenkan larutan

%. :elas ukur Untuk mengukur 'olume larutan secara

akurat3. Labu ukur Untuk menghomogenkan larutan

8. Pipet gondok Untuk mengambil larutan dengan

ukuran yang jelas dan ketelitian tinggi

5. Pipet 'olume Untuk mengambil larutan dalam jumlah

banyak

b. Alat gelas non skala


1. atang pengaduk Untuk mengaduk suatu larutan

(. otol coklat berpipet Untuk menyimpan cairan yang

dilengkapi dengan pipet tetes pada tutupbotol

%. otol pengencer Untuk mengencerkan larutan

3. otol 'ial Untuk meletakkan sampel

8. 7aan petri "ebagai tempat pembiakkan bakteri dan

jamur

5. 7hamber Untuk menarik bahan dari baah keatas

atau sebaliknya $pengelusi&

*. 7orong Untuk mengalirkan cairan yang akan

dipindahkan ke adah lainnya

6. $over glass Untuk menutupi sampel pada ob&ect

glass

/. %rigelsky Untuk meratakan bakteri

1). #aca arloji Untuk meletakkan bahan semi padat

11. "b&ect glass "ebagai tempat sampel untuk dilihat di

mikroskop

1(. Pipet tetes Untuk mengambil larutan dengan

'olume kecil tanpa skala

1%. !abung durham Untuk mendeteksi adanya bakteri

koliform

13. !abung reaksi Untuk mereaksikan suatu 2at dan

membiakkan atau mengkultur bakteri

).1.).A#at n%n +as


1. otol auades Unttuk menyimpan auades

(. otol semprot Untuk menyimpan alkohol $antiseptik&

%. 7aan porselin Untuk meletakkan sampel cair

3. +ortir dan stemper Untuk menghaluskan dan

menghomogenkan suatu bahan

8. se bulat Untuk menginokulasi mikroorganisme

pada medium miring

13


15/258

5. se lurus Untuk menginokulasi mikroorganisme

pada medium padat dan tegak

*. Paper disk Untuk melihat 2ona bening6. Pencadang Untuk melihat 2ona bening

/. Penjepit tabung Untuk menjepit tabung reaksi

1). Pinset Untuk mengambil alat atau bahan

berukuran kecil

11. Plat tetes Untuk mereaksikan sampel dalam

jumlah kecil dan dapat membandingkan

perbedaan arna secara langsung

1(. Propipet "ebagai alat pendukung pipet 'olume

dan pipet gondok yang dapat

mengambil, mengurangi dan

mengeluarkan cairan

1%. ak tabung reaksi Untuk meletakkan tabung reaksi agar

terlihat rapi

13. "endok tanduk Untuk mengambil bahan

18. "ikat tabung Untuk membersihkan tabung reaksi

15. "patula Untuk mengambil bahan

1*. "poid Untuk mengambil larutan dengan jarum

).1. A#at instrum&n


1. 'ot plate Untuk memanaskan bahan atau

mencairkan medium

(.


16/258

1(. )ortex Untuk menghomogenkan cairan dengan

cara digoyangkan secara konstan

).1./ A#at Bantu

N% Nama A#at -un+si

1. Alumunium foil Untuk menutupi adah sampel agar

tidak terjadi penguapan

(. enang godam Untuk mengikatbenda yang digunakan

%. :unting Untuk memotong bahan menjadi lebih

kecil

3. #apas Untuk menutupi tabung reaksi atau

erlenmeyer

).2. (am*arP&n+amatan

).2.1. A#at, a#atst&ri#isasi

15

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI

UNI'E!SITAS MULA0A!MAN

ama Alat Autoklaf

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat%rying oven

#eterangan

a. #atup pengeluaran uap

b. Pengukur tekanan

c. !ombol pengatur aktu

d. !ombol on*off

e. "ekrup pengaman

#eterangan

a+ !ombol on*off

b+ Pengatur suhu

c+ !empat uap

c


17/258

1*

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat (efrigator

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alataminar Air

#eterangan

a. agian atas $aiakan&

b. agian baah $+edium&

c. #abel Listrik

#eterangan

a. !ombol loer

b. !ombol Lampu neon

c. !ombol Lampu UB

a

b

a b


18/258

16

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat "ven

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat "#on sterili#er

#eterangan

a. !ombol "n*"ff

b. !ombol setting

c. Pengatur suhu

d. aki 'en

#eterangan

a. "terilisasi dengan (

b. "terilisasi dengan sinar UB

a

c

b

a


19/258

).2.2. A#atP&r$itun+anK%#%ni

1/

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Pembakar "piritus

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama alat $olony $ounter

#eterangan

a. Penutup

b. "umbu

c. Larutan spiritus

d.>adah $:elas&

#eterangan

a. #aca Pembesar

b. !ombol "n*"ff

c.Latar cahaya

$haemocytometer&

d. alpoint

b


20/258

()

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat +ikrometer "ekrup

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat "pektrofotometer UB-B


21/258

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat 'ot Plate

).2.". A#atInstrum&n

(1

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat 'ot Plate esar

#eterangan

a. 4ot Plate

b. Pengatur "uhu

#eterangan

a.'otplate

b. #abel Listrik


22/258

((

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat


23/258

(%

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat +ikroskop 0lektrik

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat eraca hous + %11

#eterangan

a+ Lensa okuler

b+ (evolver

c+ Lensa objektif

d+ Lengan mikroskope+ Pemutar kasar

f+ Pemutar halus

g+ !ombol "N="!!

h+ Pengatur intensitas

i+ "umber cahaya

&+ D


24/258

(3

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat eraca haus + (51)

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat "entrifuge

#eterangan

a. "kala

b. !empat bahan

c. Pemberat

#eterangan

a. Pengatur aktu

b. Pengatur kecepatan

c. !empat tabung sentrifuge

b

ac

c


25/258

(8

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Shaker

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat !abung "entrifuge

#eterangan

a. >adah shaker

b .#abel listrik

#eterangan

a. !utup tabung

b. !abung

a

a

b

a

b


26/258

).2.). A#atP&nunjan+

a. Alat:elaserskala

(5

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama AlatErlenmeyer

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI

UNI'E!SITAS MULA0A!MA

ama Alat )ortex

#eterangan

a. !empat$adah& )ortex

b. #abel listrik

#eterangan

a. +ulut erlenmeyer

b. Leher erlenmeyer

a b

a


27/258

(*

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat :elas kimia

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat :elas Ukur

#eterangan

a. +ulut gelas

b. "kala

#eterangan

a. +ulut gelas ukur

b. "kala

c. #aki :elas ukur

b

b

a

a

b


28/258

(6

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Labu takar

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Pipet 'olume

#eterangan

a. +iniskus

b. !utup $penutup&

#eterangan

a. +iniskus

b. Pangkal pipet

c

b

a

b

a


29/258

(/

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Pipet ukur

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat !ermometer

#eterangan

a. Pangkal pipet

b. "kala

#eterangan

a. "kala suhu

a

b

a


30/258

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat atang pengaduk

b. Alat:elasonskala

%)

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat otol cokelat

#eterangan

a. atang pengaduk

#eterangan

a. #aret Penghisap

b. !utup botol

c. otol

a

a

b


31/258

%1

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat otol pengencer

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat otol 'ial

#eterangan

a. Leher botol

b. +ulut botol

c. adan botol

#eterangan

a. !utup 'ial

b. Leher 'ial

c. adan 'ial

c

a

c

a

b


32/258

%(

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat 7aan petri

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat 7orong

#eterangan

a. Penutup caan petri

b. 7aan petri

#eterangan

a. +ulut corong

b. Leher corong

c

a

b

a


33/258

%%

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama alat #aca objek dan kaca penutup

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat%rigelsky

a.

b.

#eterangan

a. kaca objek,ob&ectglass-

b. kaca penutup,cover glass-

#eterangan

a. atang%rigelsky

b

a


34/258

%3

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat #aca arloji

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Pipet tetes

#eterangan

a. agian atas $dalam&

b. agian baah

#eterangan

a.#aret penghisap

b.!empat Penghisap

b


35/258

%8

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat !abung durham

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama alat !abung reaksi

#eterangan

a.+ulut tabung

b.adan tabung

a

b

#eterangan

a.+ulut tabung

b.adan tabung

a

b


36/258

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat otol penyemprot

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat enang godam

c. Alat non gelas

%5

#eterangan

a.Ujung benang

b.:ulungan $gumpalan benang&

#eterangan

a.!utup botol

b.Leher botol

c.otol

d.Penyemprot

a

b

c

d

b

a


37/258

%*

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat 7aan porselin

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Earum ose bulat

#eterangan

a.agian dalam caan

b.agian baah caan

c.+ulut caan

#eterangan

a.#aat nichrome

b.atang ose bulat

b


38/258

%6

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Earum ose lurus

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Lumpang dan Alu

#eterangan

a.#aat nichrome

b.atang ose lurus

#eterangan

a.Lumpang

b.Alu

b

a

b

a


39/258

%/

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama AlatPaper disk

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Pencadang

a

#eterangan

a.agian atasPaper disk

#eterangan

a.agian atas

b.agian baah

a

a

b


40/258

3)

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Penjepit tabung

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Pinset

#eterangan

a.!empat tabung reaksi

b.Alat bantu menjepit

#eterangan

a.Ujung penjepit

a

b


41/258

31

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Propipet

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Plat tetes

a

#eterangan

a. Absorban $A&

b. 0@it$0&

c. "a'e$"&

#eterangan

a.!empat sampel

a.

b c

a


42/258

F

3(

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat ak tabung reaksi

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat "endok tanduk

#eterangan

a.!empat tabung

b.!empat mengeringkan tabung

#eterangan

a.Ujung sendok

b.atang sendok

c.Ujung sendok

b

a

abc


43/258

3%

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat "ikat tabung

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat "patula

#eterangan

a."ikat

b.#aat sikat

#eterangan

a.Ujung spatula

b.atang spatula

a

b

a

b


44/258

33

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat Spoid

#eterangan

a.!ombol penyedot

b."kala

c.Earum

cb

a

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


ama Alat $hamberdan Penutup $hamber

#eterangan

a. !utup chamber

b. adan chamber

a

b


45/258

BAB '

PEMBAHASAN

+ikrobiologi merupakan ilmu pengetahuan tentang makhluk hidup yang

kecil atau jasad-jasad renik. +ikrobiologi berasal dari kata mikro $kecil atau

renik&, bio$hidup&, dan logos$ilmu&. Eadi mikrobiologi merupakan ilmu biologi

yang mempelajari atau mengkaji tentang mikroba. "ecara umum, mikroba-

mikroba tersebut diteliti atau dipelajari di laboratorium mikrobiologi.

Laboratorium mikrobiologi merupakan laboratorium yang mempelajari,

menyimpan, dan melakukan pelayanan dalam bidang mikrobiologi yang meliputi

bakteri,'irus, dan jamur. ;ungsi utama laboratorium mikrobiologi yaitu membantu

diagnosis penyakit infeksi yanng disebabkan oleh mikroba, melakukan uji

kepekaan serta penelitian-penelitian yang berkaitan dengan mikroba.

"ebelum melakukan praktikum di laboratorium mikrobiologi, praktikan

terlebih dahulu harus mengenal alat-alat yang ada di laboratorium mikrobiologi

serta mengetahui cara penggunaan dan prinsip kerja alat-alat tersebut. 4al ini

penting untuk dilakukan agar meminimalkan terjadinya kerusakan alat dan

kesalahan dalam pengerjaan yanng diakibatkan oleh kurangnya pengetahuan

praktikan mengenai alat-alat yang ada di laboratorium mikrobiologi.

Alat-alat di laboratorium mikrobiologi dibagi menjadi kelompok alat

sterilisasi, alat perhitungan mikroorganisme, alat gelas, alat non gelas, alat

38


46/258

instrumen, dan alat bantu. Alat gelas dibagi menjadi alat gelas berskala dan alat

gelas tidak berskala.

"terilisasi adalah suatu proses untuk mematikan atau membunuh semua

organisme yang terdapat di dalam suatu alat dan bahan. !ujuan sterilisasi yaitu

untuk memusnahkan semua bentuk kehidupan mikroorganisme patogen termasuk

spora, yang mungkin telah ada pada peralatan kedokteran dan peraatan yang

dipakai.

ekerja di laboratorium mikrobiologi perlu dilakukan prosedur bekerja

secara aseptik. Aseptik berarti tanpa adanya mikroorganisme. Aseptik juga

berhubungan dengan steril. ekerja secara aseptik ini perlu dilakukan untuk

menjaga kesterilan pengguna, alat dan bahan-bahan yang digunakan dari

kontaminasi karena mikrobia berukuran sangat kecil, tidak kasat mata, mudah

tersebar dan hidup dimana saja. ekerja secara aseptik ini merupakan bagian

darisafety procedure$prosedur keamanan dalam bekerja di laboratorium

mikrobiologi&.ekerja secara aseptik dilakukan dengan cara mensterilkan

pengguna, alat dan bahan baku terlebih dahulu sebelum memulai pengerjaan.

Pengguna $peneliti& melakukan prosedur aseptik dengan menggunakan masker

dan sarung tangan yang sebelumnya pada sarung tangan tersebut disemprotkan

alkohol *) 9 untuk sterilisasi tangan dari kontaminasi mikroorganisme. Eika

bekerja pada meja, pembakar spiritus harus dinyalakan dan peneliti berada sekitar

jarak %) cm dengan pembakar spiritus, selain itu meja yang akan digunakan untuk

bekerja harus disemprot alkohol *) 9 agar steril. Alat dan bahan juga dilakukan

prosedur aseptik dengan mensterilkannya terlebih dahulu sebelum digunakan

dengan beberapa cara tergantung dari asal bahan tersebut misalnya dengan

penyemprotan alkohol, penyinaran dengan UB, dengan panas kering atau prosedur

steril lain.

ekerja secara aseptis juga perlu saat dilakukan pemindahan sampel

maupun medium. Pemindahan medium dapat dilakukan diatas meja kerja dengan

terlebih dahulu menyemprotkan desinfektan seperti alkohol *) 9 diseluruh

permukaan meja, kemudian menyalakan pembakar spiritus. Pengambilan medium

pada adahnya dapat menggunakan spoid.

35


47/258

Dalam pengerjaan sterilisasi alat-alat atau medium dapat dilakukan secara

mekanis misalnya penyaringan, secara kimia misalnya menggunakan bahan-bahan

kimia dan secara fisik yaitu dengan menggunakan panas atau sinar radiasi.

"terilisasi dengan cara mekanik dilakukan apabila bahan atau alat yang akan

disterilkan bersifat tidak tahan panas. "terilisasi dengan cara kimia merupakan

sterilisasi dengan menggunakan bahan kimia, umumnya merupakan cairan atau

larutan yang mempunyai sifat mampu membunuh sel-sel 'egetatif

mikroorganisme tapi tidak mampu membunuh spora, contohnya untuk

mensterilkan permukaan meja dengan menyemprotkan alkohol 8)-*) 9.

"terilisasi dengan cara fisik menggunakan prinsip pemanasan yang dilakukan

dengan pmijaran atau dibakar, udara panas atau panas kering, pemasakan, dan uap

air bertekanan.

"ebelum disterilisasi umumnya dilakukan preparasi alat-alat. 7ontohnya

dalam sterilisasi tabung reaksi, 0rlenmeyer, dan caan petri perlu dilakukan

preparasi sebelum alat-alat tersebut sebelum dimasukkan ke dalam autoklaf

maupun o'en. Umumnya alat-alat tersebut dibungkus dengan kertas sebelum

dimasukkan ke alat sterilisasi. "ebelum sterilisasi caan petri terlebih dahulu

dibungkus dengan kertas hingga seluruh permukaan caan petri tertutup oleh

kertas. 7aranya dengan meletakkan caan petri di tengah kertas, lalu kedua ujung

kertas kanan dan kiri dipertemukan dan dilipat, kemudian sisi atas dan baah

dilipat membentuk segitiga dan di letakkan ke bagian belakang caan petri.

Preparasi tabung reaksi sebelum disterilisasi yaitu dengan membungkusnya

menggunakan kertas. +ula-mula 8 tabung reaksi diikat dengan karet, lalu

diletakkan di tengah kertas yang akan digunakan, kemudian dipertemukan kedua

ujung kanan dan kiri serta bagian atas dan baah kertas untuk dilipat menutupi

sebagian tabung reaksi. "etelah itu di ambil kertas lain untuk menutupi bagian

atap tabung yang belum terbungkus kertas. Dilipat dengan cara yang sama ketika

melipat kertas bagian baah tabung reaksi. "etelah tertutup seluruh permukaan

tabung, di ikat dengan karet dan diberi tanda bagian atas dan bagian baah dari

tabung reaksi. !ujuan pembungkusan alat sebelum sterilisasi adalah agar panas

yang diberikan dapat tersebar rata di seluruh permukaan alat sehingga sterilisasi

3*


48/258

berlangsung dengan baik. Untuk tabung reaksi dan 0rlenmeyer, sebelum

disterilisasi mulut tabung reaksi atau 0rlenmeyer perlu ditutup kapas untuk

menyumbat agar udara yang tidak steril dari luar tidak dapat lagi masuk ke dalam

tabung reaksi maupun 0rlenmeyer.

Alat-alat sterilisasi yang terdapat di laboratorium mikrobiologi antara lain

autoklaf,aminar Air !low, pembakar spiritus, o'en, dan o#on sterili#er. Autoklaf

merupakan alat sterilisasi yang menggunakan uap air bertekanan. Proses sterilisasi

yang dilakukan dalam keadaan takanan tinggi dari uap air jenuh. !ekanan yang

digunakan biasanya ( atm pada suhu 1(1G7 selama 18-() menit. Alat-alat yang

dapat disterilisasi menggunakan autoklaf adalah alat-alat yang tidak tahan

pemanasan tinggi dan alat-alat gelas berskala, selain itu medium juga dapat

disterilkan menggunakan autoklaf. "ebelum disterilkan, alat-alat ditutup dengan

kapas dan dibungkus dengan kertas. +ekanisme kerja autoklaf yaitu membunuh

mikroba patogen dengan cara denaturasi protein dari en2im dan membran sel yang

diakibatkan oleh tingginya tekanan didalam autoklaf.

'en merupakan alat sterilisasi yang menggunakan udara panas kering

dengan suhu 15) G7 sampai 1*) G7 yang dilakukan selama ( atau % jam. Alat-alat

yang dapat diterilkan dengan o'en yaitu alat yang terbuat dari gelas dan tidak

berskala serta alat tersebut tahan pemanasan tinggi. Alat gelas berskala tidak boleh

disterilkan dengan o'en karena dapat memuai dan menyebabkan skala bergeser

sehingga tidak akurat. +ekanisme o'en dalam sterilisasi yaitu membunuh

mikroba dengan cara oksidasi, dimana protein mikroba akan mengalami

koagulasi.

aminar Air !lowadalah alat untuk menyediakan tempat steril yang akan

digunakan pada pemindahan bahan yang membutuhkan tempat steril. Alat ini

berfungsi untuk pengerjaan aseptis karena memiliki pengaturan dan penyaringan

aliran udara. Prinsip kerja alat ini dengan aliran udara dari arah hori2ontal yang

terletak pada garis atau bidang yang sejajar. Aliran udara berasal dari udara

ruangan yang ditarik ke dalam alat melalui filter pertama $pre-filter& yang

kemudian ditiupkan keluar melalui filteryang sangat halus yang disebut 40PA

$'igh Efficiency Particulate Air !ilter& dengan menggunakan bloer. Pre-filter

36


49/258

berfungsi untuk menyaring debu dan benda-benda yang kasar, memiliki pori-pori

sekitar 8 mm sehingga efisiensinya dapat mencapai /8 mm untuk objek-objek

kurang dari 8 mm. 40PA memiliki ukuran pori sekitar ),% mm dan terdapat pada

bidang keluar udara kearah permukaan tempat kerja. Pada alat ini terdapat tiga

tombol, yaitu tombol bloer yang berfungsi untuk mengatur udara agar tetap

steril, tombol sinar UB yang dapat menghasilkan panjang gelombang yang dapat

membunuh mikroorganisme dan tombol lampu neon. "ebelum digunakan, lampu

UB dibiarkan menyala selama 18 menit dan segera dimatikan saat akan bekerja

dengan alat ini, kemudian dinyalakan lampu neon dan bloer.

"#on sterili#ermerupakan alat yanng dapat digunakan untuk mensterilkan

alat-alat gelas tidak berskala. "#on sterili#erterdiri dari dua bagian, yaitu bagian

atas adalah tempat membunuh mikroba menggunakan o2on $%&, dimana o2on

dapat merusak mekanisme dari mikroba sehingga sel protein pada mikroba

mengalami oksidasi yang mengakibatkan perubahan fungsi dan kematian pada

mikroba karena o2on $%& itu sendiri bersifat racun. "edangkan fungsi bagian

baah adalah mensterilkan medium menggunakan sinar lampu dengan panas

tinggi yang cara kerjanya sama dengan o'en yaitu membunuh mikroba dengan

cara oksidasi, dimana protein mikroba akan mengalami koagulasi.

Pembakar spiritus adalah alat sterilisasi dengan cara pemijaran atau

pembakaran. 7ara ini terutama dipakai untuk sterilisasi bahan yang tahan panas

seperti sterilisasi ose yang terbuat dari platina, jarum spoid, serta mulut tabung

reaksi, 0rlenmeyer, maupun caan petri ketika proses pemindahan sampel atau

bakteri. 7aranya adalah dengan membakar langsung alat tersebut diatas nyala api

spriritus, untuk alat yang terbuat dari logam sterilisasi dilakukan hingga memijar

dan dapat diulang beberapa kali.

Alat-alat yang termasuk alat perhitungan mikroorganisme yaitu colony

counter dan mikrometer sekrup. $olony counter merupakan alat yang dapat

digunakan untuk menghitung jumlah koloni mikroorganisme yang terdapat pada

caan petri. Pada colony counterterdapat pulpen dan kaca pembesar yang dapat

membantu untuk memudahkan dalam menghitung jumlah koloni.

+ikrometer sekrup merupakan suatu lat ukur diameter dengan tingkat

3/


50/258

ketelitian yang tinggi. +ikrometer sekrup berfungsi untuk mengukur tebal dan

tipis atau luas daerah hambat suatu mikroba. !ingkat ketelitian mikrometer sekrup

adalah ),)1 mm.

Alat-alat gelas cukup banyak digunakan di laboratorium mikrobiologi. 4al

ini disebabkan karena kelebihannya yang tahap terhadap pemanasan, daya tembus

cahaya yang besar, tidak mudah bereaksi dengan 2at kimia serta tahan terhadap

perubahan temperatur mendadak. amun kelemahannya adalah alat gelas mudah

pecah. Alat gelas dikelompokkan menjadi dua kelompok, yaitu kelompok gelas

beskala dan kelompok gelas tidak berskala.

Alat-alat gelas berskala antara lain 0rlenmeyer, gelas kimia, gelas ukur, labu

ukur, pipet gondok, pipet ukur dan termometer. 0rlenmeyer berfungsi untuk

menampung larutan atau medium, memanaskan larutan serta untuk

menghomogenkan larutan. entuk leher yang menyempit mempunyai keuntungan

dalam penggunaannya seperti mencegah 2at cair tumpah ketika proses

penghomogenan. 0rlenmeyer memiliki skala 8) mL, 1(8 mL, (8) mL, 8)) mL,

dan 1))) mL.

:elas kimia dapat digunakan sebagian adah untuk melarutkan suatu bahan

dan menampung larutan atau 2at cair. :elas kimia mempunyai skala mulai dari 8)

mL hingga ())) mL.

:elas ukur berfungsi unutk mengukur 'olume suatu 2at cair. #etelitian gelas

ukur lebih tinggi diabndingkan gelas kimia atau 0rlenmeyer. :elas ukur

mempunyai sakala mulai dari 1) sampai ())) mL.

Labu ukur mempunyai bentuk atas bulat dan leher panjang dan mulut

sempit. Pada lehernya terdapat tanda batas yang menunjukkan 'olume

sebagaimana tertera pada labu ukur.

Pipet gondok berfungsi untuk mengambil dan memindahkan cairan dengan

'olume tertentu sebagaimana yang tertera pada batang pipet pengaduk. Pipet

gondok mempunyai ketelitian lebih tinggi dibandingkan pipet 'olume. "kala pipet

gondok mulai dari 1 mL hingga 1)) mL. Pipet gondok merupakan alat yang lebih

akurat dalam mengambil sejumlah cairan dibandingkan dengan pipet ukur

maupun pipet tetes.

8)


51/258

Pipet ukur merupakan alat gelas menyerupai pipa dengan salah satu

ujungnya menyempit. !erdapat skala pada batangnyadan mulut lain yang lebar.

Pipet ukur membaca kapasitas tertentu yang dapat dibaca pada skalanya.

#egunaan pipet ukur adalah untuk menambahkan 2at cair dengan 'olume tertentu.

!ermometer digunakan untuk mengukur suhu. !ermometer tersedia dalam

berbagai ukuran dan kapasitas. Eika termometer akan digunakan untuk suhu air

mendidih misalnya, maka harus digunakan untuk mengukur suhu pada penangas

dengan kapasitas 1() G7. Eika untuk mengukur minyak, maka digunakan

termometer dengan kapasitas %)) G7.

Alat-alat gelas tanpa kaca antara lain batang pengaduk, botol coklat

berpipet, botol pengencer, botol 'ial, caan petri, chamber, corong, cover glass,

ob&ect glass, kaca arloji, pipet tetes,%riglesky, tabung durham, dan tabung reaksi.

atang pengaduk berbentuk batang dengan diameter 6-1( mm dan panjang

antara 1)-18 cm. atang pengaduk terbuat dari gelas dan padat berisi.

#egunaannya adalah untuk melakukan pengadukan pada larutan yang biasanya

terdapat pada gelas kimia.

otol coklat berpipet atau botol tetes mempunyai kegunaan untuk

menyimpan larutan atau indikator. otol ini dilengkapi dengan penutup yang

biasanya terbuat dari polietilen dan dilengkapi alat tetes. otol pengencer

berfungsi sebagai tempat untuk mengencerkan larutan.otol 'ial adalah botol

kaca kecil dengan tutup karet bersegel. otol ini berfungsi sebagai adah sampel

cair.

7aan petri merupakan alat gelas yang digunakan untuk menyimpan

medium yang dapat memadat. 7aan petri juga dapat berfungsi sebagai tempat

untuk membiakkan mikroorganisme. 7aan petri dilengkapi tutup yang terbuat

dari kaca.. $hamberberfungsi sebagai alat bantu dalam mengelusidasi plat #L!.

$over glassdan ob&ect glassmerupakan alat gelas yang digunakan bersama

mikroskop. "b&ect glassberfungsi sebagai tempat sampel atau ob&ectyang akan

diamati di mikroskop. "edangkan cover glassberfungsi sebagai penutup sampel

yang akan diuji yang telah diletakkan pada ob&ect glass.

%rigleskyterbuat dari kaca berdiameter %-3 mm dengan ujung berbentuk

81


52/258

segitiga digunakan untuk kultur mikroorganisme untuk metode tabur.

%rigleskyberfungsi untuk menyebarkan dan meratakan sampel atau biakan bakteri

pada medium padat. "udut lekukan pada drigleskyberbentuk segitiga tumpul.

Pipet tetes berfungsi untuk mengambil larutan dalam jumlah kecil. Pipet

tetes adalah jenis pipet yang berupa pipa kecil terbuat dari plastik atau

kaca dengan ujung baahnya meruncing serta ujung atasnya ditutupi karet. #aca

arloji berfungsi sebagai adah ketika akan menimbang suatu bahan. #aca arloji

terbuat dari kaca berbentuk cembung sedikit pipih.

!abung Durham merupakan tabung yang bentuknya sama dengan tabung

reaksi tetapi ukurannya lebih kecil. !abung Durham berfungsi untuk menangkap

gas ( yang dihasilkan dari hasil fermentasi mikroorganisme, biasa digunakan

dalam medium cair. "elain itu tabung Durham digunakan untuk mendeteksi

adanya bakteriEscherichia colidengan melihat adanya gelembung yang timbul

dan terperangkap pada tabung Durham tersebut. !abung Durham diletakkan

terbalik di dalam tabung reaksi.

!abung reaksi merupakan alat gelas yang mempunyai bantuk mirip pipa

dengan alas tumpul. #egunaan dari tabung reaksi adalah untuk mereaksikan

larutan atau cairan, selain itu juga dapat berfungsi sebagai tempat medium padat

maupun cair. !abung reaksi di sterilisasi menggunakan autoklaf atau o'en. Alat-

alat yang temasuk kelompok alat non gelas antara lain botol auadest, caan

porselin, mortir dan stamper, ose bulat, ose lurus, penjepit tabung, paper disk,

pencadang, propipet, sendok tanduk, spatula dan spoid. otol auadest berfungsi

sebagai tempat untuk menampung auadest. otol ini dilengkapi selang pada

tutupnya yang berguna untuk mengambil auadest.

7aan porselin merupakan suatu alat yang berbentuk seperti lumpang

namun berukuran lebih kecil. 7aan porselin terbuat dari porselin dan biasa

digunakan untuk memanaskan atau menguapkan suatu bahan

Mortir danstampermerupakan alat yang terbuat dari bahan porselin dan

biasanya berarna putih. #egunaan kedua alat ini berpasangan yaitu untuk

menghaluskan dan menghomogenkan bahan.

se bulat dan ose lurus merupakan alat yang terbuat dari kaat nichrome

8(


53/258

atau platinum. se berfungsi untuk mengambil dan menggores mikroorganisme.

se lurus digunakan pada medium tegak dan ose bulat digunakan pada medium

miring dan cair. se disterilkan menggunakan pembakar spiritus.

Penjepit tabung berfungsi untuk menjepit tabung dalam keadaan panas.

Penjepit tabung terbuat dari kayu keras.Paper diskmerupakan alat yang terbuat

dari kertas saring berbentuk bulat.Paper disk berfungsi untuk mengetahui 2ona

hambat. Pencadang memiliki fungsi yang serupa denganpaper diskyaitu untuk

melihat 2ona hambat yang diisi dengan antibiotik.

Propipet merupakan alat yang digunakan bersama pipet ukur dan pipet

gondokuntuk mengambil larutan. Propipet memiliki % saluran dimana masing-

masing saluran memiliki katup. #atup yang bersimbol A $absorb& berguna untuk

mengeluarkan udara dari dalam bola hisap, simbol " $save& berguna untuk

menghisap cairan yang akan digunakan, dan simbol 0 $exit& berguna untuk

mengeluarkan cairan dari pipet.

"endok tanduk merupakan alat yang digunakan untuk mengambil bahan

yang berbentuk serbuk. Ujung sendok tanduk terdiri dari sendok yang berukuran

lebih besar dan ujung lainnya berukuran lebih kecil dan lancip. "patula fungsinya

hampir sama dengan sendok tanduk, hanya saja spatula digunakan untuk

mengambil bahan yang lengket.

"poid merupakan pompa piston sederhana yang digunakan untuk

menyuntikkan atau menghisap cairan atau gas. "poid terdiri dari tabung dengan

piston didalamnya yang keluar dari ujung belakang. Adapun ujung depannya

dilengkapi dengan jarum hipodermik atau selang untuk membantu mengarahkan

aliran ke dalam atau keluar tabung. #apasitas alat spoid antara lain 1 mL, 8 mL,

dan 1) mL.

Alat-alat yang termasuk kelompok alat instrumen antara lain hot plate,

inkubator, refrigerator, mikropipet, mikroskop cahaya, mikroskop elektron,

neraca ".hauss seri %11, neraca ".hauss seri (15), sentrifuge, shaker,

spektrofotometer, timbangan analitik, dan vortex.

+ikroskop adalah alat instrumen yang paling banyak digunakan dan paling

bermanfaat di laboratorium mikroskopi. Dengan alat ini diperoleh perbesaran

8%


54/258

sehingga memungkinkan untuk melihat organisme dan struktur yang tak tampak

dengan mata telanjang. erdasarkan sumber cahaya, mikroskop dibagi menjadi

mikroskop cahaya $monokuler& dan mikroskop elektron $binokuler&. +ikroskop

cahaya memerlukan cahaya matahari sebagai sumber cahayanya sedangkan

mikroskop elektron memiliki sumber cahaya yang berasal dari energi listrik.

Prinsip kerja mikroskop yaitu lensa obyektif akan menghasilkan bayangan bersifat

nyata, terbalik, dan diperbesar dari benda yang akan diamati. Lalu bayangan

tersebut diproyeksikan ke lensa okuler dan ditangkap oleh mata dalam bentuk

bayangan yang bersifat semu, terbalik, dan diperbesar.

agian-bagian mikroskop terbagi menjadi dua yaitu bagian optik dan bagian

non optik.agian optik antara lain lensa objektif, lensa okuler dan

kondensor.Lensa objektif berfungsi sebagai pembentuk bayangan pertama yang

berada didepan benda yang akan diamati. Lensa ini membentuk bayangan nyata,

terbalik, diperbesar. Perbesaran objektif adalah 3@, 1)@, 3)@, dan 1))@. Lensa

okuler merupakan lensa yang terletak diatas tabung dan terhubung dengan mata

pengamat. Lensa ini berfungsi untuk membentuk bayangan maya, tegak, dan

diperbesar dari lensa objektif. Perbesaran okler yaitu 8@, 1)@, dan

1(,8@.#ondensor merupakan lensa tambahan yang berfungsi untuk

mengumpulkan cahaya yang masuk dalam mikroskop. Pada mikroskop cahaya

tidak terdapat kondensor dikarenakan sumber cahaya berasal dari cahaya

matahari.

agian non optik terdiri dari tabung mikroskop, pemutar kasar, pemutar

halus, meja objek, penjepit objek,revolver/ diafragma, cermin $hanya mikroskop

cahaya&, lengan, dan kaki mikroskop.!abung mikroskop berfungsi sebagai

penghubung antara lensa objektif dengan lensa okuler. Pemutar kasar berfungsi

untuk mencari fokus bayangan objek secara cepat, sedangkan pemutar halus untuk

memfokuskan bayangan objek secara lambat.(evolver berfungsi untuk mengatur

perbesaran lensa objektif dengan cara memutarnya. 7erminberfungsi untuk

memantulkan dan mengarahkan cahaya ke dalam mikroskop cahaya. Diafragma

berfungsi untuk mengatur intensitas cahaya yang akan masuk mikroskop. +eja

objek berfungsi sebagai tempat meletakkan objek yang akan di amati, sedangkan

83


55/258

penjepit objek berfungsi untuk menahan kaca objek agar tidak mudah bergeser

ketika diamati. Lengan mikroskop berfungsi sebagai pegangan pada mikroskop

dan tempat menempel meja benda. #aki mikroskop, berfungsi untuk menyangga

atau menopang mikroskop.

'ot platemerupakan alat yang berfungsi untuk memanaskan suatu cairan

ataupun medium yang akan digunakan. Alat ini dilengkapi dengan pengatur suhu,

sehingga memungkinkan kita mengatur suhu yang ingin digunakan.


56/258

agar alat yang telah steril tidak terkontaminasi kembali dengan mikroorganisme

atau dapat menjaga suatu biakan kuman tidak terkontaminasi oleh kuman lain,

karena kapas mudah ditembus udara tetapi dapat menahan mikroorganisme.

BAB 'I

PENUTUP

/.1. K&simpu#an

erdasarkan percobaan yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan

baha

a. Alat-alat sterilisasi terdiri atas autoclave, aminar air flow, pembakar

spiritus, o'en dan o#on sterili#er.

b. Alat-alat perhitungan koloni mikroorganisme anatara lain 0 colony counter,

mikrometer sekrup dan spektrofotometer.

c. Alat-alat :elas terdiri atas

1& Alat gelas berskala antara lain erlenmeyer, gelas kimia, gelas ukur, labu

ukur, pipet gondok, pipet ukur dan termometer..

(& Alat gelas non skala anatara lain batang pengaduk, botol coklat berpipet,

botol pengencer, botol 'ial, caan petri/chamber/ corong, over glass/

drigelsky, ob&ect glass, pipet tetes, tabung durham, dan tabung reaksi.

d. Alat non gelas antara lain botol auades, botol semprot, caan porselin,

mortir dan stemper, ose bulat, ose lurus, paper disk, pencadang, penjepit

tabung, pinset, plat tetes, propipet, rak tabung, sendok tanduk, sikat tabung,

spatula dan spoid.

85


57/258

e. Alat-alat instrumen antara lain hot plate/ inkubator, mikropipet,mikroskop

cahaya, mikroskop elektrik , neraca oChaus %11 dan

(15),refrigerator,sentrifuge,shaker, timbangan analitik dan vortex.

f. Alat bantu terdiri atas alumunium foil, benang godan, gunting dan kapas.

/.2. Saran

Diharapkan praktikan dapat memahami dan mengerti fungsi alat-alat yang

ada di laboratorium mikrobiologi, memahami penggunaan alat-alat laboratorium

mikrobiologi dan memahami dan mengerti cara pembersihan alat-alat di

laboratorium mikrobiologi karena akan menjadi dasar bagi praktikum selanjutnya.

BAB I

PENDAHULUAN

1.1.1. Maksud dan Tujuan Praktikum

1.1.1 Maksud Praktikum

Dilakukan dengan maksud agar praktikan dapat mengetahui cara

penyiapan dan pembuatan medium yang baik dan benar serta dapat mengetahui

jenis medium yang biasa digunakan untuk pertumbuhan jamur dan bakteri.

1.1.2 Tujuan Praktikum

a. +engetahui cara menyimpan bahan pembuatan medium A $Nutrient Agar&,

PDA $Potato %ekstrose Agar&, $Nutrient 1roth&, dan PD $Potato

%ekstrose 1roth&.

b. Untuk mengetahui dan memahami cara membuat medium.

1.2. Prinsip Praktikum

+engelompokkan macam-macam medium berdasarkan bahan yang

digunakan, kegunaan dan konsistensinya serta memahami jenis mikroba apa yang

dapat tumbuh pada masing-masing medium. "etelah itu, mengetahui komposisi

dari medium padat dan medium cair serta membuat medium padat dan medium

8*


58/258

cair dengan melarutkan padatan medium yang telah ditimbang dalam auades di

0rlenmeyer lalu dihomogenkan. Untuk medium padat dilakukan pemanasan saat

menghomogenkan campuran auades dengan bahan dasar medium lalu disterilkan

dengan autoclavepada suhu 1(1I7 selama 18 menit.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Uraian Umum

+ikroorganisme meliputi semua mikroorganisme atau organisme yang

tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. #elompok dari mikroorganisme adalah

bakteri, jamur, ragi dan 'irus serta proto2oa yang lebih besar. +ikroorganisme

seringkali dianggap tidak menguntungkan tetapi beberapa bakteri juga penting

untuk kesehatan $Eames, ())(&.

+edia merupakan suatu substrat untuk menumbuhkan jamur atau

bakteri. Umum digunakan di dalam laboratorium adalah media biakan yang

menggunakan bahan pemadat berupa agar-agar $:unaan, ())6&.

Dasar makanan yang paling baik bagi pemerian bakteri ialah medium

yang mengandung 2at-2at organik seperti rebusan daging, sayur-sayuran, sisa

makanan atau ramuan-ramuan yang dibuat oleh manusia. +edium yang paling

banyak digunakan dalam pekerjaan rutin di laboratorium ialah kaldu cair dan

kaldu agar. +edium ini tersusun atas kaldu bubuk % gram dan pepton 8 gram

dalam air suling 1))) gram.

Eika diperlukan medium padat, maka kepadanya ditambahkan 18 gram

86


59/258

agar-agar. +edium ini disebut sebagai medium baku. Untuk keperluan penelitian-

penelitian yang berhubungan dengan serologi perlu ditambahkan 8 gram a7l.

Eika tidak ada kaldu bubuk, bahan itu dapat diganti dengan rebusan daging yang

diperoleh dengan cara sebagai berikutJ ambil barang ),8 gram daging yang tidak

berlemakJ rendam dalam 1))) mL air suling semalam-malaman dalam almari es.

Paginya buanglah lemak yang mungkin terdapat mengapung di permukaan air.

#emudian peraslah suspensi leat kain mari yang halus. !ambahkan air suling

kepada filtrat sehingga 'olume menjadi 1 L lagi. #epada medium ini ditambahkan

8 gram pepton dan lain-lainnya yang diperlukan lalu panasi suspensi sampai suhu

1))o7 selama () menit. Akhirnya buanglah suspensi leat kertas saring dan

tambahkan air suling lagi sehingga 'olume tetap 1 L. +edium ini perlu

disterilisasi dahulu sebelum digunakan untuk memelihara bakteri. Euga keasaman

medium perlu diatur biasanya p4 * .

2.2. Uraian S&ara K$usus

2.2.1. J&nis,j&nis m&dia

Untuk mengetahui jenis-jenis medium yang lain, yang berkepentingan

dipersilahkan membaca buku-buku praktikum mikrobiologi atau bakteriologi.

+edium buatan manusia itu berupa

a. +edium cair

+edium cair yang biasa dipakai ialah kaldu yang disiapkan sebagai

berikutJ kepada 1 L air murni ditambahkan % gram kaldu daging lembu dan 8

gram pepton. Pepton ialah protein yng terdapat pada daging, pada air susu, pada

kedelai dan pada putih telur. Pepton banyak mengandung $nitrogen&, sedangkan

kaldu berisi garam-garam mineral dan lain-lainnya. +edium itu kemudian

ditentukan p4 nya 5,6 sampai *. Eadi sedikit asam atau netral, keadaan yang

demikian ini sesuai untuk kebanyakan bakteri. #aldu seperti tersebut diatas masih

perlu disaring untuk kemudian dimasukkan kedalam tabung-tabung reaksi atau

botol-botol. Penyaringan dapat dilakukan dengan kertas saring. "etelah tabung

reaksi atau botol berisi medium tersebut, disumbat dengan kapas, dapatlah mereka

dimasukkan ke dalam alat pensteril $autoklaf&.

b. +edium kental $padat&

8/


60/258

Dahulu kala orang la2im menggunakan kentang yang dipotong-potong

serupa silinder untuk medium. "ilinder kentang mentah itu dimasukkan kedalam

tabung reaksi, kemudian tabung disumbat dengan kapas, dan setelah itu

disterilkan dalam autoklaf. "etelah kentang dingin kembali, permukaan atas

silinder kentang dapat ditanamkan bakteri.

c. +edium yang diperkaya

#ebanyakan bakteri suka tumbuh pada sisa makanan seperti disebut

diatas. !etapi bakteri patogen seperti1ucella abortus,%iplococus pneumoniadan

Neisseria gonorhoaememerlukan 2at makanan tambahan berupa serum atau darah

yang tidak mengandung fibrinogen lagi. ;ibrinogen ialah 2at yang menyebabkan

darah kental.

$Dijoseputro, 1//6&

d. %efined media$synthetic media&

%efined media merupakan media yang komponen penyusunyya sudah

diketahui atau ditentukan. +edia ini biasanya digunakan dalam penelitian untuk

mengetahui kebutuhan nutrisi mikroorganisme. 7ontoh media untuk 0. coli yang

terdiri dari glukosa 1,) g=L, a(P315,3 g=L. #4(P31,8 g=L, $43&(.*4( (,)

g=L, 7a7l(()),) mg=L, dan ;e"31),) mg=L. p4 akhir media 5,6-*,).

e. +edia kompleks $complex media&

+edia kompleks merupakan media yang tersusun dari komponen yang

secara kimia tidal diketahui dan umumnya diperlukan karena kebutuhan nutrisi

mikroorganisme tertentu tidak diketahui. 7ontoh ekstrak daging $mengandung

asam-asam amino, peptida, nukleotida, asam organik, 'itamin, mineral&, ekstrak

khamir atau yeast e@tract $sumber 'itamin &, pepton $merupakan hidrolisa

protein, didapat dari digesti parsial daging, kasein, bubuk kedelai, gelatin dan

sumber protein lain, yang berperan sebagai sumber energi, 7 dan &. 7ontoh

Nutrient 1roth*Agar, Tryptic Soya 1roth $!"&=Tryptic Soya Agar $!"A&,

Mac$onkey Agar.

f. +edia umum $general media&

+edia umum merupakan media pendukung bagi banyak pertumbuhan

mikroorganisme. 7ontoh !", !"A.

5)


61/258

g. +edia penyubur $enrichment media&

+edia penyubur merupakan media yang berguna untuk mempercepat

pertumbuhan mikroorganisme tertentu. +edia ini digunakan bila kita ingin

menumbuhkan salah satu mikroorganisme dari kultur campuran. +edia ini

menggunakan bahan atau 2at yang serupa dengan habitat tempat mengisolasi

mikroorganisme tersebut.

h. +edia selektif $selective media&

+edia selektif merupakan media yang mendukung pertumbuhan

mikroorganisme tertentu $seleksi& dengan menghambat mikroorganisme yang lain.

Pada media ini ditambahkan bahan penghambat pertumbuhan, misalnya bile salt

dan dye $fuchsin, crystal violet, brilliant green& yang akan menghambat

pertumbuhan bakteri gram positif dan tidak memberi efek pada bakteri gram

negatif, antibiotik dan selulosa untuk mengisolasi bakteri pendegradasi selulosa.

i. +edia diferensial $differential media&

+edia diferensial digunakan untuk membedakan kelompok

mikroorganisme dan bahkan dapat digunakan untuk identifikasi. 7ontohnya

adalah media agar darah, yang merupakan media diferensial sekaligus media

penyubur, mampu membedakan antara bakteri hemolitik $Streptococcus dan

Staphylococcussaluran napas& dan bakteri nonhemolitik dengan mengetahui sifat

lisis eritrosit $ciri daerah jernih disekitar koloni akibat perusakan sel darah merah&,

mediaMac$onkey, yang merupakan media diferensial sekaligus selektif, terdiri

dari laktosa dan neutral red dye, mampu membedakan antara bakteri yang

memfermentasi laktosa dan yang bukan $ciri adanya daerah merah muda-merah

disekitar koloni&.

j. +edia khusus

7ontoh media khusus adalah media untuk bakteri anaerob. iasanya

kedalam media tersebut ditambahkan bahan yang dapat mereduksi kandungan (

dengan cara pengikatan kimiai. 7ontoh bahan-bahan itu adalah natioglikolat,

sistein, asam askorbat. "ebagai indikator anaerob digunakan re2asurin $bila terjadi

oksidasi yang berarti bakteri bersifat aerobic akan terbentuk arna merah&.

7ontoh media pertumbuhan bakteriNeisseria gonorrhoeae.

51


62/258

$Pratii, ())6&

2.2.2. P&niapan M&dia

+edia alamiah, misalnya susu skim tidak menimbulkan masalah dalam

penyiapan sebagai media, hanya semata-mata dituang dalam adah yang sesuai,

seperti tabung reaksi atau labu dan disterilkan sebelum digunakan. +edia dalam

bentuk kaldu nutrient atau yang mengandung agar disiapkan dengan cara

melarutkan masing-masing bahan yang dibutuhkan atau lebih mudah lagi dengan

cara menambahkan air pada suatu produk komersial berbentuk bubuk yang sudah

mengandung semua nutrient yang dibutuhkan. Pada praktisnya, semua medium

tersebut dalam bentuk bubuk dan siap pakai, senyaa seperti 'itamin.

#ebanyakan 'itamin berfungsi sebagai pembentul subtansi yang mengakti'asi

en2im subtansi yang menyebabkan perubahan kimiai. inatang, termasuk

manusia harus diberikan subtansi-subtansi di dalam makanannya $0ntjang, ())1&.

Agar miring merupakan salah satu bentuk medium yang digunakan

untuk membiakan mikroba, terutama yang bersifat aerobik fakultatif. 7iri-ciri

kultur termasuk pembentukan arna dan bentuk pertumbuhannya dapat segera

diamati pada agar miring.


63/258

sehingga setelah inkubasi akan terbentuk koloni-koloni secara teratur.

$>aluyo, ())6&

2.". Uraian m&dium

2.".1. M&dium PDA 3Potato Dekstrose Agar4

#omposisi

#entang $dikupas lalu dipotong-potong& ()) g

Dekstrosa () g

Agar-agar batang () g

Air suling 1))) mL

$:unaan, ())6&

+edium PDA dibuat dengan melarutkan %/ gramPotato %ektrosa Agar

$PDA& ke dalam 1))) mL air suling. Diaduk dan dipanaskan sampai larut

kemudian disterilisasi dalam autoklaf selama 18 menit pada temperatur 1(1 o7

dan tekanan atmosfer 1,8 lbs $urhasanah, ())6&.

2.".2. M&dium NA 3Nutrient Agar4

#omposisi

0kstrak ragi atau daging % g

Pepton 8 g

Agar 18 g

Auadest 1))) mL

$"abir, ())8&

+edium Nutrient Agar $A& dibuat dengan melarutkan (% gram

Nutrient Agar $A& dalam 1))) mL air suling. Diaduk kemudian dipanaskan

sampai larut dan disterilisasi dengan autoklaf "elama 18 menit pada temperatur

1(1 o7 dan tekanan atmosfer 1,8 lbs $urhasanah, ())6&.

2.".". M&dium NB 3Nutri&nt Br%t$4

Untuk Nutrient 1rothdibuat dari campuran ),8 gram ekstrak ragi, ),(

gram pepton dan )(8 gram a7l yang dilarutkan dalam 8) mL auades pada

0rlenmeyer. Untuk Nutrient 1roth dilarutkan dalam auades 18) mL pada

0rlenmeyer $kurang lebih untuk 5 buah caan petri berukuran diameter 1) cm&.

+edia yang akan digunakan didinginkan terlebih dahulu sebelum digunakan.

5%


64/258

$+ulyadi, ()1%&

#egunaan untuk penanaman non mikroorganisme.Nutrient 1rothadalah

adalah medium cair yang diproduksi sesuai dengan rumus AP4A dan ADA7 dan

mendukung pertumbuhan berbagai macam mikroorganisme yang tidak khusus

dalam gi2i kebutuhan. Nutrient 1roth digunakan dalam beberapa prosedur

laboratorium sebagai indikator karbohidrat cairan garam. +edia ini sangat cocok

digunakan untuk menganalisis prosedur bakteriologis pada produk cair dan susu.

$7onda, ()1(&

2.".). M&dium PDB 3Potato Dekstrose Broth4

#omposisi dari medium Potato %ekstrosa 1roth $PD& ialah

menggunakan ()) gram kentang, 1) gram dektrosa.


65/258

BAB III

METDE KE!JA

".1. A#at dan Ba$an

".1.1. A#at

a. Autoklaf

b. atang pengaduk

c. Labu 0rlenmeyer 1)) mLJ 8) mL

d. Lemari pendingin

e. Pemanas listrik

f. "endok tanduk

g. "patula besi

h. !imbangan analitik

".1.2. Ba$an

a. Agar

b. Air suling

c. Aluminium foil

d. enang godam

e. 0kstrak daging

f. 0tiket

58


66/258

Ditimbang A sintetik sebanyak ( gram

Ditimbang PDA sintetik sebanyak %,/ gram

g. #apas

h. +edia A $Nutrient Agar&

i. +edia $Nutrient 1roth-

j. +edia PDA $Potato %ekstrosa Agar&

k. +edia PD $Potato %ekstrosa 1roth&

".2 Ba+an K&rja

".2.1. P&m*uatan M&dium NA 3Nutrient Agar4

".2.2. P&m*uatan M&dium PDA 3Potato Dekstrosa Agar4

55

Dimasukkan ke dalam 0rlenmeyer

Ditambah auades sampai 1)) mL

Dipanaskan dan diaduk hingga mendidih

Ditutu ka as dan aluminium foil

Disterilkan dengan autoklaf pada suhu 1(1G7

Didinginkan dan disimpan dalam lemari pendingin




67/258

Ditimbang sintetik sebanyak ),3 gram

Ditimbang PD sintetik sebanyak 1,( gram

".2.". P&m*uatan M&dium NB 3Nutrient Broth4

".2.). P&m*uatan

M&dium PDB 3Potato

Dekstrosa Agar4

5*


Ditutu ka as dan aluminium foil






Ditutup kapas dan aluminium foil


Didinginkan dan disimpan dalam lemari pendinginDimasukkan ke dalam 0rlenmeyer



Ditutup kapas dan aluminium foil



68/258

56



69/258

BAB I'

HASIL PEN(AMATAN

M&diaS&*um st&ri#isasi S&ta$ st&ri#isasi S&ta$ p&n+amatan

0arna K%nsist&nsi 0arna K%nsist&nsi 0arna K%nsist&nsi

PDA#uning

keruh7air

#uning

jernih7air

#uning

jernihPadat

PDEingga

keruh7air

Eingga

jernih7air

Eingga

jernih7air

A#uning

keruh7air

#uning

jernih7air

#uning

jernihPadat

Eingga

keruh7air

Eingga

jernih7air

Eingga

jernihcair

).1. Ta* P&n+amatan

).2 P&r$itun+an

).2.1. P&m*uatan M&dium PDA (Potato Dekstrosa Agar)

Bolume medium yang akan dibuat 1)) mL

#omposisi PDA instant K %/ g dalam 1 L

Eadi, dilarutkan %,/ g PDA sintetik dalam 1)) mL auades.

).2.2. P&m*uatan M&dium PDB (Potato Dekstrosa Broth)

Bolume medium yang akan dibuat 8) mL

#omposisi PD instant K (3 g dalam 1 L

g1,(mL8)@1)))

g(3ditimbangyangerat ==

Eadi, dilarutkan PD sintetik ( g dalam 1)) mL auades.

).2.". P&m*uatan m&dium NB (Nutrient Broth)

Bolume medium yang akan dibuat 8) mL

#omposisi instant K 6 g dalam 1 L

Eadi, dilarutkan sintetik dalam 1)) mL auades.

5/


70/258

).2.). P&m*uatan M&dium NA(Nutrient Agar)

Bolume medium yang akan dibuat 1)) mL

#ompisisi A instant K () g dalam 1 L

g(mL1))@mL1)))

g()ditimbangyangahan ==

Eadi, dilarutkan A sintetik dalam 1)) mL auades.

).2. (am*ar P&n+amatan

*)


71/258

).2.1. M&dium PDA

a.

).2.2. M&dium PDB

).2.2.M&dium NA

).2.". M&dium NA

*1

LAB!AT!IUMMIK!BIL(I -A!MASI


+edium PDA $Potato %ekstrosa Agar&

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


+edium PD $Potato %ekstrosa 1roth&

a

b

cd

#eterangan

a. #apas

b. Labu 0rlenmeyer

c. +edium PDA

d. >arna kuning

keemasan

a

b

cd

#eterangan

a. #apas

b. Labu 0rlenmeyer

c. +edium PD

d. >arna kecoklatan


72/258

).2.).M&dium NB

).2.). M&dium NB

BAB '

PEMBAHASAN

*(

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASI


+edium A $Nutrient Agar&

LAB!AT!IUM

MIK!BIL(I -A!MASIUNI'E!SITAS MULA0A!MAN

+edium $Nutrient 1roth&

a

b

cd

#eterangan

a. #apasb. Labu 0rlenmeyer

c. +edium A

d. >arna kuning

keemasan

a

b

cd

#eterangan

a. #apas

b. Labu 0rlenmeyer

c. +edium

d. >arna kuning

kecoklatan


73/258

Praktikum ini mengenai pembuatan medium yang bertujuan untuk

mengetahui dan memahami cara pembuatan medium yang baik dan benar,

mengetahui cara menyimpan serta penggunaan medium. +edium adalah suatu

bahan yang terdiri dari campuran bahan makanan atau nutrien untuk

menumbuhkan suatu mikroorganisme tertentu. "yarat medium adalah

mengandung unsur hara yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangan

mikroorganisme yang dikehendaki, mempunyai tekanan osmosa, tegangan

permukaan dan p4 yang sesuai dengan kebutuhan mikroba serta medium dalam

keadaan steril, artinya sebelum ditanami mikroorganisme yang diinginkan, tidak

ditumbuhi oleh mikroorganisme lain $dicegah kontaminasi& dan tidak

mengandung 2at-2at penghambat $inhibitor&.

erdasarkan bahan yang digunakan, medium dapat dibagi menjadi tiga,

yaitu medium alamiah, medium semi alamiah dan medium sintesis. +edium

alamiah adalah medium yang terdiri atas bahan-bahan alami seperti sari buah,

ortel dan nasi. +edium semi alamiah adalah medium yang terdiri dari bahan

alamiah ditambah dengan senyaa-senyaa kimia misalnya PDA $Potato

%exstrose Agar&, +0A $Malt Ekstrak Agar&. "edangkan medium sintesis adalah

medium buatan yang terdiri dari senyaa-senyaa kimia yang komposisinya

sudah ditentukan misalnya "DA $Sabouroud %exstrose Agar&.

erdasarkan kegunaannya, medium dapat digolongkan menjadi medium

umum, medium selektif, medium deferensial dan medium diperkaya. +edium

umum adalah medium yang biasa digunakan dan dapat ditumbuhi banyak

mikroorganisme misalnya A $Natrium Agar& dan PDA $Potato %exstrose Agar&.

+edium selektif adalah medium yang ditujukan untuk jenis-jenis mikroorganisme

tertentu saja misalnya ""A $Salmonella Shigella Agar&. +edium diferensial

adalah medium yang digunakan untuk membedakan jenis mikroba satu dengan

yang lain karena adanya suatu reaksi atau cirri yang khas, contohnya adalah

medium A $1lood Agar&. +edium diperkaya adalah medium yang dipakai untuk

menumbuhkan mikroorganisme tertentu sebelum dipakai dalam suatu proses

fermentasi, contohnya +0A $Malt Ekstrak Agar&.

erdasarkan konsistensinya, medium dapat digolongkan menjadi

*%


74/258

medium padat, medium cair dan medium stengah padat. +edium padat adalah

medium dengan konsistensi padat karena adanya penambahan agar. 7ontohnya

adalah medium A $Nutrient Agar&. +edium cair adalah medium yang

konsistensinya cair, misalnya $Nutrient 1roth&. +edium setengah padat adalah

medium yang digunakan untuk melihat gerakan dari mikroorganisme apakah

bersifat motil atau non motil.

Praktikum ini diperkenalkan 3 macam medium yaitu medium A

,Nutrient Agar-, $Nutrient 1roth&, PDA $Potato %ekstrose Agar&, dan PD

$Potato %ekstrose 1roth&. +edium A dan PDA memiliki konsistensi yang padat

dikarenakan adanya penambahan agar sehingga pada suhu ruangan konsistensinya

padat, sedangkan pada medium dan PD tidak ada penambahan agar sehingga

konsistensinya menjadi cair pada suhu ruangan. +edium dengan konsistensi cair

biasanya digunakan untuk melihat pergerakan mikroba. "edangkan medium padat

digunakan untuk mengembangbiakkan mikroba dan mengamati morfologi

mikroba yang tumbuh.

+edium A dan adalah medium yang digunakan untuk pertumbuhan

bakteri karena mengandung pepton sebagai sumber nitrogen dan ekstrak daging

yang mengandung garam-garam mineral yang cocok untuk pertumbuhan bakteri.

"edangkan medium PDA dan medium PD digunakan untuk membiakkan jamur

karena medium-medium ini mengandung karbohidrat yang berasal dari kentang

yang diperlukan oleh jamur sebagai sumber nutrisi. #arbohidrat yang diperlukan

jamur adalah sebesar ),39.

A $Nutrient Agar& adalah medium dengan konsistensi padat untuk

pertumbuhan bakteri yang berarna kuning tua jernih. A instan $sintetik& yaitu

() gram dalam 1 liter. +edium A mengandung ekstrak daging, pepton dan agar

yang dilarutkan dalam auadest. 0kstrak daging mengandung nitrogen organik

dan senyaa karbon yang berfungsi sebagai 'itamin. Pepton berfungsi sebagai

nitrogen organik dan sumber nutrisi. Agar untuk memadatkan medium serta

auadest sebagai pelarut bahan lain. 7ara pembuatan medium ini adalah dengan

melarutkan ( gram A sintetik dalam 1)) mL auadest disertai pemanasan.

!ujuan dilakukan pemanasan adalah untuk mencegah agar segera membeku dan

*3


75/258

mempercepat pelarutan A dengan auadest.

$Nutrient 1roth& adalah medium dengan konsistensi cair untuk

peertumbuhan bakteri. +edium ini berarna jingga dan mengandung ekstrak

daging, pepton dan auadest. 0kstrak daging mengandung nitrogen organik dan

senyaa karbon yang berfungsi sebagai 'itamin. Pepton berfungsi sebagai

nitrogen organik dan sumber nutrisi. Audest sebagai pelarut. instan yaitu 6

gram serbuk sintetik dalam 1 liter. 7ara pembuatan medium ini adalah dengan

melarutkan sintetik dalam auadest lalu dihomogenkan.

PDA $Potato %ekstrose Agar& adalah medium dengan konsintensi padat

untuk pertumbuhan jamur. +edium ini berarna kuning dan mengandung ekstrak

kentang, dekstrosa, agar dan auadest. 0kstrak kentang berfungsi sebagai sumber

karbohidrat dan energi. Dekstrosa sebagai sumber gula dan energi. Agar sebagai

bahan pemadat dan auadet sebagai pelarut. PDA instan terdiri dari %/ gram

serbuk PDA instan dalam 1 liter. Bolume medium yang dibuat 1)) mL, sehingga

PDA yang ditimbang adalah %,/ gram dan dilarutkan dalam 1)) mL auades.

PD $Potato %exstrose 1roth& adalah medium dengan konsistensi cair

untuk pertumbuhan jamur. +edium ini mengandung ekstrak kentang, dekstrosa

dan auades. +edium ini berarna kuning dan tidak mengandung agr sebagai

pemadat. ;ungsi masing-masing komposisi sama dengan fungsi bahan pada

medium . PD instan adalah (3 gram serbuk dalam 1 liter. Bolume medium

yang dibuat adalah 8) mL, sehingga PD yang ditimbang adalah ),1( gram dan

dilarutkan dalam 8) mL auades.

7ara pembuatan medium padat $agar& adalah dengan melarutkan serbuk

medium sintetik dalam auades sambil dipanaskan hingga homogen. Dikatakan

homogen ketika medium terlihat bening. #emudian ditutup mulut 0rlenmeyer

menggunakan kapas dan alumunium foil, kemudian disterilisasi dan didinginkan

lalu disimpan dalam refrigator agar medium tidak terkontaminasi oleh mikroba.

"edangkan cara pembuatan medium cair adalah dengan melarutkan serbuk

medium sintetik tanpa disertai pemanasan hingga homogen. >arna medium

setelah dipanaskan adalah bening dimana sebelumnya arna larutan adalah

kuning keruh. "etelah itu dilakukan prosedur lanjutan seperti pada pembuatan

*8


76/258

medium padat. !ujuan melarutkan medium hingga homogen adalah untuk

meratakan nutrisi pada setiap bagian di dalam medium. Pemanasan dilakukan

dengan tujuan mempercepat pelarutan A dengan auades dan mencegah terjadi

pembekuan saat proses homogenisasi belum sempurna. !ujuan menutup mulut

0rlenmeyer adalah mencegah masuknya mikroorganisme ke dalam medium

$steril&. Pada pembuatan medium cair tidak diperlukan pemanasan karena tidak

ada agar yang perlu diproses menjadi padat. !ujuan penyimpanan medium dalam

refrigator adalah untuk menjaga kestabilannya untuk tetap padat dan untuk

menjaga kandungan nutrisi dalam medium. Agar sebagai bahan pembeku akan

mencair saat didihkan dan akan memadat dalam suhu ruangan. Pembuatan

medium padat menggunakan agar dan bukan gelatin, karena agar lebih mudah

memadat dibandingkan dengan gelatin.

Dilakukan sterilisasi medium dengan menggunakan alat autoclave.

Autoclaveadalah alat untuk mensterilkan berbagai macam alat dan medium kultur

jaringan tumbuhan dengan mengunakan tekanan 18 psi $1,)( atm& dan suhu

1(1G7 . "uhu dan tekanan tinggi yang diberikan kepada alat dan media kultur

jaringan tumbuhan yang disterilkan memberikan kekuatan yang lebih besar untuk

membunuh sel dibandingkan dengan udara panas. iasanya untuk mensterilkan

medium digunakan suhu 1(1G7 dan tekanan 18 lb=in selama 18 menit. Alasan

digunakan 1(1G7 atau (3/,6G; adala

bacot lengkap fix print

Documents