bioquimica bacteriana
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bioquimica de la bacteriasTRANSCRIPT
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE OCEANOGRAFIA, PESQUERIA, CIENCIAS
ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA
TITULO :
BIOQUIMICA BACTERIANA
N° DE PRÁCTICA: 7
PARTICIPANTE:
GAMARRA RAMOS, CARLOS ALBERTO
DOCENTE
DOC. MARIA TERESA FLORES CORDOVA
SECCION
FECHA
MIRAFLORES, 24 de junio, 2013
OBJETIVO GENERAL
Reconocer las reacciones de los microorganismos o bacterias ante pruebas
bioquímicas con carbohidratos, y el porqué de esa reacción.
OBJETIVO ESPECIFICO
Conocer como los microorganismos reaccionan frente a diversos tipos de
cultivo, en su propia reacción metabólica, el cual podremos apreciarlo por el
cambio de coloración o viraje así como la presencia de gas y presencia de
SH2, esto nos ayuda a reconocer las capacidades que posee y diferenciarlos.
FUNDAMENTO
Se fundamenta en la degradación de los carbohidratos a ácidos
Los microorganismos poseen la capacidad de fermentar diversos sustratos, los
productos finales dependen del tipo de microorganismo, del tipo de sustrato y del tipo
de enzimas que se encuentren presentes. El análisis químico de estos productos
finales ayuda a identificar los microorganismos.
MARCO TEORICO
Metabolismo microbiano como el conjunto de procesos por los cuales un
microorganismo obtiene la energía y los nutrientes (carbono, por ejemplo) que
necesita para vivir y reproducirse. Los microorganismos utilizan numerosos tipos de
estrategias metabólicas distintas y las especies pueden a menudo distinguirse en base
a estas estrategias. Las características metabólicas específicas de un microorganismo
constituyen el principal criterio para determinar su papel ecológico, su responsabilidad
en los ciclos biogeoquímicos y su utilidad en los procesos industriales.
Metabolismo de los carbohidratos
Determinar la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los
productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad
amortiguadora del sistema. La prueba Rojo de metilo es cuantitativa para la
producción de acido y requiere que los microorganismos produzcan ácidos fuertes a
partir de la glucosa, de forma que el medio del pH descienda a menos de 4.4. Esta
distinción puede hacerse a través del indicador Rojo de metilo que presenta color
amarillo por encima de un pH de 5.1 y solo presenta color rojo cuando el pH desciende
a 4.4.
Reacción en el agar triple azúcar hierro
Es una prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa y la
producción de H2S por parte de la bacteria sumándole producción de gas. El cambio
de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica fermentación. Si se
fermenta únicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre solamente en el
fondo debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la
lactosa, además los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio.
Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en el
fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden a expulsarlo
indica presencia de gas como producto final de la fermentación.
La producción de H2S se manifiesta por la aparición de un precipitado color negro
debido a la reducción de la sal de hierro presente en el medio.
PROCESO EXPERIMENTAL (practica de laboratorio)
1. METABOLISMOS DE LOS CARBOHIDRATOS:
La desintegración de los hidratos de carbono que realizan los microorganismos se ve
acompañada de ala aparición de una reacción acida. Los fermentos que desintegran
los hidratos de carbono efectúan la hidrolisis de este hasta convertirlo en glucosa o en
otro monosacáridos , de esta manera bajo la acción de la maltosa , la sacarosa y la
lactosa de los disacáridos que penetran en el interior del cuerpo bacteriano sufren
hidrolisis y desintegración de los poli y disacáridos en monosacáridos .
a) Pasos a seguir :
Identificar cada tubo
Replicar la cepa en estudio en tubos que contenga glucosa, lactosa, sacarosa y
manitol.
Considerar positivo al cambio de pH del medio acido que da un color amarillo,
considerándose fermentativa, si hay ruptura del medio se considera
fermentativa con gas.
Medios de cultivo:
Sacarosa Lactosa ManitolGlucosa
PROCESO DE LABORATORIO
Regeneración de los medios
Cuando nuestro medio de cultivo ha sido preparado días antes de la
inoculación (medio gelificado)
Tiene por finalidad eliminar las burbujas de aire que se presentar nuestro
medio de cultivo y así no dar resultados erróneos en el momento de la
lectura. El medio es sometido a un baño maría con agua hirviendo por un
tiempo no prolongado (generalmente hasta que esté en forma inicial en medio
líquido).
Cuando nuestro medio de cultivo ha sido preparado en mismo día en la
que se va hacer la inoculación (medio liquido)
No es necesario el proceso de regeneración de medio, se puede utilizar
directamente.
Trabajamos con medio de cultivo pre-preparados días antes:
Proceso de regeneración:
Por un tiempo no muy prolongado.
a) metabolismo de los carbohidratos :
Identificación de los tubos debidamente rotulados; sacarosa(s), lactosa (L),
glucosa (G) y manitol (M).
inoculación con el microorganismo (Staphylococcus aureus ) en los tubos con
medio de cultivo predeterminado con anterioridad, el proceso es una simple
estocada vertical y central hacia el fondo de cada tubo.
Ejemplo
GGGGL GS M
GGGGL GS M
acondicionar nuestras muestras para la incubación
Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por
un promedio de 12 a 48 horas.
RESULTADO: etapa oxidativa
Sacarosa Lactosa ManitolGlucosa
2. REACCIÓN EN EL AGAR TRIPLE AZÚCAR HIERRO:
Sembrar la cepa en agar TSI (triple sugar iron agar) por puntura profunda y estría en la
superficie inclinada. Incubar a 37°C por 24 horas .observar la base y la parte inclinada
acida (amarilla) considerando la prueba positiva, con o son ennegrecimiento
considerando presencia de SH2 positivo, y si hay producción de gas como
fermentativo.
b) Pasos a seguir :
Identificar el tubo TSI
Replicar la cepa en estudio en el tubo que contenga los 3 carbohidratos en las
siguientes proporciones glucosa (1 g), lactosa (10 g) y sacarosa (10 g).
Considerar los parámetros que se pueda presentar.
Nota: como la finalidad es ver la reacción en el agar, este proceso no necesita pasar
por la regeneración de medios.
Medio de cultivo: TSI (triple sugar iron agar)
PROCESO DE LABORATORIO
b) Reacción en el agar triple azúcar hierro :
Identificación del tubo TSI (triple sugar iron agar) el cual debe estar
debidamente rotulado
inoculación con el microorganismo (Staphylococcus aureus ) en el tubo con
medio de cultivo predeterminado con anterioridad, el proceso es una simple
estocada vertical y central hacia el fondo de cada tubo, seguido de una estría
sobre la superficie inclinada del medio.
Ejemplo
Acondicionar e Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura
optima de 37°c por un promedio de 12 a 48 horas.
RESULTADO:
Vista de Pinchazo profundo Vista de la superficie
RESULTADOS Y CONCLUSIONES
CUADRO N°1
METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS
Lectura
Incubación a 37°C / por 24 a 48 horasInoculación : Staphylococcus aureus
sacarosa lactosa glucosa manitol
Oxidativa SH2
oxidativa SH2
oxidativa SH2
oxidativa SH2
Conclusión:
En conclusión el Staphylococcus aureus , solo llego a la etapa oxidativa ,
etapa en la cual usa el oxigeno del tubo para hacer la degradación ,el cual ha
producido cambio de viraje en la coloración tornándose amarillo solo en la parte
superficial
El microorganismo utiliza la fuente de carbono más asequible en el medio,
la glucosa, esta por estar en menor proporción (1g). Pero como se encuentra
en el medio y en muy baja concentración se agota rápidamente. Los productos
de su degradación acidifican el medio que cambia de rojo a amarillo.
SacarosaLactosa ManitolGlucosa
CUADRO N°2
REACCIÓN EN EL AGAR TRIPLE AZÚCAR HIERRO
Lectura
Incubación a 37°C / por 24 a 48 horasInoculación : Staphylococcus aureus
glucosa ⊕ SH2 Θ (fermentativo)
Conclusión:
En conclusión el Staphylococcus aureus , nos dio los resultados de
glucosa(positivo) , SH2 (negativo) y fermentativo , el medio sembrado no
cambio de coloración a rojo en la superficie , se mantuvo en la etapa
fermentativa
Hubo proceso de utilización de la sacarosa o lactosa por lo que se mantuvo de
color amarrillo y no viro de coloración.
DISCUSIÓN:
Si fermenta glucosa cambia a amarillo en todo el tubo, lo que pasa que
en el pico de flauta los productos ácidos de la fermentación de la
glucosa se oxidaron y también se oxidaron las peptonas a aminas
alcalinas, quedando el pico de color rojo. Ahora si además fermenta
lactosa y o sacarosa esto hace que en el pico de flauta se neutralicen
las aminas y el exceso de ácido hace virar el indicador al color
amarillo.--Gómez Del Mónaco, Natalia 14 may 2009 (UTC)
BIBLIOGRAFIA
M.; ARIAS MICROBIOLOGÍA EN LOS ALIMENTOS, metabolismo bacteriano.
Microbiología 5a Ed. Prescott, Harley & Klein | 2004 | McGraw-Hill-
Página de internet:
http://www.saberdeciencias.com.ar/index.php/apuntes-de-microbiologia/167-
microbiologia-metabolismo-bacteriano