bullet page one precast gelを用いた 核酸分析の高 …bullet page one precast...
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Bullet PAGE One Precast Gel は、SDS-PAGE だけでなく、核酸電気泳動の高速化にも対応しています。また点眼瓶タイプの臭化エチジウム溶液と、ディスポトレイ -S を使用した時短染色プロトコールにより、簡単で速く核酸を検出できます。
特 長 ● 電気泳動から検出まで約 30 分(電気泳動 12 分 + 染色 15 分+ 脱色 10 秒)● シャープなバンド、低バックグラウンド● 特別な試薬は不要(泳動緩衝液はトリス - グリシン緩衝液、染色液は臭化エチジウム溶液)● マルチチャンネルピペットの使用が可能(17 ウェルタイプのみ対応)
■ 電気泳動~検出までの時間Bullet PAGE One Precast Gel を使用すると、電気泳動から検出まで約 30 分で完了します。
高速化法 通常法
組み合わせ
・Bullet PAGE One Precast Gel・泳動緩衝液 (25 mM トリス、192 mM グリシン緩衝液)
・臭化エチジウム溶液 (0.44mg/ml) 点眼ビン入り
・アガロース粉末・TAE 緩衝液またはTBE 緩衝液・臭化エチジウム溶液(10mg/ml)
ゲル作製 不要 ゲル調製 30 分、ゲルの凝固(1 時間)
電気泳動 12 分(400 V)* 30 ~ 50 分(100 V)
染色 15 分 30 分
脱色 10 秒 30 分
計 約 30 分 約 3 時間
* 電気泳動時の電圧が 300 V の場合、泳動時間は約 18 分です。
■ 高速化法(簡単な操作)
①電気泳動 ③染色 ④検出12 分 15 分
Bullet PAGE One Precast Gel, 5-11%, 17wells(#13078-94)
②臭化エチジウム溶液の準備
<ディスポトレイ -S に調製>水 40 mL臭化エチジウム溶液 1 滴
核酸分析の高速化
177Bullet PAGE One Precast Gel を用いた
分離比較 Bullet PAGE One Precast Gel は、グラジエントゲル(5 ~ 11%ゲル、5 ~ 15%ゲル)の使用において、20 ~1,500 bp の DNA がシャープなバンドで分離できます。アガロースゲル電気泳動と比べると、分離パターンは 3%ゲルに近く、広範囲で同等以上の分離が得られます。
■ Bullet PAGE One Precast Gel 使用
ゲル グラジエントゲル 均一ゲルゲル濃度 5 ~ 11% 5 ~ 15% 6% 8%
製品番号 13 ウェル17 ウェル
13077-0413078-94
13079-8413080-44
13081-3413082-24
13083-1413084-04
泳動時間 12 分(400 V )
核酸の泳動像
① ② ③
500→
100→
(bp)
20→
1,500→
① ② ③
500→
100→
(bp)
20→
1,500→
① ② ③
500→
100→
(bp)
1,500→
① ② ③
500→
100→
(bp)
1,500→
<実験条件>サンプル :① 100bp DNA Ladder One(Ready to use)(#07908-75) 2 μL
② 20 bp DNA Ladder(タカラバイオ #3409A) 2 μL ③ siRNA Ladder Marker(タカラバイオ #3430) 2 μL (注)②と③は取扱説明書の使用例に従って、6 × Loading Buffer と混合して使用しています。
泳動用緩衝液 :泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 ) PAGE 用(#30340-91)を 1 ×に調製染色 :臭化エチジウム染色
■ アガロースゲル使用
ゲル アガロース ( 低電気浸透 ) for 150 ~ 1,500 bp fragment
ゲル濃度 2% 3%
製品番号 01153
泳動時間 50 分(100 V )
核酸の泳動像
① ②
500→
100→
(bp)
1,500→
① ②(bp)
20→
500→
100→
1,500→
<実験条件>サンプル :① 100bp DNA Ladder One(Ready to use)(#07908-75) 3 μL
② 20 bp DNA Ladder(タカラバイオ #3409A) 3 μL (注)②は取扱説明書の使用例に従って、6 × Loading Buffer と混合して使用しています。
泳動用緩衝液 :トリス - ほう酸 -EDTA 緩衝原液(10 倍濃縮)(#35440)を 1 ×に調製染色 :臭化エチジウム染色
染色工程比較 Bullet PAGE One Precast Gel は、厚さが 1 mm のポリアクリルミドゲルのため、脱色を行わなくても低いバックグラウンドで検出できます。一方、アガロースゲルの場合は、電気泳動後の染色と脱色で約 1 時間を必要とします。あらかじめ臭化エチジウムをゲルに添加する方法は、泳動中に染色されるので時短になりますが、核酸が臭化エチジウムの電荷の影響を受けて、分子サイズに合った泳動距離で検出できないことがあります。その他にバックグラウンドが高い、泳動槽に臭化エチジウムが付着するなどのデメリットもあります。
■ Bullet PAGE One Precast Gel 使用
① ② ③ ④ ① ② ③ ④
1 滴 / 水 40 mL
電気泳動 12 分
染色 15 分
脱色 10 秒
検出脱色(水):10 秒 脱色(水):30 分
<実験条件>電気泳動ゲル :Bullet PAGE One Precast Gel, 5-11%, 17wells(#13078-94)サンプル :100bp DNA Ladder One(Ready to use)(#07908-75) ① 1 μL ③ 3 μL
20 bp DNA Ladder(タカラバイオ #3409A) ② 1 μL ④ 3 μL (注) ②と④は取扱説明書の使用例に従って、6 × Loading Buffer と混合して使用しています。
泳動用緩衝液 :泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 ) PAGE 用(#30340-91) を 1 ×に調製染色 :ディスポトレイ -S(#16526-82)に水 40 mL を入れ、臭化エチジウム溶液 (0.44mg/ml)(#02393-94)1 滴を添加(臭化エ
チジウム濃度 0.5 μg/mL)し、15 分染色後、脱色が 10 秒と 30 分で染色像を確認。
■ アガロースゲル使用
① ② ③ ④ ① ② ③ ④ ① ② ③ ④ 電気泳動 40 分
染色 30 分
脱色 30 分、60 分
検出
脱色(水):10 秒 脱色(水):30 分 脱色(水):60 分
<実験条件>電気泳動ゲル :アガロースプレート TAE(2%), LE( 低電気浸透 ) クラシックタイプ , 1 列 × 16wells(#01989-34)サンプル :100bp DNA Ladder One(Ready to use)(#07908-75) ① 1 μL ③ 3 μL
20 bp DNA Ladder(タカラバイオ #3409A) ② 1 μL ④ 3 μL (注)②と④は取扱説明書の使用例に従って、6 × Loading Buffer と混合して使用しています。
泳動用緩衝液 :トリス - 酢酸 -EDTA 緩衝原液(10 倍濃縮)(#35430)を 1 ×に調製染色 :ディスポトレイ -S(#16526-82) に水 80 mL を入れ、臭化エチジウム (10mg/ml)(#14631-94)4 μL を添加(臭化エチジ
ウム濃度 0.5 μg/mL)し、30 分染色後、 脱色が 10 秒、30 分、60 分で染色像を確認。
ご注意 試験・研究用以外には使用しないでください。
ナカライテスク株式会社〒 604-0855 京都市中京区二条通烏丸西入東玉屋町 498
■販売取扱店
1811T
Web site https://www.nacalai.co.jp/
0 1 2 0 - 4 8 9 - 5 5 2価格 ・納期のご照会製品に関する技術的なご照会 https://www.nacalai.co.jp/ss/Contact/
TEL:075-211-2703
試 薬 は こ こ に
ご注意 試験・研究用以外には使用しないでください。※記載の内容は、'18 年 11 月現在の情報に基づいております。※価格に消費税は含まれておりません。
Bullet PAGE One Precast Gel
製品仕様 プレート :W100 mm × H80 mm × T3.2 mm(ガラス製)ゲルサイズ :W80 mm × H60 mm × T1.0 mmウェル数(ウェル容量):13 ウェル(40 μL)、17 ウェル(28 μL)< 注意事項 >・W100 mm × H80 mm × T3.2 mm のサイズのプレートが使用可能な泳動装置を使用してください。
推奨機種)WEP-N バーティカル高速泳動槽(ジェレックスインターナショナル #WEP-N)・使用前に電気泳動装置への適合性(プレートサイズなど)とパワーサプライの性能(出力範囲など)をご確
認ください。・サンプル添加量は、ウェル容量の半量(13 ウェルは 20 μL、17 ウェルは 14 μL)以下を推奨します。
使用上の注意 ・泳動用緩衝液には、25 mM トリス、192 mM グリシン緩衝液をご使用ください。 弊社調製品:泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 )PAGE 用(#30340-91)
・Bullet PAGE One Precast Gel には、尿素やホルムアミドなどの変性剤が入っていません。核酸によって、 分離がアガロースゲル電気泳動と異なる場合があります。必要に応じて、予備検討を行ってからご使用 ください。
・泳動サンプルの核酸量や添加容量が多くなると、バンド形状に影響が生じる場合があります。・泳動時間は、泳動用緩衝液の温度やゲル濃度などによって、若干変わります。
製品リスト 均一濃度ゲル グラジエントゲル製品番号 ゲル濃度(%) ウェル数 製品番号 ゲル濃度(%) ウェル数13081-34 6 13 13077-04 5 ~ 11 1313082-24 17 13078-94 1713083-14 8 13 13079-84 5 ~ 15 1313084-04 17 13080-44 17
貯法:冷蔵 容量:10 sheets 価格:20,000 円
その他使用製品
● 臭化エチジウム溶液 (0.44mg/ml) 点眼瓶タイプ ● ディスポトレイ -S
ピペット不要
Bullet PAGE One Precast Gel に最適なサイズ
1 滴量:約 45 μL1 滴で 0.5 μg/mLの染色液を40 mL調製可能
外寸 :150 mm × 105 mm × 19 mm底面サイズ:122 mm × 80 mm
価格表
製品名 規格 製品番号 容量 価格100bp DNA Ladder One(Ready To Use) SP 07908-75 500 μL 14,000滅菌水 SP 06442-95 500 mL 2,000泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 ) PAGE 用 SP 30340-91 1 L 5,500臭化エチジウム溶液 (0.44mg/ml) 点眼ビン入り SP 02393-94 10 mL 5,000ディスポトレイ -S - 16526-82 25 pieces 2,000