株式会社アイスティサイエンス

H26.12.3~6（金沢市） 第108回日本食品衛生学会

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① LC-MS/MS測定条件

② QuEChERS抽出と注意点

③固相ミニカラムによる精製と注意点

STQ法による動物用医薬品迅速一斉分析のご提案

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LC

MS/MS

カラム

移動相

流速

注入量

イオン化モード

測定モード

：Prominence（島津製作所）

：API3200（エービー・サイエックス）

：YMC-Triart C18（ワイエムシィ）

：A…0.05％ギ酸 B…アセトニトリル

：0.2mL/min

：5uL

：ESI Positive

：MRM（Multiple Reaction Monitoring）

東京都安研 神田氏の資料※を参考に測定条件を検討した。 ※神田真軌,第104回日本食品衛生学会学術講演会講演要旨集,2012年,P.102

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測定条件

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

0 10 20 30 40

B c

onc.(

%)

Time(min)

time(min) 0 3 25 30 30.01 40

A conc.(%) 95 95 5 5 95 95

B conc.(%) 5 5 95 95 5 5

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Code No.56110 劇 PL動物薬LC/MS Mix 1（27種混合） Q1 Q3 Q1 Q3

Sulfaguanidine 3.65 215 156 215 92Sulfacetamide 9.08 215.1 156.1 215.1 92.1Sulfisomidine 9.69 279.1 124.1 279.1 186.1Diaveridine 10.6 261.2 245.1 261.2 123.2Sulfathiazole 10.7 256 156 256 92.2Trimethoprim 11 291.1 230.3 291.1 261.3Sulfapyridine 11 250 156.2 250 92.2Sulfadiazine 11.1 251.1 156.2 251.1 92.2Ormetoprim 11.5 275.2 123.1 275.2 81.1Sulfamerazine 11.5 265.1 108 265.1 92.2Sulfadimidine 12.5 279.1 92.1 279.1 65.1Sulfamonomethoxine 12.5 281.1 92.1 281.1 156.1Sulfisozole 12.6 240.1 156.2 240.1 92.1Sulfachlorpyridazine 13.6 285.1 156 285.1 92.2Pyrimethamine 13.8 249.1 177.2 249.1 198.2Sulfamethoxypyridazine 14.1 281.1 156.1 281.1 92.1Sulfamethoxazole 14.1 254 156 254 92.1Sulfadoxine 14.2 311.1 156.1 311.1 92.1Sulfaethoxypyridazine 14.3 295.1 156.2 295.1 92.2Sulfatroxazole 14.3 268.1 156.2 268.1 92.1Sulfisoxazole 14.6 268.1 156.2 268.1 92.1Sulfabenzamide 15.4 277 156 277 92Sulfadimethoxine 15.6 311.1 156.2 311.1 92.1Sulfaquinoxaline 15.6 301 156.2 301 92.3Sulfanitran 17.3 336.1 134.1 336.1 65Sulfabromomethazine 17.49 357 156.2 357 92Sulfanilamide - 173.1 156 173.1 92

定量 定性Name RT

試料 10g

NaCl 1g

クエン酸3Na 1g

クエン酸水素2Na 0. 5g

硫酸Mg(無水) 4g

水 (10 – X) mL

アセトニトリル 10mL

遠心分離(3500rpm 5min)

アセトニトリル層

ホモジナイズ（13000 rpm）

撹拌（手で振とう 1min）

Point2 試料中水分量（Y %）に応じて水を添加 X=10 (g)× Y (%)

Point3

凍結粉砕でパウダー状に粉砕

Point1

30分/4検体

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溶媒抽出操作（抽出）

・・・塩析、液液分配 ・・・緩衝作用

NaCl、MgSO4 クエン酸塩類

Point2

Point3

Point1

4種類の塩による相互作用

8 6

凍結粉砕のメリット

Poitn1

粉末状に粉砕することで、試料全体が均一化。

すじや繊維質が多い切断し難い試料でも細かく粉砕

（うなぎの皮やイカやタコなど）

サラサラのパウダーになるため試料採取が容易

冷凍状態のまま保管することが可能で再分析も容易。

極低温で粉砕することで熱による分解や酵素活性を

抑えたまま、試料を均一化することが可能。

均一性

保管性

粉砕力

分解抑制

操作性

9 7

Sample with a water content between 25 und 80 % (e.g. bananas) require the addition of water to achieve a total of 10 g water (when 10 g sample is employed).

Point2

73.3

74.2

75

20.5

22.7

23

0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100%

牛／ヒレ

豚／ヒレ

鶏／ささみ 水分

タンパク質

脂質

炭水化物

灰分

廃棄率

http://quechers.cvua-stuttgart.de/

9 8

After the initial single-phase extraction with MeCN, salts (MgSO4 and NaCl ) were added to induce phase separation.

Point3

Anastassiades et al; Journal of AOAC International Vol.86, No.2, 2003

By adding the citrate buffering salts most samples obtain pH-values between 5 and 5.5. This pH range is a compromise, at which both, the quantitative extraction of sour herbicides and the protection of alkali labile and acid labile compounds is sufficiently achieved.

http://quechers.cvua-stuttgart.de/

アセトニトリル層

C18-30 + PSA-30

C18-50

溶出 メタノール 1mL

添加 水 0.5mL

洗液 メタノール-水（4/1）1mL

定容 (4mL, 水で調製)

流出液

Point4

C18・・・脂質、低極性成分

PSA・・・脂肪酸

10分/1検体

9 9

固相抽出操作（精製）

固相ミニカラムで夾雑成分を除去

Point5

水を添加して溶媒の極性を調製することでLCのカラムの負担を軽減

※自動前処理装置により固相抽出操作の自動化が可能。

Point4

Point5

9 10

PSAミニカラムによる精製効果

Point4

抽出液通液後の固相ミニカラム 固相ミニカラム通液後の試料

弱陰イオン交換相互作用

-Si-CH2CH2CH2NHCH2CH2NH3 -Si-CH2CH2CH2NCH2CH2NH2

＋ ＋

（極性） （無極性）

ACN：水 （5:95）

ACN：水 （95:5）

夾雑物

●HPLCカラムの劣化を防ぐ ●ピーク形状の維持 ●分析時間の短縮

メリット

C18ミニカラムによる精製効果

グラジエント分析

❑ 固相C18を用いない場合

（極性）

夾雑物

❑ 固相C18による精製の場合

LCで使用されている分離

カラムは「ODS」で、固相

C18と同じ充填剤。

ACN：水 （4:1）

無極性夾雑物

予め固相C18で精製

することでLCカラムの

負荷を防ぐ。

Point5

11

16 12

A-11 １３：４５～

１階 A会場（ホール）

STQ法を用いた動物用医薬品

一斉分析への応用の検討