drogas con heterósidos flavonoides
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Reconocer la importancia de los compuestos fenólicosen farmacognosiaTRANSCRIPT
DROGAS CON HETERÓSIDOS FLAVONOIDES Universidad Nacional Mayor de san Marcos (2015)
Catedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional
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Drogas con heterósidos flavonoides
Angelo P. Motta,I Gabriela S. Donayre,I Roxana Y. Ancasi,I Yuly Y. Cotrina,I Dra. Arilmi Gorriti, II Dra. Augusta Córdoba R, II Q.F Katherine Acosta A. II I Alumnos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica- Escuela de Farmacia y Bioquímica. UNMSM. Lima-Perú II Profesoras de Laboratorio de la Asignatura de Farmacognosia I.
RESUMEN
El presente trabajo tuvo como objetivo reconocer la importancia de los compuestos fenólicos
en farmacognosia e identificar flavonoides cualitativamente en “naranja” Citrus sinensis, “ruda”
Ruta graveolens y “cebolla” Allium cepa L.. Se realizó la extracción de flavonoides utilizando
diferentes métodos, así mismo se realizaron pruebas de identificación de flavonoides y se usó
el estándar de hesperidina para el análisis cromatográfico del albedo de la naranja. Al
presentar respuestas positivas en todas las reacciones de identificación, los resultados indican
que el extracto seco de naranja contiene hesperidina. El extracto acuoso y etanólico de ruda
contiene rutina. El extracto alcohólico de cebolla contiene quercetina.
Palabras clave: Flavonoides, hesperidina, rutina, quercetina, naranja, ruda, cebolla
ABSTRACT
The present study aimed to recognize the importance of phenolic compounds in pharmacognosy and identify qualitatively flavonoids in “orange” Citrus sinensis, “rude” Ruta graveolens and “onion” Allium cepa L.. Extraction of flavonoids was conducted using different methods, also flavonoids identification tests were performed and the Standard hesperidin was used for chromatographic analysis of the orange. At present positive responses in all reactions of identification, the results indicate that dry orange extract contains hesperidin. The aqueous and ethanol extract contains rough routine. The alcoholic onion extract containing quercetin.
Key words: Flavonoids, hesperidin, rutin, quercetin, orange, rue, onion
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I. INTRODUCCIÓN
Los flavonoides son pigmentos naturales
presentes en los vegetales y que protegen al
organismo del daño producido por agentes
oxidantes, como los rayos ultravioletas, la
polución ambiental, sustancias químicas
presentes en los alimentos, etc. El organismo
humano no puede producir estas sustancias
químicas protectoras, por lo que deben
obtenerse mediante la alimentación o en
forma de suplementos. Están ampliamente
distribuidos en plantas, frutas, verduras y en
diversas bebidas y representan componentes
sustanciales de la parte no energética de la
dieta humana 1
Los flavonoides contienen en su estructura
química un número variable de grupos
hidroxilo fenólicos y excelentes propiedades
de quelación del hierro y otros metales de
transición, lo que les confiere una gran
capacidad antioxidante. Tres características
estructurales son importantes para su
función: a) La presencia en el anillo B de la
estructura catecol u O-dihidroxi; b) La
presencia de un doble enlace en posición 2,3;
c) La presencia de grupos hidroxilo en
posición 3 y 514. La quercetina presenta las
tres características mientras que la catequina
solo presenta la segunda y la diosmetina la
primera.2
II. OBJETIVOS
- Reconocer cualitativa y
cuantitativamente flavonoides en
Citrus sinensis.
- Identificar cualitativamente
flavonoides “cebolla”, Allium cepa L
- Evaluar la presencia de flavonoides
en “ruda”, Ruta graveolens
Figura 1. Flavonoides. Estructura básica y tipos
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III. DESARROLLO
3.1. ANÁLISIS CUALITATIVO
3.1.1. Hesperidósido:
“Naranja” Citrus sinensis
A. Extracción
Se pesó 20g de albedo de naranja en un
frasco ámbar, se agrega 20 mL de
etanol y 2 mL de NaOH y se dejó
reposar por 7 días. Pasado el tiempo de
maceración, se decantó el líquido de
maceración, se acidificó a pH5 y se dejó
reposar por 30minutos para la formación
de cristales. Luego se filtró, para obtener
los cristales de hesperidina en la torta,
se llevó a secar para la ebullición de los
solventes hasta obtener el extracto seco
de hesperidina.
B. Reacciones específicas de identificación
Reacción con H2SO4 cc.
Se colocó 1mg de extracto seco de
hesperidina en un tubo de ensayo, se
agregó gotas de H2SO4cc. Se observó la
coloración naranja
Reacción con HCl cc.
Se colocó 1mg de extracto seco de
hesperidina en un tubo de ensayo,
agregue gotas de HClcc. Se observó el
precipitado blanco.
Reacción con HNO3
Se colocó 1mg de extracto seco de
hesperidina en un tubo de ensayo, se
agregó gotas de HNO3. Se observó la
coloración parda rojiza.
Reacción con NaOH 30%
Se colocó 1mg de extracto seco de
hesperidina en un tubo de ensayo,
agregó gotas de NaOH 30%. Se
observó la coloración amarillo naranja
3.1.2. Rutinósido
“Ruda” Ruta graveolens
Para realizar el ensayo de los rutinósidos se pesó 10 g de Ruta
graveolens, se separó 5 g para un extracto acuoso y 5 g para un extracto etanólico.
A. Extracto etanólico En un beaker de 250 mL se colocó 5 g
del material vegetal y se agregó
alcohol de 96° c.s.p. recubrir. Se pasó
a un baño maría durante 20 minutos,
luego se decantó con ayuda de una
pipeta Pasteur a los tubos donde se
le agregó respectivamente, los
reactivos siguientes: wilson, shinoda,
FeCl3 (ac)
B. Extracto acuoso
En un beacker de 250 mL se colocó 5 g
del material vegetal y se agregó agua
destilada c.s.p. recubrir. Se pasó a un
baño maría durante 20 minutos, luego
se decantó con ayuda de una pipeta
Pasteur a los tubos donde se le agregó
respectivamente, los reactivos
siguientes: wilson, shinoda,FeCl3 (ac)
3.1.3. Quercetina :
Cebolla “Allium cepa L.”
Para realizar el ensayo de quercetina,
se pesó 2 g de cáscara de cebolla y se
agregó 25 mL de alcohol. Luego se
llevó a baño maría por 15 minutos.
A. Reacciones específicas de
identificación
Reacción con Pb(CH3COO)2 Se
colocó 0.5 mL de extracto
etanólico de cebolla en un tubo de
ensayo , se agregó gotas de
FeCl3 . Se observó la coloración
verde en frio ,rojo oscuro en
caliente
Reacción con FeCl3
Se colocó 0.5 mL de extracto
etanólico de cebolla en un tubo
de ensayo, se agregó gotas de
FeCl3. Se observó el precipitado
de color amarillo
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3.2. ANÁLISIS
CROMATOGRÁFICO
Sistema de solventes: Acetato de etilo:
metanol: agua (100: 13.5:10)
Revelador: Solución etanólica de
cloruro férrico
Soporte: Sílica gel
Estándar: Solución de hesperidina
Muestra: Extracto seco de albedo de
naranja
IV. RESULTADOS
4.1. ANÁLISIS CUALITATIVO
4.1.1. Hesperidósido:
En la figura 2, se detalla la preparación
de los extracto seco de naranja.
En la Tabla N° 1 se muestra los resultados obtenidos para la caracterización de hesperidósido en la Naranja.
Tabla 1. Reacciones específicas de identificación del
hesperidósido
4.1.2. Rutinósido
En la figura 3, se detalla la preparación de
los extractos de ruda.
En la Tabla N° 2 y 3 se muestran los
resultados obtenidos para la
caracterización de Rutina de la Ruta
graveolens. En la figura 3 y 4 se visualiza
respuestas similares para las extracciones
acuosa y alcohólica.
Reacción Observación Resultad
o
H2SO4 cc Coloración
naranja
+++
HCl cc Precipitado blanco
+++
HNO3
Coloración pardo rojizo
+
NAOH 30% Coloración
amarillo naranja
+++
Figura 2. Preparación del extracto seco de Citrus sinensis . A. Maceración alcohólica del albedo de naranja en un frasco ámbar por 7 días (izquierda) y decantación del líquido de maceración (derecha) B. Acidificación del macerado a pH 5 para la formación de cristales C. Filtración D. Secado de la torta en una estufa por 1 día E. Obtención del extracto seco de hesperidina.
pH inicial
pH 5
Figura 3.Obtención de rutinósidos. A. Hojas de Ruda; B. Extracto Acuoso; C. Extracto Etanólico.
Nota: positivo trazas (+), abundante (+++)
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Tabla 2. Caracterización de rutina de la Ruta graveolens, extracción acuosa
Tabla 3. Caracterización de rutina de la Ruta graveolens, extracción alcohólica
DROGA REACCIÓN OBSERVACIÓN RESULTADOS
RUDA Ruta
graveolens Extracto acuoso
Wilson (Ac. Bórico +
Citrato de sodio)
Coloración rosada.
Observación en el Uv: Fluorescencia
verde
++
Shinoda Coloración rosada +
FeCl3 Coloración verde ++
DROGA REACCIÓN OBSERVACIÓN RESULTADOS
RUDA Ruta
graveolens Extracto
alcohólico
Wilson (Ac.
Bórico + Citrato
de sodio)
Coloración amarilla – rosada
Observación en el Uv: Fluorescencia
verde
++
Shinoda Coloración rosada ++
FeCl3 Coloración verde ++
B
Figura 4. Caracterización del extracto acuoso de Ruta graveolens. A. Blanco (extracto acuoso); B. Extracto con el reactivo de Wilson; C. Extracto con reactivo Shinoda; D. Extracto con solución de FeCl3; E. Extracto
acuoso con el reactivo de Wilson observado en lámpara UV
Figura 5. Caracterización del extracto alcohólico de Ruta graveolens. A. Blanco (extracto alcohólico); B. Extracto con el reactivo de Wilson; C. Extracto con reactivo Shinoda; D. Extracto con solución de FeCl3; E.
Extracto acuoso con el reactivo de Wilson observado en lámpara UV
Nota: positivo trazas (+), abundante (++)
Nota: positivo trazas (+), abundante (++)
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4.1.3. Quercetinósido
En la figura 6, se detalla la preparación del
extracto etanólico de cebolla.
En la Tabla N° 4 se muestra los resultados
obtenidos para la caracterización de
quercetinósido en la cebolla
Tabla 4. Reacciones específicas de identificación del quercetinósido
Reacción Observación Resultado
Pb(CH3COO)2 Precipitado
de color amarillo
+++
FeCl3
Coloración verde en
frio
+
Coloración rojo oscuro en caliente
+
4.2. ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO
Debido a la probable contaminación del
sistema de solventes no se determinó
R.F ni de la muestra, ni del estándar de
hesperidina
En la Tabla N° 5 se muestra que no se obtuvo el R.F de la cromatografía, del extracto seco de naranja Citrus sinensis para la identificación la hesperidina
Tabla 5. Resultado de la cromatografía del hesperidósido
Heterósidos flavonoides
Relación de Flujo (R.F)
Estándar de Hesperidina
No se determino
Muestra del extracto seco de albedo de naranja
No se determino
Bf.
Figura 7. Análisis Cromatográfico A. Cromatoplaca observada en lampara UV. Bf. Bandas fluorescentes. B. Revelado con solución de FeCl3
bajo campana de extracción C. Cromatoplaca, revelada con FeCl3, vista a luz visible. D. Cromatoplaca, revelada con FeCl3, vista a luz UV, no se aprecian las fosforescencias iniciales.
Figura 6. Extracto etanólico de cebolla. A. 2 g de cascara de cebolla en 25 mL de acochol. B. Extracción
por decocción, en baño maría por 15 minutos. C. Obtención del extracto etanólico
Nota: positivo trazas (+), abundante (+++)
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V. DISCUSIÓN
Las múltiples investigaciones que se han
realizado sobre la quercetina, evidencian
que este flavonol contiene un alto poder
antioxidante y está presente en extractos
vegetales como la cebolla tipo bulbo. 3
Generalmente, los solventes polares son
empleados en la extracción de glicosidos o
agliconas.4 Por lo cual, en la práctica se
utilizó etanol como solvente de la
decocción. Así se obtuvo el extracto
alcohólico que se emplea en las reacciones
de identificación cualitativa.
En la tabla 4 se observó que la muestra
presento coloración amarilla al reaccionar
con Pb(CH3COO)2. Al reaccionar con FeCl3
en frio, se observó una coloración verde,
mientras que luego de someterla a calor,
presento coloración roja.5
La reacción del FeCl3 con grupos fenólicos
puede dar lugar a la formación de
compuestos coloreados, dado que los
grupos hidroxilo actúan como activadores
del anillo bencénico al donarle densidad,
esto ocasiona que la aromaticidad del anillo
se debilite, adquiriendo más las
características de un polieno conjugado.2
La aparición de un color verde sugiere la
presencia de un derivado de catecol.4
La reacción con el acetato de plomo se
fundamenta en formación de un complejo
coloreado entre el plomo y los di y
polihidroxifenoles como las flavonas,
flavonoles, flavanonas dihidroxiladas,
flavanoles y antocianidinas di y
trihidroxiladas.2 Es así que se apreció un
ligero precipitado amarillo.
Para el experimento de la caracterización
de Rutina de la Ruta graveolen se
realizaron dos extractos: acuosos y
etanólico resultando reacciones positivas
para ambos, que demuestra que los
rutinósidos son compuestos solubles en
agua y etanol debido a su carácter
fenólico,6 destacando prioritariamente en el
extracto alcohólico, por su solubilidad
relativamente alta7 por ser el rutinósido un
flavonoide. Entre las reacciones de análisis
cualitativo que se llevaron a cabo podemos
mencionar a la reacción de Shinoda,
donde el magnesio metálico es oxidado
por el HCl concentrado, dando como
productos al H2, que es eliminado en forma
de gas y el MgCl2, que es el que forma
complejos con los flavonoides dando
coloraciones características6, esto fue
evidenciable en la práctica ya que el
rutinósido por ser un flavonol (quercetin 3-
rutinoside)8 dio una coloración amarillenta,
la cual fue mucho más notoria en la
reacción con el extracto etanólico debido a
que el magnesio divalente intensificó la
coloración por estar doblemente
coordinado en presencia de una alta
concentración del rutinosido. Además, se
logró observar una fluorescencia verde en
una cámara UV que demuestra su intensa
absorción en la región ultravioleta
(340nm)8, esto debido a los sistemas
aromáticos conjugados6 presente en la
estructura de rutinósido.
En la tabla 1, los resultados en la
coloración con los reactivos usados para el
análisis de Hesperidina en la Naranja
(Citrus sinensis) dieron positivo sin
excepción, por parte del ácido nítrico la
coloración resultó parda rojiza pero con
una intensidad baja, esto pudo deberse a
que el ácido a pesar de ser fuerte no se
encontraba en la concentración óptima. 9
En el caso de la reacción de Shinoda, el
extracto de ruda en contacto con ácido
clorhídrico con virutas de magnesio
metálico se genera hidrógeno, este último
reduce al flavonoide (rutina), lo cual se
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reconoce por la coloración rosada. En la
reacción de coloración con FeCl3, la
muestra de extracto de ruda cambio a una
coloración verde. Esto se debe a que la
naturaleza polifenólica de los flavonoides,
específicamente compuestos con orto-
difenoles, lleva a la formación de
coloraciones variadas en presencia de
FeCl3, que en este caso por presentar
rutina, produce una coloración verde . 9
VI. CONCLUSIONES
- Se reconoció cualitativamente
hesperidina en albedo de “naranja”,
Citrus sinensis, mediante las
reacciones con ácido sulfúrico
concentrado, ácido clohídrico
concentrado, ácido nítrico e
hidróxido al 30% mientras que por el
método cromatográfico no se
corroboró la presencia de este tipo
de heterósido flavonoide.
- Se identificó cualitativamente los
flavonoides, de tipo quercetina en la
cascara de cebolla por medio de la
reacción de acetato de plomo y
cloruro férrico.
- Se evaluó la presencia de
heterósidos flavonoides de tipo
quercetín3-rutinóside (flavonol) en
Ruta graveolens mediante análisis
cualitativo.
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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