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III CURSO DE BIOSEGURIDADLABORATORIO ESTATAL DE SALUD PÚBLICA

Técnicas de monitoreo para la detección de

microorganismos en el medio ambiente

Gloria Alicia Figueroa Aguilar


Condiciones Ambientales

REQUISITO: El laboratorio debe asegurarse que

las condiciones ambientales, bajo las cuales se realizan los ensayos microbiológicos,

no invaliden los resultados de ensayo ni comprometan la calidad requerida de los resultados.


Ejemplos de condiciones ambientalesno deseables

Condiciones Ambientales

Efecto posible sobre el ensayo

Lugar a monitorear

Deficiente esterilidad biológica

Contaminación de las muestras y cultivos

Área de siembra y de preparación de

muestras

Mayor polvo en suspensión en

el aire

Contaminación de las muestras y cultivos

Área de siembra y de preparación de

muestras


El laboratorio debe establecer:

Un programa documentado de programa documentado de limpieza y limpieza y desinfeccióndesinfección

que tenga en cuenta

los resultados de vigilancia de las condiciones ambientales y la posibilidad de contaminación cruzada.

Para la desinfección se deben tomar en cuenta agentes antimicrobianos que no pongan en riesgo la salud del

operador y que no dañen las superficies de trabajo


Limpieza y desinfección

üOrganizarlastareas de limpiezaydesinfección del laboratorio.üEstablecer la frecuencia de realización de lasmismasüSe detallan las superficies a limpiar y/o desinfectar, el nivel de limpiezarequerido (trapeohúmedo, trapeomojado, etc.), los desinfectantes a prepararysumodo de uso.üEl personal querealiza la actividad

Propósito:paraque loslaboratoriosestén en condicionesadecuadaspararealizar los ensayosypermitir al personal quetrabaje en forma segura.


Limieza y desinfección

üSon los procedimientos operativos empleados durante la realización del trabajo en el laboratorio.

üTiene como principal objetivo evitar la contaminación en todas las etapas del ensayo, de lo contrario implicaría obtener resultados erróneos, la infección del personal, etc.


El laboratorio debe trabajar tomando las siguientes precauciones :

Por ejemplo: • Asegurarse que el área de trabajo esté limpia y que no haya corrientes de aire.

• Limpiar la superficie de trabajo con un desinfectante adecuado, antes y después del trabajo.

• Durante la siembra y manipuleo estéril de muestras no hablar y evitar toser, en caso necesario utilizar un cubrebocas.

• Abrir los tubos de ensayo y botellas cerca de la llama del mechero.

• Trabajar, evitando movimientos innecesarios.

• La manipulación del material patógeno o tóxico requiere trabajar en áreas cerradas o bajo campanas de bioseguridad.

• Utilizar el equipo de seguiridad apropiado de acuerdo a la actividad.

• Evitar la formación de aerosoles. Se pueden formar al abrir las cajas de Petri, los tubos, las botellas o los frascos, al usar mezcladores, jeringas, centrífugas, etc. y cuando se esterilizan asas.


ü Relativo al área de trabajo:

• Utilizar vestimenta de uso exclusivo en el laboratorio, no debe ser usado fuera del área de trabajo del laboratorio.

• Dejar en zona de oficinas o externa al laboratorio los abrigos. portafolios, etc. Y en el área del laboratorio no comer, beber, fumar.

ü Relativo a la Higiene del personal técnico:• Antes y al finalizar la labor en el laboratorio, el personal debe lavarse las

manos con un producto adecuado (jabón desinfectante).

• El personal debe tener uñas cortas y limpias, el pelo debe estar recogido, no tener anillos ni pulseras. Uso de cubrebocas cuando sea necesario.

• El personal que presente infecciones serias en manos o cara no debe realizar exámenes microbiológicos.


MONITOREO AMBIENTAL:

La calidad microbiológica del aire y las superficiesLa calidad microbiológica del aire y las superficies

del laboratorio en microbiología es

un indicador de la efectividad de las tareas realizadas en cuanto a:

FLos programas de limpieza y desinfección y a el cumplimiento del reglamento interno de trabajo.


Procedimiento: MONITOREO AMBIENTAL.

Establece :

FMetodología para la toma de muestra.F Lugares de toma de muestra.F Límites de tolerancia o criterios de aceptación o rechazo.FFrecuencia de monitoreo. FAcciones correctivas a tomar en caso de desvíos de los límites establecidos.

Esto se aplica tanto a control ambiental del área analítica del laboratorio como para las campanas de flujo laminar y /o bioseguridad, EN ACTIVO Y EN PASIVO.


El procedimiento de muestreo para monitoreo ambiental puedeincluir (dependiendo del ensayo que realiza el laboratorio):

• Determinación cuantitativa de microorganismos presentes en el ambiente (recuento total o recuento de determinados tipos de microorganismos como por ejemplo hongos).

• Determinación cualitativa de algunos patógenos y/o indicadores dependiendo de los ensayos que realiza el laboratorio (Ejemplo: Salmonella spp,Listeria spp, Staphylococcus aureus).


MÉTODO PARA CONTROL DE CALIDAD DEL AIRE:

•En activo

•En pasivo


• Toma de muestra: durante un tiempo estipulado (15min), se exponen placas de Petri con medio de cultivo no selectivo y un medio para cultivo de hongos (Cuenta Estándar / Agar papa dextrosa), en el área de trabajo.

• Áreas a monitorear o zonas de toma de la muestra: área de siembra, área de preparación de la muestra.

• Tiempo y temperatura de incubación: Luego de la exposición al aire, las placas se cierran e incuban durante 48 horas para BMA y de 3 a 5 días para hongos.

• Frecuencia de realización de los controles.Semanal en diferentes turnos de trabajo.

• Criterio de conformidad:número máximo de colonias portiempo de exposición de las placas. Ejemplo durante 15 minutos se permite hasta 15 colonias

Los resultados se expresan como unidades de colonias (UFC) por placa


Método para muestreo de superficies•Colocar sobre la superficie que se va a muestrear una plantilla estéril de papel aluminio con un cuadro de 5x5 cm recortado en el centro.

•Humedecer un hisopo estéril en una solución amortiguadora de fosfatos (10 mL) y eliminar el exceso de líquido.

•Con el hisopo inclinado en ángulo de 30° frotar 3 veces la superficie delimitada por la plantilla, cada una en dirección opuesta.

• Enjuagar el hisopo en la solución amortiguadora, hasta obtener una suspensión y repetir la operación con el mismo hisopo, sobre tres superficies más.

•Regresar el hisopo al tubo y retirar del mismo la parte que estuvo en contacto con los dedos.


Bacterias mesofílicas aerobiasNOM 092-SSA1

•Agitar perfectamente los tubos con la suspensión anterior. Colocar en 2 placas petri 1 mL y 0,1 mL de la suspensión y agregar de (15 a 20) mL de agar cuenta estándar fundido.

•Incubar a 35ºC por 48 horas

•Contar colonias

•Realizar cálculos: No. Colonias (UFC) X vol (10ml)100cm2

•Reportar como Bacterias Mesofílicas Aerobias UFC/cm2


Coliformes NOM 133-SSA1

•Colocar en 2 placas petri 1 mL y 0,5 mL de la suspensión y agregar de (12 a 15) mL de agar rojo violeta bilis fundido y conservado a 45°C dejar solidificar y agregar una segunda capa (5 mL) de agar rojo violeta.

•Incubar las placas durante 24 horas a 35ºC

•Realizar la cuenta de colonias tipicas

•Realizar cálculos: No. Colonias (UFC) X vol (10ml)100cm2

•Reportar como UFC / cm2


Microorganismos específicos

• NOM 114 SSA Determinación de Salmonella spp

• NOM 115 SSA Determinación de Staphylococcus aureus


Acciones correctivas


GRACIAS

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