OBSERVACION DE CROMOSOMAS MEIOTICOS

De la Cruz Roxana1; Luna Connie

1; Nuevo Natalie

1;Ruiz Roberto

1; Briceo Ruben

1

1_Facultad de Ciencia Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Macos

Palabras clave: Meiosis, paquiteno, Acheta domesticus.

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INTRODUCCION:

La meiosis es un mecanismo celular

mediante el cual se reduce a la mitad el

nmero cromosomas, quedando

siempre un representante de cada

pareja de cromosomas homlogos. As,

durante la reproduccin sexual, la

fusin de dos gametos de dos

individuos para formar un nuevo

permite la formacin de un zigoto con

las dos componentes de cada de cada

pareja de cromosomas homlogos, es

decir, dar a un organismo diploide. En

la meiosis inicialmente hay una

replicacin del genoma, y

posteriormente ocurren dos divisiones

celulares (denominadas meiosis I y

meiosis II), producindose 4 clulas

haploides. Cada una de estas clulas

haploides terminar convirtindose en

un gameto.

Durante la meiosis se da un proceso

denominado recombinacin. En las

clulas germinales, y en todas las

somticas, la informacin gentica

aportada por la madre y por el padre se

encuentra en cromosomas diferentes,

ambos progenitores aportan una copia

para cada cromosoma. Durante la

recombinacin se intercambian parte

de las cromtidas entre cada pareja de

cromosomas homlogos obteniendo

cromosomas con informacin nica que

da lugar a la variabilidad gentica.

Todo esto ocurre en la Profase I es por

ello la importancia de su estudio.

La observacin de los cromosomas

meiticos se realiza para el estudio de

su morfologa y los cambios que sufren

estos durante este mecanismo. Se

extrajeron las gnadas de Acheta

domesticus macho para la obtencin de

espermatocitos en desarrollo que nos

permiten observar las fases de la

meiosis. Estos fueron tratados con en

el laboratorio mediante un protocolo.

OBJETIVOS:

Conocer el protocolo de

obtencin de lminas meiticas

para el estudio de cromosomas

paquitnicos.

Observar y caracterizar las

principales fases de la meiosis

en clulas animales.

Evaluar el uso de las gnadas

de grillo como muestra para la

obtencin de lminas meiticas.

MATERIALES:

Para realizar el tratamiento se

utilizaron los siguientes

materiales:

Agua destilada

Laminas portaobjeto

Laminillas portaobjeto

Papel toalla

Placas Petri

Pipetas Pasteur

Gnadas de Acheta domesticus

Carnoy

HCl 1N

Targa

Orceina actica

METODOLOGIA:

Para realizar el procedimiento de

obtencin y diferenciacin de

cromosomas, se utiliz como muestra

biolgica las gnadas de Acheta

domesticus macho, las cuales fueron

extradas mediante una diseccin, luego al

ser extradas se le suministro gotas de

suero fisiolgico, para evitar que la

muestra se deteriore.

A continuacin las gnadas fueron

sumergidas en solucin fijadora (CARNOY)

la cual deshidrata el tejido el impide el

movimiento de los cromosomas. Se

mantuvo en esta solucin un tiempo

aproximado de 15 minutos.

Luego se procedi a lavar, sumergiendo

las gnadas en agua destilada un tiempo

de 5 minutos.

Siguiendo el procedimiento, se

sumergieron las gnadas en solucin

hidrolizaste (HCl 1N) la cual disuelve

pectinas de la lmina media y crea poros

en la pared celular, para permitir que las

dems soluciones puedan penetrar en la

clulas. Se mantuvo en esta solucin un

tiempo aproximado de 21 minutos.

Pasado este tiempo se procedi a romper

la membrana que sostiene dentro los

tbulos de las gnadas, para poder

liberarlos y que estos puedan estar en

contacto directo con la soluciones.

Se volvi a enjuagar la muestra, la cual

an conservaba la membrana gonadal con

los tbulos parcialmente liberados,

remojndola en agua destilada por un

tiempo de 5 minutos.

Pasado este tiempo se procedi a separar

totalmente los tbulos, agrupndolos en

pares si fuera posible, para que as las

siguientes sustancias difundan las clulas

de los tbulos.

A continuacin se procedi a sumergir a

la muestra, la cual ya no conserva la

membrana gonadal y sola consiste de

tbulos liberados, esta fue sumergida en

solucin ablandadora la cual facilita la

disociacin de masas celulares y fragiliza la

carioteca, para poder apreciar a los

cromosomas de mejor manera. Se

mantuvo en esta solucin un tiempo

aproximado de 4 minutos.

Luego se volvi a enjuagar remojando los

tbulos en agua destilada por un tiempo de

5 minutos.

Para finalizar se pasaron los tbulos a la

lmina portaobjeto, para poder agregarles

solucin colorante (Orcena 2%) la cual

teir los cromosomas y otros

peculiaridades como crommeros o Knobs.

Los tbulos estuvieron remojados en esta

solucin un tiempo de 20 minutos.

Por ltimo, pasado el tiempo

determinado, se procedi a colocar la

laminilla y a realizar el squash, para

observar al microscopio.

RESULTADOS:

PROFASE I:

Paquiteno:

Lamina: PA

Foto: DSC_2327

Aumento: 1000X

Coordenadas: 132.4/30.8

Lamina: PA

Foto: DSC_2334

Aumento: 1000X

Coordenadas: 131.9/30.6

Se observan los bivalentes, cromosomas

homlogos apareados, los crommeros,

knobs y el cromosoma X (ms pigmentado

y de mayor tamao).

METAFASE I:

Aumento: 1000X

Se observan las ttradas alineadas en el

ecuador de la clula.

Zoom:2X

PROFASE II

En esta fase se observa la presencia de

cromosomas compactos (reordenados) en

nmero haploide y por el rompimiento de

la membrana nuclear, mientras aparecen

nuevamente las fibras del huso.

Aumento: 1000X

Zoom: 2X

METAFASE II:

Se observ una forma particular de la

metafase pero en general se debe observar

los cromosomas en el plano ecuatorial con

las cromtides parcialmente separadas.

Aumento: 1000X

Zoom: 2X

DISCUSIN DE RESULTADOS:

El protocolo realizado es efectivo para la

preparacin de lminas meiticas, ya que

nos permiti observar varias fases de la

meiosis. Sin embargo es necesario llevarlo

a cabo con mucho cuidado debido a la

fragilidad de las clulas animales y al

pequeo tamao de los tbulos

seminferos de la especie utilizada.

La cantidad de cromosomas en la fase de

paquiteno fueron abundantes pero de

difcil obtencin con un solo ensayo debido

a la corta duracin que presenta esta fase.

Adems de su difcil separacin de los

cromosomas sin daar la muestra.

Solo se obtuvo una clula en fase de

Paquiteno que se encontraba con los

cromosomas bien separados (Foto:

DSC_2327) por lo que no se pudo elaborar

el cariotipo.

Tampoco pudimos encontrar la fase de

Diacinesis debido a una mala separacin de

los tbulos seminferos lo que nos impidi

una buena observacin, por la acumulacin

y yuxtaposicin de las clulas, adems a la

baja tincin por el uso de orcena muy

diluida.

CONCLUSIONES

El protocolo realizado fue eficaz para

la obtencin de lminas meiticas y las

observaciones sus fases.

La especie utilizada permiti y puede

permitir la observacin de las

diferentes fases de la Meiosis,

desarrollando el protocolo

adecuamente.

Se pudo caracterizar la mayora de

fases meiticas.

RECOMENDACIONES:

Tener cuidado al supervisar el tiempo

empleado para cada reactivo.

Se recomienda tambin separar la

membrana gonadal y los tbulos

seminferos con mucho cuidado.

Es recomendable realizar el protocolo

varias veces para obtener suficientes

clulas en fase de Paquiteno y

Diacinesis.

Por ltimo se recomienda realizar un

squash uniforme y con fuerza sobre la

muestra, para evitar espacios de aire

entre la muestra.

BIBLIOGRAFIA:

Prez G. , PRCTICAS PRINCIPIOS

DE GENTICA Y MEJORA VEGETAL,

Departamento Produccin Agraria

Universidad Pblica de Navarra, 3

I.A. 08/09.

http://www.biologia.edu.ar/cel_eu

ca/meiosis.htm

http://www.oocities.org/geneticaf

ca/MEIOSIS.pdf

ACTIVIDAD PRACTICA No. 9

BIOLOGIA CELULAR MITOSIS Y

MEIOSIS. CARIOTIPO, Universidad

Centroccidental Lisandro

Alvarado Decanato de Ciencias de

la Salud, Noviembre 2009.

Megas M. , Molist P. , Pombal M. ,

ATLAS de HISTOLOGA VEGETAL y

ANIMAL, Departamento de

Biologa Funcional y Ciencias de la

Salud. Facultad de Biologa.

Universidad de Vigo. (Versin:

Marzo 2015)