PRINCIPIOS DEL DIAGNOSTICO MICOLÓGICO

Laboratorio de Microbiología y Parasitología Medicas

Equipo 5

Integrantes: Ayala Hernández MarcosNolasco Galindo FernandoRicardiz Lucas JessicaAlcántara Moreno Renata

Valencia González Pablo Alberto

Instituto Politécnico NacionalEscuela Superior de Medicina

A. Clasificación y definición de las Micosis

B. Micosis tegumentarias: dermatofitosis o tiñasa) Definición

b) Géneros de los agentes etiológicos

c) Clasificación de las tiñas por la localización topográfica o anatómica

Tineacapitis seca

Tineacorporis

Tineaunguium

d) Tres etapas del proceso del diagnóstico etiológico por Laboratorio

Preanalítica (Obtención y manejo de muestra)

Analítica (Examen directo, Cultivo en Sabouraud)

Posanalítica (Interpretación de resultados)

e) Cuadro de síntesis

C. Candidosis mucocutánea: genital (vaginitis)a) Definición

b) Cuadro c´línico, signos y síntomas

c) Tres etapas del proceso del diagnóstico etiológico por Laboratorio

Preanalítica (Obtención y manejo de muestra)

Analítica (Examen directo, Cultivo en Sabouraud, Prueba de tubo germinativo)

Posanalítica (Interpretación de resultados)

Clasificación de Las Micosis (Dr. Gonzáles Ochoa)

Micosis Exclusivamente Tegumentarias

Micosis Inicialmente Tegumentarias

Micosis Secundariamente Tegumentarias

Micosis por Oportunistas

Micosis Exclusivamente Tegumentarias

Afectan las capas superficiales de la piel y sus anexos queratinizados.

No son invasivos

Frecuentes en dermatología

Distribución amplia y contagiosas.

Ejemplos: Dermatofitos o tiñas.

Micosis Inicialmente Tegumentarias

Se adquieren a través del traumatismo de la piel.

Microorganismos en fase infectante: suelo y vegetales.

No son contagiosas.

Infección: tejido subcutáneo, puede diseminarse.

Enfermedades de este grupo: Micetoma, Esporotricosis, Cromomicosis y Rinosporidiosis.

Micosis Secundariamente Tegumentarias

Agentes: Hongos dimórficos, se encuentran en fase micelial o infectante.

Zonas endémicas.

Infección por vía aérea.

Fuerte respuesta inmunológica: granuloma tuberculoide, incluso reacción piógena mixta.

Resolución espontanea o puede diseminarse.

Organismos que la causan: Coccidiomicosis, Histoplasmosis, Paracoccidioidomicosisi y Blastomicosis Norteamericana.

Micosis por Oportunistas

Localizacion Ubicua

Infección localizada o diseminada.

Mala respuesta inmune e histopatológica

Tratamiento dependiendo del paciente

Quien la causa: Candidosis, Criptocosis, Aspergilosis y Zigomicosis. Sin embargo cualquier hongo puede causar problemas de la salud en personas inmunocomprometidas.

MICOSIS EXCLUSIVAMENTE TEGUMENTARIAS

DEFINICIÓN DE DERMATOFITOSIS

1) Se refiere a un complejo de entidades causadas por algunos hongos filamentosos.

2) Son un conjunto de micosis superficiales que afectan a la piel, específicamente a la epidermis (estrato córneo) y sus anexos como uñas y pelo.

3) Estas son causadas por un grupo de hongos:

Comúnmente llamadas Tiñas o Tineas

Queratinofílicos

es decir afinidad hacia la queratina

Queratinolíticos

que metabolizan la

queratina

por medio de queratinasas lo que les permite utilizar la queratina de esas

estructuras como fuente de nitrógeno.

GENEROS DE LOS AGENTES ETIOLOGICOS DE LAS DERMATOFITOSIS

Trichophyton: tiene microconidios que miden de 8 a 50 µm, el número de septos va de 4 a 6

son alargados cuya porción distal es redondeada, de pared delgada y lisa,

Microsporum: tiene macroconidios miden de 8 a 15 µm, (5 a 15 septos).

son en forma de huso, de pared gruesa, rugosa, con hoyuelos o prominencias que semejan tubérculos denominados equínulas, multiseptados

Epidermophyton: los macroconidios son numerosos, miden de 7 a 12 µm, con 4 septos transversos, en forma de mazo o basto, redondeados en su polo

distal, de pared gruesa y lisa,

Los dermatofitos se dividen en tres géneros que se distinguen por las características morfológicas de sus macroconidios:

Clasificación de dermatofitos (según su hábitat natural)

Geofílicos

• Viven en el suelo

• Son patógenos de Animales y humanos

Zoofílicos

• Parasitan pelo y piel de animales y pueden transmitirse al humano

Antropofílicos

• Infectan al humano y se trasmiten de humano a humano.

En la actualidad se consideran 40 las especies causantes de enfermedad, de las cuales cinco son las más frecuentes:

T. rubrum,

T. mentagrophytes,

T. tonsurans,

M. canis,

E. floccosum.

El dermatofito que causa el 80-90% de esta micosis es T. rubrum.

CLASIFICACIÓN DE LAS TIÑAS

Según su localización topográfica anatómica de la infección.

CLÍNICAMENTE, LAS INFECCIONES POR TIÑA SE CLASIFICAN DE ACUERDO CON LA PROFUNDIDAD Y LA REGIÓN DEL CUERPO

AFECTADA

TINEACAPITIS: SECA(TIÑA DE LA CABEZA)

Microsporum canisTrichophyton tonsurans

Placas seudoalopésicas

Pelos cortados

Descamación

Prurito

Tiña de la cabeza. (Seca)

TINEACORPORIS(TIÑA DEL CUERPO)

Microsporum canisTrichophyton rubrumTrichophyton mentagrophytes

Placas eritematoescamosa

Forma anular

Borde activo

Centro de menor actividad y descamación intensa

Prurito

Tiña del cuerpo

TINEAUNGUIUM(TIÑA DE LAS UÑAS)

Trichophyton rubrumTrichophyton mentagrophytes

Inicio a borde distal

Opacas con estrías

Amarillentas

Quebradizas

Gruesas

Material como migajón de pan

No duele

No causa prurito

Tiña de las uñas (Onicomicosis)

Tinea capitis

• tiña de la cabeza, es la infección del cuero cabelludo.

Tinea barbae

• tiña de la barbilla, es la infección de la barba y del área del cuello.

Tiñas superficiales

Tinea manuum

• tiña de la mano, es la infección de las palmas y región interdigital.

Tinea pedis

• tiña del pie o "pie de atleta“, afecta principalmente a los pies en las plantas de los mismos y las zonas interdigitales.

Tinea corporis

• tiña del cuerpo, es la infección del tronco y extremidades.

Tinea cruris

• tiña crural o tiña de la ingle,es la afección en la ingle.

Tinea unguium

• tiña ungueal o tiña de la uña (una forma de onicomicosis

• es la infección de la uñas

Querión de Celso

Tiña fávica o favus

Granuloma tricofítico

Micetoma

Enfermedad dermatofítica o de Hadida

Tiñas profundas

Tinea Corporis.

Agente etiológico T. rubrum, M. canis y T. mentagrophytes

Entidad nosológica Tinea corporis

Signos y sintomas. Son lesiones pruríticas y aparecen en cualquier parte de la piel expuesta y lampiña, con más frecuencia en la cara, brazos y espalda. Las tineas de la piel tienen un aspecto circular característico con bordes eritematosos y descamados con pequeñas vesículas y/o pápulas.

Muestra biológica. Piel

Técnica de recolección.

Raspa la lesión de la piel, utilizando un borde romo como el del portaobjetos de un microscopio. Los raspados de la lesión de piel se colocan en un líquido que contiene hidróxido de potasio (KOH) y se examina bajo el microscopio.

Exámenes de laboratorio.

Examen de hidróxido de potasio en lesión de piel

Estructura Diagnostica

Tinea unguium

Agente etiológico T. rubrum y T. mentagrophytes

Entidad nosológica Tinea unguium

Signos y sintomas. Uñas de coloración blanquecina o amarillenta, quebradas, frágiles y deformes. Al progresar la infección se ve la separación de la lámina ungueal del lecho de la uña. Ocasionalmente se puede acompañar de dolor, o incomodidad y raramente se observa celulitis de la piel vecina. El extremo distal de la uña es la que se afecta con muchísima más frecuencia, en menor frecuencia puede iniciar en el extremo proximal o lateral.

Muestra biológica. Piel o uña

Técnica de recolección.

Raspa la uña, utilizando un borde romo como el del portaobjetos de un microscopio, o debridamiento del tejido lesionado debajo o alrededor de la uña.

Exámenes de laboratorio.

Examen de hidróxido de potasio al 30% enuña y el cultivo micológico (agar de Sabouraud)

Estructura Diagnostica

ETAPA PRE- ANALÍTICA.

Recolección de escamas, uña y pelo.

Técnica para toma de muestras.

Obtención de escamas de piel con cinta Scotch:

1) Cortar una tira de 5cm de cinta scotch

2) Colocar sobre la lesión, haciendo presión.

3) Retirarla y colocarla sobre un porta objetos con las escamas hacia abajo, previa aplicación del aclarante.

Útil cuando la descamación es escasa o no se dispone de un portaobjetos estéril.

Técnica para toma de muestras.

Obtención de escamas de piel:

1) Limpiar la zona afectada con un trozo de gaza empapado en alcohol

2) Raspar la lesion con el borde de un portaobjetos (esterilizados en pares y envueltos en papel manila).

3) Recibir las escamas en el otro portaobjetos.

4) Empalmar los portaobjetos y envolverlos de nuevo en el papel manila.

5) Escribir los datos del paciente sobre la envoltura.

Técnica para toma de muestras.

Obtención de cabellos parasitados con dermatofitos:

1) Examinar la lesión en cuero cabelludo del paciente con lupa.

2) Depilar con pinzas los cabellos quebrados a la altura del foliculo piloso y al mismo tiempo colectar sobre un portaobjetos o caja de petri estéril de escamas.

3) Empalmar los portaobjetos y envolverlos o cerrar la caja de petri.

4) Escribir los datos del paciente sobre la envoltura.

Cuando el paciente es un niño que no puede resistir la depilación se toma una muestra con cinta de scotch.

Técnica para toma de muestras.

Obtención de raspado de uñas:

1) Limpiar la uña con esponja con alcohol.

2) Colocar la yema del dedo afectado sobre el margen de un portaobjetos estéril o dentro la superficie de una caja de petri estéril.

3) Raspar la uña con una navaja estéril pasándola de la parte proximal a la distal.

4) Empalmar los portaobjetos o cerrar la caja de petri y envolverlos.

5) Los fragmentos de uñas se obtienen mediante tijeras o cortaúñas estériles y se depositan en una caja de petri.

Si mas de una uña necesita ser raspada se utiliza material estéril para cada una. Para la obtención de muestras de uñas de los pies, el laboratorista debe sentarse frente el paciente quien debe acomodar el talón sobre su rodilla, esto permite una posición cómoda para la toma de muestra.

ETAPA ANALÍTICA.

Método directo.

Cultivo de sabouraud.

Análisis de muestras como pelo y escaras cutáneas.

Las muestras son tratadas con hidroxido de potasio (KOH) al 10% para disolver el tejido dejando intacto al hongo o se tiñe con colorantes especiales para hongos.

Se encontraran esporas asexuales atípicas, hifas o levaduras en el microscopio.

Examen directo.

Tinea capitis. Invasión endotrix se observa intacto el límite del pelo y en el interior hifas

Tinea capitis. invasión endo-ectotrix se observan hifas dentro y fuera del pelo formando una cubierta

en la parte externa del pelo.

Examen sauboraud.

Se usa para cultivar dermatofitos y otros tipos de hongos.

En el medio de cultivo, la peptona, la tripteina y la glucosa son los nutrientes para el desarrollo de los microrganismos.

El alto contenido en glucosa, cloranfenicol y el pH acido, inhiben la proliferación bacteriana y favorecen la de los hongos. El agar es un agente solidificante.

El aspecto micelio y la naturaleza de las esporas asexuales bastan para identificar al hongo.

Cultivo de m. canis.

ETAPA POST- ANALÍTICA.

Informar la existencia de estructuras esperadas del hongo, confirmando el diagnostico etiológico y el nosológico.

Tinea capitis: Seca.

Agente etiológico M. Canis

Entidad nosológica Tinea capitis

Signos y síntomas. Placas alopécicas escamosas con puntos negros debido a pelos rotos en la superficie.Picazón en el cuero cabelludo.

Cuadro de Síntesis

Muestra biológica. Cabello.

Técnica de recolección. 1) Examinar la lesión en cuero cabelludo del paciente con lupa.

2) Depilar con pinzas los cabellos quebrados a la altura del foliculo piloso y al mismo tiempo colectar sobre un portaobjetos o caja de petri estéril de escamas.

3) Empalmar los portaobjetos y envolverlos o cerrar la caja de petri.

4) Escribir los datos del paciente sobre la envoltura.

Exámenes de laboratorio. Directo.-Solucion de KOH al 10-30% con tinta Parker permite localizar esporas endothrix o ectothrix del talla piloso.Cultivo de sabouraud.

Estructura diagnostica. Tinea capitis. Invasión endotrix se observa intacto el límite del pelo y en el

interior hifas

Tinea capitis. invasión endo-ectotrix se observan hifas dentro y fuera del pelo

formando una cubierta en la parte externa del pelo.

El género Candida es el grupo másimportante de hongos patógenosoportunistas.

C. albicans es la especie que ocasiona lamayor parte de las infecciones mucocutáneasocasionadas por el género Candida.

Factores predisponentes: anticonceptivosorales, embarazo, diabetes mellitus, VIH,tratamiento con antibióticos ycorticoesteroides.

Infección vulvogenital /vulvovaginitis ocasionada por el hongo Candida albicans

Microbiota normal

Depende del estado inmunológico

Infección localizada o diseminada; respuesta histiopatológica mal

organizada

Inmunidad específica escasa o nula

Mucocutánea

Cutánea

OTRAS INFECCIONES

CAUSADAS POR

C. albicans

Visceral

Máculas blancas semejantes al requesón, que se adhieren en forma laxa a la superficie de la mucosa, de color blanco amarillento y de aspecto mucoide; zonas eritematosas en la vulva

Leucorrea viscosa moderada o abundante, amarillenta con aspecto de requesón y fétida

Ardor intravaginal y prurito vulvar; además de enrojecimiento e inflamación

Micción y relaciones sexuales dolorosas

• Obtención y manejo de muestras: exudado vaginal

Preanalítica

• Examen directo (KOH y tinciones)

• Cultivo

Analítica• Interpretación y significado de resultados (directo, cultivo y tubo germinativo)

Posanalítica

Etapa preanalítica

Ténica de exudado vaginal Paciente: sin aseo o medicamentos24h previas, sin menstruación

Posición ginecológica, se introduce elespejo vaginal sin lubricantes

Se toma la muestra con 3 hisoposestériles de zonas con alteraciones oexudado abundante.

Tubos

1. Soln. salina estéril, KOH al 10%

2. Frotis

3. Siembra en medios de cultivo

Etapa analítica Examen microscópico directo

KOH al 10% (disolver el tejido, dejar intacto a los hongos)

Tinción de Giemsa

Tinción de Gram (gram +)

Utilidad clínica: levaduras únicas o en gemación (blastoconidas) con o sin la presencia de pseudohifas. Información preliminar o presuntiva, en algunos casos llegar a ser diagnóstica.

Cultivo en agar Sabouraud dextrosa; agar papa dextrosa

pH ácido, cloranfenicol y ciclohexamida, dextrosa: favorece el crecimiento de hongos y limita el de bacterias

Extendido con Gram. Levaduras y pseudohifasde Candida spp.

Cultivo en agar dextrosa Sabouraud. Colonias de Candida spp.

Etapa analítica (cultivo y microscopía)

Morfología microscópica Hongo dimórfico: micelial y levaduriforme

Levaduras de gemación ovaladas, diámetro de 2-6µm

Hifas (filamentos ramificados) y pseudohifas(células alargadas y unidas como salchichas)

Morfología en cultivo Macroscópicas

Pálidas y opacas

Blanco-marrón

Lisas o rugosas

Microscópicas

Blastoconidias (estructura procedente de la gemación en la reproducción asexual; cúmulos esféricos sobre las hifas)

Pseudohifas (células alargadas y unidas como salchichas) y/o clamidosporas terminales (aumento del tamaño de la hifa y paredes gruesas)

Blastoconidias de diferentetamaño, redondeadas, de pareddelgada, gemantes Hifas y/o pseudohifas.

Etapa analítica

Tubo germinativo (permite diferenciar las especiesde Candida albicans de las no albicans).

Procedimiento Suspender un inóculo de la cepa pura de Candida con 24

horas de desarrollo en 0,5 mL de suero humano o deconejo. Incubar a 35 – 37 ºC por 2h y 30 min.

Colocar 2 ó 3 gotas de la suspensión en un portaobjeto ycubrir con un cubreobjeto, observar a 40x.

La prueba es positiva al visualizar la estructuraelongada que se origina a partir de la levadura.

Tubo germinativo: primordio hifal a partir de unconidio. Parecen prolongaciones tempranas de lascélulas levaduriformes similares a hifas producidas sin unestrechamiento en el punto de origen de la célula

Tubo genimativo positivo. Extensión filamentosa de la levadura, sin estrechamiento (constricción) en su sitio de unión con la blastoconidia, que da lugar a hifas verdaderas.

Formación de Tubo germinaltivoPositivo. Gram, 40x.

Etapa posanalítica

Dx clínico presuntivo: Sígnos y síntomas Máculas blancas semejantes al requesón, que se adhieren en forma laxa a la superficie de la mucosa, leucorrea viscosa moderada o abundante, amarillenta con aspecto de requesón y fétida; ardor intravaginal y prurito vulvar; además de enrojecimiento e inflamación; micción y relaciones sexuales dolorosas

Dx nosológico: Candidiasis/candidosis vaginal o vulvovaginal; vulvovaginitis por Candida

Dx etiológico Examen directo: levaduras únicas o en gemación (blastoconidas) con o sin la presencia depseudohifas

Cultivo

Macroscópico: colonias pálidas y opacas, blanco-marrón, lisas o rugosas

Microscópico: blastoconidias, hifas y/o pseudohifas, clamidosporas. Levaduras de gemación ovaladas, diámetro de 2-6µm

Tubo germinativo positivo: Extensión filamentosa de la levadura, sin estrechamiento(constricción) en su sitio de unión con la blastoconidia

CUADRO DE SÍNTESIS

(Candida albicans)

Agente etiológico Candida albicans

Entidad nosológica Candidiasis vaginal o vulvovaginal ; vaginitis

por Candida

Signos y síntomas

Máculas blancas Leucorrea viscosa Ardor intravaginal y prurito vulvarMicción y relaciones sexuales dolorosas

Muestras biológicas o clínicas para el examen de laboratorio

zonas con alteraciones o exudado abundante.

Técnica de recolección o toma de muestra

Ténica de exudado vaginalPaciente: sin aseo o medicamentos 24hprevias, sin menstruaciónPosición ginecológica, se introduce elespejo vaginal sin lubricantesSe toma la muestra con 3 hisoposestériles de zonas con alteraciones oexudado abundante.

Exámenes de laboratorio usados para el diagnostico

1. Examen microscópico directo2. Cultivo en agar Sabouraud dextrosa; agar

papa dextrosa

Estructura diagnostica 1. levaduras únicas o en gemación

2. Blastoconidias, Pseudohifas