enzimas mitocondriales
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EVIDENCIAS FOTOGRAFICAS
LABORATORIO DE ENZIMAS
MITOCONDRIALES
ROCIO CASTRO
TANIA CUADROS
DIANA BENAVIDES
ANGELICA PINILLA
JONATAN PRIETO
FACULTAD DE MEDICINA.
2014.
MATERIALES. 10 tubos de ensayo.
2 Erlenmeyer de 50ml
1 de precipitado de 500ml
1 mortero con mano
4 pipetas de 5ml
5 pipetas de 2ml
2 tubos de centrífuga
1 gradilla
1 pipeteador.
REACTIVOS. buffer fosfato 0,1M y pH 7.4 (300ml)
solución malonato de sodio 1% (100ml)
Solución cianuro de potasio 0,05M (50ml) PELIGROSO
Solución de p-fenilendiamina al 1% (100ml)
Solución de succinato de sodio al 1% (100ml)
Solución de azul de metileno 0,01% (100ml)
aceite mineral (200ml)
Agua destilada
Baño de maría termostatado a 37ºC
Tejido cardiaco y tejido fresco de pollo (deben conseguir tejidos
de animales recién sacrificados en un matadero, puede ser de
porcino, vacuno o ave (órgano entero) y mantenerlos
refrigerados. Son pequeñas porciones y sirven para todo el
grupo)
1. EXTRACCION Y PREPARACION DE LAS ENZIMAS Y LAS
COENZIMAS: Tomar aproximadamente 5 gr de tej libre de sangre y
colocarlos en un mortero con 2 gr de arena lavada y adicionar 3
porciones de 5 ml de buffer fosfato y macerar.
Se macero hasta obtener una pasta fina, luego se transfirió a un
Erlenmeyer y se puso en una nevera por 15 minutos mezclando
ocasionalmente.
Al mismo tiempo que se realizaba el proceso anterior, también, se rotularon
5 tubos de ensayo (B’, 1’, 2’, 3’,4’) para luego adicionarles los siguientes
reactivos:
TABLA 2.
Luego de adicionar los reactivos a los tubos de ensayo, se
mezclaron suavemente y se llevaron los tubos al baño
serológico.
Luego de los 15 minutos de estar el extracto enzimático en la nevera,
se adiciono este en 1 tubo de centrifuga y se llevo a centrifugar a 1500
rpm por 10 minutos.
Al terminar el centrifugado del extracto enzimático, se termino el
procedimiento de la tabla 2.
Se adiciono el extracto enzimático sin sacar los tubos del baño
serológico y luego el aceite mineral para establecer condiciones
anaerobias.
TABLA 2.
Al mismo tiempo del procedimiento anterior, se realizo otro
procedimiento en el que se adiciono los reactivos de la siguiente tabla:
TABLA 1.