ppt chymosin dari aspergillus niger- kelompok 7
TRANSCRIPT
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 1/38
Click here to add text
Click here to add text. Click here to add text.
Click here to add text. Click here to add text.
Click here to add text. Click here to add text.
CHYMOSINdari Aspergillus niger
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 2/38
Place logo
or logotype here,otherwisedelete this.
Kelompok 7
Nindya Sulistyani (1206212501)Risky Azlia Edrina (1206237151)
Septi Niawati (1206212294)Wendi Anata (1206240631)Yosia Marsino (1206248426)
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 3/38
SUMBER MIKROBA CHYMOSIN
Nama scientific : : Aspergillus niger var. awamori
Phylum : Deuteromycota (anamorphic fungi)Class : anamorphic fungiOrder : anamorphic fungi
Aspergillus niger van Tieghem var. awamori(Nakazawa) A1-Musallam, direvisi dari spesiesAspergillus hitam.
Thesis Ph. D., University of Utrecht. 1980.
Habitat : daun busuk, tanah
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 4/38
CHYMOSIN
IUB No. 3.4.4.3
Protein yang terdiri rantai tunggal polipeptida yang terdiri dari 323 asam amino
dengan hubungan intramolekular disulfida
Chymosin terdiri dari 2 macam yaitu A dan B yang dibedakan berdasarkanresiduenya pada posisi basa ke-286. chymosin A= asam aspartam dan
chymosin B=glysin
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 5/38
CHYMOSIN
Chymosin
A Eschericia coli K-12
B
Kluyveromyces Lactis
Aspergillus niger var.awamori
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 6/38
CHYMOSIN
Chymosin, biasa disebut rennin,merupakan enzim proteolitik yangdisintesis oleh sel di lambung.
Perannya adalah mengkoagulasi susudalam lambung.
Jika susu tidak dikoagulasi, susu akanmengalir dengan cepat melalui lambungdan protein di dalamnya tidak akantercerna dengan baik.
Chymosin mengubah susu cairmenjadi semi-padat seperti kejusehingga dapat bertahan lebih lama di
lambung.Sekresi chymosin pada puncaknya padabeberapa hari setelah kelahiran,menurun setelahnya, dan digantikan oleh
pepsin.
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 7/38
CHYMOSIN
Chymosin disekresi sebagai proenziminaktif yang disebut prochymosin
yang diaktifasi jika terekspos padaasam.
Chymosin paling aktif pada lingkunganasam.
Chymosin secara alami berada pada
lambung hewan. Namun secararekombinan dapat dihasilkan olehmikroba yaitu umumnya Aspergillusniger
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 8/38
CHYMOSIN
•Seperti halnya protease asam dari asam lambung, chymosin disekresikansebagai prekursor tidak aktif, prochymosin
•Prekursor stabil pada pH jelek unsur alkali dimana aktivitas enzimterdenaturasi pada pH diatas 7
•Pada pH dibawah 5 enzim prochymosin dikonversi menjadi chymosin denganproteolisis terbatas selama segmen peptida diputus dari N-terminal
•Aktivitas proteolytic chymosin optimum pada pH 3-5
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 9/38
MEKANISME KERJA CHYMOSIN
•Chymosin menghancurkan ikatan peptida k-casein antara Phe105 dan Met 106•Bagian berwarna biru adalah bagian hidrofobik dan hijau adalahbagian hidrofilik• Substrat asli enzim ini adalah K-Kasein. •Muatan enzim yang berlawanan dengan substrat dapatberinteraksi dengan enzim . Inhibisi dari substrat ini adalahbetahairpin.
•K-casein adalah kappa casein, casein yang tidak dapatdipresipitasi oleh kalsium. K-casein pada umumnya menjagaprotein pada susu agar tetap terlarut dan tidak terkoagulasi.
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 10/38
MEKANISME KERJA CHYMOSIN
•Chymosin akan memotong secara proteolitik dan menginaktivasi K-casein,mengubahnya menjadi para-k-casein dan makropeptida.•Para-k-casein tidak dapat menstabilisasi protein susu untuk tetap berada dalam
kondisi terlarut, sehingga casein akan terpresipitasi.
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 11/38
Gambaran Umum Proses Produksi Rekombinan Chymosin
Aspergillusmengandung gen Bprochymosin sapi
muda
Proses produksi rekombinan
chymosin (sumber :http://www.ncbe.reading.ac.uk/ncbe/gmfood/chymosin.html)
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 12/38
Gambaran Umum Proses Produksi Rekombinan Chymosin
Mengambil lapisan pada perut sapi muda
Mengisolasi DNA dari selnya
Amplifikasi gen chymosin dengan menggunakan PCR untukmeningkatkan jumlah fragmen gen
Pilihan lain yaitu mengisolasi mRNA secara langsung danmengubahnya menjadi cDNA menggunakan enzimretrotranskriptase
S
T
E
P
1
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 13/38
Gambaran Umum Proses Produksi Rekombinan Chymosin
Mengenalkan sekuens gen ke plasmid yang akandiperkenalkan ke target mikroba (Aspergilus niger )
Biasanya gen diperkenalkan setelah adanya sekuenspromotor untuk meningkatkan ekspresi gennya
Terjadi produksi chymosin
Purifikasi kolom dimana chimosin akan melekat padakolom berdasarkan afinitas untuk matriks di dalam kolomsedangkan protein lainnya tidak melekat
S
T
E
P
2
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 14/38
Gambaran Umum Proses Produksi Rekombinan Chymosin
S
T
E
P
3Strategi untuk meningkatkan produksi chymosin
1. Pada Aspergilus niger, terbentuk glucoamilase.2. Adanya tambahan daerah kontrol transkripsi dantranslasi pada host ke gen yang tidak mungkin hanyapromotor spesifik tetapi terminator transkripsi spesifik
3. Penambahan promotor, misalnya untuk E.coliditambahkan molekul IPTG
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 15/38
Mutan glucoamilase dihasilkan dari strain Aspergillusniger NRRL 3112 dilakukan mutagenesis dan seleksiuntuk mengisolasi mutan pyrG dan argB
Strain disilangkan dan mutan ganda pyrG dan argBdiisolasikan dari primer dan didesain menjadi GC12
Strain GC12 dimodifikasi dengan mengganti kode gen
untuk aspergillopepsin A, sebuah extracellular aspartic proteinase yang dapat mendegradasi chymosin danmenyebabkan rasa keju berkurang, dengan gen A.nidulans argB
Transformasi strain GC12 ke aspergillopepsin A dan genA. nidullans argB
Vektor ekspresi mendesign pGAMpR yang dikonstruksi
pada basis plasmid pBR322
Gambaran
SpesifikProses
Produksi
Rekombinan
Chymosin
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 16/38
FERMENTATION IN LARGE SCALE
Inokulasike dalamfermentor
Seltumbuhsecaraaerobik
dibawahkondisiyang
sesuai (pH, suhu,
komposisinutrisi,dll)
Chymosinmencapai
level yangdiinginkan
dalamfermentor
Fermentasidihentikan
Sel jamur
diinkativasi dandipisahkandari liquid
Chymosindipisahkan
dari brothdengansatu atau
duametode
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 17/38
PEMISAHAN CHYMOSIN DARI BROTH
Difilter, purifikasi kromatografi daankromatografi konsentrasi chymosin
Tahap kromatografi diganti dengan ekstraksichymosin dari broth fermentasi
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 18/38
Aliran Fermentasi Produksi Chymosin (FPC)
Kultur primer dari bakteri Aspergillus nigerdifermentasi dengan soy, maltose atau glukosa
1
Proses inaktivasi jamur dalam fermentor yang kemudian
biomassa difiltrasi, Cake hasil filtrat disisihkan2
SKALA INDUSTRI
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 19/38
Aliran Fermentasi Produksi Chymosin (FPC)
Chymosin dipurifikasi dengan menggunakankromatografi dan terjadi pemisahan pengotor danlimbah berupa amilase
3
Lalu dilakukan filtrasi untuk mensterilkanchymosin dimana cake yang tertahan adalah
mikroorganisme4
SKALA INDUSTRI
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 20/38
Aliran Fermentasi Produksi Chymosin (FPC)
Dilakukan standardisasi untuk mendapatkankekuatan yang sama : 200 IMCU/ml dan 1000IMCU/ml
5
Lalu dikemas dan siap dipasarkan
6
SKALA INDUSTRI
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 21/38
Produksi Keju dari Chymosin
VIDEO
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 22/38
Kekurangan dan Kelebihan Chymosin
1. Chymosin adalah bahan alami yang tidak
berbahaya2. Umumnya pembuatan keju ditambahkan
sedikit asam untuk memperkuat susu, tetapiChymosin mendapatkan keju dari susu
3. Low cost untuk membeli asam4. Kualitas keju lebih baik
1. Biaya operasi pabrik mahal2. Biaya peralatan lebih mahal
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 23/38
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 24/38
CHY-MAXTM
CHY-MAXTM merupakanchymosin yang diproduksioleh perusahaan biotech Chr.
Hansen dengan prosesfermentasi Aspergillus nigervar. awamori dan calf gen.
CHY-MAXTM telah disertifikasiKosher, Halal, Vegetarian danbebas GMO.
CHY-MAXTM memiliki patensebagai berikut: EP0429490, US 6509171, US
5840570, CA 1333777, US5364770, US 6103490 dll.
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 25/38
Perusahaan Penghasil EnzimChymosin CHR. HANSEN
Chr. Hansen A/S10-12 Bøge Allé, DK-2970 Hørsholm, DenmarkPhone: +45 45 74 74 74
Chr. Hansen Singapore Pte Ltd
Chr. Hansen, Inc.9015 W. Maple St., Milwaukee, WI 53214, USAPhone: +1 800-558-0802
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 26/38
COMPANY PROFILE
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 27/38
COMPANY PROFILE
More than 135 years of experience in cheese coagulants
Chr. Hansen is a global biotechnology company that provides natural ingredientsto the food, dairy, dietary supplement, infant formula, pharmaceutical, and
agricultural industries. In 1874 Christian D.A. Hansen defi ned the benchmark withhis standardized animal rennet. In 1989, CHY-MAX® was launched as the newstandard. Today, more than 50% of the world’s cheese is produced with a 1stgeneration FPC. With over 1,500 customers and 20 years in the marketChr..Hansen’s CHY-MAX® is the undisputed quality yard-stick and market leader in
coagulants. CHYMAX® M is now taking it to the next level.
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 28/38
CHY-MAX® DAN MAXIREN®
Fermentasi-Produced Chymosin (FPC) adalah Chymosin Rekombinan
Saat ini, FPC yang diproduksi baik oleh jamur Aspergillus niger dan
dikomersialisasikan di bawah merek dagang CHY-MAX® oleh perusahaanDenmark Chr. Hansen , maupun diproduksi oleh Kluyveromyces lactis dandikomersialisasikan di bawah merek dagang MAXIREN® oleh perusahaan
Belanda DSM .
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 29/38
CHY-MAX® DAN MAXIREN®
CHY-MAX® has established itself as a market leaderin virtually all cheese-producing countries. BecauseCHY-MAX® coagulants are very pure, they can be
used to optimize the cheese production process andobtain high cheese quality. CHY-MAX® offers highmilk-clotting performance and optimal flavour andtexture development. CHY-MAX® is offered indifferent volumes and strengths, in both liquid and
granulated forms.
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 30/38
MARKET AND PRICE
Annual production
An example of a recombinant rennet isChymosin which is the most commonly usedenzyme used for cheese making. In 1999,about 60% of U.S. hard cheese was made with
genetically engineered chymosin and it has upto 80% of the global market share for rennet.By 2008, approximately 80 - 90% ofcommercially made cheeses in the UnitedStates were made utilizing GMO-based rennet.
Hence the production of rennet variesdepending on the demand on cheese.
Pricing of rennet
Chy-Max is a genetically engineered rennetcreated by Pfizer and marketed by Chr. Hansen.It contains a synthetic version of chymosin, an
enzyme that causes milk to curdle.
One gallon of Chy-max is about 85 to 90
dollars. This price is more expensive than rennetbut the price is relatively stable and Pfizer
guarantee a steady supply.A gallon of Chy-Max, Pifizer’s brand chymosin is
enough to turn 85,000 gallons of milk into
8500 pound of cheese
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 31/38
Sekitar 7 €/ton Keju
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 32/38
MICROBIAL RENNET
Tube with 20 Natural (Calf) Rennet Tablets. Eachrennet tablet is good for 20 l milk and each tabletcan easily be broken in four quarter tablets.
Making cheese of quantities of 5L milk possible.Dissolve the tablet in a little cool, clean water andadd it to the milk. Simply does it! When ordering,feel free to advise what type of cheese you intendto make and we will try to supply a recipe to help
you on your way.
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 33/38
Jurnal 5 Tahun Terakhir
Screening of Chymosin Producing Bacterium from Soil and the Influence Factors of
Chymosin Production Activity (2013)
(SONG Xi & CHEN Yan-bing)College of Agriculture and Foresty,Longdong University,Qingyang 745000,Gansu &
Department of Biological Sciences and Technology,Changzhi University,Changzhi
046011,Shanxi
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 34/38
Jurnal 5 Tahun Terakhir
Isolasi enzim chymosin hasil produksi bakteri dari tanah Yak Ginzang, Tianzu sertascreening bakteri yang mempunyai aktivitas chymosin yang tinggi, namun memiliki aktivitasproteolitik yang rendah. Pemakaian C5 dengan strain target untuk mempelajari faktor yangkira – kira akan mempengaruhi seperti fermentasi medium, waktu, serta penambahanpenginduksi dan CA2+. Eksperimen orthogonal menunjukkan bahwa faktor yang palingmempengaruhi adalah konsentrasi sertapenambahan kuantitas dari Ca2+ dan yang terakhiradalah casein. Aktivitas chymosin yang paling tinggi adalah 169.27SU/mL.
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 35/38
Jurnal 5 Tahun Terakhir
Study on Isolation,Purification and Enzymological Characteristics of Chymosin
Produced from Rhizopus sp.Strain (2011)
Pan Daodong & Han Lingling
(Life Science and Biotechnology Faculty of Ningbo University,Ningbo 315211,Zhejiang &
Branch of National Dairy Processing Technology Developing Center,Nanjing Normal
University,Nanjing 210097)
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 36/38
Jurnal 5 Tahun Terakhir
Crude chymosin didapat dengan ekstraksi menggunakan 75% ethanol sebagai pelarut dandihasilkan dalam ekstrak dengan konsentrasi ethanol sebesar 52,65% . Setelah itudigunakan DE-52 dan Sephadex G-75 untuk pemurnian dan freeze dryer untuk pengeringan.
Perolehan dari metode tersebut didapat aktivitas 1 813.74 SU/g serta 11,25% chymosin.Hasil penelitian menyimpulkan Tempertatur dan pH optimum untuk chymosin adalah 5,7 dan45℃. Chymosin stabil pada pH 5,0 sampai dengan 7,5 dan akan inaktivasi pada suhu 60 ℃ dalam waktu 20 menit. Larutan Ca2+, Fe2+, Mg2+, Cu2+, Zn2+, Al3+ menunjukkan efekstimulus yang sangat jelas pada aktivitas chymosin terutama untuk Ca2+ dan Al3+. Akan
tetapi Na+ dan K+ dapat menghambat aktivitas chymosin. Berat molekul dari chymosinadalah sekitar 35 kDa yang diukur menggunakan SDS-PAGE
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 37/38
Place logoor logotype here,
otherwisedelete this.
Daftar Pustaka
Microbial Production of Recombinant Chymosin [online],https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Microbial_production
_of_recombinant_chymosin, diakses pada tanggal 3 November2014 pukul 19.45 WIBLin, F.S.D. Chymosin A and B from Genetically Modified
Microorganisms [online],http://www.inchem.org/documents/jecfa/jecmono/v28je08.ht
m, diakses pada tanggal 3 November 2014 pukul 18.00 WIBhttp://cdn.chr-hansen.de/uploads/tx_tcdownloadables/CHY-MAX_M_Trifolder__Oct_2011.pdf http://www.iisc.ernet.in/currsci/jul10/articles22.htm
http://cdn.chr-hansen.com/uploads/tx_tcdownloadablessecure/CHY-MAX_M_Trifolder__Oct_2011.pdf
8/21/2019 Ppt Chymosin Dari Aspergillus Niger- Kelompok 7
http://slidepdf.com/reader/full/ppt-chymosin-dari-aspergillus-niger-kelompok-7 38/38