oksİdatİf stres ve antİoksİdanlar

ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI

1

OKSİDATİF STRES VE

ANTİOKSİDANLAR

ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI

2

AMAÇ

• Bu çalışmada amaç; kromatografik şartları optimize

ederek, hedeflenen bitki ekstraktlarındaki

bileşenlerin etkin bir şekilde ayırmak ve ayrılan her

bir bileşenin FRAP antioksidan kapasitesini eş

zamanlı olarak belirlemek için bir on-line HPLC-

FRAP sistemi geliştirmekti.


3

GENEL BİLGİLER (özet)• Serbest Radikaller

• Reaktif Oksijen Türleri (ROS)

• Antioksidanlar

• Oksidatif Stres

• Fenolik Maddeler– Flavonoidler

– Fenolik asitler

• Kromatografi (HPLC)


4

Serbest Radikaller

• Serbest radikaller, kimyasal olarak en dış yörüngesinde bir elektron kaybetmiştir.


5

• Serbest radikallerin yapısında, çoğunlukla oksijen yer almaktadır. (reaktif oksijen türleri=ROS)

• ROS oksijen içeren, küçük ve oldukça reaktif moleküllerdir.

• Serbest radikaller (ROS) kararsız bir yapıdadırlar ve kararlı hale gelmek için hücrelere saldırarak hasar oluştururlar.


6

Reaktif Oksijen Türleri (ROS)Ateroskleroz

Kalp ve beyin hastalıkları

Diyabet

Yaşlanma

Kanser

İnflamasyon

Artrit

Katarakt

Reaktif

Oksijen

TürleriRadyasyon

hasarı Parkinson

Sıtma, amfizem

Alzheimer


7

Antioksidanlar • Serbest radikal oluşumunun, temelinde

oksijen olduğu için, gerçekte bir oksidasyon (oksidan) faaliyettir.

• Vücudumuz, bu faaliyete karşı “antioksidan” larla cevap vermektedir.


8

Oksidatif Stres• Antioksidanların miktarı oluşan serbest

radikalleri dengeleyemez ve serbest radikal seviyesi, antioksidan seviyesine göre artar ise serbest radikaller hücrelerde oksidatif hasarlara yol açar ve bu duruma oksidatif stres denir.

Pro-oksidan

ve oksidan

Antioksidan


9

Fenolik Maddeler(En yaygın görülen antioksidanlar)

• Flavonoidler

• özellikle meyve ve sebzelerde bulunur.

• C6-C3-C6 yapısında

• Fenolik asitler• yaygın olarak bitki taç kısmında

bulunur.

1. Hidroksi benzoik asit türevleri

2. Hidroksi sinamik asit türevleri

6

,

C

B

A

2

3

45

7

2

8

65

4

3

,

,

,


10

Fenolik Asitler


11

Fenolik Bileşiklerin Biyoaktiviteleri

• antimutajen,

• antikarsinojen,

• antioksidan,• antiviral,

• antibakteriyel,

• antitrombotik,

• antialerjik.


12

Antioksidan Kapasite Belirleme Yöntemleri

1. Hidrojen Atomu Transfer (HAT) Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler

(substratın hidrojen verebilme yeteneğini ölçer)

2. Tek Elektron Transfer (SET) Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler

(substratın (antioksidan) indirgeyici yeteneğini ölçer)


13

Hidrojen Atomu Transfer (HAT)Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler

• Oksijen radikal absorbans kapasitesi (ORAC),

• Toplam radikal yakalama antioksidan parametresi (TRAP),

• Oksijen kullanım inhibisyonu (IOU),

• Linoleik asit oksidasyonu inhibisyonu,

• LDL oksidasyonu inhibisyonu

• Krosin beyazlatma


14

Tek Elektron Transfer (SET) Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler

• Folin-Ciocalteu ayıracı ile toplam fenolik madde miktarı (FCR/TPC),

• Troloks eşdeğeri antioksidan kapasite (TEAC/ABTS),

• Demir (III) iyonu indirgeyici antioksidan güç (FRAP),

• Bakır (II) iyonu indirgeyici antioksidan kapasite (CUPRAC),

• DPPH (2,2'difenil-1-pikrilhidrazil) radikali temizleme


15

KROMATOGRAFİ

• Hareketli fazın cinsine göre:- Sıvı kromatografisi - Gaz kromatografisi

• Kullanılan tekniklere göre:- Kağıt kromatografisi (PC)- İnce tabaka kromatografisi (TLC)- Kolon kromatografisi (CC)- Gaz kromatografisi (GC)

HPLC


16

Adsorpsiyon kromatografisi, polarlıkları farklı bileşenlerden

oluşan karışımların ayrılmasında iyi sonuç verir.

HPLC

KROMATOGRA

Fİ


17

Bitkisel poşet çaylarda klasik

spektrofotometrik FRAP analizi


18

Bitkisel çaylarda antioksidan aktiviteler

455

435

649

605

264 293

718

659

961

892

347

367

499 509

443 50

9

842

832

788 77

8

0

200

400

600

800

1000

1200

Tarçın

-kar

anfil

Kuşbu

rnu

Ihlam

urAda

çayı

Yeşilç

ayFor

mça

yıM

ate ça

yıEkin

ezya

Mes

ir ça

yıSiya

hçay

şekerli

şekersiz

1. Toplam fenolik Madde İçerikleri

GA

E v

eya

CA

E (

µg/

mL)


19

2. DPPH Radikali Temizleme Aktiviteleri

49

60

33

,1 32

,9

10

2,8

99

,1

51

,12

1,1

18

,7 19

,1

11

0,6

10

5,3

53

,1 56

,1

47

,3

48

29

,2

38

,4

26

,62

2

0

20

40

60

80

100

120 şekerlişekersiz

SC50

seyr

elm

e or

anı x

10-4

0

200

400

600

800

1000

1200

Tarçın

-kar

anfil

Kuşbu

rnu

Ihlam

urAda

çayı

Yeşilç

ayFor

mça

yıM

ate ça

yıEkin

ezya

Mes

ir ça

yıSiya

hçay

şekerli

şekersiz


20

3. Demir (III) İndirgeme/ Antioksidan Güç Aktiviteleri

(FRAP)

229

408

120

582

831

118 26

0

246

552

547

214 31

4

144

527

817

123 22

4

271

576

569

0

200

400

600

800

1000T

arçı

nKar

anfi

l

Kuş

burn

u

Ihla

mur

Ada

çayı

Yeş

ilçay

For

mça

yı

Mat

e ça

yı

Eki

nezy

a

Mes

ir ç

ayı

Siy

ah ç

ay

TE

AC

(µ

M )

Şekerli

Şekersiz


21

Yaylaçayı bitki ekstraktlarında klasik

spektrofotometrik FRAP analizi


22

Yaylaçayı Ekstraktlarının FRAP Aktiviteleri

590

351

130 11580 82

0

100

200

300

400

500

600

Sulu-YÇ Metanollü-YÇ Etanollü-YÇ İzopropanollü-YÇ

Bütanollü-YÇ Asetonitrilli-YÇ

TE

AC

( µ

M )

.

Çözücülerin literatürdeki bağıl polarite değerleri su, metanol, etanol, n-bütanol, izopropanol ve asetonitril için sırasıyla 1,000- 0,762 - 0,654 - 0,602 - 0,546 ve 0,460’tır.

oksİdatİf stres ve antİoksİdanlar

Documents